本發(fā)明屬于微生物，具體涉及一種猴耳環(huán)鏈霉菌、縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a及其制備方法、應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、抗生素是一類具有生物活性的化合物，能夠抑制或殺死細(xì)菌、真菌和病毒等微生物，在臨床上，抗生素廣泛應(yīng)用于治療感染性疾病。然而，由于過(guò)度使用和濫用抗生素，導(dǎo)致了許多菌株的耐藥性逐漸增強(qiáng)，甚至出現(xiàn)了耐多種抗生素的超級(jí)菌株，嚴(yán)重威脅了公共衛(wèi)生和人類健康，因此，急需發(fā)現(xiàn)新的抗生素來(lái)應(yīng)對(duì)這種挑戰(zhàn)。

2、猴耳環(huán)是一種南方特色的植物，生長(zhǎng)于山野叢林中，其根部、枝葉部含有大量的生物活性物質(zhì)，被廣泛用于清熱解毒、去濕斂瘡的中藥制劑中，具有發(fā)現(xiàn)新型抗菌、抗病毒化合物的巨大潛力。

3、雙環(huán)tryptorubin?a是由六個(gè)氨基酸連接而成的小分子環(huán)肽，存在非典型的旋轉(zhuǎn)對(duì)映異構(gòu)現(xiàn)象。長(zhǎng)期以來(lái)，小分子的結(jié)構(gòu)被認(rèn)為僅由原子連接性和中心手性或軸手性定義。例如，類固醇激素都具有相同的基本碳原子骨架，它們不同的生物學(xué)作用取決于對(duì)該基本骨架外周的修飾。與小分子不同，像蛋白質(zhì)這樣的生物大分子要實(shí)現(xiàn)生物學(xué)功能，不僅僅需要具有正確的原子連接性(即一級(jí)結(jié)構(gòu))，往往還需要在不斷裂或形成新共價(jià)鍵的情況下折疊成具有生物活性的分子形狀(即三級(jí)結(jié)構(gòu))。但對(duì)于一些大分子來(lái)說(shuō)，決定分子形狀的主要因素是原子連接性，而非構(gòu)象變化。比如，dna拓?fù)洚悩?gòu)酶可以通過(guò)切割和重連磷酸二酯鍵來(lái)切換環(huán)狀dna的螺旋狀態(tài)和解旋狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為拓?fù)洚悩?gòu)(topo-isomerism)。索烴(catenane)分子中也同樣存在拓?fù)洚悩?gòu)現(xiàn)象，在不斷裂和重新形成化學(xué)鍵的情況下，拓?fù)洚悩?gòu)體之間無(wú)法相互轉(zhuǎn)化。tryptorubin?a的獨(dú)特拓?fù)洚悩?gòu)現(xiàn)象，決定了其為是一種具有潛在藥用價(jià)值的天然產(chǎn)物，具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤等生物活性，由于其獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和良好的藥理活性，tryptorubin?a已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一。目前，已有多種方法用于制備tryptorubin?a，如化學(xué)合成和天然產(chǎn)物發(fā)酵提取等。然而，這些現(xiàn)有的方法存在成本高、產(chǎn)率低、污染嚴(yán)重等問(wèn)題。因此，研究一種高效、低成本、環(huán)保的制備tryptorubin?a的方法具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明目的在于提供一種猴耳環(huán)鏈霉菌，同時(shí)提供一種縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a及其制備方法和應(yīng)用。

2、基于上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：

3、一種猴耳環(huán)鏈霉菌，命名為streptomyces?sp.hehy，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，登記入冊(cè)編號(hào)為cgmcc?no.26800，保藏日期為2023年3月14日。

4、所述猴耳環(huán)鏈霉菌由經(jīng)預(yù)處理的猴耳環(huán)分離培養(yǎng)、純化得到。猴耳環(huán)取自海南省五指山的藥用植物猴耳環(huán)。

5、分離培養(yǎng)方法：將預(yù)處理后的猴耳環(huán)加入一定量的蒸餾水研磨后，涂布于培養(yǎng)基上，于室溫下培養(yǎng)，直至菌落生長(zhǎng)出灰褐色直徑1mm以上菌落，純化方法：采取平板劃線法，將菌落置于培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng)，重復(fù)純化培養(yǎng)步驟；培養(yǎng)基為isp2培養(yǎng)基。

6、一種縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a，其由猴耳環(huán)鏈霉菌經(jīng)過(guò)培養(yǎng)、純化制得，分子式為c26h25n2o5，分子量為897.48。

7、縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a的制備方法，包括以下步驟：

8、1)培養(yǎng)：將猴耳環(huán)鏈霉菌接種至培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得培養(yǎng)物；

9、2)培養(yǎng)物收集：將步驟1)的培養(yǎng)物過(guò)濾，得菌液和菌絲體，菌絲體采用浸泡液浸泡，蒸發(fā)濃縮后，采用萃取劑進(jìn)行萃取，蒸發(fā)濃縮，得浸膏a；菌液采用萃取劑進(jìn)行萃取后，蒸發(fā)濃縮，得浸膏b，合并浸膏a和浸膏b，得縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a的粗提物；

10、3)將步驟2)縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a的粗提物純化，即得縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a。

11、步驟1)中，培養(yǎng)基為isp2液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度28℃，轉(zhuǎn)速180rpm/min，培養(yǎng)時(shí)間為7d。

12、步驟2)中，浸泡液為乙醇，萃取劑為乙酸乙酯，菌絲體采用乙醇浸泡，取出菌絲體后再次浸泡，浸泡3-4次，每次浸泡6-7天，然后旋蒸濃縮后，用乙酸乙酯萃取3-4次后，旋蒸濃縮，得浸膏a；菌液直接用乙酸乙酯萃取3-4次，旋蒸濃縮得到浸膏b，蒸發(fā)采取旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

13、步驟3)中，純化方法：將步驟2)tryptorubin?a的粗提物進(jìn)行超濾、硅膠柱層析、制備hplc分離后獲得純品(高效液相色譜法)。

14、縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a在醫(yī)藥制品、化妝品、食品中的應(yīng)用。

15、所述醫(yī)藥制品為抗菌、抗病毒或抗腫瘤藥物。

16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

17、本發(fā)明通過(guò)從植物猴耳環(huán)中分離出一株放線菌，具體為猴耳環(huán)鏈霉菌，分類學(xué)名稱為streptomyces?sp.hehy，利用該猴耳環(huán)鏈霉菌生產(chǎn)一種黃色固體tryptorubin?a，解決了傳統(tǒng)方法中成本高、操作復(fù)雜、產(chǎn)率低等問(wèn)題，具有較高的生產(chǎn)效率和經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)，tryptorubin?a具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤等生物活性，能有效地抑制多種革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性菌，尤其對(duì)多重耐藥菌的殺滅能力能達(dá)到85％，本發(fā)明可用于制備抗菌、抗病毒、抗腫瘤藥物，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種猴耳環(huán)鏈霉菌，命名為streptomyces?sp.hehy，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，登記入冊(cè)編號(hào)為cgmcc?no.26800，保藏日期為2023年3月14日。

2.如權(quán)利要求1所述的猴耳環(huán)鏈霉菌，其特征在于，所述猴耳環(huán)鏈霉菌由經(jīng)預(yù)處理的猴耳環(huán)分離培養(yǎng)、純化得到。

3.如權(quán)利要求2所述的猴耳環(huán)鏈霉菌，其特征在于，分離培養(yǎng)方法：將預(yù)處理后的猴耳環(huán)組織加入一定量的蒸餾水研磨后，涂布于培養(yǎng)基上，于室溫下培養(yǎng)，直至生長(zhǎng)出灰褐色直徑1mm以上菌落；純化方法：采取平板劃線法，將菌落置于培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng)，重復(fù)純化培養(yǎng)步驟；培養(yǎng)基為isp2培養(yǎng)基。

4.一種縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a，其特征在于，其由權(quán)利要求1-3任一所述的猴耳環(huán)鏈霉菌經(jīng)過(guò)培養(yǎng)、純化制得，分子式為c26h25n2o5，分子量為897.48。

5.縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

6.如權(quán)利要求5所述的縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a的制備方法，其特征在于，步驟1)中，培養(yǎng)基為isp2液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度28℃，轉(zhuǎn)速180rpm/min，培養(yǎng)時(shí)間為7d。

7.如權(quán)利要求5所述的縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a的制備方法，其特征在于，浸泡液為乙醇，萃取劑為乙酸乙酯，菌絲體采用乙醇浸泡，取出菌絲體后再次浸泡，浸泡3-4次，每次浸泡6-7天，然后旋蒸濃縮后，用乙酸乙酯萃取3-4次后，旋蒸濃縮，得浸膏a；菌液直接用乙酸乙酯萃取3-4次，旋蒸濃縮得到浸膏b。

8.如權(quán)利要求5所述的縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a的制備方法，其特征在于，步驟3)中，純化方法：將步驟2)縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a的粗提物進(jìn)行超濾、硅膠柱層析、制備hplc分離后獲得純品。

9.縮氨酸環(huán)肽類化合物tryptorubin?a在醫(yī)藥制品、化妝品、食品中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述醫(yī)藥制品為抗菌、抗病毒或抗腫瘤藥物。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)一種猴耳環(huán)鏈霉菌，命名為Streptomyces?sp.HEHY，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCCNo.26800，保藏日期為2023年3月14日。同時(shí)提供利用猴耳環(huán)鏈霉菌分離出縮氨酸環(huán)肽類化合物Tryptorubin?A及應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)從植物猴耳環(huán)中分離出一株放線菌，具體為猴耳環(huán)鏈霉菌，分類學(xué)名稱為Streptomyces?sp.HEHY，利用該猴耳環(huán)鏈霉菌生產(chǎn)一種黃色固體Tryptorubin?A，Tryptorubin?A具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤等生物活性，能有效地抑制多種革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性菌，尤其對(duì)耐藥菌的殺滅能力更為明顯。

技術(shù)研發(fā)人員：匡慧慧,叢琳,于梅,胡紅焱,程萌,張悅
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院海南醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26