專利名稱:一種基于釀造功能導(dǎo)向的微生物組合方法及組合菌劑在白酒工業(yè)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基于釀造功能導(dǎo)向的微生物組合方法，以及將組合的菌劑在釀酒工業(yè)領(lǐng)域中的應(yīng)用。屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
釀造酒行業(yè)是我國的優(yōu)勢(shì)民族傳統(tǒng)制造 業(yè)，也是食品工業(yè)的重要組成部分。2011年釀造酒行業(yè)產(chǎn)量達(dá)到7103. 46萬千升，生產(chǎn)總值6699. 24億元，占到食品工業(yè)總產(chǎn)值的8. 6%左右。因此釀造酒行業(yè)的發(fā)展對(duì)于我國食品行業(yè)甚至國民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展都具有重要的意義。
中國白酒是釀造酒的典型代表。首先，白酒生產(chǎn)屬于一類多菌種共同作用的自然發(fā)酵過程，但是目前，對(duì)白酒釀造過程的規(guī)律的認(rèn)識(shí)并不是很清楚。仍然存在很多問題白酒發(fā)酵中哪些是對(duì)發(fā)酵具有重要作用的功能微生物，它們對(duì)白酒釀造的貢獻(xiàn)如何？其次，中國白酒的釀造屬于典型的自然發(fā)酵的過程，需要依靠自然富集過程去獲得環(huán)境中的各種功能微生物進(jìn)行發(fā)酵，但是這種依靠大自然的發(fā)酵過程受環(huán)境的影響非常大，因此隨著季節(jié)等環(huán)境因素的變化，并不一定總能夠有效穩(wěn)定的從環(huán)境中富集到所需要的各種功能微生物，因此白酒生產(chǎn)面臨的最大難題就是生產(chǎn)品質(zhì)不穩(wěn)定性、生產(chǎn)效率低的問題。因此，只有解決上述問題，才能促進(jìn)中國白酒穩(wěn)定性的規(guī)?；a(chǎn)，從而促進(jìn)中國白酒產(chǎn)業(yè)健康快速的發(fā)展。
在白酒釀造過程中，由于所用的釀造原料中主要為淀粉及蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，它們只有被降解為小分子后才能被其它微生物所利用，因此釀造過程首先由特定微生物產(chǎn)生降解酶，生成小分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)后，其它微生物利用這些可利用的營(yíng)養(yǎng)進(jìn)行生長(zhǎng)與代謝，產(chǎn)生乙醇以及其它復(fù)雜的風(fēng)味成分。
中國白酒風(fēng)味成分十分復(fù)雜，盡管白酒中乙醇和水的含量占到白酒總量的98%左右，其余的微量成分只占2%左右，但是這僅占2%的微量成分中含有上千種不同的成分，它們對(duì)白酒的風(fēng)味起到重要貢獻(xiàn)。通過分析測(cè)定，上述微量成分主要包含若干類醇類、脂類、揮發(fā)酸類、以及某些特征香等類型。因此根據(jù)白酒的成分組成以及釀造過程的特征，我們將白酒釀造中的功能劃分為產(chǎn)降解酶、產(chǎn)醇(包括乙醇和其它醇類)、產(chǎn)酯、產(chǎn)揮發(fā)酸、產(chǎn)特征香等功能。這些相關(guān)功能都是與微生物具有重要的聯(lián)系。其中降解酶的產(chǎn)生主要是由特定霉菌產(chǎn)生；乙醇以及其它醇、揮發(fā)酸、酯等物質(zhì)的產(chǎn)生主要與特定酵母有關(guān)；特征香主要由特定細(xì)菌廣生。因此，針對(duì)白酒釀造的基本功能，基于對(duì)白酒功能相關(guān)微生物的認(rèn)識(shí)，將上述特定功能微生物進(jìn)行復(fù)配組合。
目前僅有提升白酒釀造風(fēng)味構(gòu)建的混合細(xì)菌的報(bào)道，該報(bào)道中所用的微生物包括波茨坦短芽胞桿菌、嗜熱梭菌、枯草芽孢桿菌、類芽胞桿菌、琥珀酸嗜熱梭菌、短短芽胞桿菌。但是這些微生物全部為細(xì)菌類，而且它們均購于美國或德國的菌種保藏中心，而非來自于白酒釀造本土環(huán)境中篩選所得，并且這些細(xì)菌對(duì)白酒具有哪些特定的風(fēng)味貢獻(xiàn)也并不是很清楚。本發(fā)明能夠?qū)χ匾δ芪⑸镞M(jìn)行系統(tǒng)性的、有針對(duì)性的富集，能夠使白酒風(fēng)味更加平衡，而且使質(zhì)量和產(chǎn)量同時(shí)得到明顯提高，最終有效提高白酒生成的穩(wěn)定性，促進(jìn)白酒的規(guī)?；l(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
( I)要解決的技術(shù)問題
本發(fā)明要解決的一個(gè)技術(shù)問題是提供了基于釀造功能導(dǎo)向的微生物組合方法，以及將該法制造的組合菌劑在釀酒工業(yè)中的應(yīng)用。(2)本發(fā)明的技術(shù)方案
基于釀造功能導(dǎo)向的微生物組合方法，在釀造過程中將具有相應(yīng)釀造功能的微生物菌劑進(jìn)行復(fù)配組合使用，釀造功能包括產(chǎn)醇、產(chǎn)酯、產(chǎn)酸、產(chǎn)特征香、產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶，使釀造酒產(chǎn)生相應(yīng)的以及復(fù)合的釀造功能。
具有白酒釀造相應(yīng)功能的微生物為
產(chǎn)醇酵母釀酒酵母cerevisiae) CGMCC No. 4747、拜爾接合酵母iZygo sac char omyc e s bai Ii ) CGMCC No. 4745、粟酒裂殖酵母 iSchizosaccharomycespombe ) CGMCC No. 4744。
產(chǎn)酷酵母異常畢赤酵^iPichia anomala) CGMCC No. 4740、少抱酵母(.Kazachstania exigua ) CGMCC No. 4748。
產(chǎn)酸酵母東方伊薩酵母orientalis)CGMCC No. 4741、膜酸畢赤酵母 iP. Membranifaciens ) CGMCC No. 4751。
上述菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。在申請(qǐng)?zhí)?011101224203 “利用風(fēng)味定向技術(shù)篩選中國白酒釀造中的β -大馬酮產(chǎn)生菌株及其應(yīng)用”中公開，公開號(hào)CN102242072A，
公開日2011年11月16日。
拜爾接合酵_ (^ygOssccImromyces baiIii) CGMCC No. 4745 在申請(qǐng)?zhí)?011101223982 “中國醬香型白酒生產(chǎn)中高產(chǎn)乙醇低產(chǎn)雜醇油的酵母的篩選與應(yīng)用”中公開，公開號(hào)CN102226255A，
公開日2011年10月26日。
產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的霉菌白曲霉kawachii)CGMCC No. 6263、米曲霉(Aspergillus oryzae CGMCC No. 6264)。
產(chǎn)特征香的細(xì)菌地衣芽胞桿菌Iicheniformis )CGMCC No. 3961、解淀粉芽胞桿菌(也<^77"5· amyloliquefaciens ) CGMCC No. 6262。
上述菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。
將上述各類相應(yīng)功能的微生物中的一株或若干株的組合應(yīng)用。
上述各類功能微生物菌劑的制作方法，為液體或固態(tài)菌劑的制作方法。
功能酵母菌劑的制作方法
液體酵母菌劑培養(yǎng)基I (g/L):酵母膏10，蛋白胨20，葡萄糖20，蒸餾水配制，I X IO5Pa滅菌20 min0液體酵母菌劑培養(yǎng)基2:以白酒釀造所用的原料為培養(yǎng)基成分，原料選用高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮及其各種不同比例的混合配方制取液體種子培養(yǎng)基，制作方式為原料樣品經(jīng)粉碎后，與水按I : I 4 (w/v)的比例混合后，蒸煮I 5h,冷卻后加入糖化酶10 50單位/g原料，于40 80°C保持2 10h，過濾、離心所得濾液，調(diào)節(jié)糖度為1(Γ 5°Βχ，調(diào)節(jié) pH 為 4 6。
液體酵母菌劑培養(yǎng)方法，接一環(huán)酵母菌體于液體酵母菌劑培養(yǎng)基I或2中，30°C培養(yǎng) 24h。
固體酵母菌劑培養(yǎng)基I :選用高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮及其各種不同比例的混合配方制取固體種子培養(yǎng)基，制作方式為原料樣品經(jīng)粉碎后，與水按I : 0.5 2 (w/v)的比例混合后，80 100°C蒸煮30min。
固體酵母菌劑培養(yǎng)基2 :在新鮮酒糟加入O. I lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)酸度為O 5 ；
固體酵母菌劑培養(yǎng)方法接一環(huán)酵母菌體于液體酵母菌劑培養(yǎng)基I或2中，30°C培養(yǎng)24h后，以10%接種比例接種于固體酵母菌劑培養(yǎng)基I或2中，30°C培養(yǎng)24 36h。
功能細(xì)菌菌劑的制作方法
液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基I (g/L):牛肉膏5，蛋白胨10，NaCl 5，蒸餾水配制，pH 7.0，
1X IO5Pa滅菌20 min。液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基2 :以白酒釀造所用的原料為培養(yǎng)基成分，原料選用高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮及其各種不同比例的混合配方制取液體種子培養(yǎng)基，制作方式為原料樣品經(jīng)粉碎后，與水按I : I 4 (w/v)的比例混合后,蒸煮l_5h,冷卻后加入糖化酶10 50單位/g原料，于40 8(TC保持2 IOh,過濾、離心所得濾液,調(diào)節(jié)糖度為1(Γ 5οΒχ，調(diào)節(jié)pH為4 7。
液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)方法，接一環(huán)細(xì)菌菌體于液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基I或2中，37°C培養(yǎng) 24h。
固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基I :選用高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮及其各種不同比例的混合配方制取固體種子培養(yǎng)基，制作方式為原料樣品經(jīng)粉碎后，與水按I : 0.5 2 (w/v)的比例混合后，80 100°C蒸煮30min。
固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基2 :在新鮮酒糟加入O. I lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)酸度為O 5 ；
固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)方法接一環(huán)細(xì)菌菌體于液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基I或2中，37°C培養(yǎng)24h后，以10%接種比例接種于固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基I或2中，37°C培養(yǎng)24 — 36h。
功能霉菌菌劑的制作方法
固體霉菌菌劑培養(yǎng)基I :選用高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮及其各種不同比例的混合配方制取固體種子培養(yǎng)基，制作方式為原料樣品經(jīng)粉碎后，與水w/v按I : 0.5 2的比例混合后，80 100°C蒸煮30min。
固體霉菌菌劑培養(yǎng)基2 :在新鮮酒糟加入O. 1-lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)酸度為O 5 ；
固體霉菌菌劑培養(yǎng)方法接一環(huán)霉菌菌體于固體霉菌菌劑培養(yǎng)基I或2中，30°C培養(yǎng)
2 3h。
按照上述培養(yǎng)方法制作得到的各類功能菌劑的細(xì)胞數(shù)量，酵母總活菌數(shù)達(dá)到IO6 101QCFU/g，細(xì)菌總活菌數(shù)達(dá)到IO7 — 109CFU/g，霉菌孢子總數(shù)IO6 IO9個(gè)/g。
上述各類微生物菌劑的組合方法，是酵母細(xì)菌霉菌細(xì)胞數(shù)量為10 : I 100 :
I 10，其中產(chǎn)醇酵母產(chǎn)酯酵母產(chǎn)酸酵母細(xì)胞數(shù)量比為10 : I 100 : I 100。上述各菌按數(shù)量比進(jìn)行攪拌混合。[0031 ] 基于釀造功能導(dǎo)向的微生物組合方法的應(yīng)用，是在各種釀造酒工業(yè)中的應(yīng)用。將各類微生物菌劑按總量O. 2^5% (v/w、w/w)接入到釀造過程中的糟醅或醪糟中，提高白酒中的醇、揮發(fā)酸及酯，同時(shí)白酒的特征香、豐滿度、細(xì)膩感、甜度、舒適感都提高。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明突出的優(yōu)點(diǎn)是使白酒生產(chǎn)效率提高、品質(zhì)穩(wěn)定性加強(qiáng)，對(duì)于白酒高效、高品質(zhì)的規(guī)?；a(chǎn)，以及走向純種式發(fā)酵具有重要的意義。該組合菌劑可應(yīng)用于各種釀造酒工業(yè)中。本發(fā)明能夠?qū)χ匾δ芪⑸镞M(jìn)行系統(tǒng)性的、有針對(duì)性的富集，能夠使白酒風(fēng)味更加平衡與突出，而且使質(zhì)量和產(chǎn)量同時(shí)得到明顯提高，最終有效提高白酒生成的品質(zhì)穩(wěn)定性與生產(chǎn)效率，促進(jìn)白酒的規(guī)模化發(fā)展。
生物材料樣品保藏
釀酒酵母(SaccAaro焊Ce1S cerevisiae ^) CGMCC No. 4747、
拜爾接合酵母焊cm baiIii ) CGMCC No. 4745、
粟酒裂殖酵母(SbAizo1SaccAaro焊Ce1S pombe ) CGMCC No. 4744 ；
異常畢赤酵母anomala ) CGMCC No. 4740、
少抱酵母exigua^) CGMCC4748 ；
東方伊薩酵母orientalis) CGMCC No. 4741、
膜酸畢赤酵母(Z7· Membrani faci ens ) CGMCC No. 4751 ；
白曲霉kawachii ) CGMCC No. 6263、
米曲霉oryzae ) CGMCC No. 6264 ；
地衣芽胞桿菌(ifeci77w5· licheniformis^) CGMCC No. 3961、
解淀粉芽胞桿菌amyloli quefaci ens) CGMCC No. 6262 ；
白曲霉(Aspergillus kawachii ) M90,已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，簡(jiǎn)稱CGMCCJia :北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號(hào)CGMCC No. 6263，保藏日期2012年6月21日。
米曲霉orj^ae) M92,已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，簡(jiǎn)稱CGMCCJia :北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號(hào)CGMCC No. 6264，保藏日期2012年6月21日。
解淀粉芽胞桿菌(ifeci77i/5· amyloli quefaci ens ) B2,已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，簡(jiǎn)稱CGMCCJia :北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號(hào)CGMCC No. 6262，保藏日期2012年6月21日。


圖I :釀酒酵母(SaccAaro焊Ce1S cerevisiae^) CGMCC No 4747 的電鏡照片 圖2 :異常畢赤酵母(/7ZcAia anomala ) CGMCC No 4740的電鏡照片
圖 3 :東方伊薩酵母orientalist CGMCC No 4741 的電鏡照片 圖 4 :地衣芽胞桿菌(ifeci77w5· Ii cheni formi s ) CGMCC No 3961 的電鏡照片 圖 5 :白曲霉kawachii ) CGMCC No 6263 的菌落照片
圖6 :采用組合微生物菌劑生產(chǎn)的白酒GC/MS圖譜。
具體實(shí)施方式
[0037]實(shí)施例I :不同類型的微生物的功能
產(chǎn)醇酵母釀酒酵母cerevisiae ^) CGMCC No 4747 產(chǎn)乙醇 43. 8g/L、其它高級(jí)醇 82. 6g/L ;拜爾接合酵母 QZygosaccharotnyces baiIii ) CGMCC No 4745 產(chǎn)乙醇 32. 8g/L、其它高級(jí)醇 22. 6g/L ;粟酒裂殖酵母pombe ) CGMCC No4744產(chǎn)乙醇40. lg/L，其它高級(jí)醇12. 6 g/L。
產(chǎn)酯酵母異常畢赤酵母G0ZcAia anomala ) CGMCC No 4740 產(chǎn)酯 215. 2 mg/L ;少抱酵母 exigua) CGMCC No 4748 產(chǎn)酯 31. 8 mg/L。產(chǎn)揮發(fā)酸酵母東方伊薩酵母orien tali s ) CGMCC No 4741 產(chǎn)酸510. 4mg/L ;膜酸畢赤酵母(/I Membrani faci ens ) CGMCC No 4751 產(chǎn)酸 128. 2 mg/L。
產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的霉菌白曲霉kawachii ) CGMCC No 6263產(chǎn)糖化酶 1120U/g、酸性蛋白酶活力 1830 U/g ;米曲霉oryzaeXQWC No 6264產(chǎn)糖化酶1200U/g、酸性蛋白酶活力1830 U/g。
產(chǎn)特征香的細(xì)菌通過感官品評(píng)地衣芽胞桿菌(ifeci77i/5· licheniformis) CGMCCNo 3961、解淀粉芽胞桿菌05<3<^'77^/5· amyloli quefaci ens )CGMCC No 6262 為產(chǎn)特征香的菌株。
實(shí)施例2 組合菌劑在白酒生產(chǎn)中的應(yīng)用 功能微生物菌劑的制作方式
功能酵母菌劑的制作方式
液體酵母菌劑培養(yǎng)基麩皮經(jīng)粉碎后，與水w/v按I : I 4的比例混合后，蒸煮l_5h，冷卻后加入糖化酶10 50單位/g原料，于40 80°C保持2 10h，過濾、離心所得濾液，調(diào)節(jié)糖度為1(Γ 5°Βχ，調(diào)節(jié)pH為4 6。
液體酵母菌劑培養(yǎng)方式，接一環(huán)酵母菌體于液體培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)24h。
固體酵母菌劑培養(yǎng)基高梁樣品經(jīng)粉碎后，與水w/v按I : O. 5 2的比例混合后,80 10CTC 蒸煮 30min。
固體酵母菌劑培養(yǎng)方式接一環(huán)酵母菌體于液體酵母菌劑培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)24h后，以10%接種比例接種于固體酵母菌劑培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)24 — 36h。
功能細(xì)菌菌劑的制作方式
液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基麩皮經(jīng)粉碎后，與水w/v按I : I 4的比例混合后，蒸煮l_5h，冷卻后加入糖化酶10 50單位/g原料，于40 80°C保持2 10h，過濾、離心所得濾液，調(diào)節(jié)糖度為1(Γ 5οΒχ，調(diào)節(jié)pH為4 7。
液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)方式，接一環(huán)細(xì)菌菌體于液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)24h。
固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基高梁經(jīng)粉碎后，與水w/v按I : O. 5 2的比例混合后，80 10CTC 蒸煮 30min。
固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)方式接一環(huán)菌體于液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)24h后，以10%接種比例接種于固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)24 36h。
功能霉菌菌劑的制作方式
固體霉菌菌劑培養(yǎng)基在新鮮酒糟加入O. 1-lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)酸度為O 5 ;
固體霉菌菌劑培養(yǎng)方式接一環(huán)霉菌菌體于固體霉菌菌劑培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)2 3h。[0051]功能菌劑在白酒生產(chǎn)中的應(yīng)用
將釀酒酵母cerevisiae CGMCC No 4747)(產(chǎn)醇酵母)、異常畢赤酵母{Pi chi a anomala CGMCC No 4740)(產(chǎn)酷酵母)、東方伊薩酵母ori en tali sCGMCC No 4741)(產(chǎn)揮發(fā)酸酵母)、地衣芽胞桿菌UaciJJw1S licheniformis CGMCC No3961)(產(chǎn)特征香細(xì)菌)、白曲霉kawachii CGMCC No 6263)(產(chǎn)糖化酶和蛋白酶的霉菌)分別按照上述培養(yǎng)條件培養(yǎng)后微生物總活菌數(shù)達(dá)到108CFU/g、108CFU/g、IO8CFU/g、109CFU/g、108 個(gè)/g。
將上述微生物按照細(xì)胞數(shù)量I : I : I : 10 : I的比例進(jìn)行混合后，共同加入到芝麻香型白酒生產(chǎn)的堆積酒醅中，堆積40h后，入池發(fā)酵30天，收集蒸餾酒，測(cè)定出酒率為31%，比未應(yīng)用組合微生物生產(chǎn)白酒的出酒率高8%。同時(shí)對(duì)酒進(jìn)行風(fēng)味測(cè)定和感官品評(píng)，結(jié)果如下表I和表2。白酒中的醇、揮發(fā)酸及酯明顯提高，同時(shí)白酒的特征香、豐滿度、細(xì)膩感、甜度、舒適感都提高。此應(yīng)用連續(xù)生產(chǎn)3排，結(jié)果均一致。
表I添加菌液對(duì)芝麻香型白酒頭段酒的風(fēng)味成分影響(μ g/L)
權(quán)利要求
1.基于釀造功能導(dǎo)向的微生物組合方法，其特征在于在釀造過程中將具有相應(yīng)釀造功能的微生物菌劑進(jìn)行復(fù)配組合使用，使釀造酒產(chǎn)生相應(yīng)的以及復(fù)合的釀造功能； 所述釀造功能包括產(chǎn)醇、產(chǎn)酷、產(chǎn)揮發(fā)酸、產(chǎn)特征香、產(chǎn)糖化酶和蛋白酶； 所述的具有相應(yīng)釀造功能的微生物為 產(chǎn)醇酵母釀酒酵母焊Ce1S cerevisiae) CGMCC No. 4747、拜爾接合酵母iZygo sac char otnyc e s bai Ii i ) CGMCC No. 4745、粟酒裂通酵母 iSchizosaccharotnycespombe) CGMCC No. 4744 ； 產(chǎn)酷酵母異常畢赤酵母Cft'cAia anomala ) CGMCC No. 4740、少抱酵母exigua ) CGMCC No. 4748 ； 產(chǎn)酸酵母東方伊薩酵母ori en tali s ) CGMCC No. 4741、膜酸畢赤酵母iP. Membranifaciens ) CGMCC No. 4751 ； 產(chǎn)糖化酶和蛋白酶的霉菌白曲霉kawachii ) CGMCC No. 6263、米曲霉{Aspergillus oryzae) CGMCC No. 6264 ； 產(chǎn)特征香的細(xì)菌地衣芽胞桿菌Uaciパ心HcheniforniisXmCC No. 3961、解淀粉芽胞桿菌 CfeciBw1S amyloliquefaciens ) CGMCC No. 6262 ； 上述菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。
2.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的基于釀造功能導(dǎo)向的微生物組合方法，其特征在于具有各類相應(yīng)釀造功能的微生物中的一株或若干株的組合應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的基于釀造功能導(dǎo)向的微生物組合方法，其特征在于酵母細(xì)菌霉菌細(xì)胞數(shù)量比為10 : I 100 : I 10，其中產(chǎn)醇酵母產(chǎn)酯酵母產(chǎn)酸酵母數(shù)量比為10 : I 100 : I 100 ;所述各微生物按細(xì)胞數(shù)量比進(jìn)行攪拌混合。
4.如權(quán)利要求
I所述的基于釀造功能導(dǎo)向的微生物組合方法的應(yīng)用，其特征在于在各種釀造酒エ業(yè)中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求
4所述的應(yīng)用，其特征在于將各類微生物菌劑按總量0.29T5%(v/w或w/w)接入到釀造過程中的糟醅或醪糟中，提高白酒中的醇、揮發(fā)酸及酷，同時(shí)白酒的特征香、豐滿度、細(xì)膩感、甜度、舒適感都提高。
6.權(quán)利要求
I中所述的各類功能微生物菌劑的制作方法，其特征在于為液體或固體菌劑的制作方法； (a)功能酵母菌劑的制作方法 液體酵母菌劑培養(yǎng)基I以g/L計(jì)酵母膏10，蛋白胨20，葡萄糖20，蒸餾水配制，I X IO5Pa 滅菌 20 min ； 液體酵母菌劑培養(yǎng)基2:以白酒釀造所用的原料為培養(yǎng)基成分，原料選用高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮或各種不同比例的混合配方制取液體種子培養(yǎng)基，制作方式為原料樣品經(jīng)粉碎后，按原料水為I : I 4 w/v的比例混合后，蒸煮I 5h，冷卻后加入糖化酶10 50単位/g原料，于40 80°C保持2 10h，過濾、離心所得濾液，調(diào)節(jié)糖度為l(ri5°Bx，調(diào)節(jié) pH 為 4 6 ; 液體酵母菌劑培養(yǎng)方式，接ー環(huán)酵母菌體于液體酵母菌劑培養(yǎng)基I或2中，30°C培養(yǎng)24h ； 固體酵母菌劑培養(yǎng)基I :選用高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮或各種不同比例的混合配方制取固體種子培養(yǎng)基，制作方式為原料樣品經(jīng)粉碎后，按原料水為I : O. 5 2 w/v的比例混合后，80 100°C蒸煮30min ； 固體酵母菌劑培養(yǎng)基2 :在新鮮酒糟加入O. I lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)酸度為O 5 ;固體酵母菌劑培養(yǎng)方式接一環(huán)酵母菌體于液體酵母菌劑培養(yǎng)基I或2中，30°C培養(yǎng)24h后，以10%接種比例接種于固體酵母菌劑培養(yǎng)基I或2中，30°C培養(yǎng)24 36h ； (b)功能細(xì)菌菌劑的制作方式 液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基I以g/L計(jì)牛肉膏5，蛋白胨10，NaCl 5，蒸餾水配制，pH 7. 0，1X IO5Pa 滅菌 20 min ； 液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基2:以白酒釀造所用的原料為培養(yǎng)基成分，原料選用高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮或各種不同比例的混合配方制取液體種子培養(yǎng)基，制作方式為原料樣品 經(jīng)粉碎后，按原料水為I : I 4 w/v的比例混合后,蒸煮l-5h,冷卻后加入糖化酶10 50單位/g原料，于40 80°C保持2 10h，過濾、離心所得濾液，調(diào)節(jié)糖度為1(Γ 5°Βχ，調(diào)節(jié)pH為4 7 ; 液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)方式，接一環(huán)細(xì)菌菌體于液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基I或2中，37°C培養(yǎng)24h ； 固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基I :選用高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮或各種不同比例的混合配方制取固體種子培養(yǎng)基，制作方式為原料樣品經(jīng)粉碎后，按原料水為I : 0.5 2 w/v的比例混合后，80 100°C蒸煮30min ； 固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基2 :在新鮮酒糟加入O. I lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)酸度為O 5 ;固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)方式接一環(huán)細(xì)菌菌體于液體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基I或2中，37°C培養(yǎng)24h后，以10%接種比例接種于固體細(xì)菌菌劑培養(yǎng)基I或2中，37°C培養(yǎng)24 36h ； (c)功能霉菌菌劑的制作方式 固體霉菌菌劑培養(yǎng)基I :選用高粱、大麥、小麥、豌豆、麩皮或各種不同比例的混合配方制取固體種子培養(yǎng)基，制作方式為原料樣品經(jīng)粉碎后，按原料水為I : O. 5 2 w/v的比例混合后，80 100°C蒸煮30min ； 固體霉菌菌劑培養(yǎng)基2 :在新鮮酒糟加入O. 1-lmol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)酸度為O 5 ; 固體霉菌菌劑培養(yǎng)方式接一環(huán)霉菌菌體于固體霉菌菌劑培養(yǎng)基I或2中，30°C培養(yǎng)2 3h。
7.根據(jù)權(quán)利要求
6所述的各類功能微生物菌劑的制作方法，其特征在于各類功能微生物菌劑的細(xì)胞數(shù)量，酵母總活菌數(shù)達(dá)到IO6 101(lCFU/g，細(xì)菌總活菌數(shù)達(dá)到IO7 IO9CFU/g，霉菌孢子總數(shù)IO6 IO9個(gè)/g。
8.權(quán)利要求
I中所述的產(chǎn)糖化酶和蛋白酶的霉菌，其特征在于所述霉菌為白曲霉{Aspergillus kawachii) M90,已保藏方中國微生物菌種保藏管理委員會(huì),保藏編號(hào)CGMCCNo.6263。
9.權(quán)利要求
I中所述的產(chǎn)糖化酶和蛋白酶的霉菌，其特征在于所述霉菌為 米曲霉(As/76 r^777w5· oryzae)W2,已保藏方中國微生物菌種保藏管理委員會(huì),保藏編號(hào) CGMCC No. 6264。
10.權(quán)利要求
I中所述的產(chǎn)特征香的細(xì)菌，其特征在于所述細(xì)菌為解淀粉芽胞桿菌(,Bacillus amyloliquefaciens) B2,已保藏方中國微生物菌種保藏管理委員會(huì),保藏編號(hào)VO ry r/ry r/ k T
專利摘要
本發(fā)明公開了基于一種釀造功能導(dǎo)向的微生物組合方法及組合菌劑在白酒工業(yè)中的應(yīng)用，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明基于白酒釀造的基本功能，將來自于白酒釀造環(huán)境中具有相應(yīng)功能的微生物，進(jìn)行復(fù)配組合，并將其用于白酒釀造生產(chǎn)中，所生產(chǎn)的白酒的品質(zhì)以及出酒率均得到穩(wěn)定與提高。所述釀造功能包括產(chǎn)醇、產(chǎn)酯、產(chǎn)揮發(fā)酸、產(chǎn)特征香、產(chǎn)糖化酶和蛋白酶；及其相關(guān)酵母、霉菌和細(xì)菌。本發(fā)明突出的優(yōu)點(diǎn)是白酒中的醇、揮發(fā)酸及酯，以及白酒的特征香、豐滿度、細(xì)膩感、甜度、舒適感都提高。該組合菌劑可應(yīng)用于各種釀造酒工業(yè)中，對(duì)于釀造酒高效、高品質(zhì)的規(guī)模化生產(chǎn)具有重要的意義。
文檔編號(hào)C12N1/20GKCN102766576SQ201210250259
公開日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年7月19日
發(fā)明者吳群, 徐巖 申請(qǐng)人:江南大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan