專(zhuān)利名稱(chēng):利用粉紅柱狀的乳節(jié)藻生產(chǎn)藻紅素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是有關(guān)于用粉紅柱狀的乳節(jié)藻(Galaxauraoblongata)生產(chǎn)具有高吸光度(OD)比值藻紅素的方法。利用粉紅柱狀的乳節(jié)藻生活史中具有的有性生殖、無(wú)性生殖與營(yíng)養(yǎng)繁殖三個(gè)世代交替及果孢子絲狀體階段不含各種膠類(lèi)的特征下，在控制的光線、溫度及營(yíng)養(yǎng)條件下，延續(xù)其絲狀體階段，并進(jìn)一步以其為原料，萃取具有高吸光度比值的藻紅素。
背景技術(shù)：
不論就藻紅素、藻藍(lán)素或其它天然蛋白質(zhì)色素而言，通常具有實(shí)用安全性，對(duì)熱、酸堿度等亦具有相當(dāng)程度的穩(wěn)定性，可應(yīng)用于食品與化妝品上，同時(shí)亦可作為免疫學(xué)上抗體標(biāo)志用的熒光色素，而應(yīng)用于臨床診斷及細(xì)胞生化學(xué)研究上。
目前市場(chǎng)已開(kāi)發(fā)并應(yīng)用的有藻藍(lán)素(phycocyanin)與藻紅素(phycoerythrin)，其中，藻藍(lán)素生產(chǎn)的原料來(lái)源多為可予大量繁殖培養(yǎng)的藍(lán)綠藻，如螺旋藻(Spirulina)與銅銹微囊藻(Microcystis)，且其培養(yǎng)與生產(chǎn)方法多享有專(zhuān)利。
而藻紅素則因?yàn)樵系娜狈Γ蛞驗(yàn)樵喜焕谏厣a(chǎn)，而存在產(chǎn)量少及價(jià)格昂貴的缺陷，對(duì)全球每年數(shù)萬(wàn)磅食用紅色色素的需求，必須開(kāi)發(fā)一種天然、安全、穩(wěn)定又具有特殊熒光釋出的紅色色素，預(yù)估大量生產(chǎn)后，將使價(jià)格下降，更會(huì)擴(kuò)大其應(yīng)用范圍與市場(chǎng)供給。
目前藻紅色素蛋白大部分是分離自紅藻的大型葉狀體，如紫菜(Porphyra)或仙菜藻(Ceramium)等，少部分則萃取自可大量控制培養(yǎng)的紫球藻(Porphyridium)。其主要問(wèn)題在于1、目前雖有野生大量紅藻資源及栽培的紫菜作為藻紅素原料，但因?yàn)槎鄶?shù)紅藻含豐富膠質(zhì)物(洋菜膠、鹿角菜膠、紅藻膠)，導(dǎo)致色素的萃出不易，尤其是干燥后的藻類(lèi)原料更是如此，再加上野生藻種的原料在品和產(chǎn)量上均有季節(jié)性差異，為人力所不易掌握。
2、目前紫球藻的培養(yǎng)于收集細(xì)胞時(shí)，亦有顯著的困難，因?yàn)閱渭?xì)胞藻體的收集一向是耗能而耗時(shí)的操作，造成生產(chǎn)成本甚大，而藻細(xì)胞于培養(yǎng)時(shí)所分泌的可溶性多醣類(lèi)，除了阻礙細(xì)胞的收集外，亦影響到色素的抽取。
為了解決上述的問(wèn)題，美國(guó)專(zhuān)利5,358,858提出了一種由頭發(fā)菜(Bangiaatropurpurea)及狹葉紫菜(Porphyraangusta)絲狀體生產(chǎn)藻紅素的方法，利用頭發(fā)菜及狹葉紫菜生活史中的絲狀孢子體階段不含各種膠類(lèi)的特征下，通過(guò)控制的光線、溫度及營(yíng)養(yǎng)條件下，延續(xù)其絲狀體階段，并進(jìn)一步以其為原料，萃取藻紅素，其步驟如下1、絲狀體的培養(yǎng)與繁殖，從野外采集成熟的頭發(fā)菜或狹葉紫菜配子體，以滅菌海水及毛筆清洗藻體干凈，稍陰干后，投入含改良過(guò)的SWM-III(如表一所示)培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿內(nèi)底部鋪有蓋玻片，待孢子釋放并附著于蓋玻片后，在室溫下、1000-4000lux的照度及每日10-16小時(shí)照光的培養(yǎng)箱中發(fā)芽成長(zhǎng)，最后發(fā)育呈分歧多枝的絲狀孢子體。
