054] 取干燥的猴耳環(huán)嫩枝和葉15kg，用7倍量的65%工業(yè)乙醇回流提取5次，每次2 小時，合并提取液并減壓濃縮后得總浸膏1. 5kg，總浸膏用8L水混懸后，經(jīng)D101大孔樹脂分 別以水和體積分數(shù)30 %、60 %、95 %的乙醇水洗脫，得到的水層干浸膏290g，30 %層干浸膏 90g，60%層干浸膏330g，95%層干浸膏180g。95%乙醇洗脫物采用快速減壓柱色譜，以二 氯甲烷-甲醇系統(tǒng)35:1、20:1、10 :1、5:1、3:1、2:1逐漸洗脫，得到16個流分，經(jīng)硅膠薄層層 析檢識，將流分合并為A1~A5。
[0055] 流分Al(42g)再經(jīng)0DS柱色譜，以甲醇-水系統(tǒng)40%、50%、60%、70%、80%逐漸 洗脫，得到15個流分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識，將流分合并為F1~F3。流分F2再經(jīng)硅膠柱色 譜，以二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)30:1、15:1、8:1、5 :1、2:1、1:1逐漸洗脫，得到27個流分，經(jīng)硅膠 薄層層析檢識，將流分合并為B1~B7。利用HPLC法以甲醇-水系統(tǒng)64%為流動相在B5 中制備得到化合物1，甲醇-水系統(tǒng)62%為流動相在B4中制備得到化合物3。
[0056] 流分A2(43g)再經(jīng)0DS柱色譜，以甲醇-水系統(tǒng)40%、50%、60%、70%、80%逐漸 洗脫，得到15個流分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識，將流分合并為C1~C5。流分C2再經(jīng)硅膠柱 色譜，以二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)20:1、10:1、5:1、3:1、2:1、1:1逐漸洗脫，得到26個流分，經(jīng)硅 膠薄層層析檢識，將流分合并為D1~D5。利用HPLC法以甲醇-水系統(tǒng)60%為流動相在D2 中制備得到化合物2。
[0057] 本發(fā)明所述的三個新化合物的結(jié)構(gòu)解析：
[0058] 實驗例1:
[0059] 化合物l(6mg)為黃色油狀物（甲醇）；高分辨電噴霧離子質(zhì)譜（HR-ESI-MS) 給出準分子離子峰m/z307. 1319[M+Na] + (cal. 307. 1305)，結(jié)合1HNMR、13CNMR譜， 確定分子式為C18H2(l03;UV(MeOH)在Amax 217, 292nm有最大吸收，說明存在苯環(huán)骨 架；IR(KBr)在3426cm-1有吸收，說明存在羥基，在1495cm―1和820cm―1有吸收，說明 存在苯環(huán)骨架；在1HNMR譜（400Hz，DMS0-d6，ppm，JinHz)中，S:6.94(2H，s，H-6/ H_6,），6.93 (2H,overlaped,H_4/H_4,），6.76 (2H,overlaped,H_3/H_3,）為兩個 1，3, 4_ 苯 環(huán)取代上的 6 個質(zhì)子信號，8:5.94(1氏(1(1^=17.0,9.6,6.4抱，11-8)，5.06(111，1^. d,J= 17.0Hz，H-9a)，5.00(lH，br.d,J= 9.6Hz，H-9b)為一個末端雙鍵上的三個質(zhì)子 信號，S:3.74(lH，m，H-8'）為一個連氧亞甲基上的2個質(zhì)子信號，S:3.27(2H，d，J= 6. 4Hz,H-7), 2. 61 (1H,dd,J= 5. 8, 13. 2Hz,H-7'a), 2. 45 (1H,dd,J= 6. 5, 13. 2Hz,H-7'b) 為兩個連在苯環(huán)上的亞甲基質(zhì)子信號，S:1.〇2(3氏(1，1 = 5.7泡，9'-〇13)為一個甲基質(zhì) 子信號；在13CNMR譜（100MHz，DMS0-d6,ppm)中給出18個碳信號，包括12個芳香碳信號 8 ：126. 8(C-1), 153. 6(C-2), 116. 2 (C-3), 128. 3 (C-4), 129. 8(C-5), 131. 7 (C-6), 126. 3 (C-1'），153. 8(C-2'），116. 6(C-3'），129. 3(C-4'），129. 8(C-5'），132. 5(C-6'），兩個雙鍵碳信 號S:138. 9(C-8)，115. 6(C-9), -個連氧碳信號S:68.l(C-8'）和三個烷基碳信號S: 45. 2 (C-7,），23. 5 (C-9,），39. 3 (C-7)。在HMBC譜中，H-7 與C-4、C-5、C-6、C-8、C-9 有相關(guān)， 顯示烯丙基連在C-5上，H-7'a及H-7'b與C-4'、C-5'、C-6'、C-8'、C-9'有相關(guān)，顯示另一 個三碳鏈連在C-5'上。由以上推導可確定化合物的結(jié)構(gòu)，分子式為C18H2(l03,與HR-ESI-MS 所給出的分子式一致。經(jīng)scifinder文獻檢索，為一未見報道的新化合物，命名為5-稀 丙基-5' -(2-輕丙基）[1，1' -聯(lián)苯]-2, 2' -二醇?；衔?的碳氫歸宿及HMBC相關(guān)見 Table. 1〇
[0060] 實驗例2:
[0061]化合物2 (9mg)為黃色油狀物（甲醇）；高分辨電噴霧離子質(zhì)譜（HR-ESI-MS)給 出準分子離子峰111/^ 353.1360[]\1+似]+ (〇&1〇(1作1'(：191122似05,3 5 3.13 59)，結(jié)合111匪1?、13〇NMR譜，確定分子式為C19H22 05;IR(KBr)在3425CHT1有吸收，說明存在羥基，在1496CHT1和 826CHT1有吸收，說明存在苯環(huán)骨架；UV(MeOH)在Amax220,289nm有最大吸收，進一步說明 存在苯環(huán)骨架；根據(jù)1HNMR和13CNMR譜可以看出化合物2與化合物1具有相同的結(jié)構(gòu)特 征，只是連在C-5'上的三碳鏈有所區(qū)別，結(jié)合HMBC譜可以推出，C-7'上連了一個甲氧基， C-9'由甲基變成了羥甲基，其它信號均與化合物1相同。由以上推導可確定化合物的結(jié)構(gòu)， 這也與化合物2分子式為C19H2205相符，經(jīng)scifinder文獻檢索，為一未見報道的新化合物， 命名為5_條丙基_5' -(2, 3_二羥基-1-甲氧基丙基）[1，1_聯(lián)苯]_2, 2'-二醇?；衔? 的碳氫歸宿及HMBC相關(guān)見Table. 1。
[0062] 實驗例3 :
[0063] 化合物3(8mg)為黃色油狀物（甲醇）；高分辨電噴霧離子質(zhì)譜（HR-ESI-MS)給 出準分子離子峰111/^ 357.1309[]\1+似]+ (〇&1〇(1作1'(：181122似06,3 5 7.1309)，結(jié)合111匪1?、13〇 NMR譜，確定分子式為C18H22 06;IR(KBr)在3425CHT1有吸收，說明存在羥基，在1515CHT1和 817CHT1有吸收，說明存在苯環(huán)骨架；在1HNMR譜（400Hz，DMS0-d6，ppm，JinHz)中，S: 6. 68 (1H,d,J= 1. 8Hz,H-2'），6. 62 (1H,d,J= 8. 0Hz，H-5'），6. 49 (1H,dd,J= 1. 8, 8. 00Hz ，H-6'），6.04(2H，s，H-3"，H-5"）為兩個苯環(huán)上的 5 個質(zhì)子信號，S:3.71(3H，s，3'-0C H3)，3. 68 (3H,s, 2 " -0CH3)，3. 67 (3H,s, 6 " -0CH3)為三個甲氧基質(zhì)子信號；在13CNMR譜 (100MHz，DMS0-d6，ppm)中給出18個碳信號，包括12個芳香碳信號6:131.4(01'），113. 9 (02,），147. 5 (03,），144. 9 (04,），115. 5 (05,），121. 8 (06,），106. 6 (C-1 ")，159. 5 (C-2 ")， 90.4(C-3")，157.4(C-4")，94.4(C-5")，159.3(C-6")，三個甲氧基碳信號S:56.0(3'-0CH 3)，55. 9(2"-0CH3)，55. 3(6"-0CH3)，一個連氧碳信號S:72. 3(C-2)，兩個烷基碳信號S: 31. 5 (C-3)，42. 8 (C-1)。結(jié)合HSQC及HMBC譜確定該化合物的結(jié)構(gòu)，也與化合物3分子式 為C18H2206相符，經(jīng)scifinder文獻檢索，為一未見報道的新化合物，命名為1-(3' -甲氧 基，4' -羥基苯基）-3- (2 "，6 " -二甲氧基-4 " -羥基苯基）丙烷-2-醇?；衔?的碳氫 歸宿及HMBC相關(guān)見Table. 1。
[0064] 表1化合物1-3的1H、13CNMR數(shù)據(jù)
[0065]
[0066]
【主權(quán)項】
1. 如下結(jié)構(gòu)所示的化合物：2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于：所述化合物是從猴耳環(huán)嫩枝和葉中提 取分離得到的。3. 如權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn)： (1) 取干燥的猴耳環(huán)嫩枝和葉，用60~75%乙醇回流提取，合并提取液并減壓濃縮后得 總浸膏，總浸膏用水混懸后，經(jīng)DlOl大孔樹脂分別以水和體積分數(shù)25%~35%、55%~65%、 85%~95%的乙醇水洗脫，85%~95%乙醇洗脫物采用快速減壓柱色譜，以二氯甲烷/三氯 甲烷-甲醇系統(tǒng)50:1~2:1逐漸洗脫，得到15~20個流分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識，將流分 合并為Al~A5 ; (2) 流分Al (50:1~30:1的洗脫流分）再經(jīng)ODS柱色譜，以甲醇-水系統(tǒng)40%~90% 逐漸洗脫，得到12~18個流分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識，將流分合并為Fl~F3,流分F2再經(jīng) 硅膠柱色譜，以二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇系統(tǒng)30:1~1:1逐漸洗脫，得到20~30個流 分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識，將流分合并為Bl~B7利用HPLC法以甲醇-水為流動相在B2~ B6中制備得到化合物1和3 ; (3) 流分A2 (30:1~15:1的洗脫流分）再經(jīng)ODS柱色譜，以甲醇-水系統(tǒng)40%~80% 逐漸洗脫，得到15~20個流分，經(jīng)硅膠薄層層析檢識，將流分合并為Cl~C5,流分C2再經(jīng) 硅膠柱色譜，以二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇系統(tǒng)15:1~1:1逐漸洗脫，得到20~30個流分， 經(jīng)硅膠薄層層析檢識，將流分合并為Dl~D5,利用HPLC法以甲醇-水為流動相在D2~D4 中制備得到化合物2。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述提取為回流提取，提取3~5 次，每次2~3小時。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述的用于HPLC的甲醇-水的比例 為 50%-65%。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述猴耳環(huán)是指豆科猴耳環(huán)屬植物 爲{Pithecellobium clypearia Benth.)。7. 藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的化合物和藥學上可接受的載體。8. 權(quán)利要求1所述的化合物或權(quán)利要求7所述的藥物組合物在制備抗氧化藥物中的應(yīng) 用。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗氧化藥物為具有清除ABTS自由 基能力的藥物。10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗氧化藥物為與自由基對人體 破壞相關(guān)疾病的藥物。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及從豆科猴耳環(huán)屬植物猴耳環(huán)(Pithecellobium clypearia Benth.)中提取分離的化合物，化學名為：5-烯丙基-5'-(2-羥丙基)[1,1'-聯(lián)苯]-2,2'-二醇，5-烯丙基-5'-(2,3-二羥基-1-甲氧基丙基)[1,1-聯(lián)苯]-2,2'-二醇，1-(3'-甲氧基,4'-羥基苯基)-3-(2'', 6''-二甲氧基-4''-羥基苯基)丙烷-2-醇。是通過將猴耳環(huán)粗提物經(jīng)過反復的硅膠、ODS柱層析、HPLC分離得到的三個新化合物。經(jīng)過ABTS自由基清除能力的測定結(jié)果，表明三個化合物均具有很好的抗氧化活性，可制備治療及預防自由基對人體破壞相關(guān)疾病的藥物。 。
【IPC分類】A61K31/05, C07C37/82, C07C39/21, C07C41/36, A61K31/09, C07C43/178, C07C43/23, C07C37/70, C07C41/34, A61P39/06, A61K31/075
【公開號】CN104974018
【申請?zhí)枴緾N201510329178
【發(fā)明人】宋少江, 彭纓, 李霖光, 李玲芝, 劉慶博, 黃肖霄
【申請人】沈陽藥科大學
【公開日】2015年10月14日
【申請日】2015年6月15日