專利名稱:編碼具耐鹽特性多肽的dna序列、耐鹽多肽sing－22及表達(dá)載體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬基因工程領(lǐng)域，具體涉及編碼具耐鹽特性的多肽的DNA序列、其表達(dá)多肽及表達(dá)載體。
背景技術(shù)：
干旱、鹽漬、土壤沙化是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)與生態(tài)環(huán)境的重要因素。干旱、土壤沙化以及頻繁發(fā)生的揚(yáng)沙天氣，嚴(yán)重破壞了人類賴以生存的生態(tài)環(huán)境。在人口不斷增加、耕地面積減少和淡水資源不足，以及生態(tài)環(huán)境惡化的嚴(yán)重壓力下，增加糧食產(chǎn)量，改善生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)可持續(xù)發(fā)展，已成為科學(xué)家、社會(huì)和國(guó)家政府關(guān)心的問(wèn)題。隨著對(duì)植物抗旱耐鹽機(jī)制研究的深入和轉(zhuǎn)基因技術(shù)的日趨完善，克隆抗旱耐鹽基因，提高抗旱耐鹽基因的抗逆性功能，培育抗逆植物新品種，為解決上述諸多問(wèn)題提供了可能。
干旱和高濃度的鹽以及低溫脅迫將引起細(xì)胞脫水，造成高滲脅迫及離子失衡，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、發(fā)育不良，嚴(yán)重將使細(xì)胞和生物體死亡。植物在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中，已發(fā)展出多種機(jī)制來(lái)適應(yīng)或抵抗環(huán)境脅迫和失水反應(yīng)。迄今為止，科學(xué)家們已獲得了一些可表達(dá)耐鹽、耐旱蛋白質(zhì)的基因，如甜菜堿醛脫氫酶基因(陳受宜等人，中國(guó)專利公開(kāi)號(hào)CN1221034A)，大麥HVA基因(Xu De-ping等，Plant Physiol，1996，110249-257)，Na+/H+反向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因GhNHX(鄭成超，中國(guó)發(fā)明專利公開(kāi)號(hào)CN1425675A)，1-磷酸甘露糖醇脫氫酶(Tarczynski，Science，1993，259508-510)，Δ′-二氫吡咯-5-羧酸還原酶(D5CR)(Kishol，P.B.K，PlantPhysical，1995，1081387-1394)等。目前人們獲得的抗旱耐鹽基因數(shù)目不多，這使得實(shí)施抗逆遺傳育種工程受到了限制。
為了更好地提高轉(zhuǎn)基因植物的抗旱耐鹽能力，人們正努力獲得更多的耐旱耐鹽基因，特別是那些起重要作用的關(guān)鍵基因。然而，獲得關(guān)鍵的耐旱耐鹽基因并不是很容易的事情，需要大量的實(shí)驗(yàn)工作做基礎(chǔ)。因此，研究植物耐旱耐鹽基因結(jié)構(gòu)和功能，不僅可揭示植物耐旱耐鹽的機(jī)制，也可以利用這些基因序列中起耐旱耐鹽的功能區(qū)序列，為進(jìn)一步實(shí)施抗逆遺傳育種提供基因資源。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種編碼具耐鹽特性的多肽的DNA序列及其表達(dá)的具耐鹽特性的多肽。
本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供含有本發(fā)明的編碼具耐鹽特性多肽的DNA序列的表達(dá)載體。
本發(fā)明的第三個(gè)目的在于把本發(fā)明的編碼具耐鹽特性多肽的DNA序列應(yīng)用于培育耐鹽、耐旱、耐低溫植物新品種。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明提供的DNA序列具有序列表中SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列或可在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列雜交的核苷酸序列，序列表中SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列具體如下GCCACGGACA ACAACAACAA CAAAACCGGT TCCAAGGTCG GAGAGTACGC AGATTACGCT 60TCTCAGAAGG CCAAGGAAAC AAAAGATGCA ACGATGGAAA AAGCTGGAGA GTACACGGAT 120