表一 SWM-III的組成NaNO38.5g/100ml 取2mlNa2HPO40.595g/100ml 取2mlNa2EDTA 0.5g/100ml 取2ml0.01625g/100ml 取2mlFeCl3(或FeCl3·7H2O) 0.02885g/100ml 取2ml*1PI-metal 取2ml*2S-3Vitamins 取2mlSoil extract 取50mlTris(10cc/l) 取500mg
Livere xtract 取10mg海水 pH＝7、5 1升(調(diào)pH時(shí)先以濃HCl調(diào)至pH≤7，再以適當(dāng)濃度的NaOH調(diào)至pH7、5，如此可免于消毒時(shí)產(chǎn)生白色沉淀)其中 *1PI-metal為H3BO312.368gMnCl21.385gZnCl20.109g蒸餾水 2升CoCl2·6H2O 4.479mgCuCl2·2H2O 0.034mg其中*2S-3Vitamins為T(mén)hiaminHCl 0.5gCapantothenate 0.1gNicotinicacid 0.1gP-aminobenzoicacid 10mgBiotin 1mg蒸餾水 2升Inositol 5gFolic acid 2mgThymine 3mgB121mg(所有的Stock溶液均存于褐色瓶中，冷藏保存)2、絲狀體刮下后，移至含培養(yǎng)液的三角瓶，在上述生長(zhǎng)環(huán)境條件下培養(yǎng)，育成絲狀體的聚集團(tuán)。打碎絲狀體的聚集團(tuán)，移至更大生長(zhǎng)的量瓶繼續(xù)發(fā)育成更多的聚集團(tuán)，并因此漸次擴(kuò)大培養(yǎng)的體積，在較大體積的照光培養(yǎng)槽中，應(yīng)予打氣(每分鐘300毫升干凈空氣)大量繁殖培養(yǎng)。通過(guò)100-400網(wǎng)目的網(wǎng)布過(guò)濾，濾除的培養(yǎng)液可回收再使用，對(duì)后續(xù)的培養(yǎng)并無(wú)妨礙。
3、藻體收獲后，因?yàn)榻z狀體結(jié)構(gòu)可經(jīng)真空或溫風(fēng)迅速干燥，再研磨成粉后，以水或磷酸鹽溶液予以充分?jǐn)嚢栎腿?、離心，可得澄清的深紅藻蛋白溶液；藻色素的濃縮與純化，可通過(guò)20％硫酸銨溶液去除部分雜質(zhì)蛋白沉淀，再于溶液中經(jīng)60-65％硫酸銨溶液沉淀出色素蛋白，為OD565/OD280＝1.4-1.6的粗紅色色素。為食品、化妝品可用的色素。
4、將沉淀的蛋白進(jìn)一步通過(guò)膠濾層析純化(gelfiltration)，使用Sephadex G200樹(shù)酯分離，第一道程序可得OD比為3.3-3.7的藻紅素產(chǎn)品，再次重復(fù)即可得OD比為5.1-5.2的藻紅素，再經(jīng)膠體電泳法(SDS)電泳，所得的結(jié)果顯示純度約99％，可作為免疫檢驗(yàn)用試劑。
上述的方法雖然可以避免傳統(tǒng)紫菜、仙菜藻萃取色素法需以加熱及分離膠值的復(fù)雜手續(xù)，或是紫球藻等單細(xì)胞植物萃取法，由于其體積小，導(dǎo)致收集的困難與其分泌的多醣類(lèi)影響色素的抽取的問(wèn)題，其主要缺陷在于但是頭發(fā)菜及狹葉紫菜絲狀體直接形成的深紅藻蛋白溶液，其OD565/OD280只有1.4-1.6，仍需進(jìn)行藻色素的濃縮與純化，來(lái)獲取高OD值的藻紅素，造成制程復(fù)雜及成本較高。因此我們需要開(kāi)發(fā)其它藻種的絲狀體，使其初次形成的深紅藻蛋白溶液就具有高OD值的藻紅素。
