本發(fā)明涉及提取分離方法，特別是涉及一種佛手的提取分離方法。

背景技術(shù)：

1、佛手(citri?sarcodactylis?fructus)為蕓香科柑橘屬植物佛手(citrus?medical.var.sarcodactylis?swingle)的干燥果實(shí)。佛手在我國藥用歷史悠久，分布較廣，廣西、廣東、四川、云南、福建、浙江等地均有栽培。佛手始以“枸櫞”之名載于唐代陳藏器的《本草拾遺》《本草圖經(jīng)》《滇南本草》《本草綱目》等。2020版《中國藥典》記載其味辛、苦、酸，溫。歸肝、脾、胃、肺經(jīng)，具有疏肝理氣，和胃止痛，燥濕化痰的功效。用于肝胃氣滯，胸脅脹痛，胃脘痞滿，食少嘔吐，咳嗽痰多等癥。佛手被列入國家衛(wèi)健委發(fā)布的《按照傳統(tǒng)既是食品又是中藥材物質(zhì)目錄》，作為傳統(tǒng)的藥食兩用植物，佛手亦有著很高的食用價(jià)值，同時(shí)，從中提取出的佛手精油能起到緩解疲勞、舒緩情緒等作用，在食品、藥品、化妝品等領(lǐng)域均有著廣泛應(yīng)用。

2、現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，佛手提取物含有多種生物活性成分，主要包括黃酮、香豆素、多糖和揮發(fā)油等化合物。其中揮發(fā)油主要由檸檬烯、γ-松油烯、d-枸櫞烯等組成，這些成分賦予了佛手特有的香氣。黃酮包括三羥基二甲氧基黃酮等，具有抗氧化、抗炎等生物活性。香豆精類化合物：如二甲氧基香豆精，對(duì)身體有一定的保健作用。其他生物活性物質(zhì)：多酚類化合物、萜類化合物等，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等功效。

3、如今，癌癥、心血管疾病等代謝性疾病和焦慮、抑郁等精神類疾病呈急速增長趨勢(shì)，以綠色、天然的植物為原料，開發(fā)安全、高效的功能性食品是預(yù)防和控制各種疾病發(fā)生和發(fā)展的重要手段。目前從佛手中分離出的化學(xué)成分報(bào)道研究較少，且結(jié)構(gòu)新穎性較低，因此對(duì)佛手中化合物的開發(fā)和分離亟待解決，并且關(guān)于佛手提取分離方法工藝尚不明確。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種佛手的提取分離方法，以解決上述佛手提取分離出的物質(zhì)較少，且結(jié)構(gòu)新穎性較低的問題。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明第一方面提供了一種佛手的提取分離方法，包括以下步驟：

3、步驟1：取佛手干燥藥材，粉碎后，用10～30倍量的甲醇在室溫下浸泡2～5d，過濾，重復(fù)3～5次，合并提取液，提取液經(jīng)過減壓濃縮、真空回收溶劑得到藥材原液，備用；

4、步驟2：將步驟1中的藥材原液用水進(jìn)行稀釋，稀釋后倒入d101大孔樹脂柱中，以甲醇-水的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，得到若干第一洗脫餾分；

5、每一個(gè)第一洗脫餾分經(jīng)濃縮、冷凍干燥、高效液相檢測后，合并相同色譜峰類似的餾分，備用；

6、步驟3：將步驟2中合并的每一個(gè)餾分通過mci色譜柱進(jìn)行分離，以甲醇-水的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，得到若干第二洗脫餾分；

7、每一個(gè)第二洗脫餾分經(jīng)濃縮、冷凍干燥、高效液相檢測后，合并相同色譜峰類似的餾分，備用；

8、步驟4：將步驟3中合并的每一個(gè)餾分進(jìn)行150dac制備粗分，以甲醇-水的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，得到若干第三洗脫餾分；

9、每一個(gè)第三洗脫餾分經(jīng)濃縮、冷凍干燥、高效液相檢測后，合并相同色譜峰類似的餾分，得到目標(biāo)成分混合樣；

10、步驟5：將步驟4中得到的目標(biāo)成分混合樣進(jìn)行濃縮，在30dac系統(tǒng)上對(duì)粗分進(jìn)行分離，以甲醇-水的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，每次截取需要的主峰部分，合并后減壓濃縮，根據(jù)高效液相檢測后，得到9種化合物產(chǎn)品。

11、優(yōu)選的，步驟2～5中高效液相檢測的色譜條件為：

12、色譜柱c18，流動(dòng)相a為千分之一三氟乙酸水溶液和流動(dòng)相b為乙腈；15％b～100b梯度洗脫；體積流量為1ml/min；柱溫35℃，進(jìn)樣量8μl；檢測波長為210nm。

13、優(yōu)選的，步驟2中藥材原液與水的體積比為1:1～1.3。

14、優(yōu)選的，步驟2中梯度洗脫過程中甲醇和水的體積比依次為30:70、60:40、80:20、100:0，每個(gè)洗脫梯度洗脫至無色為止。

15、優(yōu)選的，步驟3中梯度洗脫過程中甲醇和水的體積比為5:95～100:0，每個(gè)洗脫梯度洗脫至無色為止。

16、優(yōu)選的，步驟4中梯度洗脫過程中甲醇和水的體積比為35:65～75:25，每個(gè)洗脫梯度洗脫至無色為止。

17、優(yōu)選的，步驟5中梯度洗脫過程中甲醇和水的體積比為10:90～70:30，每個(gè)洗脫梯度洗脫至無色為止。

18、本發(fā)明第二方面提供餓了一種佛手提取物，由上述的提取分離方法分離得到的。

19、優(yōu)選的，佛手提取物包括化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物6、化合物7、化合物8、化合物9，化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式分別為：

20、

21、

22、本發(fā)明提供了從佛手中提取分離黃酮類、香豆素類和糖苷類化合物的方法。所述化合物包括：3-(2-葡糖氧基-4-甲氧基苯基)丙酸(化合物1)、松柏苷(化合物2)、新化合物(化合物3)、4'-o-甲基光牡荊素ii(化合物4)、田薊苷(化合物5)、濱蒿內(nèi)酯(化合物6)、白芷屬腦(化合物7)、白當(dāng)歸素(化合物8)及5，7-二甲氧基香豆素(化合物9)。

23、因此，本發(fā)明采用上述結(jié)構(gòu)的一種佛手的提取分離方法，具有以下有益效果：

24、(1)本發(fā)明涉及到從佛手中提取、分離、純化、鑒別香豆素類、黃酮類和糖苷類化合物的方法，首次分離得到一個(gè)未知新化合物(化合物3)，本發(fā)明還首次從佛手中分離得到黃酮類、糖苷類成分、白當(dāng)歸素和白芷屬腦化學(xué)成分。這些發(fā)現(xiàn)不僅豐富了對(duì)佛手化學(xué)組成的認(rèn)識(shí)，還揭示了佛手在防治相關(guān)疾病方面的潛在應(yīng)用。這些化合物的提取和分離對(duì)于理解佛手的藥理作用機(jī)制具有重要意義，同時(shí)也為開發(fā)基于佛手的新型藥物、保健品和化妝品提供了理論依據(jù)和技術(shù)支持。這些化合物有可能被開發(fā)成治療各種疾病的藥物，或者作為功能性成分添加到各種產(chǎn)品中，以增強(qiáng)其健康效益。本發(fā)明極大推動(dòng)了佛手化學(xué)成分的研究進(jìn)展。

25、(2)采用本發(fā)明的方法提取分離的黃酮類、香豆素類和糖苷類化合物純度高，該化合物可作為佛手質(zhì)量研究用對(duì)照物質(zhì)，用于檢測和鑒定佛手中這些成分的存在與否，以及含量的高低，這對(duì)于保證佛手產(chǎn)品的質(zhì)量和一致性具有重大意義。另外，佛手作為傳統(tǒng)草藥，在不同產(chǎn)地、收獲季節(jié)、加工方法下，其化學(xué)成分可能存在較大差異，高純度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)有助于建立佛手的化學(xué)指紋圖譜，實(shí)現(xiàn)其質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化。

26、(3)由于佛手藥食兩用，使用需求大，采用本發(fā)明的提取分離法方法從佛手中提取分離黃酮類、香豆素類和糖苷類化合物成本低，有利于佛手提取分離工藝規(guī)?；?，擴(kuò)大佛手的使用范圍。

27、下面通過附圖和實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

技術(shù)特征：

1.一種佛手的提取分離方法，其特征在于：包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種佛手的提取分離方法，其特征在于：步驟2～5中高效液相檢測的色譜條件為：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種佛手的提取分離方法，其特征在于：步驟2中藥材原液與水的體積比為1:1～1.3。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種佛手的提取分離方法，其特征在于：步驟2中梯度洗脫過程中甲醇和水的體積比依次為30:70、60:40、80:20、100:0，每個(gè)洗脫梯度洗脫至無色為止。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種佛手的提取分離方法，其特征在于：步驟3中梯度洗脫過程中甲醇和水的體積比為5:95～100:0，每個(gè)洗脫梯度洗脫至無色為止。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種佛手的提取分離方法，其特征在于：步驟4中梯度洗脫過程中甲醇和水的體積比為35:65～75:25，每個(gè)洗脫梯度洗脫至無色為止。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種佛手的提取分離方法，其特征在于：步驟5中梯度洗脫過程中甲醇和水的體積比為10:90～70:30，每個(gè)洗脫梯度洗脫至無色為止。

8.一種佛手提取物，其特征在于：由權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)的提取分離方法分離得到的。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種佛手提取物，其特征在于：佛手提取物包括化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物6、化合物7、化合物8、化合物9，化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式分別為：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種佛手的提取分離方法，包括以下步驟：首先對(duì)佛手進(jìn)行醇提得到藥材原液，然后藥材原液依次經(jīng)過D101大孔樹脂柱、MCI色譜柱、150DAC制備粗分、在30DAC系統(tǒng)上對(duì)粗分進(jìn)行分離，梯度洗脫，每次截取需要的主峰部分，合并后減壓濃縮，根據(jù)高效液相檢測后，得到9種化合物產(chǎn)品。本發(fā)明不僅從佛手中提取、分離、純化得到了黃酮類、糖苷類成分、白當(dāng)歸素和白芷屬腦化學(xué)成分，還首次分離得到了一個(gè)未知新化合物(化合物3)，豐富了對(duì)佛手化學(xué)組成的認(rèn)識(shí)，另外本發(fā)明提取分離方法成本低，有利于佛手提取分離工藝規(guī)?；?，擴(kuò)大了佛手的使用范圍。

技術(shù)研發(fā)人員：謝正紅,李金玲,李良八,班建平
受保護(hù)的技術(shù)使用者：武漢天植生物技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19