一種葡萄果中原花青素提取物的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物美容領(lǐng)域，具體涉及一種葡萄果中原花青素提取物的制備方法及 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 葡萄，又稱提子，是葡萄屬的一種常見落葉木質(zhì)藤本植物，是漿果類水果中營養(yǎng)價 值極高的一種水果類物質(zhì)，原產(chǎn)于亞洲西部地區(qū)?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中載文稱，葡萄具有"久食， 親身不老延年"的功效，葡萄是一種具有抗貧血、抗炎和美容養(yǎng)顏功效的水果。葡萄中含有 的花青素等多酚類化學(xué)成份，這些成分具有突出的抗氧化性，能夠消除人體自由基，抑制體 內(nèi)脂質(zhì)過氧化，達(dá)到增強皮膚免疫力、防止紫外線、美白、祛斑及減少皺紋、收斂毛孔和保濕 的效果。目前現(xiàn)有的專利和技術(shù)的關(guān)注點都集中在葡萄籽中原花青素的提取，而葡萄皮和 葡萄果肉以及葡萄籽中都有原花青素類物質(zhì)的存在，而實際上葡萄皮和葡萄果實中的原花 青素含量也不低，但由于葡萄果通常用來釀酒，該部分的原花青素基本被廢棄，實際上原花 青素的含量和價值不亞于釀酒。
[0003] 目前針對原花青素的提取方法中主要有：一、水溶液浸泡法，在水溶液中利用加熱 浸泡，然后用非極性大孔樹脂吸附，用乙醇洗脫、濃縮得到粗提物，粗提物蒸干得到粉末狀 結(jié)晶。然而本方法提取得到的產(chǎn)品純度較低，回收率也較低，其使用受到一定的限制。二、 有機(jī)溶劑萃取法，根據(jù)相似相溶原理，選用水、乙醇、乙酸乙酯和丙酮等萃取劑進(jìn)行提取。然 而本方法分離過程的工藝流程復(fù)雜，操作時間長，對化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的化合物分離純化能力 有限，而且使用的溶劑種類多、用量大，容易對環(huán)境造成污染。三、微波輔助提取法，根據(jù)物 質(zhì)組分不同的微波吸收能力差異使得基體物質(zhì)的某些區(qū)域或萃取體系中的某些組分被選 擇性加熱，從而使得萃取物質(zhì)從基質(zhì)活體系中分離，計入介電常數(shù)較小、微波吸收能力相對 較差的萃取液中。四、超臨界流體萃取法，利用超臨界流體作為萃取劑液體和固體中提取某 些成分，達(dá)到分離和提純的目的。然而本方法需要特定的設(shè)備，設(shè)備運行及維護(hù)成本較高， 而且對不同成分的提取率有著很大的差異。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供葡萄果中原花青素提取物的制備方 法，該方法能夠高效地提取葡萄果中原花青素，并應(yīng)用于抗衰老美容化妝品中。
[0005] 本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：
[0006] -種葡萄果中原花青素提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0007] (1)準(zhǔn)備葡萄皮和葡萄果肉：將葡萄果剔除葡萄籽得到葡萄皮和葡萄果肉；
[0008] 葡萄籽自身帶有一層外殼保護(hù)結(jié)構(gòu)，在提取原花青素的過程中需要去除該部分結(jié) 構(gòu)，在去除的過程中可能導(dǎo)致部分原花青素?fù)p失，因此工藝相對復(fù)雜，不僅需要相應(yīng)的設(shè) 備，而且在去殼的過程有引進(jìn)雜質(zhì)的風(fēng)險，而葡萄果實和葡萄皮由于自身結(jié)構(gòu)不同，不存在 該問題，因此原材料的初步處理工藝上不同，只需要進(jìn)行一步的溶劑萃取，無需進(jìn)行二次溶 劑萃取，而且減少了萃取劑的應(yīng)用就降低了引進(jìn)雜質(zhì)的風(fēng)險。
[0009] (2)萃取原花青素：按體積比為（0. 5-2) : (0. 5-2) : (0. 5-2)配置甲醇、乙醇和水溶 液成混合溶液，將混合溶液與步驟（1)準(zhǔn)備的葡萄皮和葡萄果肉混合，反應(yīng)12-36小時；
[0010] 本發(fā)明采用甲醇、乙醇和水的混合溶液來萃取原花青素，且為了更好的提高提取 效率，甲醇、乙醇和水體積比為（〇. 5-2) : (0. 5-2) : (0. 5-2)，該比例的混合溶液對提取葡萄 果實中的原花青素更加有效。
[0011] 乙醇作為一種無毒萃取劑，在工業(yè)應(yīng)用上范圍較廣，但是乙醇對原花青素的提取 率相對沒有甲醇等物質(zhì)高，因此將甲醇和乙醇及水等混合一起既可以提高萃取率時又能降 低甲醇的殘留，同時又能夠降低可能殘留的甲醇對人體帶來的毒副作用；經(jīng)實驗證明最佳 比例為1 :1，而現(xiàn)有對比技術(shù)中的其溶劑的成份較為復(fù)雜，容易引進(jìn)雜質(zhì)，而且其成份中醚 類及烷烴類分子量較大，在萃取時會降低原花青素的萃取率。而且本發(fā)明跟現(xiàn)有技術(shù)相比 不需要進(jìn)行二次萃取，因此在溶劑成份和比例上，包括萃取效果和萃取次數(shù)上都相對現(xiàn)有 技術(shù)更具優(yōu)勢。
[0012] (3)步驟⑵反應(yīng)后，將反應(yīng)物進(jìn)行固液分離得到提取液，在 (-0. 30MPa)-(-0. 05MPa)的條件下，對提取液用水凍溶，并濃縮；
[0013] 在負(fù)壓情況下，會產(chǎn)生強烈的空化效應(yīng)和機(jī)械震動，造成葡萄細(xì)胞壁快速破碎，加 速胞內(nèi)物質(zhì)的向介質(zhì)釋放、擴(kuò)散和溶解，促進(jìn)提取的過程，達(dá)到較好的提取效率。隨著負(fù)壓 的增加，葡萄果實細(xì)胞和葡萄皮中的原花青素的提取率會有增加，但是隨著負(fù)壓達(dá)到一定 的臨界值后就會開始下降，所以要選擇一個最佳的負(fù)壓值。而凍溶是因為在低溫情況下，細(xì) 胞的一些生物活性能夠得到保存，包括原花青素的生物化學(xué)結(jié)構(gòu)能夠更加的穩(wěn)定，同時提 取率更加的高。
[0014] 本發(fā)明采用負(fù)壓低溫凍溶法結(jié)合非持續(xù)微波法提取葡萄中的原花青素。本發(fā)明在 (-0. 30MPa)-(-0. 05MPa)的條件下，對提取液用小于等于0°C;這種非持續(xù)性的微波處理能 夠盡量降低葡萄果實和葡萄皮中細(xì)胞的細(xì)胞膜破碎速度，降低提取樣品引入雜質(zhì)的幾率， 再結(jié)合反應(yīng)液的溫度，提高提取效率。
[0015] (4)微波提取原花青素：在400-650W微波條件下對提取液處理6-15min，離心；
[0016] (5)濃縮：將步驟⑷離心后的上清液進(jìn)行濃縮，得到濃縮的原花青素提取液。
[0017] 優(yōu)選的，步驟（1)中將所述葡萄皮和葡萄果肉搗碎。
[0018] 優(yōu)選的，步驟（2)中所述甲醇、乙醇和水的體積比為1:1:1，所述混合溶液與步驟 (1)準(zhǔn)備的葡萄皮和葡萄果肉混合后反應(yīng)24小時。
[0019] 優(yōu)選的，步驟（3)中將所述固液分離得到提取液在_〇.lOMPa下用0°C以下的水凍 溶；所述步驟（4)中在550W微波條件下對所述提取液處理。
[0020] 優(yōu)選的，步驟（4)中對所述提取液處理采用進(jìn)行短時間多次微波處理方式，每次 微波時間為〇. 3-0. 8S，時間間隔為0. 3-0. 8S。
[0021] 優(yōu)選的，步驟（4)中每次微波時間為0. 5S，時間間隔為0. 5S，提取液溫度超過設(shè) 定的報警溫度40-50°C則反應(yīng)停止；所述微波處理過的提取液在2000-4000r/min下離心 5-20min。這種非持續(xù)性的微波處理能夠盡量降低葡萄果實和葡萄皮中細(xì)胞的細(xì)胞膜破碎 速度，降低提取樣品引入雜質(zhì)的幾率，再結(jié)合反應(yīng)液的溫度，在超過一定設(shè)定溫度的情況 下，可提前結(jié)束微波處理，因為較高的溫度會破壞原花青素的化學(xué)結(jié)構(gòu)，故要設(shè)置一定的溫 度，提前停止是因為在該溫度下細(xì)胞膜的通透性已經(jīng)很大，再高的溫度可能會讓細(xì)胞膜通 透性活性完全死亡，釋放大量的其它雜質(zhì)類物質(zhì)，增加了分離提取的難度。
[0022] 本發(fā)明還提供了所述方法制得的葡萄果中原花青素提取物制成原花青素凍干粉 的方法，包括以下步驟：
[0023] (1)過濾：收集濃縮的原花青素提取液，用孔徑小于0. 45yM的濾膜過濾；
[0024] (2)濃縮：濃縮上清液；
[0025] (3)過濾：將濃縮的上清液采用孔徑小于0.22yM的濾膜過濾；
[0026] (4)凍干處理：凍干溫度為（_20°C)-(_35°C)，真空度為50_200Pa，凍干時間為 24-36小時，即得到原花青素凍干粉。
[0027] 本發(fā)明提供了所述方法制得的原花青素凍干粉在抗衰老護(hù)膚品中應(yīng)用。本發(fā)明 將去籽后葡萄皮和葡萄果實中的原花青素化合物應(yīng)用于抗衰老美容行業(yè)中，如面膜等化妝 品，能夠達(dá)到保持面部肌膚彈性、去皺等效果，同時也可以將其應(yīng)用在保健品中。
[0028] 優(yōu)選的，所述抗衰老護(hù)膚品為面膜、爽膚水、面霜、乳液、眼霜、洗面乳。
[0029] 優(yōu)選的，所述原花青素凍干粉在抗衰老護(hù)膚品中的添加量為1-1000Ug/ml。
【具體實施方式】
[0030] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明 進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0031] 實施例1
[0032] 1.葡萄皮和葡萄果肉的準(zhǔn)備
[0033]1)選取新鮮的葡萄（在市場上采購即可），用自來水清洗干凈后再用去離子水清 洗一遍，然后剔除葡萄中的葡萄籽。
[0034] 2)將剔除葡萄籽的葡萄果放在不銹鋼容器中，然后用器械盡可能地?fù)v碎徹底。
[0035] 2?加入混合有機(jī)溶劑萃取原花青素
[0036] 1)按照體積比為1 :1 :1的比例加入甲醇、乙醇和水溶液，充分?jǐn)嚢杌靹蛴袡C(jī)溶劑 和搗碎后的去籽葡萄。
[0037] 2)靜置24小時后處理。
[0038] 3?負(fù)壓凍溶
[0039]1)靜置結(jié)束后對其進(jìn)行抽濾處理，進(jìn)行固液分離。
[0040] 2)在-0. 10mPa的負(fù)壓條件下，用0°C冷水凍溶，蒸發(fā)回收甲醇及乙