鑒于上述的背景技術(shù)中，傳統(tǒng)利用頭發(fā)菜及狹葉紫菜絲狀體直接形成的深紅藻蛋白溶液，其吸光度比值偏低的問(wèn)題。本發(fā)明人創(chuàng)造出利用粉紅柱狀的乳節(jié)藻生產(chǎn)具有高吸光度比值藻紅素的方法，避免上述情形產(chǎn)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是提供一種利用粉紅柱狀的乳節(jié)藻生產(chǎn)藻紅素的方法，通過(guò)其單位重量含有藻紅素的高重量比值，達(dá)到降低生產(chǎn)成本的目的。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種利用粉紅柱狀的乳節(jié)藻生產(chǎn)藻紅素的方法，通過(guò)其可萃取具有高吸光度比值的藻紅素，達(dá)到減少藻紅素純化步驟的目的。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種利用粉紅柱狀的乳節(jié)藻生產(chǎn)藻紅素的方法，其生活史具有的有性生殖、無(wú)性生殖與營(yíng)養(yǎng)繁殖三個(gè)世代交替，利用其孢子絲狀體生產(chǎn)高吸光度比值的藻紅素；該孢子絲狀體為果孢子(carpospore)絲狀體。
該藻種為粉紅柱狀的乳節(jié)藻(Galaxauraoblongata)，從其果孢子絲狀體中萃取的藻紅素，經(jīng)高效能液相層析儀所得出的565nm的層析光譜圖。
該粉紅柱狀的乳節(jié)藻果孢子絲狀體生產(chǎn)高吸光度比值的藻紅素，包含下列步驟以培養(yǎng)液培養(yǎng)粉紅柱狀的乳節(jié)藻含成熟果孢子囊的配子體并得到果孢子；將該果孢子置于15-30℃下，500-6000lux的照度與明暗比為10∶14以上的環(huán)境下培養(yǎng)，使其長(zhǎng)成為絲狀體；收集該絲狀體；加入酸堿緩沖液，加以攪拌、離心，以得到深色色素蛋白溶液；及以鹽析法去除該深色的色素蛋白溶液中雜質(zhì)，并沉淀出藻紅素蛋白。
該培養(yǎng)液為SWM-III培養(yǎng)液。該SWM-III培養(yǎng)液為去有機(jī)物的SWM-III培養(yǎng)液。培養(yǎng)該果孢子絲狀體的方法為懸浮培養(yǎng)法。其較佳的培養(yǎng)環(huán)境為20℃，20001ux的照度與明暗比為12∶12。
收集該絲狀體的步驟更包含以網(wǎng)布收集法收集該絲狀體；干燥該絲狀體及研磨該絲狀體，使其成為粉末。網(wǎng)布收集法是使用20-400網(wǎng)目網(wǎng)布。干燥該絲狀體的方法為真空法。干燥該絲狀體的條件為溫風(fēng)。離心的條件為轉(zhuǎn)速6000rpm、時(shí)間10min及溫度4℃。該酸堿緩沖液為磷酸鉀溶液，以維持溶液pH值在5-10之間。鹽析法去除雜質(zhì)為加入20％硫酸銨溶液。鹽析法沉淀色素蛋白為加入60-65％硫酸銨溶液。更包含以超過(guò)濾法(ultrafiltration)純化分離出藻紅素。更包含以膠濾層析法純化分離出藻紅素。膠濾層析法為使用SephadexG200的膠濾層析法。
下面結(jié)合較佳實(shí)施例和附圖詳細(xì)說(shuō)明。



圖1是利用高效能液相層析儀(HPLC)得出的藻紅素UV吸收及熒光發(fā)散層析光譜圖；圖2是頭發(fā)菜生活史的示意圖；圖3是狹葉紫菜生活史的示意圖；圖4是海面生活史的示意圖；圖5-圖7是傳統(tǒng)的頭發(fā)菜萃取出的純質(zhì)藻紅素經(jīng)高效能液相層析儀所得出的280nm、565nm、615nm的層析光譜圖。
圖8-圖10是傳統(tǒng)的狹葉紫菜萃取出的純質(zhì)藻紅素經(jīng)高效能液相層析儀所得出的280nm、565nm、615nm的層析光譜圖。
圖11-圖13是本發(fā)明的粉紅柱狀的乳節(jié)藻萃取出的純質(zhì)藻紅素經(jīng)高效能液相層析儀所得出的280nm、565nm、615nm的層析光譜圖。
具體實(shí)施方式
下面的較佳實(shí)施例僅為說(shuō)明本發(fā)明，還可以廣泛地在其它藻種的實(shí)施例施行，且本發(fā)明的范圍不受下面較佳實(shí)施例的限定。
眾所周知，藻膽蛋白是來(lái)自藻類(lèi)體內(nèi)的一種水溶性熒光蛋白色素。因其具有特殊的熒光性質(zhì)，目前主要被廣泛的運(yùn)用于流動(dòng)細(xì)胞儀的熒光試劑上。各種藻膽蛋白中，藻紅素是其中的一種，亦是天然物中熒光強(qiáng)度最高的一種，因此有許多熒光檢測(cè)方法采用此類(lèi)色素。
圖1為藻紅素利用高效能液相層析儀(HPLC)得出的UV吸收及熒光發(fā)散層析光譜圖，其層析條件如下所述HPLC columnHYDROCELL DEAE NP10Column size50*4.6mmBuffer A10mMK-PBS pH6.0Buffer B10mMk-PBS，0.5M NaCl pH6.0
Gradient0％Buffer B→12min→50％Buffer BDetection565nmFlow rate1ml/min而高效能液相層析儀主要由高精密度高壓泵體、分離管、偵測(cè)儀和記錄器所組成。
參閱圖2所示，觀察頭發(fā)菜生活史，有性生殖為產(chǎn)生造果器6(即雌性配偶體5)與精子囊2(即雄性配偶體1)釋放的精子3受精4之后，在果孢子囊7會(huì)發(fā)育成果孢子8，里面的果孢子8成熟后，即會(huì)散出，變成絲狀孢子體9，在側(cè)腰狀色素體b作用下，成長(zhǎng)為胞子體10和殼胞子囊11，其放出的殼胞子12在單胞子形成部位15進(jìn)一步成長(zhǎng)為幼體13、單列藻體14，在星狀色素體a作用下，形成單胞子16，單胞子16進(jìn)一步形成直立體(配偶體)18、多列藻體17成長(zhǎng)為雄性配偶體1。
無(wú)性生殖則是由單孢子16直接發(fā)育萌發(fā)成幼體13、單列藻體14及小型藻體，等到一定時(shí)候又可產(chǎn)生單孢子16，單孢子16又萌發(fā)成單列藻體14及小型藻體，如此循環(huán)一直到適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件下，單列藻體14及小型藻體所產(chǎn)生的單孢子16就可萌發(fā)成大型藻體17。同時(shí)，單列藻體14及小型藻體也能轉(zhuǎn)變成大型藻體17，再進(jìn)入有性生殖世代。
參閱圖3所示，觀察狹葉紫菜生活史中，由于其與圖2的頭發(fā)菜生活史大體相同，故不詳述。我們可以得知上述兩種藻類(lèi)的生活史一般是有性生殖及無(wú)性生殖兩個(gè)世代交替，傳統(tǒng)技術(shù)就是利用絲狀孢子體階段不含各種膠類(lèi)的特征，在控制的光線、溫度及營(yíng)養(yǎng)條件下，延續(xù)其絲狀體階段，并進(jìn)一步以其為原料，萃取藻紅素。
參閱圖4所示，觀察海面(Nemalion)生活史，由于其與圖2的頭發(fā)菜生活史大體相同，故不詳述。藻類(lèi)的生活史除了是以有性生殖及無(wú)性生殖兩個(gè)世代交替外，另外部分藻類(lèi)還多出一個(gè)營(yíng)養(yǎng)繁殖世代，即產(chǎn)生四分孢子的孢子體(即四分孢子體)，其過(guò)程為造果器受精后形成果孢子體(carposporephyte)、果孢子(carpospore)、四分孢子體(tetrasporophyte)、四分孢子囊(tetrasporangium)、最后是四分孢子(tetraspore)，其中果孢子與四分孢子都會(huì)萌發(fā)成絲狀體，但此兩種絲狀體的特性不同。
本發(fā)明就是利用具有營(yíng)養(yǎng)繁殖世代的粉紅柱狀的乳節(jié)藻，其果孢子絲狀體階段不含各種膠類(lèi)的特征，在控制的光線、溫度及營(yíng)養(yǎng)條件下，延續(xù)其絲狀體階段，并進(jìn)一步以其為原料，萃取出具有高OD值的藻紅素，其步驟如下1、絲狀體的培養(yǎng)與繁殖，將成熟的錫蘭海膜含成熟果孢子囊的配子體，以滅菌海水及毛筆清洗藻體干凈，稍陰干后，投入不含有機(jī)物的SWM-III培養(yǎng)液的培養(yǎng)器中，培養(yǎng)器內(nèi)底部鋪有玻璃片，待果孢子(carpospore)釋放并附著于玻璃片后，在溫度15-30℃下，500-6000lux的照度，明暗比為10∶14以上及每日10小時(shí)以上照光的培養(yǎng)器中發(fā)芽成長(zhǎng)，最后發(fā)育呈分歧多枝的絲狀體。
2、絲狀體刮下后，移至含有培養(yǎng)液的大型培養(yǎng)槽，在上述生長(zhǎng)環(huán)境條件下培養(yǎng)，可育成絲狀體的疏松小聚集團(tuán)，并因此漸次擴(kuò)大培養(yǎng)的體積，在較大體積的照光培養(yǎng)槽中，應(yīng)予打氣使該小聚集團(tuán)懸浮于培養(yǎng)液中(稱(chēng)為懸浮培養(yǎng))大量繁殖培養(yǎng)。通過(guò)20-400網(wǎng)目的網(wǎng)布過(guò)濾，濾除的培養(yǎng)液可回收再使用，對(duì)后續(xù)的培養(yǎng)并無(wú)妨礙。
3、藻體收獲后，因?yàn)榻z狀體結(jié)構(gòu)可經(jīng)真空或溫風(fēng)迅速干燥，再經(jīng)過(guò)自動(dòng)磨粉機(jī)研磨成粉后，取2.4克重的粉末，加入70毫升、10mM的磷酸鉀溶液或其它酸堿緩沖液予以充分?jǐn)嚢?，以維持溶液pH值在5-10之間予以充分?jǐn)嚢琛⒃僖?000rpm、10min及4℃的狀態(tài)下離心，可得澄清的深紅藻蛋白溶液。藻色素的濃縮與純化，可通過(guò)20％硫酸銨溶液去除部分雜質(zhì)蛋白沉淀，再于溶液中經(jīng)60-65％硫酸銨溶液沉淀出色素蛋白，其為OD565/OD280＝2.66的粗紅色色素，為食品、化妝品可用的色素。
上述澄清的深紅藻蛋白溶液也可以用直接收獲的濕藻體磨碎加磷酸鉀溶液后再離心取得，而藻色素的濃縮與純化可通過(guò)超過(guò)濾法(ultrafiltration)來(lái)進(jìn)行。
4、將沉淀的蛋白進(jìn)一步通過(guò)膠濾層析純化(gelfiltration)，使用120公分長(zhǎng)的Sephadex G200樹(shù)酯分離，第一道程序可得OD比為4.5以上的藻紅素產(chǎn)品，再次重復(fù)即可得OD比為5.3以上藻紅素，再經(jīng)膠體電泳法(SDS)電泳所得的結(jié)果顯示純度約99％，可作為免疫檢驗(yàn)用試劑。
參閱圖5-圖7所示，為傳統(tǒng)從頭發(fā)菜萃取出的純質(zhì)藻紅素經(jīng)高效能液相層析儀(HPLC)所得出的280nm、565nm、615nm的層析光譜圖，參閱圖8-圖10所示，為傳統(tǒng)從狹葉紫菜萃取出的純質(zhì)藻紅素經(jīng)高效能液相層析儀所得出的280nm、565nm、615nm的層析光譜圖。實(shí)際上，從不同的藻種中所萃取出的藻紅素，其經(jīng)高效能液相層析儀所得出層析光譜圖亦有所差異，就像人類(lèi)的手指指紋一般。因此，我們可以通過(guò)此一特性來(lái)分辨出藻紅素是由何種藻種所生產(chǎn)。
參閱圖11-圖13所示，是本發(fā)明從粉紅柱狀的乳節(jié)藻取出的純質(zhì)藻紅素經(jīng)高效能液相層析儀所得出的280nm、565nm、615nm的層析光譜圖。
表二為傳統(tǒng)的頭發(fā)菜、狹葉紫菜與本發(fā)明的粉紅柱狀的乳節(jié)藻萃取藻紅素的比較表。
第一列為單位藻類(lèi)重量(克)含有藻紅素重量(毫克)的比值，代表在相同的藻類(lèi)重量下可以產(chǎn)出的藻紅素，我們可以清楚得知本發(fā)明的粉紅柱狀的乳節(jié)藻，其含藻紅素的比值為最高。
第二、三列為從藻種中萃取出藻紅素的吸光度比值(OD565/OD280)及(OD615/OD565)，前者表示藻紅素和其它蛋白質(zhì)純度的比例，后者表示藻藍(lán)素和藻紅素的純度比，(OD565/OD280)比值越高表示藻紅素純度越高，其附加價(jià)值越高，越具有食品或化妝品色素利用價(jià)值，也越有利后續(xù)制程純化，可應(yīng)用于醫(yī)療的免疫檢驗(yàn)用試劑上；而因?yàn)樵逅{(lán)素會(huì)吸收藻紅素所發(fā)出的熒光，造成作為在食品或化妝品色素用途時(shí)熒光顏色不佳，因此(OD615/OD565)越低表示藻藍(lán)素含量越少，在熒光顏色效果上更佳。同樣地，我們可以明顯看出本發(fā)明的粉紅柱狀的乳節(jié)藻，其萃取出藻紅素具有最高的吸光度比值。因此，利用本發(fā)明的粉紅柱狀的乳節(jié)藻絲狀體來(lái)萃取藻紅素，其較傳統(tǒng)頭發(fā)菜和狹葉紫菜的絲狀體，具有高藻紅素含量和高吸光度比值的優(yōu)點(diǎn)。
表二各藻種的藻粉色素成份分析


其中RPE一種藻紅蛋白，具有親水性并在水與形成穩(wěn)定性水溶液，其最大UV吸收波長(zhǎng)及熒光發(fā)散波長(zhǎng)各為566nm及575nm。
Ba傳統(tǒng)頭發(fā)菜(Bangia atropurpurea)Pa傳統(tǒng)狹葉紫菜(Porphyra angusta)Go本發(fā)明的粉紅柱狀的乳節(jié)藻(Galaxaura oblongata)本發(fā)明是通過(guò)舉出一個(gè)較佳實(shí)施例來(lái)描述，但是本發(fā)明并不限定于所舉出的實(shí)施例，顯而易見(jiàn)，其它未脫離本發(fā)明所揭示的精神下，所完成的等效改變或修飾，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
綜上所述，本發(fā)明的實(shí)施例能達(dá)到所預(yù)期的功效，又其所揭露的具體構(gòu)造，不僅未曾見(jiàn)諸于同類(lèi)產(chǎn)品中，亦未曾公開(kāi)于申請(qǐng)前，具有新穎性、創(chuàng)造性和實(shí)用性。
權(quán)利要求
1.一種利用粉紅柱狀的乳節(jié)藻生產(chǎn)藻紅素的方法，其特征是該粉紅柱狀的乳節(jié)藻的生活史具有有性生殖、無(wú)性生殖與營(yíng)養(yǎng)繁殖三個(gè)世代交替，利用其孢子絲狀體生產(chǎn)高吸光度比值的藻紅素；該孢子絲狀體為果孢子絲狀體。
2.一種利用粉紅柱狀的乳節(jié)藻生產(chǎn)藻紅素的方法，其特征是它包含下列步驟(1)以培養(yǎng)液培養(yǎng)粉紅柱狀的乳節(jié)藻含成熟果孢子囊的配子體，并得到果孢子；(2)將該果孢子置于溫度15-30℃下，光照為500-6000lux的照度及明暗比為10∶14以上的環(huán)境下培養(yǎng)，使其長(zhǎng)成為絲狀體；(3)收集該絲狀體；(4)加入酸堿緩沖液，加以攪拌和離心，以得到深色的色素蛋白溶液；(5)以鹽析法去除該深色的色素蛋白溶液中雜質(zhì)，并沉淀出藻紅素蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的方法，其特征是該培養(yǎng)液為SWM-III培養(yǎng)液。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的方法，其特征是該SWM-III培養(yǎng)液為去除有機(jī)物的SWM-III培養(yǎng)液。
5.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的方法，其特征是該步驟(2)培養(yǎng)該果孢子絲狀體的方法為懸浮培養(yǎng)法。
6.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的方法，其特征是該步驟(1)的培養(yǎng)環(huán)境為20℃、2000lux的照度及明暗比為12∶12。
7.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的方法，其特征是該步驟(3)的收集該絲狀體還依次包含如下的步驟以網(wǎng)布收集法收集該絲狀體、干燥該絲狀體及研磨該絲狀體，使其成為粉末。
8.根據(jù)權(quán)利要求
7所述的方法，其特征是該網(wǎng)布收集法是使用20-400網(wǎng)目的網(wǎng)布。
9.根據(jù)權(quán)利要求
7所述的方法，其特征是干燥該絲狀體的方法為真空法。
10.根據(jù)權(quán)利要求
7所述的方法，其特征是干燥該絲狀體的條件為溫風(fēng)。
11.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的方法，其特征是該步驟(4)的離心條件為轉(zhuǎn)速6000rpm、時(shí)間10min及溫度4℃。
12.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的方法，其特征是該步驟(4)的酸堿緩沖液為磷酸鉀溶液，以維持溶液pH值在5-10之間。
13.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的方法，其特征是該步驟(5)的鹽析法去除雜質(zhì)為加入20％硫酸銨溶液。
14.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的方法，其特征是該步驟(5)的鹽析法沉淀色素蛋白為加入60-65％硫酸銨溶液。
15.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的方法，其特征是還包含以超過(guò)濾法純化分離出藻紅素。
16.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的方法，其特征是還包含以膠濾層析法純化分離出藻紅素。
17.根據(jù)權(quán)利要求
16所述的方法，其特征是該膠濾層析法為使用SephadexG200的膠濾層析法。
專(zhuān)利摘要
利用粉紅柱狀的乳節(jié)藻生產(chǎn)藻紅素的方法。利用粉紅柱狀的乳節(jié)藻生活史中具有的有性生殖、無(wú)性生殖與營(yíng)養(yǎng)繁殖三個(gè)世代交替及果孢子絲狀體階段不含各種膠類(lèi)的特征下，在控制的光線、溫度及營(yíng)養(yǎng)條件下，延續(xù)其絲狀體階段，并進(jìn)一步以其為原料，萃取具有高吸光度比值的藻紅素。
文檔編號(hào)C07K14/405GKCN1239514SQ03102041
公開(kāi)日2006年2月1日 申請(qǐng)日期2003年1月27日
發(fā)明者江永棉, 周宏農(nóng), 鄭俊明, 呂志翼 申請(qǐng)人:人宇生物科技股份有限公司, 呂志翼導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan