本申請(qǐng)涉及抗體，更具體地說，它涉及一種cpz免疫組織化學(xué)抗體及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、免疫組織化學(xué)是利用抗原與抗體間的特異性結(jié)合原理和特殊的標(biāo)記技術(shù)，對(duì)組織和細(xì)胞內(nèi)的特定抗原或抗體進(jìn)行定位、定性或定量檢測(cè)的技術(shù)。免疫組織化學(xué)技術(shù)具有特異性強(qiáng)、敏感性高、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合等特點(diǎn)，有利于病理學(xué)領(lǐng)域的深入研究，在現(xiàn)代病理診斷中起重要作用。

2、病理科日常工作使用的免疫組織化學(xué)抗體品種達(dá)數(shù)百種，對(duì)人類疾病的診斷和治療發(fā)揮著重要的作用。隨著人類對(duì)疾病認(rèn)識(shí)的不斷提高，病理科應(yīng)用的抗體種類也逐漸增加。在近十年人類基因組計(jì)劃完成和蛋白質(zhì)譜計(jì)劃推進(jìn)的過程中，越來越多抗體的潛在價(jià)值等待被發(fā)掘，等待不斷擴(kuò)展和添加到病理科抗體應(yīng)用的目錄中。

3、免疫組織化學(xué)中所使用的抗體，又稱為一抗(primary?antibody)，根據(jù)其制備方式可分為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體因其特異性高廣受免疫組化使用者的青睞，在病理科使用的抗體中占絕大多數(shù)。

4、單克隆抗體在制備過程中，會(huì)產(chǎn)出很多種克隆，大部分克隆特異性不強(qiáng)，因此，需要篩選特異性強(qiáng)的克隆?？寺『Y選是十分專業(yè)的工作，不但需要臨床一線高年資專業(yè)病理醫(yī)生，還需要豐富的不同陽(yáng)性強(qiáng)度和陽(yáng)性范圍的臨床標(biāo)本，才有可能挑選出特異和穩(wěn)定的亞克隆細(xì)胞株。

5、羧肽酶(carboxypeptidases，cps)是一類肽鏈端解酶，主要在肽鏈的游離羧基末端發(fā)揮作用，通過水解從蛋白質(zhì)和多肽的c端釋放單個(gè)氨基酸。根據(jù)羧肽酶不同的催化機(jī)制，可將其分為絲氨酸羧肽酶(酸性羧肽酶)、半胱氨酸羧肽酶(組織蛋白酶x)和金屬羧肽酶(metallocarboxypeptidases,mcps)，前兩者研究相對(duì)較少。mcps多在家蠶等昆蟲中報(bào)道，對(duì)其食物蛋白質(zhì)的消化吸收起較為重要的作用。羧肽酶z(carboxypeptidase?z,cpz)是金屬羧肽酶家族的新成員，又稱為金屬碳酰肽酶z，也是一種zn依賴性酶。該酶于1997年在人類中首次被克隆，于1998年在大鼠中被克隆。人類唾液腺中cpz?mrna的主要形式為編碼一個(gè)具有641個(gè)氨基酸開放閱讀框的蛋白質(zhì)，并發(fā)現(xiàn)了三個(gè)變體。除羧肽酶同源性結(jié)構(gòu)域以外，cpz還包含120個(gè)殘基的富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域(crd)，該結(jié)構(gòu)域與果蠅和哺乳動(dòng)物的卷曲蛋白(即wnt受體家族)的氨基酸序列具有20％-30％的同一性。wnt信號(hào)通路在拮抗或協(xié)同調(diào)節(jié)腫瘤的增殖、遷移和侵襲中發(fā)揮重要作用，推測(cè)cpz可能作為wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)劑。既往報(bào)道cpz?mrna在大鼠胎盤中含量豐富，在大鼠腦、肺、胸腺和腎臟中低至中等含量。追溯國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，本發(fā)明專利首次探索cpz在全身正常組織和多種腫瘤組織中的表達(dá)情況，并發(fā)掘其在臨床應(yīng)用潛在的鑒別診斷價(jià)值，且具有廣闊的應(yīng)用前景。因此，本發(fā)明擬對(duì)這一候選分子進(jìn)行制備和篩選，以期鑒定出敏感性高，特異性優(yōu)的克隆株，以協(xié)助臨床診斷和發(fā)掘更多的潛在價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的發(fā)明目的是：探索cpz在全身正常組織和多種腫瘤組織中的表達(dá)情況，發(fā)掘其在臨床應(yīng)用潛在的鑒別診斷價(jià)值，以協(xié)助臨床診斷。

2、正常肝組織陽(yáng)性率為100％，肝細(xì)胞癌陽(yáng)性表達(dá)率為91％，且多為胞漿彌漫強(qiáng)陽(yáng)性，而肝內(nèi)膽管癌陽(yáng)性表達(dá)率為28％，往往胞漿呈局灶陽(yáng)性表達(dá)或少量腔緣線狀陽(yáng)性表達(dá)，其他肝臟原發(fā)腫瘤如肝細(xì)胞腺瘤、膽管腺瘤/錯(cuò)構(gòu)瘤、彌漫性大b細(xì)胞淋巴瘤，以及肝臟轉(zhuǎn)移性腫瘤陽(yáng)性率為陰性。綜前所述，cpz是一種極具潛力的肝細(xì)胞癌的鑒別診斷指標(biāo)，并具有進(jìn)一步探索作為其他器官、系統(tǒng)、組織和細(xì)胞水平潛在的鑒別、預(yù)測(cè)和靶標(biāo)的價(jià)值。因此，本研究組擬對(duì)這一候選分子進(jìn)行制備和篩選。

3、為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，第一方面，本發(fā)明提供了一種cpz免疫組織化學(xué)抗體及應(yīng)用，所述抗體包括氨基酸序列為seq?id?no:2或seq?id?no:6所示的重鏈可變區(qū)，以及氨基酸序列為seq?id?no:4或seq?id?no:8所示的輕鏈可變區(qū)。

4、第二方面，本發(fā)明提供了編碼上述cpz免疫組織化學(xué)抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的基因。

5、進(jìn)一步地，所述編碼基因，包括：

6、編碼氨基酸序列為seq?id?no:2所示的重鏈可變區(qū)的基因，序列為seq?id?no：1；

7、編碼氨基酸序列為seq?id?no:6所示的重鏈可變區(qū)的基因，序列為seq?id?no：5；

8、編碼氨基酸序列為seq?id?no:4所示的輕鏈可變區(qū)的基因，序列為seq?id?no：3；

9、編碼氨基酸序列為seq?id?no:8所示的輕鏈可變區(qū)的基因，序列為seq?id?no：7。

10、第三方面，本發(fā)明提供了所述的cpz免疫組織化學(xué)抗體在制備鑒別診斷肝細(xì)胞癌和/或肝內(nèi)膽管癌的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

11、進(jìn)一步地，所述鑒別診斷肝細(xì)胞癌和/或肝內(nèi)膽管癌的產(chǎn)品包括檢測(cè)試劑盒。

12、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請(qǐng)具有以下有益效果：

13、1.本發(fā)明制備后的抗體能夠協(xié)助鑒別診斷肝細(xì)胞癌和肝內(nèi)膽管癌，最終有效地將cpz用于肝臟惡性腫瘤和良性腫瘤的鑒別中，提高了肝細(xì)胞癌的診斷準(zhǔn)確性。

14、2.本發(fā)明利用高產(chǎn)和量產(chǎn)組織芯庫(kù)，首次發(fā)現(xiàn)cpz在正常組織主要分布于肝臟，與單項(xiàng)檢測(cè)arg-1或hep?par-1相比較，無論是單項(xiàng)檢測(cè)cpz，或是上述三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)診斷肝細(xì)胞癌均有更高的敏感度，更好的診斷準(zhǔn)確性，且對(duì)診斷低分化肝細(xì)胞癌更有幫助。因此，對(duì)肝細(xì)胞癌的鑒別診斷有互補(bǔ)性。

技術(shù)特征：

1.一種cpz免疫組織化學(xué)抗體，其特征在于，所述抗體包括氨基酸序列為seq?id?no:2或seq?id?no:6所示的重鏈可變區(qū)，以及氨基酸序列為seq?id?no:4或seq?id?no:8所示的輕鏈可變區(qū)。

2.編碼權(quán)利要求1所述的cpz免疫組織化學(xué)抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的編碼基因，其特征在于，包括：

4.權(quán)利要求1所述的cpz免疫組織化學(xué)抗體在制備鑒別診斷肝細(xì)胞癌和/或肝內(nèi)膽管癌的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述鑒別診斷肝細(xì)胞癌和/或肝內(nèi)膽管癌的產(chǎn)品包括檢測(cè)試劑盒。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)涉及抗體技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種CPZ免疫組織化學(xué)抗體及應(yīng)用，所述抗體包括氨基酸序列為SEQ?ID?NO:2或SEQ?ID?NO:6所示的重鏈可變區(qū)，以及氨基酸序列為SEQ?ID?NO:4或SEQ?ID?NO:8所示的輕鏈可變區(qū)。本申請(qǐng)制備后的抗體能夠協(xié)助鑒別診斷肝細(xì)胞癌和肝內(nèi)膽管癌，最終有效地將CPZ用于肝臟惡性腫瘤和良性腫瘤的鑒別中，提高了肝細(xì)胞癌的診斷準(zhǔn)確性。

技術(shù)研發(fā)人員：侯英勇,鄧民英,平軼芳,王慧美,徐晨,樊嘉,周儉,羅榮奎,黃雯,陳伶俐,蔣冬先,袁偉,姚家美,宋琦,宿杰阿克蘇
受保護(hù)的技術(shù)使用者：復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26