用于治療肝臟疾病和心血管疾病的脂肽的制作方法
【專利說明】用于治療肝臟疾病和心血管疾病的脂化
[0001] 本發(fā)明設(shè)及基于脂膚的化合物，其用于診斷、預(yù)防和/或治療肝臟疾病或病況，優(yōu) 選肝臟參與的代謝疾病，W及用于控制或改變膽固醇水平或膽固醇攝取，并且因此，診斷、 預(yù)防和/或治療屯、血管疾病。此外，本發(fā)明設(shè)及用于測試或測量測試化合物的NTCP介導(dǎo)的 轉(zhuǎn)運(yùn)的體外或體內(nèi)測定或方法。此外，本發(fā)明設(shè)及用于診斷、預(yù)防和/或治療肝臟疾病或病 況的方法，其包括將治療有效量的基于脂膚的化合物施用于患者。此外，本發(fā)明設(shè)及用于診 斷、預(yù)防和/或治療屯、血管疾病的方法。
[000引發(fā)明背景 人己型肝炎病毒（皿V)是嗜肝DM病毒科的成員。嗜肝DNA病毒是最小的包膜DNA病 毒，其經(jīng)由pgRNA中間體的逆轉(zhuǎn)錄復(fù)制。在裝配過程中，核衣殼獲取稱為大（L)、中（M)和 ?。⊿)的=種病毒包膜蛋白。它們被編碼在一個開放閱讀框中，并且共享對于膜錯定所需 的S結(jié)構(gòu)域。除了S-結(jié)構(gòu)域W外，M含有55個氨基酸的N端親水性延伸（preS2)，而L進(jìn) 一步延伸107、117或118個氨基酸（基因型依賴性），被稱為preSl(化ban2008)。了型 肝炎病毒（皿V)是利用皿V包膜蛋白用于進(jìn)入肝細(xì)胞的衛(wèi)星擬病毒。已知L的肉豆違酷化 的preSl-結(jié)構(gòu)域在皿V和皿V感染性中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
[0003] 本發(fā)明人先前已經(jīng)鑒定了皿Vk蛋白衍生的脂膚，其阻斷皿V和皿V感染P皿和 HepaRG細(xì)胞（Gripon等人，2005，Schulze等人，2010，W0 2009/092611A1)。它們代 表了皿V的preSl-結(jié)構(gòu)域的N端47個氨基酸（皿化reS/2-4Smyt)，并且包括天然存在的肉 豆違酸修飾。
[0004] 在W0 2009/092612和W0 2012/107579(其內(nèi)容W其整體通過引用并入本文）中， 發(fā)明人描述了皿V的疏水性修飾的preS-衍生膚及其作為媒介物用于將化合物特異性遞送 至肝臟的用途。
[0005] 此外，發(fā)明人先前已經(jīng)鑒定了負(fù)責(zé)該些皿￥k蛋白衍生脂膚的結(jié)合的受體，即牛 橫膽酸鋼協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)多膚（NTCP/SLC10A1)。（美國臨時申請61/725, 144,2012年11月12日 申請）。NTCP是整合性跨膜蛋白，在化pG2、化H7中不表達(dá)，在DMS0處理后在化paRG細(xì)胞 中誘導(dǎo)化otani等人，2012)，并且在去分化過程中在原代肝細(xì)胞中下調(diào)值oring等人， 2012)〇
[0006] 具體而言，發(fā)明人已經(jīng)鑒定了在己型肝炎病毒（皿V)和/或了型肝炎病毒（皿V) 感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用的新型皿VpreSl-特異性受體，人牛橫膽酸鋼協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)多膚NTCP/ SLC10A1。該受體或某些非人對應(yīng)物的表達(dá)允許將先前不能結(jié)合皿V和/或皿V和/或不易 受皿V和/或皿V感染的細(xì)胞轉(zhuǎn)化為能夠結(jié)合皿V和/或皿V和/或易受皿V和/或皿V 感染的細(xì)胞。已經(jīng)易受皿V和/或皿V感染的細(xì)胞化巧aRG細(xì)胞）顯示NTCP表達(dá)后顯著 增加的易感性。
[0007] 此外，Yan等人（20。）將NTCP/SLC10A1鑒定為原代樹駒肝細(xì)胞（PTH)中的 preS-特異性受體，并且表明人化）NTCP促進(jìn)皿V/皿V進(jìn)入肝細(xì)胞瘤細(xì)胞。
[0008] 肝臟在藥物生物轉(zhuǎn)化和從身體處置中發(fā)揮主要作用。鑒于其在胃腸道和全身血液 之間的屏障功能，其恒定暴露于進(jìn)入口靜脈循環(huán)的攝取的外源性物質(zhì)。藥物誘導(dǎo)的肝損傷 占自愿向藥物警戒登記（pharmacovigilanceregistries)報告的所有不良藥物反應(yīng)的報 告的高達(dá)7%。藥物引起對肝細(xì)胞、膽管或血管結(jié)構(gòu)的直接損害，或者可干擾膽汁流。通常 遇到的表型因此包括肝炎、膽汁渺積、脂肪變性、肝硬化、血管和腫瘤性病變和甚至暴發(fā)性 肝衰竭。幾乎每種藥物都具有引起肝損傷的潛能，其通過藥劑的直接毒性或通過個體的特 質(zhì)反應(yīng)。肝臟對藥物損傷的敏感性受各種因素諸如年齡、性別、懷孕、組合用藥、腎功能和遺 傳因素的影響（Kullak-Ublick, 2000)。
[0009] 藥物誘導(dǎo)的膽汁渺積性肝病是肝損傷的一種亞型，其特征在于繼發(fā)于施用肝毒性 劑的堿性磯酸酶和膽紅素的主要升高。它本身可W表現(xiàn)為膽汁渺積性肝炎或溫和性膽汁渺 積化landcholestasis),該取決于病原體和損傷機(jī)制。通常引起膽汁渺積與肝炎的藥物 包括精神藥物、抗生素和非醬體抗炎藥（NSAID)。該機(jī)制是免疫過敏的，并且由超敏反應(yīng)導(dǎo) 致。使用避孕藥和17a-烷基化雄激素類固醇最經(jīng)常觀察到無肝炎的純膽汁渺積，并且所 述機(jī)制最可能設(shè)及干擾膽汁鹽、有機(jī)陰離子和磯脂的肝細(xì)胞小管外排系統(tǒng)。膽汁形成的限 速步驟被認(rèn)為是膽汁鹽穿過小管肝細(xì)胞膜的膽汁鹽輸出累炬SE巧介導(dǎo)的轉(zhuǎn)位。環(huán)抱霉素 A、曲格列酬、波生坦、利福平和性類固醇的代謝產(chǎn)物對BSEP功能的抑制是藥物誘導(dǎo)的膽汁 渺積的一個重要原因（Kullak-Ublick, 2000)。
[0010] 本領(lǐng)域需要用于治療肝臟參與的代謝疾病、藥物誘導(dǎo)的毒性和膽汁渺積性肝病W 及屯、血管疾病的改進(jìn)的手段和方法。
[0011] 發(fā)明概述 根據(jù)本發(fā)明，該目標(biāo)通過提供用于診斷、預(yù)防和/或治療肝臟疾病或病況的基于脂膚 的化合物來解決，其中所述肝臟疾病或病況與化合物向肝細(xì)胞的牛橫膽酸鋼協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)多膚 (NTCP)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)。
[0012] 根據(jù)本發(fā)明，該目標(biāo)通過提供用于診斷、預(yù)防和/或治療屯、血管疾病的基于脂膚 的化合物來解決。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明，該目標(biāo)通過用于測試或測量一種或多種測試化合物的NTCP介導(dǎo)的 轉(zhuǎn)運(yùn)的體外或體內(nèi)測定或方法來解決，所述測定或方法包括W下步驟： (a)提供一種或多種測試化合物和如本發(fā)明中定義的基于脂膚的化合物； 化）提供用于功能性和選擇性NTCP表達(dá)的測試系統(tǒng)； (C)與基于脂膚的化合物或不與基于脂膚的化合物一同將一種或多種測試化合物添 加至化）的NTCP測試系統(tǒng)； (d)通過比較各自有添加或無添加基于脂膚的化合物情況下步驟化）和（C)的結(jié)果確 定所述測試化合物是否經(jīng)由NTCP轉(zhuǎn)運(yùn)， 其中，當(dāng)測試化合物減少、阻斷或抑制通過NTCP的膽汁鹽轉(zhuǎn)運(yùn)(競爭性轉(zhuǎn)運(yùn))時，或者當(dāng) 所述化合物的轉(zhuǎn)運(yùn)可W通過添加基于脂膚的化合物而減少、阻斷或抑制時，所述化合物被 認(rèn)為是經(jīng)由NTCP轉(zhuǎn)運(yùn)。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明，該目標(biāo)通過用于診斷、預(yù)防和/或治療肝臟疾病或病況的方法來解 決， 其中所述肝臟疾病或病況與化合物向肝細(xì)胞的牛橫膽酸鋼協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)多膚（NTCP)介導(dǎo) 的轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)， 所述方法包括將治療有效量的基于脂膚的化合物施用于患者。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明，該目標(biāo)通過用于診斷、預(yù)防和/或治療屯、血管疾病的方法來解決。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明，該目標(biāo)通過用于控制或改變膽固醇水平或膽固醇攝取的方法來解 決，所述方法包括將治療有效量的基于脂膚的化合物施用于患者。
[0017] 本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案的描述 在W下更詳細(xì)地描述本發(fā)明之前，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不限于本文中描述的具體方法、方 案和試劑，因?yàn)樗鼈兛蒞變化。還應(yīng)當(dāng)理解，本文中所用的術(shù)語僅出于描述具體實(shí)施方案的 目的，并且不旨在限定將僅由所附權(quán)利要求限定的本發(fā)明的范圍。除非另有說明，否則本文 中所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語均具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。出于本 發(fā)明的目的，本文中引用的所有參考文獻(xiàn)均W其整體通過引用并入本文。
[0018] 濃度、量和其他數(shù)值數(shù)據(jù)在本文中可W范圍形式表達(dá)或呈現(xiàn)。應(yīng)當(dāng)理解的是，此類 范圍形式僅僅出于方便和簡潔而使用，并且因此應(yīng)當(dāng)靈活地解釋W(xué)不僅包括作為范圍的限 值明確記載的數(shù)值，而且包括該范圍內(nèi)涵蓋的所有個別數(shù)值或子范圍，如同每個數(shù)值和子 范圍被明確地記載。作為舉例說明，"至少4個氨基酸，優(yōu)選4至19"的數(shù)值范圍應(yīng)當(dāng)被解 釋為不僅包括4至19的明確記載的值，而且包括所示范圍內(nèi)的個別值和子范圍。因此，該 數(shù)值范圍內(nèi)包括的是個別值，諸如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19,和子范 圍諸如4至10、6至15、10至19、8至19和15至19等。作為舉例說明，"至少1個氨基酸， 優(yōu)選1至78"的數(shù)值范圍應(yīng)當(dāng)被解釋為不僅包括1至78的明確記載的值，而且包括所示范 圍內(nèi)的個別值和子范圍。因此，該數(shù)值范圍內(nèi)包括的是個別值，諸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 …75、76、77、78,和子范圍諸如10至50、15至40、8至35、30至50和20至40等。該相同 原則適用于僅記載一個數(shù)值的范圍。此外，此類解釋應(yīng)當(dāng)適用，而不論范圍的寬度或所述特 征。
[001引脂膚在肝臟疾病的治療中的用途 如上所討論，本發(fā)明提供用于診斷、預(yù)防和/或治療肝臟疾病或病況的基于脂膚的化 合物。
[0020] 所述肝臟疾病或病況與化合物向肝細(xì)胞的牛橫膽酸鋼協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)多膚（NTCP)介導(dǎo) 的轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)。
[0021] 優(yōu)選地，所述與化合物向肝細(xì)胞的NTCP介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的肝臟疾病或病況是選 自W下的肝臟參與的代謝疾病 肝內(nèi)膽汁渺積， 肝臟（通過肝臟毒素）的中毒/肝毒性， 藥物誘導(dǎo)的膽汁渺積性肝病， 局脂血癥。
[002引-基于脂膚的化合物基于脂膚的化合物優(yōu)選包含： (a)膚或氨基酸序列， 化）疏水性或脂質(zhì)修飾，優(yōu)選在膚（a)處， (C)任選地，一個或多個進(jìn)一步部分。
[0023] 優(yōu)選地，#?或氛蓋屬庚琢白;具有或包含通式 X-P-Y 其中 P是氨基酸序列NPLGF斯aPSEQ.IDNO: 1， (單字母氨基酸代碼） 其中斯a是任意氨基酸；優(yōu)選F或L更優(yōu)選F(因此，P優(yōu)選為NPLGFFP或NPLGFLP); X是具有m個氨基酸長度的氨基酸序列， 其中m為至少4 ; Y是具有n個氨基酸長度的氨基酸序列， 其中n為0或至少1; 并且其中m+n>11。
[0024]膚或氨基酸序列（a)(具有通式X-P-Y)優(yōu)選衍生自己型肝炎病毒（皿V)的preS結(jié)構(gòu)域（也稱為"preS-膚"）。皿V的包膜包封S種蛋白，其被稱為L(大）、M(中）和 S(小）。它們共有具有四個跨膜區(qū)的C端S結(jié)構(gòu)域。