專利名稱:以純棉毛巾為載體的固定化脂肪酶的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及固定化脂肪酶技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及以純棉毛巾為載體的固定化脂肪酶的制備方法。
背景技術(shù)：
脂肪酶(Lipase，EC 3. 1. 1. 3)，也叫三?；视王；饷?，它可以催化天然油脂進(jìn)行水解，生成脂肪酸、甘油、甘油單酯或二酯，是生物體內(nèi)脂代謝不可缺少的重要水解酶。 脂肪酶是一種生物催化劑，其最突出的特點(diǎn)就是能夠在油水界面催化反應(yīng)，與化學(xué)催化劑相比，具有反應(yīng)條件溫和、催化效率高、專一性強(qiáng)、污染低等優(yōu)點(diǎn)。然而，在實(shí)際使用過程中， 游離酶即使在最適反應(yīng)條件下也存在易失活、催化反應(yīng)不穩(wěn)定、與產(chǎn)物分離困難或分離成本高等缺點(diǎn)。另外，脂肪酶酶制劑或者是通過微生物發(fā)酵產(chǎn)生，或者是從動物、植物體內(nèi)提取的，分離純化成本高，導(dǎo)致酶的生產(chǎn)價格較高，加上游離酶很難重復(fù)利用，導(dǎo)致酶制劑的使用成本提高，從而限制了游離酶在工業(yè)生產(chǎn)中大規(guī)模的應(yīng)用。
酶的固定化是指將酶束縛或限制于一定區(qū)域內(nèi)，但仍保留其催化特性并可回收和重復(fù)使用的一類技術(shù)。固定化脂肪酶與游離脂肪酶相比最大的優(yōu)勢在于固定化脂肪酶可以重復(fù)使用、連續(xù)操作、能夠控制產(chǎn)品組成、簡化和更加高效地催化反應(yīng)。這就要求在固定化過程中不僅要使脂肪酶保持最大活性，還要滿足工業(yè)反應(yīng)器中催化反應(yīng)的要求。因此，高效固定化脂肪酶依賴于很多因素，除了高活性的脂肪酶之外，還包括固定化酶載體、反應(yīng)溶劑以及反應(yīng)器類型。其中，酶的載體通常被認(rèn)為是生物催化劑固定化反應(yīng)器性能的最重要部分。固定化酶所用的載體有改性硅膠、大孔樹脂、活性炭、硅藻土、凹凸棒土、層狀硅酸鹽、 絲瓜絡(luò)、殼聚糖、纖維素、聚乙烯醇、聚乙烯丙烯胺、卡拉膠、氣凝膠、海藻酸鈉、磁性淀粉微球、蠶絲、蛋殼以及復(fù)合二氧化硅等。
國內(nèi)外研究者主要通過脂肪酶固定化載體的選擇、處理，固定劑的選擇及固定化方法方面進(jìn)行研究，并且取得了一定的研究成果。例如，譚天偉等采用吸附法將脂肪酶固定在經(jīng)共固定劑處理的惰性載體膜或紡織物上，固定化載體可與金屬絲網(wǎng)復(fù)合，形成新型反應(yīng)器。其不足之處在于采用吸附法實(shí)現(xiàn)脂肪酶的固定化，酶與載體之間的結(jié)合力不強(qiáng)，易脫落[中國專利申請公開文獻(xiàn)CN145667A，
公開日為2003. 11. 19]。劉新喜等在棉纖維膜上用高碘酸鈉法固定化脂肪酶，其特點(diǎn)是用一定濃度的高碘酸鈉溶液在室溫下處理棉纖維膜一段時間，用蒸餾水清洗至中性，再和緩沖液配制好的酶液交聯(lián)24h得固定化酶。其特點(diǎn)是該方法達(dá)到了脂肪酶被重復(fù)使用的目的，穩(wěn)定性較好。固定化原理為高碘酸鈉先將棉纖維膜上存在著的鄰二羥基的碳鍵氧化成醛基，繼而與酶蛋白上的氨基進(jìn)行醛胺縮合反應(yīng)形成希夫堿，通過共價交聯(lián)得到固定化脂肪酶。其不足之處在于此法反應(yīng)劇烈，交聯(lián)時間長，反應(yīng)過程中容易導(dǎo)致酶失活(劉新喜，彭立鳳.棉纖維膜上高碘酸鈉法固定化脂肪酶[J].河北師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)2001，25 (1):80-83.)。張寶華等以絲瓜絡(luò)作為脂肪酶固定化的載體，所得到的固定化脂肪酶活力回收率高、重復(fù)使用率高、并且固定化好的酶能夠多次使用而不失活。其特點(diǎn)在于載體絲瓜絡(luò)需要用氫氧化鈉溶液在7(T95°C的情況下洗滌12h，以去除多余的油脂，經(jīng)清洗后超聲3h，經(jīng)上述工序處理過的絲瓜絡(luò)載體干燥后與有機(jī)溶劑按一定比例混合后加入脂肪酶粉在搖床中固定16士2h，用有機(jī)溶劑沖洗三次，室溫干燥得固定化脂肪酶。其不足之處在于載體處理需要7(T95°C的高溫下處理12h，能耗高；需超聲處理，需有機(jī)溶劑(環(huán)己烷、正庚烷、正己烷)清洗，提高了固定化酶的生產(chǎn)成本；固定化周期過長[中國專利申請，公開號為CN101260396A，
公開日2008. 09. 10]。Givanildo等通過過濾的方式將陽極氧化鋁與聚乙烯亞胺相結(jié)合，之后通過戊二醛的交聯(lián)作用促使聚乙烯亞胺_陽極氧化鋁形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，用緩沖溶液沖洗10次得到聚乙烯亞胺-陽極氧化鋁復(fù)合載體，然后與胰蛋白酶相結(jié)合，得到固定化胰蛋白酶。載體通過聚乙烯亞胺處理的固定化胰蛋白酶比載體未經(jīng)聚乙烯亞胺處理所得到的固定化酶酶活高[Givanildo Bezerra Oliveira et al. Enzyme immobilization on anodic aluminum oxide/polyethyleneimine or polyaniline composites [J]. Reactive&Functional Polymers 68 (2008) 27-32.]。美國俄亥俄州立大學(xué)楊尚天教授研究小組開發(fā)的創(chuàng)新型固定化酶反應(yīng)器技術(shù)，用純纖維狀基質(zhì)作為固定化酶的載體，高度分支的陽離子聚合物聚乙烯(polyethyleneimine，PEI)和戊二醛(glutaraldehyde，GA)處理其表面。PEI先吸附在載體表面，并通過靜電吸附酶，GA使 PEI-酶聚集體交聯(lián)并覆蓋在支持物表面實(shí)現(xiàn)固定化，酶的載量是單層共價鍵固定方法的幾倍，酶活也會保持在90%以上，其熱穩(wěn)定性也至少提高了 10-20%，但是在交聯(lián)反應(yīng)中醛基與氨基反應(yīng)生成C=N希夫鍵易于水解，特別是在較高溫度時水解更嚴(yán)重，在固定化過程中酶活性損失較大；在貯存中由于自動聚合而形成很多不同物質(zhì)，性質(zhì)不穩(wěn)定；另外戊二醛也是一種有毒物質(zhì)，對操作者身體不利(美國專利號US7166451，申請日為2004. 02. 24)。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種以純棉毛巾為載體用聚乙烯亞胺吸附、三羥甲基磷或三羥甲基磷與戊二醛水溶液為交聯(lián)劑制備的固定化脂肪酶的方法。
本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
以純棉毛巾為載體的固定化脂肪酶的制備方法包括以下步驟首先將聚乙烯亞胺 (PEI)水溶液滴在毛巾上，待毛巾吸收聚乙烯亞胺(PEI)水溶液完成后，加入用蒸餾水配好的脂肪酶溶液，經(jīng)恒溫?fù)u床震蕩，酶吸附在含有聚乙烯亞胺(PEI)的純棉毛巾上，除去上清液，再用交聯(lián)劑對吸附了酶和聚乙烯亞胺(PEI)的毛巾進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)完成后，取出毛巾，用緩沖液清洗毛巾，直到?jīng)]有蛋白洗脫下來，室溫下干燥得到固定化脂肪酶；所述脂肪酶包括堿性脂肪酶、豬胰脂肪酶或酯化用脂肪酶，所述交聯(lián)劑包括三羥甲基磷(THP)水溶液或戊二醛(GA)水溶液和三羥甲基磷(THP)水溶液的混合物。
脂肪酶水溶液的配制方法為稱取8. Og的脂肪酶粉劑，加入50ml蒸餾水磁力攪拌，充分溶解，酶溶液呈渾濁的淺褐色懸液且沒有結(jié)塊，將酶溶液裝入離心管中，然后在漩渦混合器上混合lOmin，12000rpmU0° C下離心20min ；倒出上清液，在沉淀中再次加入40ml蒸餾水進(jìn)行溶解、離心，重復(fù)兩次，上清液混合在一起，測其蛋白含量，放入冰箱中 4° C保存，并且盡快使用。
所述豬胰脂肪酶水溶液濃度為5. 0mg/ml，堿性脂肪酶水溶液濃度為0. 5mg/ml，酯化用脂肪酶水溶液濃度為0. 25mg/ml。
所述聚乙烯亞胺(PEI)水溶液的濃度為1. 5 6. 0 mg/ml、pH為4. (TlO. 0 ；所述三羥甲基磷(THP)水溶液的濃度為0. 059Γ0. 50% (ν/ν)；所述交聯(lián)劑戊二醛(GA)和三羥甲基磷 (THP)的混合物由濃度為0. 26%的戊二醛(GA)水溶液與濃度為0. 10%的三羥甲基磷(THP) 水溶液按照體積比1:3 3:1混合得到；所述交聯(lián)時間為5 200min ；所述吸附溫度和交聯(lián)溫度均為0°C 40°C ；所述緩沖液為醋酸鹽緩沖液或甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液。
所述醋酸鹽緩沖溶液用來清洗吸附了豬胰脂肪酶或酯化用脂肪酶且經(jīng)交聯(lián)劑交
聯(lián)后的毛巾，甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液用來清洗吸附了堿性脂肪且經(jīng)交聯(lián)劑交聯(lián)后的毛巾。
所述聚乙烯亞胺(PEI)水溶液的濃度為1. 5mg/ml、2. 0mg/ml、2. 5mg/ml、3. Omg/ ml、4. 0mg/ml、5. Omg/ml 或 6. Omg/ml，pH 為 4、5、6、7、8、9 或 10 ；交聯(lián)劑三羥甲基磷(THP)水溶液的濃度為 0. 05%,0. 10%,0. 15%、0. 20%,0. 25%,0. 30%,0. 35%,0. 40%,0. 45% 或 0. 50% (ν/ ν)；交聯(lián)劑戊二醛(GA)和三羥甲基磷(THP)的混合物由濃度為0. 26%的戊二醛(GA)水溶液與濃度為0. 10%的三羥甲基磷(THP)水溶液按照體積比1:3、1:1或3:1混合得到；交聯(lián)時間為5、10、20、30、60、120、150、200min ；吸附溫度和交聯(lián)溫度均為0、4、15、30或40°C ；醋酸鹽緩沖液的濃度為0. 1Μ，ρΗ為4、4.5、5、6或7，甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液的濃度為0. 1M， pH 為 8. 0,8. 6,9. 0,9. 6 或 10。
所述聚乙烯亞胺(PEI)水溶液的加入量為0. Γ0. 9ml，交聯(lián)劑加入量為^il,緩沖液的使用量為75ml/g毛巾，豬胰脂肪酶水溶液的加入量為廣400mg/g毛巾、堿性脂肪酶的加入量為廣30mg/g毛巾、酯化用脂肪酶加入量為廣7mg/g毛巾。
所述聚乙烯亞胺(PEI)水溶液的濃度為3. 37mg/ml、pH為7. O ；三羥甲基磷(THP) 水溶液濃度為0. 10% (ν/ν)；交聯(lián)劑戊二醛(GA)和三羥甲基磷(THP)的混合物由濃度為 0. 26%的戊二醛(GA)水溶液與濃度為0. 10%的三羥甲基磷(THP)水溶液按照體積比1:1混合得到；吸附溫度為40°C，交聯(lián)溫度為15°C ；交聯(lián)時間為20min ；醋酸鹽緩沖溶液的濃度為 0. 1M、pH為5. 0，甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液的濃度為0. 1M、pH為9. O。
所述聚乙烯亞胺(PEI)水溶液的加入量為0. 5ml，豬胰脂肪酶水溶液的加入量為 250mg/g毛巾、堿性脂肪酶的加入量為27mg/g毛巾、酯化用脂肪酶加入量為6. 25mg/g毛巾。
交聯(lián)劑三羥甲基磷(THP)水溶液是由四羥甲基氯化磷(THPC)與氫氧化鉀(KOH)按摩爾比1 :0. 995混合反應(yīng)制得。具體操作方法為，取四羥甲基氯化磷(THPC)溶于去離子水中，相應(yīng)質(zhì)量的氫氧化鉀(KOH)溶于去離子水中，在磁力攪拌器攪拌下，氫氧化鉀(KOH) 水溶液緩緩的加入到四羥甲基氯化磷(THPC)溶液中，反應(yīng)結(jié)束，制得交聯(lián)劑三羥甲基磷水 (THP)溶液，三羥甲基磷(THP)水溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配。
相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)
(1)本發(fā)明所采用聚乙烯亞胺是一種水溶性聚胺，也是重金屬離子吸附劑，工業(yè)上把它與某些載體結(jié)合，用于吸附水中的重金屬離子。聚乙烯亞胺分子鏈上具有大量的氨基，當(dāng) pH<10時，其分子鏈上的氨基多處于質(zhì)子化狀態(tài)，因此聚乙烯亞胺又是一種帶正電荷的聚電解質(zhì)。而大部分酶在PH<10時帶負(fù)電，因此聚乙烯亞胺在一定酸堿度下對酶分子具有靜電吸引作用，它能使酶分子發(fā)生離子吸附而被固定化。
( 2)本發(fā)明的載體材料具有其他載體材料所不具備的優(yōu)點(diǎn)。純棉毛巾廉價易得，且固定化工藝簡單，能耗低，不需要特殊設(shè)備，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
(3)本發(fā)明固定化脂肪酶能組裝成固定化酶反應(yīng)器，實(shí)現(xiàn)催化和分離的連續(xù)反應(yīng)體系，有很好的工業(yè)化應(yīng)用前景；并且本發(fā)明固定化脂肪酶能提供良好流量、低壓降、可以忽略傳質(zhì)阻力的影響，這種特性對于工業(yè)酶的應(yīng)用也非常重要。
(4)本發(fā)明的固定化酶酶活高，反應(yīng)時間短，反應(yīng)Ih轉(zhuǎn)酯化率達(dá)92. 1%，酯交換比酶活力為15. 80U/g毛巾。
(5)本發(fā)明所采用的固定化方法具有良好的操作穩(wěn)定性。交聯(lián)劑THP交聯(lián)所得固定化酶重復(fù)使用10次后，剩余的酯交換比酶活力為63. 41% ；交聯(lián)劑GA交聯(lián)所得固定化酶重復(fù)使用10次后，剩余的酯交換比酶活力為50. 8% ；具有良好的溫度穩(wěn)定性，交聯(lián)劑THP交聯(lián)所得固定化酶75°C反應(yīng)Ih后，剩余的酯交換比酶活力為87. 12% ；交聯(lián)劑GA交聯(lián)所得固定化酶75°C反應(yīng)Ih后，剩余的酯交換比酶活力為75. 52%。
(6)本發(fā)明所采用的載體一純棉毛巾具有多空隙，纖維較長，具有較大的比表面積，有利于催化反應(yīng)的進(jìn)行。與顆粒狀載體相比，酶更容易從反應(yīng)體系中分離出來；具有良好的機(jī)械強(qiáng)度和穩(wěn)定性，可以用于酶固定化反應(yīng)器的設(shè)計，形成新型脂肪酶酶纖維床反應(yīng)器，實(shí)現(xiàn)酶在最大接觸面積下對底物的連續(xù)化反應(yīng)。
(7)本發(fā)明所使用的交聯(lián)劑具有毒性小、價格低廉、對酶活損失小且能提高固定化酶的穩(wěn)定性的優(yōu)點(diǎn)。
(8)本方法適用于至少三種脂肪酶的固定化，且都獲得了較高的酶活。


圖1為分別以THP和GA為交聯(lián)劑固定化酯化用脂肪酶的溫度穩(wěn)定性圖。
圖2為分別以THP和GA為交聯(lián)劑固定化酯化用脂肪酶的重復(fù)使用性圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例和附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但并不局限于此。
本實(shí)施方式中固定化脂肪酶的評價方法
1、蛋白載量的測定采用Bradford方法檢測溶液中的蛋白含量。將洗滌液與吸附后酶液、交聯(lián)后剩余溶液混合，測其蛋白含量。將混合液稀釋到合適的濃度，取IOmL混合液到96 孔板，再加入190mL用去離子水配好的Bradford染色試劑，用手搖勻，在室溫下放置20min， 用酶標(biāo)儀在595nm下測其吸光值，根據(jù)下面的公式計算固定化脂肪酶的酶載量。同一條件下的實(shí)驗至少平行重復(fù)三次，取平均值。
權(quán)利要求
1.以純棉毛巾為載體的固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于包括以下步驟首先將聚乙烯亞胺水溶液滴在毛巾上，待毛巾吸收聚乙烯亞胺水溶液完成后，加入用蒸餾水配好的脂肪酶溶液，經(jīng)恒溫?fù)u床震蕩，酶吸附在含有聚乙烯亞胺的純棉毛巾上，除去上清液，再用交聯(lián)劑對吸附了酶和聚乙烯亞胺的毛巾進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)完成后，取出毛巾，用緩沖液清洗毛巾，直到?jīng)]有蛋白洗脫下來，室溫下干燥得到固定化脂肪酶；所述脂肪酶包括堿性脂肪酶、豬胰脂肪酶或酯化用脂肪酶，所述交聯(lián)劑包括三羥甲基磷水溶液或戊二醛水溶液和三羥甲基磷水溶液的混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于脂肪酶水溶液的配制方法為稱取8.Og 的脂肪酶粉劑，加入50ml蒸餾水磁力攪拌，充分溶解，酶溶液呈渾濁的淺褐色懸液且沒有結(jié)塊，將酶溶液裝入離心管中，然后在漩渦混合器上混合10min，12000rpm、10° C下離心 20min ；倒出上清液，在沉淀中再次加入40ml蒸餾水進(jìn)行溶解、離心，重復(fù)兩次，上清液混合在一起，測其蛋白含量，放入冰箱中4° C保存，并且盡快使用。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于所述豬胰脂肪酶水溶液濃度為5.Omg/ml, 堿性脂肪酶水溶液濃度為0. 5mg/ml，酯化用脂肪酶水溶液濃度為0. 25mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于所述聚乙烯亞胺水溶液的濃度為1.5飛.O mg/ml、pH為4. (TlO. O ；所述三羥甲基磷水溶液的濃度為0. 059Π). 50% (ν/ν)；所述交聯(lián)劑戊二醛和三羥甲基磷的混合物由濃度為0. 26% (ν/ν)的戊二醛水溶液與濃度為0. 10% (ν/ ν)的三羥甲基磷水溶液按照體積比1:3 3:1混合得到；所述交聯(lián)時間為5 200min ；所述吸附溫度和交聯(lián)溫度均為0°C 40°C ；所述緩沖液為醋酸鹽緩沖液或甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液。
5.根據(jù)權(quán)利要求
4所述的方法，其特征在于所述醋酸鹽緩沖溶液用來清洗吸附了豬胰脂肪酶或酯化用脂肪酶且經(jīng)交聯(lián)劑交聯(lián)后的毛巾，甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液用來清洗吸附了堿性脂肪且經(jīng)交聯(lián)劑交聯(lián)后的毛巾。
6.根據(jù)權(quán)利要求
4所述的方法，其特征在于聚乙烯亞胺水溶液的濃度為1.5mg/ml、 2. Omg/ml、2. 5mg/ml、3. Omg/ml、4. Omg/ml、5. Omg/ml 或 6. Omg/ml, pH 為 4、5、6、7、8、9 或 10 ；交聯(lián)劑三羥甲基磷水溶液的濃度為0. 05%,0. 10%,0. 15%、0. 20%,0. 25%,0. 30%,0. 35%、 0. 40%,0. 45%或0. 50% (ν/ν)；交聯(lián)劑戊二醛和三羥甲基磷的混合物由濃度為0. 26% (ν/ν) 的戊二醛水溶液與濃度為0. 10% (ν/ν)的三羥甲基磷水溶液按照體積比1:3、1:1或3:1混合得到；交聯(lián)時間為5、10、20、30、60、120、150、200min ；吸附溫度和交聯(lián)溫度均為0、4、15、 30或40°C ；醋酸鹽緩沖液的濃度為0. 1M，pH為4、4. 5、5、6或7，甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液的濃度為 0. 1M, pH 為 8. 0,8. 6,9. 0,9. 6 或 10。
7.根據(jù)權(quán)利要求
6所述的方法，其特征在于所述聚乙烯亞胺水溶液的加入量為 0. Γ0. 9ml，交聯(lián)劑加入量為anl，緩沖液的使用量為75ml/g毛巾，豬胰脂肪酶水溶液的加入量為廣400mg/g毛巾、堿性脂肪酶的加入量為廣30mg/g毛巾、酯化用脂肪酶加入量為廣7mg/g毛巾。
8.根據(jù)權(quán)利要求
6所述的方法，其特征在于所述聚乙烯亞胺水溶液的濃度為3.37mg/ ml、pH為7. O ；三羥甲基磷水溶液濃度為0. 10% (ν/ν)；交聯(lián)劑戊二醛和三羥甲基磷的混合物由濃度為0. 26%的戊二醛水溶液與濃度為0. 10%的三羥甲基磷水溶液按照體積比1 1混合得到；吸附溫度為40°C，交聯(lián)溫度為15°C ；交聯(lián)時間為20min ；醋酸鹽緩沖溶液的濃度為.0. 1M、pH為5. 0，甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液的濃度為0. 1M、pH為9. 0。
9.根據(jù)權(quán)利要求
7所述的方法，其特征在于所述聚乙烯亞胺水溶液的加入量為0.5ml, 豬胰脂肪酶水溶液的加入量為250mg/g毛巾、堿性脂肪酶的加入量為27mg/g毛巾、酯化用脂肪酶加入量為6. 25mg/g毛巾。
10.根據(jù)權(quán)利要求
8所述的方法，其特征在于交聯(lián)劑三羥甲基磷水溶液是由四羥甲基氯化磷與氫氧化鉀按摩爾比1 :0. 995混合反應(yīng)制得；具體制備方法為取四羥甲基氯化磷溶于去離子水中，相應(yīng)質(zhì)量的氫氧化鉀溶于去離子水中，在磁力攪拌器攪拌下，氫氧化鉀水溶液緩緩的加入到四羥甲基氯化磷溶液中，反應(yīng)結(jié)束，制得交聯(lián)劑三羥甲基磷水溶液。
專利摘要
本方法提供以純棉毛巾為載體的固定化脂肪酶的制備方法，即用純棉毛巾吸附聚乙烯亞胺水溶液，吸附完成后，加入脂肪酶溶液，經(jīng)恒溫?fù)u床震蕩，酶附著在含有聚乙烯亞胺的純棉毛巾上，除去上清液，再用交聯(lián)劑對吸附了酶和聚乙烯亞胺的毛巾進(jìn)行交聯(lián)的固定化技術(shù)。本發(fā)明采用的毛巾載體具有多空隙，毛巾纖維較長，因而具有較大的比表面積，有利于固定化酶催化反應(yīng)的進(jìn)行，并且具有非常好的機(jī)械強(qiáng)度，與顆粒狀載體相比，酶更容易從反應(yīng)體系中分離出來；采用的交聯(lián)劑三羥甲基磷比戊二醛具有更好的交聯(lián)效果；采用的固定化方法具有條件溫和、多層固定的優(yōu)點(diǎn)；制得的固定化酶具有良好的溫度穩(wěn)定性，反應(yīng)酶活高，可縮短反應(yīng)時間，能反復(fù)多次使用。
文檔編號C12N11/08GKCN102206622SQ201110083472
公開日2011年10月5日 申請日期2011年4月2日
發(fā)明者梁欣欣, 魏東 申請人:華南理工大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan