專利名稱:一類新型的水飛薊賓類黃酮木脂素及其制備方法和用途的制作方法
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明屬于有機(jī)化學(xué)和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一類新型的水飛薊賓類黃酮木脂素的制備方法和用途，該類化合物通過全合成的方法得到。本發(fā)明的化合物及其中間體對(duì)SD新生大鼠原代肝細(xì)胞有抗氧化損傷保護(hù)作用，且在同一濃度下，其對(duì)細(xì)胞抗氧化損傷能力比陽性對(duì)照槲皮素還要高出許多，可以預(yù)期作為防止肝臟損傷類藥物用途；本發(fā)明又對(duì)該類化合物抗氧自由基活性進(jìn)行了測(cè)試，發(fā)現(xiàn)其具有體外清除超氧陰離子自由基、清除二苯基苦基苯肼自由基、抑制自由基誘導(dǎo)之脂過氧化物生成的活性，以上活性表明該類水飛薊賓類黃酮木脂素可以預(yù)期用于制備預(yù)防或治療急性慢性肝損傷類疾病以及由氧自由基引起或與氧自由基有關(guān)的其他生理改變或疾病的藥物；該類化合物還表現(xiàn)出很強(qiáng)的對(duì)抗自由基引起的PC12細(xì)胞損傷作用，即對(duì)模擬腦神經(jīng)細(xì)胞的PC12細(xì)胞有抗氧化損傷保護(hù)作用，而且在同一濃度下，其清除自由基保護(hù)細(xì)胞的能力比陽性對(duì)照槲皮素還高，說明其對(duì)保護(hù)腦神經(jīng)抗氧化、防治老年性癡呆癥有積極作用；以上活性表明該類水飛薊賓類黃酮木脂素可以預(yù)期用于制備預(yù)防或治療急性慢性肝損傷類疾病以及由氧自由基引起或與氧自由基有關(guān)的其他生理改變或疾病的藥物。
背景技術(shù)：
水飛薊賓作為最早發(fā)現(xiàn)的一類黃酮木脂素，存在于菊科植物水飛薊的種子中。在眾多抗自由基天然產(chǎn)物中，水飛薊是少數(shù)幾個(gè)在臨床上廣泛應(yīng)用的藥物之一。三十多年的臨床實(shí)驗(yàn)證明該藥具有確切的療效和低毒性(參閱Flora K.等人，Am.J.Gastroenterol，1998，93，139-143；Saller R.等人，Drugs，2001，61(14)，2035-2063)。水飛薊中水飛薊賓含量最多，活性也最高。該藥作用主要有以下幾點(diǎn)。(一)抗自由基活性水飛薊素對(duì)于由CCl4，半乳糖胺、醇類和其他肝毒素造成的肝損害具有保護(hù)作用。1990年Lotteron等人報(bào)道了在小鼠肝微粒體內(nèi)，水飛薊素能減少由CCl4代謝引起的體外脂質(zhì)過氧化及由還原型輔酶單獨(dú)引起的過氧化作用這些都表明水飛薊素為鏈中斷抗氧化劑或?yàn)樽杂苫宄齽?二)保護(hù)肝細(xì)胞膜通過抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)維持細(xì)胞膜的流動(dòng)性，保護(hù)肝細(xì)胞膜。還能阻斷真菌毒素鬼筆毒環(huán)肽和α-鵝膏蕈堿等與肝細(xì)胞上特異受體的結(jié)合，抑制其對(duì)肝細(xì)胞的攻擊及跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，中斷其肝腸循環(huán)，從而增強(qiáng)肝細(xì)胞膜對(duì)于多種損害因素的抵抗力。(三)促進(jìn)肝細(xì)胞的修復(fù)和再生水飛薊賓進(jìn)入細(xì)胞后可以與雌二醇受體結(jié)合，并使之激活，活化的受體可以增強(qiáng)肝細(xì)胞核內(nèi)RNA聚合酶1的活性，使RNA轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)，促進(jìn)酶及蛋白質(zhì)的合成，并間接促進(jìn)DNA的合成，有利于肝細(xì)胞的修復(fù)和再生；(四)抗腫瘤作用各種活性氧能氧化鳥嘌呤形成8-羥基鳥嘌呤，造成DNA損傷，進(jìn)而引起腫瘤，水飛薊賓作為一個(gè)有效的抗自由基物質(zhì)也顯示了預(yù)防和治療腫瘤的作用。此外，水飛薊賓還可作用于pGp偶聯(lián)蛋白，作為腫瘤耐藥抑制劑以及抗菌耐藥抑制劑(Maitrejean等，Bioorganic Medinical Chemitry Letters，(2000)，10，157-160；Guz等，Journal of Medinical Chemitry，(2001)，44，261-268)。因此，以水飛薊賓為代表的黃酮木脂素類化合物引起了越來越多的關(guān)注。
水飛薊賓類化合物具有確切的療效，但是由于其水溶性和生物利用度上的一些不足限制了該藥物的市場(chǎng)。故尋找水飛薊賓類新的衍生物，使其能夠具有更高或者更新的藥理活性，以期獲取自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新藥，實(shí)屬必要。據(jù)此我們?cè)O(shè)計(jì)并制備出一類新的烷氧基取代黃酮木脂素類化合物，并對(duì)其多項(xiàng)重要的生物活性進(jìn)行了測(cè)試。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種具有清除自由基活性、抑制自由基誘導(dǎo)之脂過氧化物生成、保護(hù)肝臟細(xì)胞損傷、治療急性慢性肝損傷類疾病以及由氧自由基引起或與氧自由基有關(guān)的其他生理改變或疾病以及保護(hù)腦神經(jīng)抗氧化、防治老年性癡呆癥的活性化合物。具體而言，本發(fā)明提供了一種式(1)所示B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物及其可藥用鹽或其溶劑化物。
式(1)其中R1為氫或1-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基；R2為氫、1-3個(gè)碳的烷氧基、鹵素、烯丙基、羥甲基、芳環(huán)上取代或未取代的芐氧基、硝基、氨基；R3為氫或1-8個(gè)碳的烷氧基；當(dāng)R2、R3分別為甲氧基和氫時(shí)，R1不為甲基；式(1)中2、3、10、11位的立體構(gòu)型分別是或同時(shí)是R或S構(gòu)型；式(1)化合物包括經(jīng)柱層析、重結(jié)晶等方法純化后的光學(xué)活性化合物，也包括未經(jīng)純化而具有立體異構(gòu)的混合物。
同時(shí)，本發(fā)明還提供了一種式(1-5)所示的B環(huán)上三連氧取代的二氫黃酮醇類化合物及其可藥用鹽或其溶劑化物
式(1-5)其中R1為含2-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基。式(1-5)中2、3位的立體構(gòu)型分別是或同時(shí)是R或S構(gòu)型；式(1-5)化合物包括經(jīng)柱層析、重結(jié)晶等方法純化后的光學(xué)活性化合物，也包括未經(jīng)純化而具有立體異構(gòu)的混合物；該類化合物為合成式(1)化合物的重要中間體。
具體而言，本發(fā)明提供了一種式(1)所示的B環(huán)上含有烷氧基取代黃酮木脂素類化合物及其可藥用鹽或其溶劑化物。
式(1)其中R1為氫或1-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基；R2為氫、1-3個(gè)碳的烷氧基、鹵素、烯丙基、羥甲基、芳環(huán)上取代或未取代的芐氧基、硝基、氨基；R3為氫或1-8個(gè)碳的烷氧基。當(dāng)R2、R3分別為甲氧基和氫時(shí)，R1不為甲基；式(1)中2、3、10、11位的立體構(gòu)型分別是或同時(shí)是R或S構(gòu)型；式(1)化合物包括經(jīng)柱層析、重結(jié)晶等方法純化后的光學(xué)活性化合物，也包括未經(jīng)純化而具有立體異構(gòu)的混合物。
本發(fā)明優(yōu)選的式(1)化合物包括化合物1-a2-[2，3-二氫-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-b2-[2，3-二氫-3-(4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-c2-[2，3-二氫-3-(4-羥基-3，5-二甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-d2-[2，3-二氫-3-(4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-e2-[2，3-二氫-3-(4-羥基-3，5-二甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-f2-[2，3-二氫-3-(3-芐氧基-4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-g2-[2，3-二氫-3-(3-烯丙基-4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；
化合物1-h2-[2，3-二氫-3-(3-烯丙基-4-羥基-5-甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮。
同時(shí)，本發(fā)明提供了一種式(1-5)所示的黃酮類化合物及其可藥用鹽或其溶劑化物 式(1-5)其中R1為含2-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基。式(1-5)中2、3位的立體構(gòu)型分別是或同時(shí)是R或S構(gòu)型；式(1-5)化合物包括經(jīng)柱層析、重結(jié)晶等方法純化后的光學(xué)活性化合物，也包括未經(jīng)純化而具有立體異構(gòu)的混合物。
本發(fā)明優(yōu)選的式(1-5)化合物為5′-乙氧基-3，5，7，3′，4′-五羥基二氫黃酮(化合物1-5-1)。
本發(fā)明的另一目的是提供了式(1)化合物的全合成方法，該方法的合成工藝路線特征是以化合物2，4，6-三甲氧甲氧基苯乙酮(1-1)和3-烷氧基-4，5-甲氧甲氧基苯甲醛(1-2)為起始原料，在有機(jī)溶劑和堿水溶液中縮合得到查耳酮(1-3)，在堿性過氧化氫的作用下環(huán)氧化得到環(huán)氧查耳酮(1-4)，(1-4)在酸性有機(jī)溶劑中環(huán)合得到二氫黃酮醇(1-5)；在催化劑存在下，(1-5)與松柏醇類似物(1-6)進(jìn)行自由基偶聯(lián)反應(yīng)生成化合物(1)，具體流程如下所示 其中R1，R2，R3的定義與式(1)化合物定義相同。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了式(1)化合物用于防治肝臟細(xì)胞損傷、保肝護(hù)肝的用途。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供了一種含有式(1)化合物的用于防治肝臟細(xì)胞損傷、保肝護(hù)肝的藥物或藥物組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了一種式(1)化合物用于抗氧化、抗衰老、防治早老性疾呆癥的用途。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供了一種含有式(1)化合物的用于制備基于抗氧化自由基機(jī)制的抗衰老藥物、防治早老性癡呆癥的藥物或藥物組合物。
本發(fā)明的又一目的是提供了式(1)化合物的用于制備由氧自由基引起或與氧自由基有關(guān)的生理改變或疾病特別是心血管及腦血管病變藥物的用途。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供了一種含有式(1)化合物的用于制備由氧自由基引起或與氧自由基有關(guān)的生理改變或疾病特別是心血管及腦血管病變藥物或藥物組合物。
具體實(shí)施方式為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面分別用實(shí)施例的形式說明化合物制備的過程，實(shí)施例給出了代表性化合物的部分物理和化學(xué)及波譜學(xué)數(shù)據(jù)。必須說明，本發(fā)明的實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
實(shí)施例1化合物1-3-1(1-(2，4，6-三甲氧甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧甲氧基-5-甲氧基苯基)丙烯酮)的制備 3克3-甲氧基-4，5-二甲氧甲氧基苯甲醛和3.5克2，4，6-三甲氧甲氧基苯乙酮溶解于40mL乙醇中，加入溶解有10g氫氧化鉀的20mL水液，于室溫?cái)嚢?5小時(shí)。減壓蒸去乙醇，加入30mL水，乙酸乙酯提取(3×20mL)。合并有機(jī)相后，依次用飽和亞硫酸氫鈉(40mL)和飽和食鹽水(40mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮，經(jīng)柱層析得化合物1-3-1黃色油狀物4.4g，收率70％。
Rf(PET/EtOAc＝2∶1)0.36；UV(MeOH)λmax＝208,321nm；1H NMR(400MHz，氘代氯仿)δ3.34(s，6H，OCH3)，3.43(s，3H，OCH3)，3.46(s，3H，OCH3)，3.56(s，3H，OCH3)，3.90(s，3H，OCH3)，5.06(s，4H，OCH2O)，5.11(s，4H，OCH2O)，5.14(s，2H，OCH2O)，6.51(s，2H，H-3′，5′)，6.74(d，J＝1.6Hz，1H，H-2)，6.80(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，6.91(d，J＝1.6Hz，1H，H-6)，7.17(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)；ESI-MS539(M+1)+。
根據(jù)實(shí)施例1相同的方法制備化合物1-3-2實(shí)施例2化合物1-3-2(1-(2，4，6-三甲氧甲氧基苯基)-3-(3，4-二甲氧甲氧基-5-乙氧基苯基)丙烯酮)的制備
Rf(PET/EtOAc＝2∶1)0.40；UV(MeOH)λmax＝210,325nm；1H NMR(400MHz，氘代氯仿)δ1.39(t，J＝7.2Hz，3H，CH3)，3.34(s，6H，OCH3)，3.43(s，3H，OCH3)，3.46(s，3H，OCH3)，3.56(s，3H，OCH3)，4.02(q，J＝7.2Hz，2H，CH2)，5.06(s，4H，OCH2O)，5.11(s，4H，OCH2O)，5.14(s，2H，OCH2O)，6.51(s，2H，H-3′，5′)，6.74(d，J＝1.6Hz，1H，H-2)，6.80(d，J＝16.0Hz，1H，H-α)，6.91(d，J＝1.6Hz，1H，H-6)，7.17(d，J＝16.0Hz，1H，H-β)；ESI-MS553(M+1)+。
實(shí)施例3化合物1-4-1(1-(2，4，6-三甲氧甲氧基苯基)-3-(3-甲氧基-4，5-二甲氧甲氧基苯基)環(huán)氧丙酮)的制備 3克化合物1-3-1溶解于50毫升甲醇中，于攪拌狀態(tài)下加入2N氫氧化鈉4mL，30％過氧化氫4mL，于室溫?cái)嚢?0小時(shí)，減壓蒸去溶劑，加入50mL水，乙酸乙酯提取(3×30mL)。合并有機(jī)相后用飽和食鹽水(40mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，濃縮得黃色油狀物2.6克，收率85％，可直接用于下一步反應(yīng)。
Rf(PET/EtOAc＝2∶1)0.37；UV(MeOH)λmax＝205,278nm；1H NMR(400MHz，氘代氯仿)δ3.34(s，6H，OCH3)，3.43(s，3H，OCH3)，3.46(s，3H，OCH3)，3.56(s，3H，OCH3)，3.87(s，3H，OCH3)，3.89(d，J＝1.6Hz，1H，H-β)，3.93(d，J＝1.6Hz，1H，H-α)，5.06(s，4H，OCH2O)，5.11(s，4H，OCH2O)，5.14(s，2H，OCH2O)，6.51(s，2H，H-3′，5′)，6.74(d，J＝1.6Hz，1H，H-2)，6.91(d，J＝1.6Hz，1H，H-6)；ESI-MS555(M+1)+。
根據(jù)實(shí)施例3相同的方法制備化合物1-4-2實(shí)施例4化合物1-4-2(1-(2，4，6-三甲氧甲氧基苯基)-3-(3-乙氧基-4，5-二甲氧甲氧基苯基)環(huán)氧丙酮)的制備 Rf(PET/EtOAc＝2∶1)0.40；UV(MeOH)λmax＝206,281nm；1H NMR(400MHz，氘代氯仿)δ1.39(t，J＝7.2Hz，3H，CH3)，3.34(s，6H，OCH3)，3.43(s，3H，OCH3)，3.46(s，3H，OCH3)，3.56(s，3H，OCH3)，3.91(d，J＝1.6Hz，1H，H-β)，3.94(d，J＝1.6Hz，1H，H-α)，4.03(q，J＝7.2Hz，2H，CH2)，5.06(s，4H，OCH2O)，5.11(s，4H，OCH2O)，5.14(s，2H，OCH2O)，6.51(s，2H，H-3′，5′)，6.74(d，J＝1.6Hz，1H，H-2)，6.91(d，J＝1.6Hz，1H，H-6)；
ESI-MS569(M+1)+。
實(shí)施例5化合物1-5-1(5′-乙氧基-3，5，7，3′，4′-五羥基二氫黃酮)的制備 2.8克化合物1-4-2溶解于35mL甲醇和15mL四氫呋喃中，向其中滴加5mL濃鹽酸，于50-55℃攪拌30分鐘，減壓蒸去溶劑，乙酸乙酯提取(3×30mL)，合并有機(jī)相后用飽和食鹽水(40mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，濃縮，經(jīng)柱層析得黃色粉末0.75克，收率45％。
Rf(CHCl3/MeOH＝10∶1)0.15；1H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ1.33(t，J＝7.2Hz，3H，CH3)，4.08(q，2H，J＝7.2Hz，CH2)，4.62(dd，J＝12.0，4.0Hz，1H，H-3)，4.68(d，J＝4.0Hz，1H，3-OH)，4.97(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.93(d，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.97(d，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.71(d，J＝2.0Hz，1H，H-2′)，6.73(d，J＝2.0Hz，1H，H-6′)，11.71(s，1H，5-OH)；ESI-MS349(M+1)+。
實(shí)施例6化合物1-a{2-[2，3-二氫-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-2-羥甲基-乙氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮}的制備 在干燥氮?dú)獗Ｗo(hù)的反應(yīng)瓶中加入0.6克化合物1-5-1和化合物1-6-1(松柏醇)0.75克，用無水丙酮40mL和無水苯120mL溶解，再加入1.5克碳酸銀，于55-60℃攪拌20分鐘，過濾，母液濃縮，經(jīng)柱層析得淺黃色粉末0.32克，收率27％。
Rf(CHCl3/MeOH/EtOAc/acetone/HCOOH＝11∶0.5∶1∶1∶0.1)0.25；1H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ1.35(t，J＝7.2Hz，3H，CH3)，3.51(m，1H，H-23a)，3.81(s，3H，OCH3)，3.87(q，J＝7.2Hz，2H，CH2)，4.07(m，1H，H-23b)，4.17(m，1H，H-10)，4.68(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.95(d，J＝8.0Hz，1H，H-11)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.92(d，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.96(d，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.76-6.85(m，5H，Ar-H)，11.67(s，1H，5-OH)；ESI-MS527(M+1)+。
根據(jù)實(shí)施例6相同的方法制備得到以下表一中所列化合物
表一.
實(shí)施例7化合物1-b{2-[2，3-二氫-3-(4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮}Rf(CHCl3/MeOH/EtOAc/acetone/HCOOH＝11∶0.5∶1∶1∶0.1)0.15；1H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ1.33(t，J＝7.2Hz，3H，CH3)，3.51(m，1H，H-23a)，3.98(q，J＝7.2Hz，2H，CH2)，4.03(m，1H，H-23b)，4.17(m，1H，H-10)，4.68(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.95(d，J＝8.0Hz，1H，H-11)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.93(d，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.97(d，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.73-6.88(m，6H，Ar-H)，11.67(s，1H，5-OH)；ESI-MS497(M+1)+。
實(shí)施例8化合物1-c{2-[2，3-二氫-3-(4-羥基-3，5-二甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮}Rf(CHCl3/MeOH/EtOAc/acetone/HCOOH＝11∶0.5∶1∶1∶0.1)0.27；1H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ1.34(t，J＝7.2Hz，3H，CH3)，3.51(m，1H，H-23a)，3.83(s，6H，OCH3)3.99(q，J＝7.2Hz，2H，CH2)，4.06(m，1H，H-23b)，4.17(m，1H，H-10)，4.68(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.95(d，J＝8.0Hz，1H，H-11)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.93(d，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.97(d，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.75-6.89(m，4H，Ar-H)，11.67(s，1H，5-OH)；ESI-MS557(M+1)+。
實(shí)施例9化合物1-d{2-[2，3-二氫-3-(4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮}Rf(CHCl3/MeOH/EtOAc/acetone/HCOOH＝11∶0.5∶1∶1∶0.1)0.19；1H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ3.51(m，1H，H-23a)，3.91(s，3H，OCH3)，4.06(m，1H，H-23b)，4.17(m，1H，H-10)，4.68(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.95(d，J＝8.0Hz，1H，H-11)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.93(d，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.95(d，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.76-6.85(m，6H，Ar-H)，11.67(s，1H，5-OH)；ESI-MS483(M+1)+。
實(shí)施例10化合物1-e{2-[2，3-二氫-3-(4-羥基-3，5-二甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮}Rf(CHCl3/MeOH/EtOAc/acetone/HCOOH＝11∶0.5∶1∶1∶0.1)0.27；1H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ3.51(m，1H，H-23a)，3.85(s，6H，OCH3)，3.99(s，3H，OCH3)，4.06(m，1H，H-23b)，4.17(m，1H，H-10)，4.63(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.94(d，J＝8.0Hz，1H，H-11)，5.01(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.90(d，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.97(d，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.75-6.89(m，4H，Ar-H)，11.67(s，1H，5-OH)；ESI-MS543(M+1)+。
實(shí)施例11化合物1-f{2-[2，3-二氫-3-(3-芐氧基-4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮}Rf(CHCl3/MeOH/EtOAc/acetone/HCOOH＝11∶0.5∶1∶1∶0.1)0.16；1H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ3.51(m，1H，H-23a)，3.91(s，3H，OCH3)，4.06(m，1H，H-23b)，4.17(m，1H，H-10)，4.68(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.95(d，J＝8.0Hz，1H，H-11)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.19(s，2H，CH2)，5.93(d，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.95(d，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.76-7.35(m，10H，Ar-H)，11.67(s，1H，5-OH)；ESI-MS589(M+1)+。
實(shí)施例12化合物1-g{2-[2，3-二氫-3-(3-烯丙基-4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮}Rf(CHCl3/MeOH/EtOAc/acetone/HCOOH＝11∶0.5∶1∶1∶0.1)0.17；1H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ3.40(d，J＝6.4Hz，2H，CHCH＝CH2)，3.51(m，1H，H-23a)，3.91(s，3H，OCH3)，4.06(m，1H，H-23b)，4.17(m，1H，H-10)，4.68(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.95(d，J＝8.0Hz，1H，H-11)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.15(m，2H，CHCH＝CH2)，5.93(d，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.95(d，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.01(m，1H，CHCH＝CH2)，6.76-6.84(m，5H，Ar-H)，11.67(s，1H，5-OH)；ESI-MS523(M+1)+。
實(shí)施例13化合物1-h{2-[2，3-二氫-3-(3-烯丙基-4-羥基-5-甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮}Rf(CHCl3/MeOH/EtOAc/acetone/HCOOH＝11∶0.5∶1∶1∶0.1)0.19；1H NMR(400MHz，氘代丙酮)δ3.40(d，J＝6.4Hz，2H，CHCH＝CH2)，3.51(m，1H，H-23a)，3.89(s，3H，OCH3)，3.91(s，3H，OCH3)，4.06(m，1H，H-23b)，4.17(m，1H，H-10)，4.68(d，J＝12.0Hz，1H，H-3)，4.95(d，J＝8.0Hz，1H，H-11)，5.03(d，J＝12.0Hz，1H，H-2)，5.15(m，2H，CHCH＝CH2)，5.93(d，J＝2.0Hz，1H，H-6)，5.95(d，J＝2.0Hz，1H，H-8)，6.01(m，1H，CHCH＝CH2)，6.73-6.89(m，4H，Ar-H)，11.67(s，1H，5-OH)；ESI-MS553(M+1)+。
式(1)所示的B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物具有多種重要的生物活性，本發(fā)明將該系列化合物對(duì)過氧化氫致大鼠乳鼠原代肝細(xì)胞損傷體外模型進(jìn)行了肝細(xì)胞損傷保護(hù)活性篩選。該類B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物被發(fā)現(xiàn)具有保護(hù)肝細(xì)胞和促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù)的作用。本發(fā)明又對(duì)該類化合物抗氧自由基活性進(jìn)行了測(cè)試，發(fā)現(xiàn)其具有體外清除超氧陰離子自由基、清除二苯基苦基苯肼自由基、抑制自由基誘導(dǎo)之脂過氧化物生成的活性。以上活性表明該類化合物可以預(yù)期用于制備預(yù)防或治療急性慢性肝損傷類疾病以及由氧自由基引起或與氧自由基有關(guān)的其他生理改變或疾病的藥物。該類化合物還表現(xiàn)出很強(qiáng)的對(duì)抗自由基引起的PC12細(xì)胞損傷作用，即對(duì)模擬腦神經(jīng)細(xì)胞的PC12細(xì)胞有抗氧化損傷保護(hù)作用，而且在同一濃度下，其清除自由基保護(hù)細(xì)胞的能力比陽性對(duì)照槲皮素還高，說明其對(duì)保護(hù)腦神經(jīng)抗氧化、防治老年性癡呆癥有積極作用。
本發(fā)明的式(1)化合物或其可藥用鹽及其溶劑化物可以與藥學(xué)上常用的輻料或載體結(jié)合，制備得到具有保護(hù)肝細(xì)胞急性和慢性損傷活性從而可以用于預(yù)防以及治療肝臟疾病的藥物組合物或者保健品。上述各類藥物組合物或者保健品可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑、軟膏劑等劑型藥物。
本發(fā)明的式(1)化合物或其可藥用鹽及其溶劑化物還可以與現(xiàn)已上市的肝臟保護(hù)及肝病治療藥物藥物如聯(lián)苯雙酯、水飛薊素、水飛薊賓葡甲胺、齊墩果酸、二氯乙酸二異丙胺、原卟啉鈉(protoporphyrin disodium)、馬洛替酯(malotilate)、熊去氧膽酸等聯(lián)合使用，制備得到具有保護(hù)肝臟活性的組合物，可用于治療急慢性病毒性肝炎、慢性肝炎、早期肝硬化、脂防肝及中毒性肝損傷疾病藥品或者保健品。上述各類藥物組合物或者保健品可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑、軟膏劑等劑型藥物。
本發(fā)明的式(1)化合物或其可藥用鹽及其溶劑化物可以與現(xiàn)已上市的抗自由基氧化劑藥物如超氧化物歧化酶(SOD)等聯(lián)合使用，制備得到具有防御自由基引起的損害活性的抗氧化藥物組合物或者保健品，用于治療上述疾病。上述各類藥物組合物或者保健品可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑、軟膏劑等劑型藥物。
氧壓是由機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生和清除自由基之間的失調(diào)所引起的，可誘發(fā)多種疾病。氧壓可引起神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如中風(fēng)，帕金森氏病，阿爾茨海默病。另外它還跟其它疾病的病理途徑有關(guān)，如心臟病、自身免疫性疾病、腫瘤、病毒性疾病(如AIDS、肝炎)。因此尋找新的抗氧化劑成為治療由氧壓引起的各種疾病的有效途徑。為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面分別用藥理實(shí)施例的形式對(duì)化合物體外清除陰離子超氧化自由基的活性試驗(yàn)；體外清除二苯基苦基苯肼自由基(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)的活性試驗(yàn)；測(cè)定化合物對(duì)雙氧水H2O2所致PC12(大鼠腎上嗜鉻細(xì)胞瘤)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用；化合物抑制自由基誘導(dǎo)之脂過氧化物生成等試驗(yàn)說明本發(fā)明權(quán)利要求
中化合物的抗氧化活性。本發(fā)明還用過氧化氫致SD大鼠乳鼠原代肝細(xì)胞損傷體外模型的肝細(xì)胞損傷保護(hù)活性的藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果，共同說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。藥理實(shí)施例給出了代表性化合物的部分活性數(shù)據(jù)。同樣必須說明，本發(fā)明的藥理實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
藥理實(shí)施例1化合物I-a體外清除超氧陰離子自由基的活性試驗(yàn)化合物I-a清除超氧陰離子自由基能力的檢測(cè)乃使用吩嗪-N甲硫酸鹽-NADH(phenazine methosulfate-NADH)系統(tǒng)，用四唑氮藍(lán)(nitroblue tetrazolium)還原方法檢定。用3毫升含有78μM的NADH、50μM四唑氮藍(lán)和10μM吩嗪-N甲硫酸鹽在pH值為8.0的16mM Tris-HCl緩沖液中產(chǎn)生出超氧陰離子自由基，在不同濃度的化合物I-a檢測(cè)其活性。超氧陰離子自由基和四唑氮藍(lán)反應(yīng)生成物的顏色用分光光度計(jì)在560nm波長(zhǎng)下監(jiān)測(cè)，槲皮素被用作陽性對(duì)照藥物。試驗(yàn)結(jié)果見表二。
表二
試驗(yàn)結(jié)果表明，化合物I-a具有一定的超氧陰離子自由基清除作用，但是在同一濃度下，其清除能力沒有槲皮素高。結(jié)論該類B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物屬于具有一定清除超氧陰離子自由基的抗氧化物質(zhì)。
藥理實(shí)施例2化合物I-c體外清除二苯基苦基苯肼自由基(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)的活性試驗(yàn)DPPH的甲醇溶液在517nm有強(qiáng)吸收值，其被抗氧化物還原時(shí)，吸收值下降，吸光度越低，其抗氧化作用越強(qiáng)。在250μL反應(yīng)體系中含有各種不同濃度的化合物I-c25μL，DPPH(0.4mg/mL)的甲醇溶液40μL及甲醇溶液185μL，37℃水浴反應(yīng)30分鐘后，在517nm處測(cè)定吸光度。DPPH的甲醇液和槲皮素分別作為陰性、陽性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表三。
表三
試驗(yàn)結(jié)果表明，化合物I-c具有一定的DPPH自由基清除作用，但是在同一濃度下，其清除能力沒有槲皮素高。結(jié)論該類B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物屬于具有一定清除DPPH自由基的抗氧化物質(zhì)。
藥理實(shí)施例3化合物I-c對(duì)雙氧水H2O2所致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用活性試驗(yàn)H2O2是一種主要的活性自由基的前體，它可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞的凋亡，PC12細(xì)胞(大鼠腎上嗜鉻細(xì)胞瘤)可模擬腦神經(jīng)細(xì)胞，因此常用它來作為研究藥物與神經(jīng)細(xì)胞之間關(guān)系的模型，用MTT測(cè)細(xì)胞的存活率，如果待測(cè)化合物有清除由H2O2引起的自由基，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用，OD值高，細(xì)胞存活率就高，反之就低。對(duì)唐希燦所報(bào)道的方法(Xiaoqiu Xiao等，Neurosci Letter，1999，27573-76)加以改進(jìn)測(cè)定化合物的保護(hù)作用。PC12細(xì)胞用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10％胎牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL鏈霉素。細(xì)胞以每孔6000個(gè)的密度加到96孔板中，在37℃，50％CO2潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36小時(shí)。細(xì)胞存活率用倒置顯微鏡觀觀察和改良的MTT法。細(xì)胞經(jīng)36小時(shí)的孵育后，分別加新配的化合物I-c的二甲亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中。作用2小時(shí)后加入新配的H2O2(終濃度為500μmol/L)作用3小時(shí)，顯微鏡觀察記錄，棄去原培養(yǎng)液，加入新的培養(yǎng)液100μL，然后加入MTT 10μL，3小時(shí)后，小心吸去培養(yǎng)液，加入150μL DMSO溶解甲臜，于570nm處讀數(shù)，用槲皮素作陽性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表四。
表四 化合物I-c及陽性對(duì)照槲皮素對(duì)雙氧水損傷PC12細(xì)胞保護(hù)率
試驗(yàn)結(jié)果表明，化合物I-c具有很強(qiáng)的對(duì)抗自由基引起的PC12細(xì)胞損傷作用，即對(duì)模擬腦神經(jīng)細(xì)胞的PC12細(xì)胞有抗氧化損傷保護(hù)作用。而且在同一濃度下，其清除自由基保護(hù)細(xì)胞的能力比陽性對(duì)照槲皮素還高。結(jié)論該類B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物屬于具有強(qiáng)效保護(hù)模擬腦神經(jīng)細(xì)胞的PC12細(xì)胞作用的抗氧化物質(zhì)。
測(cè)定化合物對(duì)H2O2所致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用可作為初步探討其保護(hù)中樞腦神經(jīng)細(xì)胞的作用機(jī)理。故該類B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物表現(xiàn)出對(duì)雙氧水損傷所致PC12細(xì)胞的保護(hù)作用，說明其對(duì)老年性癡呆證的治療有積極作用。
藥理實(shí)施例4化合物I-b抑制自由基誘導(dǎo)之脂過氧化物生成的活性試驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)原理脂質(zhì)過氧化是自由基作用于多不飽和脂肪酸的產(chǎn)物，含量與自由基的生成正相關(guān)，由于機(jī)體有抗氧化的酶系及非酶系的保護(hù)作用，使自由基不斷產(chǎn)生又不斷被清除。隨著年齡的增長(zhǎng)，體內(nèi)的抗氧化劑不斷下降，清除自由基的能力逐漸減弱，脂質(zhì)過氧化作用則增強(qiáng)，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物增多。因此，測(cè)定樣品抗脂質(zhì)過氧化作用，是篩選抗氧化，抗衰老藥物的重要指標(biāo)之一。
2.化合物I-b抑制自由基誘導(dǎo)之脂過氧化物生成乃通過鼠肝微粒體檢測(cè)。(1)肝微粒體的制備實(shí)驗(yàn)大鼠斷頭處死，迅速取出肝臟，用超速離心法制備肝微粒體。(2)樣品對(duì)鼠肝脂質(zhì)過氧化的抑制作用在含F(xiàn)eSO4(4μmol/L)與Vc(50μmol/L)的1mL緩沖液中加入200μg/mL微粒體中，以誘導(dǎo)產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化，同時(shí)加入不同濃度的I-b樣品，37℃孵育30分鐘后加入1mL三氯醋酸(20％)中止反應(yīng)加入1.5mL硫代巴比妥酸(0.76％)，100℃沸水浴20分鐘，離心去除蛋白沉淀，在532nm波長(zhǎng)下測(cè)定上清吸光度。脂質(zhì)過氧化以反應(yīng)中生成的丙二醛表示，實(shí)驗(yàn)以槲皮素作為陽性對(duì)照。試驗(yàn)結(jié)果見表五。
表五 樣品對(duì)大鼠肝微粒體脂質(zhì)過氧化的抑制作用
試驗(yàn)結(jié)果表明，化合物I-b具有較強(qiáng)的抑制自由基誘導(dǎo)之脂過氧化物生成能力，即對(duì)細(xì)胞有抗氧化損傷保護(hù)作用。但在同一濃度下，其對(duì)細(xì)胞抗氧化損傷能力比陽性弱。結(jié)論該類B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物屬于具有有效保護(hù)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化物質(zhì)；提示其具有抗氧化、抗衰老的作用。
藥理實(shí)施例5化合物I-5-1對(duì)SD新生大鼠原代肝細(xì)胞雙氧水損傷模型的保護(hù)作用試驗(yàn)無菌取出SD大鼠新生乳鼠(5日齡內(nèi))肝臟，剪碎，用0.25％的胰蛋白酶消化，制成肝細(xì)胞懸液。將肝細(xì)胞懸液收集在錐形瓶中，用200目雙層尼龍過濾，再用清洗液清洗，離心3次，以培養(yǎng)液重懸，即可得到大部分為肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的懸液。
用1640培養(yǎng)液(內(nèi)含10％小牛血清，105U/L青霉素，100mg/L鏈霉素10mg/L胰島素)稀釋純化的肝細(xì)胞懸液，每毫升含1.0×106個(gè)肝細(xì)胞。將上述肝細(xì)胞懸液加入96孔(每孔0.1ml)培養(yǎng)板中，置5％CO2培養(yǎng)箱中，在37℃下培養(yǎng)12h后，吸棄上清，加入0.6mmol/L的H2O2。作用1h后，分別加入高、中、低3種不同濃度的I-5-1樣品試驗(yàn)藥液，每一濃度至少設(shè)3個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)溶劑和陽性對(duì)照組。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，吸棄上清，收集肝細(xì)胞樣品，570nm波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀計(jì)算保護(hù)率和增生指數(shù)，結(jié)果見表六。
表六.樣品和槲皮素對(duì)SD新生大鼠原代肝細(xì)胞雙氧水損傷模型的保護(hù)作用
試驗(yàn)結(jié)果表明化合物I-5-1具有非常強(qiáng)的保護(hù)SD新生大鼠原代肝細(xì)胞免受雙氧水損傷模型的能力，即對(duì)SD新生大鼠原代肝細(xì)胞有抗氧化損傷保護(hù)作用；且在同一濃度下，其對(duì)細(xì)胞抗氧化損傷能力比陽性對(duì)照槲皮素還要高出許多；結(jié)論該類B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物及其中間體屬于具有強(qiáng)效保護(hù)細(xì)胞抗氧化物質(zhì)，提示其具有保肝護(hù)肝功效以及預(yù)期用于制備預(yù)防或治療急性慢性肝損傷類疾病的作用。
權(quán)利要求
1.一種式(1)所示的B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物及其藥用鹽及其溶劑化物 式(1)其中R1為氫或1-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基；R2為氫、1-3個(gè)碳的烷氧基、鹵素、烯丙基、羥甲基、芳環(huán)上取代或未取代的芐氧基、硝基、氨基；R3為氫或1-8個(gè)碳的烷氧基；當(dāng)R2、R3分別為甲氧基和氫時(shí)，R1不為甲基；式(1)中2、3、10、11位的立體構(gòu)型分別是或同時(shí)是R或S構(gòu)型；式(1)化合物包括經(jīng)柱層析、重結(jié)晶等方法純化后的光學(xué)活性化合物，也包括未經(jīng)純化而具有立體異構(gòu)的混合物。
2.具有式(1)所示的B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物及其藥用鹽及其溶劑化物，它們是化合物1-a2-[2，3-二氫-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-b2-[2，3-二氫-3-(4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-c2-[2，3-二氫-3-(4-羥基-3，5-二甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-乙氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-d2-[2，3-二氫-3-(4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-e2-[2，3-二氫-3-(4-羥基-3，5-二甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-f2-[2，3-二氫-3-(3-芐氧基-4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-g2-[2，3-二氫-3(-3-烯丙基-4-羥基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮；化合物1-h2-[2，3-二氫-3-(3-烯丙基-4-羥基-5-甲氧基苯基)-2-羥甲基-8-甲氧基-1，4-苯并二氧六環(huán)-6-]-2，3-二氫-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮。
3.權(quán)利要求
1中式(1)化合物的制備方法，包括將式(1-5)化合物與式(1-6)化合物在催化劑存在下進(jìn)行自由基偶聯(lián)反應(yīng)得到式(1)化合物 其中R1，R2，R3的定義如權(quán)利要求
1；當(dāng)R2、R3分別為甲氧基和氫時(shí)，R1不為甲基；反應(yīng)式中催化劑可以為碳酸銀，氧化銀，六氰合鐵酸鉀，辣根過氧化酶(Horseradish peroxidase，HRP)，優(yōu)選碳酸銀；溶劑可以為單獨(dú)的苯或?yàn)楸脚c甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃中的任一種溶劑組成的混合溶劑，優(yōu)選苯與丙酮(體積比為3∶1)組成的混合溶劑；反應(yīng)溫度可以為20-80℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3的制備方法，其中式(1-5)化合物由式(1-4)化合物酸化環(huán)合而制得 其中R1的定義如權(quán)利要求
1；反應(yīng)式中的酸為鹽酸，硫酸或冰乙酸，優(yōu)選鹽酸；反應(yīng)中的容劑為甲醇，乙醇，丙醇，四氫呋喃及任意兩種所組成的混合溶劑；反應(yīng)溫度可以為20-80℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求
4的制備方法，其中式(1-4)化合物由式(1-3)化合物在堿催化下，由過氧化氫環(huán)氧化制備而得 其中R1的定義如權(quán)利要求
1；反應(yīng)式中的堿為氫氧化鈉，氫氧化鉀；溶劑為甲醇，乙醇，丙醇，四氫呋喃及任意兩種所組成的混合溶劑，優(yōu)選為甲醇；反應(yīng)溫度可以為0-50℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求
4的制備方法，其中式(1-3)化合物由式(1-1)化合物和式(1-2)化合物縮合而制得 其中R1的定義如權(quán)利要求
1；反應(yīng)式中的堿為氫氧化鈉，氫氧化鉀；溶劑為甲醇，乙醇，丙醇及任意兩種所組成的混合溶劑，優(yōu)選甲醇；反應(yīng)溫度可以為0-50℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求
3和4的式(1-5)所示的二氫黃酮醇類化合物 其中R1為含2-8個(gè)碳的直鏈或支鏈烷基；式(1-5)中2、3位的立體構(gòu)型分別是或同時(shí)是R或S構(gòu)型；式(1-5)化合物包括經(jīng)柱層析、重結(jié)晶等方法純化后的光學(xué)活性化合物，也包括未經(jīng)純化而具有立體異構(gòu)的混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求
7的式(1-5)所示的二氫黃酮醇類化合物，它是化合物1-5-13′-乙氧基-3，5，7，4′，5′-五羥基二氫黃酮。
9.根據(jù)權(quán)利要求
4和5的式(1-4)所示的環(huán)氧查耳酮類化合物，它們是化合物1-4-13-甲氧基-4，5，2′，4′，6′-五甲氧甲氧基環(huán)氧查耳酮；化合物1-4-23-乙氧基-4，5，2′，4′6′-五甲氧甲氧基環(huán)氧查耳酮。
10.根據(jù)權(quán)利要求
5和6的式(1-3)所示的查耳酮類化合物，它們是化合物1-3-13-甲氧基-4，5，2′，4′，6′-五甲氧甲氧基查耳酮；化合物1-3-23-乙氧基-4，5，2′，4′，6′-五甲氧甲氧基查耳酮。
11.一種用于制備預(yù)防或治療急性慢性肝損傷類疾病以及由氧自由基引起或與氧自由基有關(guān)的其他生理改變引起的疾病包括炎癥疾病、自身免疫性疾病、老年性癡呆、腫瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、變態(tài)反應(yīng)、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病之藥物組合物，其含有作為活性成分的治療有效量的權(quán)利要求
1、2、7、8、9、10所述之新型的B環(huán)上含有烷氧基取代水飛薊賓類黃酮木脂素類化合物吸其中間體或其可藥用鹽或深劑化物或者它們的混合物和可藥用輔料。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種具有抗自由基氧化、保肝護(hù)肝、防治老年性癡呆癥、抗衰老活性的水飛薊賓類黃酮木脂素化合物及其可藥用鹽或溶劑化物。本發(fā)明還涉及制備式(1)化合物的制備方法包括其重要中間體及其藥物組合物和醫(yī)藥用途。本發(fā)明的化合物對(duì)SD新生大鼠原代肝細(xì)胞有抗氧化損傷保護(hù)作用，可以預(yù)期作為防止肝臟損傷類藥物用途；本發(fā)明的化合物具有清除超氧陰離子自由基和二苯基苦基苯肼自由基、抑制自由基誘導(dǎo)之脂過氧化物生成的活性，以及很強(qiáng)的對(duì)抗自由基引起的PC12細(xì)胞損傷作用，因此可以預(yù)期成為治療由自由基引起的各種疾病之藥物。
文檔編號(hào)A61P39/06GK1990485SQ200510132511
公開日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2005年12月26日
發(fā)明者趙昱, 陶巧鳳, 汪峰, 龔景旭, 馮玉冰, 白驊, 劉偉, 周長(zhǎng)新, 巫秀美, 曾蘇 申請(qǐng)人:浙江海正天華新藥研發(fā)有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan