本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種用于半番鴨性別鑒定的pcr引物、試劑盒及其方法。

背景技術(shù)：

1、雜種優(yōu)勢是生物界中普遍存在的一種遺傳現(xiàn)象，指遺傳背景具有差異的親本雜交產(chǎn)生的后代在生長勢、生物量、產(chǎn)量以及對環(huán)境的適應(yīng)性等方面優(yōu)于親本，一般親本之間親緣關(guān)系越遠，雜交優(yōu)勢越明顯。在畜禽上，騾子、犏牛和半番鴨等都是遠緣雜交的經(jīng)典案例，為我國畜牧業(yè)的發(fā)展做出了重要貢獻。

2、半番鴨是用棲鴨屬(cairina)的番鴨(cairina?moschata)與河鴨屬(anaslinnaeus)的家鴨(anas?platyrhynchos?domestica)雜交所產(chǎn)生的后代，俗稱騾鴨。半番鴨克服了純番鴨公母體型懸殊大、生長周期長的缺陷，表現(xiàn)出較強的雜交優(yōu)勢，具有肉味鮮美、生活力強、生長快、體型大、飼料報酬高，在我國華南以及東南亞很受歡迎，每年出欄量1億只以上。半番鴨也是重要的肥肝禽類，我國育成的“中畜長白半番鴨”新品種，年出欄量超過2000萬只，在國內(nèi)肥肝市場的占比40％左右。

3、半番鴨是屬間遠緣雜交后代，無繁殖能力，生產(chǎn)要飼養(yǎng)父母本，并采用人工授精手段，不僅繁瑣，而且受精率低，耗費極大的人力和物力。因此，研究半番鴨不育的機制具有重要的價值。由于性腺器官發(fā)育不完全，因此半番鴨公母之間的第二性征很不明顯，僅靠外表無法分辨公母，給半番鴨不育機制的研究帶來了一定的難度。因此，亟需開發(fā)一種簡單方便，能夠快速、準(zhǔn)確鑒別半番鴨性別的方法，早日突破半番鴨不育的技術(shù)瓶頸。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明目的在于解決的技術(shù)問題在于針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種設(shè)計合理，可用于半番鴨早期性別快速鑒定的pcr引物。

2、本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)本發(fā)明的目的：

3、本發(fā)明目的之一在于提供一種性別鑒定用pcr引物，所述引物序列如下所示。即所述引物的核苷酸序列為：

4、正向引物：5'-tccaaatgccgaagaaatgc-3'；

5、反向引物：5'-gttacattttgtccacctgc-3'。

6、本發(fā)明目的之二在于提供包含本發(fā)明所述的性別鑒定用pcr引物的試劑盒。

7、在本發(fā)明的一種實施例中，本發(fā)明所述的試劑盒包含本發(fā)明所述的pcr引物、pcr反應(yīng)液，在一些實施例中，還可以包含dna提取液。

8、本發(fā)明目的之三在于提供本發(fā)明所述的pcr引物或本發(fā)明所述的試劑盒在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用。

9、本發(fā)明目的之四在于提供本發(fā)明所述的pcr引物或本發(fā)明所述的試劑盒在半番鴨性別鑒定中的應(yīng)用。

10、本發(fā)明所述的在半番鴨性別鑒定中的應(yīng)用，通過本發(fā)明所述的引物對待測半番鴨的基因組dna進行pcr擴增，毛細管電泳結(jié)果呈現(xiàn)966和998bp兩個峰的為公半番鴨，呈現(xiàn)966bp一個峰時為母半番鴨。

11、本發(fā)明所述的方法，步驟1)提取待測半番鴨的基因組dna可以按照本領(lǐng)域常規(guī)方法提取，例如可以選用包括但不限于羽毛、血液、組織、器官等進行待測半番鴨的基因組dna的提取。

12、本發(fā)明所述的方法，步驟2)中pcr反應(yīng)體系可以為本領(lǐng)域的常規(guī)體系，在本發(fā)明的一種具體的實施方式中，2×pcr?mix(南京諾唯贊生物有限公司)25μl，10μmol/l正向和反向引物各1μl，50-100μg/ml模板dna?2μl，超純水21μl。

13、本發(fā)明所述的方法，步驟2)中pcr反應(yīng)程序可以為本領(lǐng)域的常規(guī)體系，在本發(fā)明的一種具體的實施方式中，為：95℃5min，(95℃30s，60℃30s，72℃30s)35個循環(huán)，72℃3min。

14、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點：本發(fā)明通過設(shè)計的pcr引物，進行pcr擴增和毛細管電泳，利用毛細管電泳結(jié)果的峰數(shù)來確定半番鴨的性別，具有操作簡單方便，鑒別結(jié)果快速準(zhǔn)確，便于基層推廣和使用，具有廣闊的市場應(yīng)用前景，此外，基于本發(fā)明方法開發(fā)的檢測試劑盒，可產(chǎn)生可觀的經(jīng)濟效益和良好的社會價值。

15、本發(fā)明的引物對半番鴨品種限制性小，因此對于所述的本發(fā)明所述的半番鴨沒有具體品種的限制。

技術(shù)特征：

1.一種半番鴨性別鑒定用pcr引物，其特征在于，所述引物如下：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的pcr引物，其特征在于，所述引物5，端加有fam熒光標(biāo)記。

3.包含權(quán)利要求1或2所述的性別鑒定用pcr引物的試劑盒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包含pcr反應(yīng)液和/或dna提取液。

5.權(quán)利要求1或2所述的pcr引物或權(quán)利要求3或4所述的試劑盒在半番鴨性別鑒定中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，通過權(quán)利要求1或2所述的pcr引物或權(quán)利要求3或4所述的試劑盒對待測半番鴨的基因組dna進行pcr擴增，電泳結(jié)果呈現(xiàn)966和998bp兩個峰的為公半番鴨，呈現(xiàn)966bp一個峰時為母半番鴨。

7.一種半番鴨的性別快速鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的鑒定方法，其特征在于，步驟1)提取待測半番鴨的基因組dna選用羽毛、血液、組織或器官進行基因組dna的提取。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的鑒定方法，其特征在于，步驟2)中pcr反應(yīng)體系為：2×pcrmix25μl，10μmol/l正向和反向引物各1μl，50-100μg/ml模板dna?2μl，超純水21μl。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的鑒定方法，其特征在于，步驟2)中pcr反應(yīng)程序為：95℃5min，即95℃30s，60℃30s，72℃30s，35個循環(huán)，72℃10min。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種用于半番鴨性別鑒定的PCR引物、試劑盒及其方法，通過本發(fā)明的PCR引物進行PCR擴增和毛細管電泳，利用毛細管電泳結(jié)果的峰數(shù)來確定半番鴨的性別，具有操作簡單方便，鑒別結(jié)果快速準(zhǔn)確，便于基層推廣和使用，具有廣闊的市場應(yīng)用前景，此外，基于本發(fā)明方法開發(fā)的檢測試劑盒，可產(chǎn)生可觀的經(jīng)濟效益和良好的社會價值。

技術(shù)研發(fā)人員：高玉時,賈曉旭,周倩,唐夢君,馬尹鵬,張靜,陳皖強,陸俊賢,唐修君,樊艷鳳,黃勝海,馬麗娜,劉茵茵,陳大偉,張小燕,葛慶聯(lián),張文濤
受保護的技術(shù)使用者：江蘇省家禽科學(xué)研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19