專利名稱：一種海藻多糖及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在海藻原料中提取的海藻多糖及其制備方法和用途。
乳節(jié)藻Galaxaura sp.廣泛分布在我國的南海海域，資源豐富，有關(guān)它的藥理及化學方面的研究，目前國內(nèi)外尚未見報道。目前在臨床上所用的鎮(zhèn)靜催眠藥物主要是以生化藥為主，如安定、巴比妥類藥等，此類藥物的毒性和副作用較大，因而探索從天然海洋植物中提取其藥用有效成分并研究其適于工業(yè)應(yīng)用的制備方法，以便對海藻資源進行綜合利用，具有重要意義。
本發(fā)明的目的是提出一種從海藻原料中所分離提取的海藻多糖的新物質(zhì)及其制備方法，并提出該物質(zhì)作為鎮(zhèn)靜、安神和催眠藥物的新用途。
本發(fā)明所提出的海藻多糖新產(chǎn)品，為海洋植物中的紅藻門Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳節(jié)藻屬Galaxaura Lamx.的海藻所提取分離的有效部位多糖，其分子量在500～50000道爾頓之間，固態(tài)呈淺黃色至淺棕色，用高壓液相色譜分析，單糖的組成主要為90～98％的葡萄糖醛酸、2～8％的海藻糖及少量的阿拉伯糖和葡萄糖，糖溶液的pH＜7，屬于酸性多糖。
本發(fā)明的海藻多糖產(chǎn)品，從所述的海藻原料中所提取分離的有效部位多糖，其分子量在500～20000道爾頓之間的，品質(zhì)較好；其有效部位多糖的分子量在2000～12000道爾頓之間的，品質(zhì)最好。
本發(fā)明所述的海藻多糖的制備方法為以海洋植物中的紅藻門Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳節(jié)藻屬Galaxaura Lamx.的海藻為原料，其制備工藝步驟如下(1)干海藻粉碎后稱量；(2)用非脂性溶劑的水溶液浸泡，所說的非脂性溶劑一般可采用乙醇、甲醇、丙醇或乙二醇；(3)過濾出浸泡液；(4)將浸泡液在減壓蒸干；(5)用有機溶劑浸泡蒸干物5～10小時，所說的有機溶劑一般可采用乙醇、甲醇、異丙醇、丙酮、丁醇、二甲基甲胺或二甲亞砜；(6)過濾，取濾液；(7)所得的濾液加入有機溶劑，攪拌后靜置，使分層，除去上層含葉綠素部分的層液，所說的有機溶劑可采用乙酸乙脂、乙酸丁脂、苯、甲苯、二甲苯或60～90°的石油醚；(8)將除去葉綠素后的濾液通過離子交換柱或離子滲析方法脫鹽；(9)將經(jīng)脫鹽的濾液先用酸性離子交換，再用堿性離子交換去蛋白；(10)對離交下柱液加氨水中和至中性；(11)再加入乙醇，形成沉淀物；(12)取沉淀物，用無水乙醇洗滌，一般洗滌3～5次；(13)再先后經(jīng)陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂截取得分子量為500～50000道爾頓的多糖。所述的陰離子交換樹脂最好采用701(弱堿330)陰離子交換樹脂；所述的陽離子交換樹脂最好采用724(弱酸101)陽離子交換樹脂或732陽離子交換樹脂；(14)將上述所得物濃縮后，烘干，粉碎，或者直接將濃縮物噴霧干燥，即得本海藻多糖產(chǎn)品。
為獲取品質(zhì)較好的海藻多糖產(chǎn)品，上述步驟(13)的所得物可進一步純化，用高壓液相色譜分離、提純得分子量為500～20000道爾頓的多糖，最好提純分子量為2000～12000道爾頓的多糖，以后再繼續(xù)所述的步驟(14)即可得精制的海藻多糖產(chǎn)品。
本發(fā)明所提供的海藻多糖產(chǎn)品，是從所述的海洋植物中的紅藻門Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳節(jié)藻屬Galaxaura Lamx.的海藻原料中經(jīng)過逐步分離提純所得到的有效部位為一種海藻多糖，根據(jù)藥效學研究以及動物試驗和初步臨床試驗結(jié)果表明，本海藻多糖產(chǎn)品對神經(jīng)系統(tǒng)具有很強的抑制作用，具有明顯的鎮(zhèn)靜、安神和催眠等作用，可用作鎮(zhèn)靜、安神、催眠的藥品或作為具有這類藥用功能的保健品或食品。
本發(fā)明采用現(xiàn)代科學方法，對所述的海藻原料中的藥用保健成分進行分離提純，所制得的海藻多糖產(chǎn)品安全無毒，其制備方法可靠易行，適宜大規(guī)模生產(chǎn)，不污染環(huán)境，成本低。
本發(fā)明良好的鎮(zhèn)靜、安神和催眠作用，已經(jīng)過動物實驗證明，現(xiàn)將它的主要藥效學實驗報告如下藥效試驗結(jié)果Ⅰ．樣品來源中國科學院南海海洋研究所提供的本海藻多糖(簡稱GPG)產(chǎn)品Ⅱ．實驗動物NIH純系小白鼠，由廣東省醫(yī)用動物飼養(yǎng)場提供Ⅲ．試驗方法與結(jié)果(一)．對小鼠一般行為活動的影響試驗取健康小鼠170只，體重20+2g，雌雄各半，隨機分17組，用于灌胃給藥的有8個不同劑量組，用于腹腔注射給藥的有9個不同劑量組。給藥后連續(xù)觀察和記錄小鼠在24小時內(nèi)的行為外觀癥狀。
(二)．口服給藥與巴比妥類藥物的協(xié)同作用1、對戊巴比妥鈉睡眠時間的影響預(yù)試驗得出使小鼠100％入睡，但又不使睡眠時間過長的戊巴比妥鈉劑量為30mg/kg，小鼠體重20-25g，隨機分7組，給藥組口服一定劑量的海藻GPG多糖，藥物出現(xiàn)峰作用前10-15分鐘，給動物腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg，觀察海藻GPG多糖對戊巴比妥鈉睡眠時間的延長作用。結(jié)果見表1。
表1口服給藥對戊巴比妥鈉睡眠時間的影響組別 劑量mg/kg 動物數(shù)只 出現(xiàn)睡眠百分率％ 平均睡眠時間分鐘 P值戊巴比妥鈉組 30 10 100 20.75+5.94高GPG組 1400 10 00中GPG組 1050 10 00低GPG組 700 10 00高GPG+戊1400+30 10 100 52.05+3.51*＜0.01中GPG+戊1050+30 10 100 42.70+4.49*＜0.01低GPG+戊700+30 10 100 28.45+4.54*＞0.05*與戊巴比妥鈉組比較2、對戊巴比妥鈉閾下催眠劑量試驗預(yù)試驗得出戊巴比妥鈉閾下催眠劑量，即90-100％小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大劑量為25mg/kg。小鼠體重20-25g，隨機分7組，給藥組口服一定劑量的海藻GPG多糖，藥物出現(xiàn)峰作用前10-15分鐘，腹腔注射戊巴比妥鈉25mg/kg，觀察口服給藥動物出現(xiàn)睡眠數(shù)。結(jié)果見表2。
表2 口服給藥對戊巴比妥鈉閾下催眠劑量試驗組別劑量mg/kg動物數(shù)(只)出現(xiàn)睡眠數(shù)(只)未出現(xiàn)睡眠數(shù)(只) P值戊巴比妥鈉 25 10 0 10高GPG組 1400 10 0 10中GPG組 1050 10 0 10低GPG組700 10 0 10高GPG+戊 1400+25 10 10 0 ＜0.01中GPG+戊 1050+25 10 8 2 ＜0.01低GPG+戊700+25 10 7 3 ＜0.013、再入睡試驗小鼠體重20-25g，隨機分4組，給予睡眠劑量30mg/kg的戊巴比妥鈉，小鼠睡眠醒來后立即口服一定劑量的海藻GPG多糖，觀察口服給藥動物出現(xiàn)的再入睡數(shù)。結(jié)果見表3。
表3 口服給藥再入睡試驗組別 劑量mg/kg 動物數(shù)(只) 出現(xiàn)再入睡數(shù)(只) 未出現(xiàn)再入睡數(shù)(只) P值戊巴比妥鈉 30 10 010高GPG組 1400+30 10 l00＜0.01中GPG組 1050+30 10 9 1＜0.01低GPG組 700+30 l0 7 3＜0.01(三)．腹腔注射給藥與巴比妥類藥物的協(xié)同作用1．對戊巴比妥鈉睡眠時間的影響方法與(二)1相同，給藥途徑為腹腔注射。觀察腹腔注射海藻GPG多糖對戊巴比妥鈉睡眠時間的延長作用。結(jié)果見表4。
表4腹腔注射給藥對戊巴比妥鈉睡眠時間的影響組別 劑量mg/kg 動物數(shù)只 出現(xiàn)睡眠百分率％ 平均睡眠時間分鐘 P值戊巴比妥鈉30 10 100 18.80+4.55高GPG組 280 10 00中GPG組 210 10 00低GPG組 140 10 00高GPG+戊 280+30 0 100 34.50+5.40* ＜0.05中GPG+戊 210+30 10 100 28.75+3.58* ＜0.05低GPG+戊 140+30 10 100 29.10+5.91* ＜0.05*與戊巴比妥鈉組比較2．戊巴比妥鈉閾下催眠劑量試驗預(yù)試驗得出戊巴比妥鈉閾下催眠劑量為18mg/kg。方法與(二)2相同，給藥途徑為腹腔注射。觀察腹腔注射海藻GPG多糖后動物出現(xiàn)睡眠數(shù)。結(jié)果見表5。
表5腹腔注射給藥對戊巴比妥鈉閾下催眠劑量試驗組別 劑量mg/kg動物數(shù)只 出現(xiàn)睡眠數(shù)只 未出現(xiàn)睡眠數(shù)只P值戊巴比妥鈉 18 101 9高GPG組280 100 10中GPG組210 100 10低GPG組140 100 10高GPG+戊280+18 1010 0＜0.01中GPG+戊210+18 109 1＜0.01低GPG+戊140+18 102 8＞0.053．再入睡試驗方法與(二)3相同，給藥途徑為腹腔注射。觀察腹腔注射海藻GPG多糖后動物出現(xiàn)的再入睡數(shù)。結(jié)果見表6。
表6腹腔注射給藥再入睡試驗組別 劑量mg/kg 動物數(shù)(只) 出現(xiàn)睡眠數(shù)(只) 未出現(xiàn)睡眠數(shù)(只) P值戊巴比妥鈉 30 10 0 10高GPG+戊280+30 10 100 ＜0.01中GPG+戊210+30 10 100 ＜0.01低GPG+戊140+30 10 73 ＜0.01結(jié)論1．海藻GPG多糖對動物試驗具有很明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用，表現(xiàn)為動物活動減少，安靜，隨劑量的提高作用加強，動物出現(xiàn)睡眠。
2．海藻GPG多糖能使動物自主活動減少。
3．海藻GPG多糖與巴比妥類藥物合用有協(xié)同作用。二種給藥途徑均可延長戊巴比妥鈉的睡眠時間，同時與戊巴比妥鈉閾下催眠劑量試驗中，90％以上小鼠發(fā)生睡眠。在再入睡試驗中，小鼠出現(xiàn)再入睡。
上述試驗表明口服及腹腔注射二種途經(jīng)給予海藻GPG多糖，對實驗動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)均有較強的抑制作用，既具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠等作用。
實施例一取干海藻(紅藻門Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳節(jié)藻屬Galaxaura Lamx.的海藻)2公斤，粉碎后，加濃度為95％的乙醇2倍量(重量)，浸泡5次，濾布過濾出浸泡液，在80℃下減壓蒸干；蒸干物加丙酮浸泡8小時，框濾出濾液，加乙酸乙脂，攪拌后靜置1小時，分層后除去上層含葉綠素部分的層液，再用離子滲析法脫鹽，然后用酸性離子交換和堿性離子交換，離交下柱液加氨水中和至中性，加入乙醇有沉淀物產(chǎn)生，取沉淀物用無水乙醇洗滌三次；再用701陰離子交換樹脂及724陽離子交換樹脂截取分子量為500～50000道爾頓的多糖，最后用高壓液相色譜分離、提純得分子量為2000～12000道爾頓的多糖，然后在80℃下烘干1小時，粉碎烘干物，即得本淺黃色海藻多糖。
實施例二將所述的干海藻粉碎后，稱2公斤，加95％甲醇約2倍量，浸泡5次，濾布過濾出浸泡液，在60℃下減壓蒸干；蒸干物加乙醇浸泡6小時，框濾出濾液濃縮，回收乙醇；濃縮物加苯，攪拌后靜置1小時，分層后除去上層含葉綠素部分的層液，用離子交換柱脫鹽，離交下柱液加氨水中和至中性，加入乙醇有沉淀物產(chǎn)生，用無水乙醇洗滌沉淀物五次，再用701陰離子交換樹脂及724陽離子交換樹脂截取分子量為500～50000道爾頓的多糖；最后用高壓液相色譜分離、提純得分子量為500～10000道爾頓的多糖，然后經(jīng)噴霧干燥即得本淺黃色海藻多糖。
實施例三將所述的干海藻粉碎后，稱2公斤，加95％甲醇約2倍量，浸泡5次，濾布過濾出浸泡液，在60℃下減壓蒸干，回收乙醇；蒸干物加異丙醇浸泡6小時，過濾出濾液濃縮；濃縮物加苯，攪拌后靜置1小時，分層后除去上層含葉綠素部分的層液，用離子交換柱脫鹽，離交下柱液加氨水中和至中性，加入乙醇有沉淀物產(chǎn)生，用無水乙醇洗滌沉淀物三次，再用701陰離子交換樹脂及732陽離子交換樹脂截取分子量為500～50000道爾頓的多糖，然后用高壓液相色譜分離、提純得分子量為2000～50000道爾頓的多糖，最后在80℃下烘干1小時，粉碎烘干物，即得本淺棕色海藻多糖。
權(quán)利要求
1．一種海藻多糖，其特征在于為海洋植物中的紅藻門Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳節(jié)藻屬Galaxaura Lamx.的海藻所提取分離的有效部位多糖，其分子量在500～50000道爾頓之間，固態(tài)呈淺黃色至淺棕色，用高壓液相色譜分析，單糖的組成主要為90～98％的葡萄糖醛酸、1～8％的海藻糖及少量的阿拉伯糖和葡萄糖，糖溶液的pH＜7。
2．按權(quán)利要求1所述的海藻多糖，其特征在于該海藻多糖的分子量在500～20000道爾頓之間。
3．按權(quán)利要求1所述的海藻多糖，其特征在于該海藻多糖的分子量在2000～12000道爾頓之間。
4．權(quán)利要求1所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于以海洋植物中的紅藻門Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳節(jié)藻屬GalaxauraLamx.的海藻為原料，其制備工藝步驟如下(1)干海藻粉碎后稱量；(2)用非脂性溶劑的水溶液浸泡；(3)過濾出浸泡液；(4)將浸泡液在減壓蒸干；(5)用有機溶劑浸泡蒸干物5～10小時；(6)過濾，取濾液；(7)所得的濾液加入有機溶劑，攪拌后靜置，使分層，除去上層含葉綠素部分的層液；(8)將除去葉綠素后的濾液通過離子交換柱或離子滲析方法脫鹽；(9)將經(jīng)脫鹽的濾液先用酸性離子交換，再用堿性離子交換去蛋白；(10)對離交下柱液加氨水中和至中性；(11)再加入乙醇，形成沉淀物；(12)取沉淀物，用無水乙醇洗滌；(13)再先后經(jīng)陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂截取得分子量為500～50000道爾頓的多糖；(14)將上述所得物濃縮后，烘干，粉碎，或者直接將濃縮物噴霧干燥，即得本海藻多糖產(chǎn)品。
5．按權(quán)利要求4所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所述的步驟(13)的所得物可進一步純化，用高壓液相色譜分離、提純得分子量為500～20000道爾頓的多糖，以后再繼續(xù)所述的步驟(14)即可得精制的海藻多糖產(chǎn)品。
6．按權(quán)利要求4所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所述的步驟(13)的所得物可進一步純化，用高壓液相色譜分離、提純得分子量為2000～12000道爾頓的多糖，以后再繼續(xù)所述的步驟(14)即可得精制的海藻多糖產(chǎn)品。
7．按權(quán)利要求4所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中，所說的非脂性溶劑為乙醇、甲醇、丙醇或乙二醇的水溶液。
8．按權(quán)利要求4所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所述的步驟(5)中，所說的有機溶劑為乙醇、甲醇、異丙醇、丙酮、丁醇、二甲基甲胺或二甲亞砜。
9．按權(quán)利要求4所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所述的步驟(7)中，所說的有機溶劑為乙酸乙脂、乙酸丁脂、苯、甲苯、二甲苯或60～90°的石油醚。
10．按權(quán)利要求4所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所述的步驟(12)中，所述的沉淀物用無水乙醇洗滌3～5次。
11．按權(quán)利要求4所述的海藻多糖的制備方法，其特征在于所述的步驟(13)中，所述的陰離子交換樹脂最好采用701(弱堿330)陰離子交換樹脂；所述的陽離子交換樹脂最好采用724(弱酸101)陽離子交換樹脂或732陽離子交換樹脂。
12．權(quán)利要求1所述的海藻多糖，其特征在于用作鎮(zhèn)靜、安神和催眠藥品。
全文摘要
本發(fā)明提供一種海藻多糖及其制備方法,所說的海藻多糖產(chǎn)品,為海洋植物中的紅藻門Rhofophys,海索面目Nemaliales,粘皮藻科Chaetangiaceae,乳節(jié)藻屬Galaxaura Lamx.的海藻所提取分離的有效部位多糖,其分子量在500～50000之間,固態(tài)呈淺黃色至淺棕色,可用作鎮(zhèn)靜、安神、催眠的藥品或作為具有這類藥用功能的保健品或食品。本發(fā)明還提供本海藻多糖產(chǎn)品的制備方法,該方法可靠易行,適宜大規(guī)模生產(chǎn),不污染環(huán)境,成本低。
文檔編號C08B37/00GK1297948SQ9911725
公開日2001年6月6日 申請日期1999年11月30日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月30日
發(fā)明者鐘紅茂, 李瑞聲, 趙迪, 劉錫金, 林卓新, 張維漢 申請人:中國科學院南海海洋研究所