TATGCTTCGC AGAAAGCGAA GGAAGCGAAG AAGACGACCA TGGAGAAGGG TGGAGAATAC 180AAGGATTACT CTGCGGAGAA AGCTAAGGAG AGAAAAGATG CTACTGTGAA TAAGATGGGA 240GAGTATAAGG ACTATGCTGC GGAGAAAGCC AAAGAGGGGA AAGATGCTAC TGTGAATAAA 300ATGGGAGAGT ATAAGGACTA TGCTGCGGAG AAAACGAAAG AGGGGAAAGA TGCCACTGTG 360AATAAGATGG GAGAGTATAA GGATTACACT GCGGAGAAGG CGAAAGAGGG GAAAGATACG 420ACGTTGGGG 429序列表中SEQ ID NO.1所述的DNA序列來(lái)源于大豆GmPM2基因(GenBank NoM80664)閱讀框架的部分序列，其長(zhǎng)度為429bp，本申請(qǐng)人將該DNA片段命名為SING-22。本發(fā)明人推測(cè)DNA序列SING-22編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物SING-22可形成親水的α-螺旋結(jié)構(gòu)。為了制備該DNA片段，本發(fā)明人根據(jù)該DNA序列設(shè)計(jì)特異性引物，用PCR方法擴(kuò)增出該片段。
本發(fā)明提供的具耐鹽特性的多肽SING-22由DNA序列SING-22編碼，多肽SING-22具有序列表中SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列，具體如下Ala Thr Asp Asn Asn Asn Asn Lys Thr Gly Ser Lys Val Gly Glu Tyr1 5 10 15Ala Asp Tyr Ala Ser Gln Lys Ala Lys Glu Thr Lys Asp Ala Thr Met20 25 30Glu Lys Ala Gly Glu Tyr Thr Asp Tyr Ala Ser Gln Lys Ala Lys Glu35 40 45Ala Lys Lys Thr Thr Met Glu Lys Gly Gly Glu Tyr Lys Asp Tyr Ser50 55 60Ala Glu Lys Ala Lys Glu Arg Lys Asp Ala Thr Val Asn Lys Met Gly65 70 75 80Glu Tyr Lys Asp Tyr Ala Ala Glu Lys Ala Lys Glu Gly Lys Asp Ala85 90 95Thr Val Asn Lys Met Gly Glu Tyr Lys Asp Tyr Ala Ala Glu Lys Thr100 105 110Lys Glu Gly Lys Asp Ala Thr Val Asn Lys Met Gly Glu Tyr Lys Asp115 120 125
Tyr Thr Ala Glu Lys Ala Lys Glu Gly Lys Asp Thr Thr Leu Gly130 135 140多肽SING-22具有17.0KD的分子量。
本發(fā)明提供了含有DNA序列SING-22或可在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與DNA序列SING-22雜交的核苷酸序列的重組載體。用PCR方法擴(kuò)增本發(fā)明的DNA序列時(shí)，可在DNA序列的5’端和3’端加上可連接到載體上的限制性酶切位點(diǎn)，例如，在5’端可加有EcoRI位點(diǎn)，在3’端可加有HindIII位點(diǎn)。為了構(gòu)建本發(fā)明的重組載體，本發(fā)明人把擴(kuò)增出的DNA片段回收后，酶切，連接至表達(dá)載體，即獲得含DNA序列SING-22或可在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與DNA序列SING-22雜交的核苷酸序列的重組載體，例如本發(fā)明實(shí)施例所述的重組質(zhì)粒pET28a∷SING-22。
把獲得的重組載體轉(zhuǎn)化宿主，如大腸桿菌TOP10，獲得轉(zhuǎn)化子。從轉(zhuǎn)化子中提取重組載體進(jìn)行PCR反應(yīng)和酶切分析，將重組載體再轉(zhuǎn)化宿主，例如大腸桿菌BL21 STAR，獲得轉(zhuǎn)化子，例如實(shí)施例中所述的工程菌BL21/pET28a∷SING-22。
將擴(kuò)繁后的工程菌BL21/pET28a∷SING-22進(jìn)行異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導(dǎo)，誘導(dǎo)產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳。經(jīng)考馬斯亮蘭染色后，電泳板上出現(xiàn)一條特異的蛋白質(zhì)條帶。將此蛋白條帶切下、酶解后用三氟乙酸洗脫。洗脫液經(jīng)液質(zhì)聯(lián)用-電噴霧質(zhì)譜(安捷倫公司)鑒定，證明此蛋白條帶確為多肽SING-22。
通過(guò)本發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的多肽SING-22具有親水性、熱穩(wěn)定性和耐鹽特性。
本發(fā)明提供的DNA序列SING-22或可在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與DNA序列SING-22雜交的核苷酸序列可應(yīng)用于培育耐鹽、耐旱、耐低溫植物新品種設(shè)計(jì)一對(duì)分別帶有翻譯起始位點(diǎn)ATG和終止密碼子TGA的特異性引物，從工程菌pET28a∷SING-22中擴(kuò)增出SING-22基因。將其連接至植物表達(dá)載體中。將帶有SING-22基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化植物組織或細(xì)胞。從轉(zhuǎn)化后的植株葉片中提取基因組DNA，進(jìn)行SING-22基因的PCR鑒定。將帶有SING-22基因的轉(zhuǎn)基因植株栽入含鹽培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)15-25天后可以看出，轉(zhuǎn)基因植株的生長(zhǎng)狀態(tài)明顯好于不含SING-22基因的對(duì)照植株。此結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽性優(yōu)于后者。
本發(fā)明的耐鹽DNA序列及其耐鹽基因是從大豆未成熟種子中克隆，其編碼的產(chǎn)物應(yīng)屬于儲(chǔ)藏蛋白質(zhì)部分，因此，本發(fā)明的DNA序列及相應(yīng)的基因，不涉及對(duì)環(huán)境、生態(tài)和食品的安全性問(wèn)題。
以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。



圖1是本發(fā)明實(shí)施例二中重組質(zhì)粒pET28a∷SING-22的構(gòu)建流程圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例一編碼多肽SING-22的DNA序列SING-22的制備。
1.大豆未成熟種子cDNA的制備實(shí)驗(yàn)所用大豆種子取自吉林省白城市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所。
利用Promega公司的(RNAgents)RNA提取試劑盒(Total RNAIsolation System)，按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作，提取大豆未成熟種子的mRNA。以提取的mRNA為模板，寡核苷酸(olig)dT為引物，利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(購(gòu)自Takara公司)，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄(RT)反應(yīng)，獲得大豆未成熟種子cDNA。
反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為10×RNA PCR緩沖液 2μlMgCl2(25mM) 4μldNTP混合物(各10mM) 2μlAMV反轉(zhuǎn)錄酶XL(5U/μl) 1μlRNase抑制劑(40U/μl) 0.5μl寡核苷酸dT(2.5μM) 1μl大豆未成熟種子mRNA 1μldH2O 8.5μl總共 20μl反轉(zhuǎn)錄(RT-PCR)反應(yīng)進(jìn)行的條件是將裝有上述反應(yīng)體系的離心管置于PCR儀內(nèi)，采用以下反應(yīng)條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)即30℃，10分鐘；45～60℃，20分鐘 95℃，5分鐘。即得到大豆未成熟種子cDNA。
2.DNA序列SING-22的制備根據(jù)DNA序列SING-22(429bp)設(shè)計(jì)一對(duì)特異性的引物，引物序列見(jiàn)序列表中SEQ ID NO3和SEQ ID NO4，具體如下上游引物CACCGAATTCGCCACGGACAACAACAACAAC，下游引物GTCCAAGCTTCCCCAACGTCGTATCTTT，上述引物序列的5’端含EcoRI酶切位點(diǎn)，3’端含HindIII的酶切位點(diǎn)。將上一步反轉(zhuǎn)錄制得的大豆未成熟種子cDNA作PCR反應(yīng)的模板，采用上述特異性引物序列，經(jīng)PCR反應(yīng)，擴(kuò)增出DNA序列SING-22，該P(yáng)CR反應(yīng)體系如下10×Ex Taq緩沖液(加Mg2+) 10μlTaKaRa Ex Taq酶(5U/μl) 0.5μl上游特異性PCR引物(20μM) 1μl下游特異性PCR引物(20μM) 1μl大豆未成熟種子cDNA 20μldH2O 67.5μl總體積 100μl該P(yáng)CR反應(yīng)條件如下將裝有上述反應(yīng)體系的離心管置于PCR儀內(nèi)，采用以下反應(yīng)條件進(jìn)行30個(gè)循環(huán)94℃，30秒；45～55℃，30秒；72℃，1分鐘。即得到了DNA片段SING-22。
實(shí)施例二DNA序列SING-22的表達(dá)載體的構(gòu)建把實(shí)施例一擴(kuò)增出的DNA片段SING-22經(jīng)回收后，用EcoRI和HindIII雙酶切，連接至經(jīng)相同酶切處理的質(zhì)粒pET28a(購(gòu)自Novagen公司)，獲得重組質(zhì)粒pET28a∷SING-22，構(gòu)建過(guò)程如圖1所示。將重組質(zhì)粒pET28a∷SING-22轉(zhuǎn)化大腸桿菌TOP10(購(gòu)自Novagen公司)，獲得大腸桿菌轉(zhuǎn)化子TOP/pET28a∷SING-22。從大腸桿菌轉(zhuǎn)化子TOP/pET28a∷SING-22中提取重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21STAR菌株(購(gòu)自Novagen公司)，得到大腸桿菌轉(zhuǎn)化子，將此工程菌命名為BL21/pET28a∷SING-22。
實(shí)施例三大腸桿菌轉(zhuǎn)化子BL21/pET28a∷SING-22中SING-22多肽的表達(dá)及鑒定。
1.大腸桿菌轉(zhuǎn)化子BL21/pET28a∷SING-22中SING-22多肽的表達(dá)及質(zhì)譜鑒定。
(1)大腸桿菌轉(zhuǎn)化子BL21/pET28a∷SING-22中SING-22多肽的表達(dá)及電泳分析。
挑取工程菌BL21/pET28a∷SING-22的單克隆，接種至含50ug/ml卡那的LB培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10-15h后，加入終濃度為1mM的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，4h后，離心收集菌體。菌體經(jīng)沸水煮5min后離心，取上清液進(jìn)行十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)電泳。結(jié)果顯示，與對(duì)照菌相比，工程菌BL21/pET28a∷SING-22在20～22kD處有一條較濃的特異條帶，此蛋白條帶與預(yù)期的多肽SING-22的分子量大小接近。
(2)大腸桿菌轉(zhuǎn)化子BL21/pET28a∷SING-22中多肽SING-22的質(zhì)譜分析。
從SDS-PAGE電泳板上切取該特異的蛋白條帶。將蛋白進(jìn)行胰蛋白酶消化，再利用三氟乙酸(TFA)將蛋白質(zhì)從凝膠中洗脫出來(lái)。洗脫液經(jīng)液質(zhì)聯(lián)用-電噴霧質(zhì)譜(安捷倫)鑒定，結(jié)果測(cè)得的肽段序列與推測(cè)的耐鹽多肽SING-22的序列一致，表明工程菌BL21/pET28a∷SING-22可表達(dá)多肽SING-22。
2.多肽SING-22的親水性和熱穩(wěn)定性分析。
將大腸桿菌轉(zhuǎn)化子BL21/pET28a∷SING-22裂解后離心，取上清液進(jìn)行SDS-PAGE電泳。結(jié)果顯示上清液中存在SING-22多肽，表明工程菌中SING-22多肽以水溶性的形式存在。
大腸桿菌轉(zhuǎn)化子BL21/pET28a∷SING-22熱穩(wěn)定蛋白的提取方法是菌液經(jīng)85℃熱處理10min后，以15000rpm離心10min，取上清液進(jìn)行SDS-PAGE電泳。電泳結(jié)果顯示，幾乎所有的大腸桿菌蛋白條帶均消失，而工程菌BL21/pET28a∷SING-22經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)的特異性SING-22條帶仍明顯存在，表明多肽SING-22具有良好的熱穩(wěn)定性。
實(shí)施例四可表達(dá)多肽SING-22的大腸桿菌轉(zhuǎn)化子的耐鹽功能分析。
我們將pET28a載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，獲得工程菌(菌株BL21/pET28a。為確定SING-22片段的抗逆活性，我們以上述工程菌(菌株BL21/pET28a)作為對(duì)照組，以含DNA序列SING-22的工程菌(菌株BL21/pET28a∷SING-22)作為實(shí)驗(yàn)組。采用平板計(jì)數(shù)法，通過(guò)觀察上述兩種菌株在高鹽固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況，研究含SING-22基因的菌株對(duì)高鹽的耐受能力。
具體做法是分別將異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)4h的菌液作為細(xì)菌原液，并依次做梯度稀釋，并將其涂至LB固體平板、以及含有700mM NaCl和500mM KCl的高鹽平板上，37℃倒置培養(yǎng)2～3天后，統(tǒng)計(jì)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目。
統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示與對(duì)照組(菌株BL21/pET28a)相比較，含DNA序列SING-22的實(shí)驗(yàn)菌(菌株BL21/pET28a∷SING-22)在700mMNaCl平板培養(yǎng)基上的存活率比前者高1.76倍，在500mMKCl平板培養(yǎng)基上的存活率比前者高1.66倍。由此可見(jiàn)，由SING-22基因編碼的多肽SING-22對(duì)大腸桿菌的繁殖未造成不良影響，相反，多肽SING-22的表達(dá)賦予重組子菌株(BL21/pET28a∷SING-22)以高耐鹽特性。
實(shí)施例五含SING-22基因的植物表達(dá)載體的構(gòu)建。
在DNA序列SING-22的5’端設(shè)計(jì)帶有翻譯起始位點(diǎn)ATG及BamHI酶切位點(diǎn)的引物，3’端設(shè)計(jì)帶有終止密碼子TGA及SacI酶切位點(diǎn)的引物，以pET28a∷SING-22質(zhì)粒為模板進(jìn)行擴(kuò)增。引物序列見(jiàn)序列表中SEQ ID NO5和SEQ ID NO6，具體如下上游引物CTGTGGATCCATGGCCACGGACAACAACA下游引物CATCGAGCTCACTAGTGCCCCAACGTCGT擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)BamHI和SacI雙酶切后，被連接至經(jīng)相同酶切處理的植物雙元表達(dá)載體pBI121，獲得含有SING-22基因的pBI121∷SING-22質(zhì)粒。將pBI121∷SING-22質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌LBA4404(購(gòu)自CAMBIA公司)中，獲得含SING-22基因表達(dá)載體的農(nóng)桿菌LBA4404/pBI121∷SING-22。
實(shí)施例六含SING-22基因表達(dá)載體的農(nóng)桿菌LBA4404/pBI121∷SING-22向煙草植株的轉(zhuǎn)化。
將無(wú)菌的煙草葉盤(pán)放入上述農(nóng)桿菌(LBA4404/pBI121∷SING-22)菌液中侵染。暗培養(yǎng)3天后，將侵染后的煙草葉盤(pán)轉(zhuǎn)移至含有卡那霉素和頭孢霉素的分化培養(yǎng)基中。培養(yǎng)20天，在煙草葉盤(pán)的邊緣分化出具有卡那霉素抗性的幼芽。此時(shí)即得到待鑒定的轉(zhuǎn)SING-22基因的煙草幼苗。
實(shí)施例七SING-22基因在轉(zhuǎn)基因植物中的分子生物學(xué)鑒定。
從上述幼苗葉片提取煙草葉片基因組DNA。以此為模板，分別以SING-22基因和卡那霉素基因的引物進(jìn)行PCR反應(yīng)。電泳檢測(cè)，擴(kuò)增產(chǎn)物以出現(xiàn)兩條特異DNA條帶，分別為SING-22基因和卡那霉素基因，為雙陽(yáng)性反應(yīng)。由此證明目的基因SING-22已經(jīng)整合到煙草植株的基因組中。
實(shí)施例八轉(zhuǎn)SING-22基因植物的耐鹽功能分析。
我們將pBI121載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404，獲得工程菌(菌株LBA4404/pBI121)。利用此工程菌侵染煙草葉盤(pán)，獲得的抗卡那霉素的煙草植株作為耐鹽功能鑒定的對(duì)照植株。將經(jīng)過(guò)DNA水平鑒定的、帶有SING-22基因的煙草植株作為實(shí)驗(yàn)組。將對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組煙草幼苗轉(zhuǎn)移至含有1.5％NaCl的培養(yǎng)基中。
培養(yǎng)15～25天后，比較二者在含鹽培養(yǎng)基中植株的生長(zhǎng)狀況。結(jié)果表明，這時(shí)對(duì)照組植株的葉片變黃，與其相比，轉(zhuǎn)基因煙草葉片顏色仍呈深綠色，葉片較飽滿?？梢?jiàn)，轉(zhuǎn)SING-22基因煙草對(duì)高鹽的耐受性明顯高于不含外源基因的對(duì)照組。
序列表<110>深圳大學(xué)<120>編碼具耐鹽特性多肽的DNA序列、耐鹽多肽SING-22及表達(dá)載體<160>6<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>429<212>DNA<213>大豆(Glycine Max.L)<400>1gccacggaca acaacaacaa caaaaccggt tccaaggtcg gagagtacgc agattacgct 60tctcagaagg ccaaggaaac aaaagatgca acgatggaaa aagctggaga gtacacggat 120tatgcttcgc agaaagcgaa ggaagcgaag aagacgacca tggagaaggg tggagaatac 180aaggattact ctgcggagaa agctaaggag agaaaagatg ctactgtgaa taagatggga 240gagtataagg actatgctgc ggagaaagcc aaagagggga aagatgctac tgtgaataaa 300atgggagagt ataaggacta tgctgcggag aaaacgaaag aggggaaaga tgccactgtg 360aataagatgg gagagtataa ggattacact gcggagaagg cgaaagaggg gaaagatacg 420acgt tgggg 429<210>2<211>143<212>PRT<213>大豆(Glycine Max.L)<400>2Ala Thr Asp Asn Asn Asn Asn Lys Thr Gly Ser Lys Val Gly Glu Tyr1 5 10 15Ala Asp Tyr Ala Ser Gln Lys Ala Lys Glu Thr Lys Asp Ala Thr Met20 25 30Glu Lys Ala Gly Glu Tyr Thr Asp Tyr Ala Ser Gln Lys Ala Lys Glu35 40 45Ala Lys Lys Thr Thr Met Glu Lys Gly Gly Glu Tyr Lys Asp Tyr Ser50 55 60Ala Glu Lys Ala Lys Glu Arg Lys Asp Ala Thr Val Asn Lys Met Gly65 70 75 80Glu Tyr Lys Asp Tyr Ala Ala Glu Lys Ala Lys Glu Gly Lys Asp Ala85 90 95Thr Val Asn Lys Met Gly Glu Tyr Lys Asp Tyr Ala Ala Glu Lys Thr100 105 110Lys Glu Gly Lys Asp Ala Thr Val Asn Lys Met Gly Glu Tyr Lys Asp115 120 125
Tyr Thr Ala Glu Lys Ala Lys Glu Gly Lys Asp Thr Thr Leu Gly130 135 140<210>3<211>31<212>DNA<213>大豆(Glycine Max.L)<400>3caccgaattc gccacggaca acaacaacaa c 31<210>4<211>28<212>DNA<213>大豆(Glycine Max.L)<400>4gtccaagctt ccccaacgtc gtatcttt 28<210>5<211>29<212>DNA<213>大豆(Glycine Max.L)<400>5ctgtggatcc atggccacgg acaacaaca 29<210>6<211>29<212>DNA<213>大豆(Glycine Max.L)<400>6catcgagctc actagtgccc caacgtcgt 29
權(quán)利要求
1.一種DNA序列，具有序列表中SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列或可在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。
2.如權(quán)利要求
1所述的DNA序列在培育耐鹽、耐旱、耐低溫植物新品種中的應(yīng)用。
3.一種具耐鹽特性的多肽SING-22，具有序列表中SEQ ID NO.2所述的氨基酸序列。
4.一種重組載體，含有權(quán)利要求
1所述的任何一種DNA序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求
4所述的重組載體，為重組質(zhì)粒。
專利摘要
本發(fā)明涉及編碼具耐鹽特性多肽的DNA序列、耐鹽多肽SING－22及表達(dá)載體，本發(fā)明提供的DNA序列具有序列表中SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列或可在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列雜交的核苷酸序列，本發(fā)明提供的耐鹽多肽SING－22具有序列表中SEQID NO.2所述的氨基酸序列，分子量為17.0KD，本發(fā)明提供的重組載體含有SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列或可在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。本發(fā)明提供的多肽SING－22具有親水性、熱穩(wěn)定性和耐鹽特性，本發(fā)明提供的DNA序列可應(yīng)用于培育抗逆植物新品種。
文檔編號(hào)C12N15/29GKCN1603410SQ200410051755
公開(kāi)日2005年4月6日 申請(qǐng)日期2004年9月30日
發(fā)明者鄭易之 申請(qǐng)人:深圳大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan