本發(fā)明涉及降解玉米秸稈的微生物復(fù)合菌系制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種新型降解玉米秸稈的復(fù)合菌系及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：我國作為一個農(nóng)業(yè)大國，農(nóng)作物秸稈資源最為豐富，秸稈產(chǎn)量每年可達到7億噸以上，尤其玉米秸稈的產(chǎn)量最大。目前對于玉米秸稈的主要利用途徑是秸稈還田，因為秸稈在腐解過程中，能夠釋放許多營養(yǎng)物質(zhì)，從而改善土壤結(jié)構(gòu)，增加土壤有機質(zhì)，增加土壤透氣性，達到提高土壤肥力的目的。玉米秸稈主要由纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、粗脂肪、粗蛋白和灰分組成。纖維素構(gòu)架之間填充著半纖維素和木質(zhì)素，并以牢固的氨鍵、化學(xué)鍵相連接構(gòu)成結(jié)晶區(qū)域，使得玉米秸稈的纖維化和木質(zhì)化程度高，自然降解過程緩慢。秸稈的降解實際上是微生物為主導(dǎo)的酶解過程，自然界中廣泛存在著能降解纖維素的微生物。但由于玉米秸桿中的天然木質(zhì)纖維素結(jié)構(gòu)復(fù)雜，很難被單一微生物和酶分解。因此篩選出降解玉米秸稈的復(fù)合菌系對于玉米秸稈腐熟還田來說具有很重要的意義。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，有必要提供一種新型降解玉米秸稈的復(fù)合菌系。還有必要提供一種新型降解玉米秸稈的復(fù)合菌系的制備方法。還有必要提供一種新型降解玉米秸稈的腐熟劑。還有必要提供一種新型降解玉米秸稈的復(fù)合菌系應(yīng)用。一種新型降解玉米秸稈的復(fù)合菌系，包含細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬；一種新型降解稻草秸稈的復(fù)合菌系的制備方法，包括以下步驟：采集微生物樣品：采集包含有細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬的樣品；制備玉米秸稈：收集干凈的玉米秸稈1kg，將玉米秸稈風(fēng)干后，用40g/lnaoh溶液浸泡24h，然后用清水將玉米秸稈沖洗數(shù)次直至沖洗液為中性ph＝7.0，接著將浸泡后的玉米秸稈在80℃條件下烘干12-16h，將烘干后的玉米秸稈切成1cm-2cm長片段備用；制備蚯蚓液：收集活體蚯蚓5kg，清洗2-3遍以去除蚯蚓體表面的污物，接著加入蚯蚓質(zhì)量3倍的清水，將蚯蚓浸泡12h以上直至蚯蚓將體內(nèi)的沙子全部吐出，再將吐沙后的活體蚯蚓用濃度為75％的酒精浸泡2-3min，酒精的加入量為蚯蚓質(zhì)量的2倍，再用濃度為3％的次氯酸鈉溶液浸泡10-15min，次氯酸鈉溶液的加入量也為蚯蚓液質(zhì)量的2倍，以去除蚯蚓體表面的微生物，接著用組織勻漿機將蚯蚓破碎，制成蚯蚓液，將蚯蚓液分裝于自封袋中，每份重量為0.5kg，置于冰箱內(nèi)冷凍儲藏，冷凍溫度在-20℃，用時取出化凍使用；制備選擇培養(yǎng)基：將制備好的玉米秸稈10g/l、尿素5g/l、豆渣1g/l、硫酸鎂0.1g/l、硫酸錳0.1g/l、磷酸氫二鈉5g/l及500ml去離子水混合形成選擇培養(yǎng)基，用1mol/l的鹽酸或1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至7.0-7.2，補足水至1,000ml，接著將選擇培養(yǎng)基在溫度為121℃，壓力為0.12mpa的條件下滅菌20min；復(fù)合菌系的初篩：(1)取制備好的蚯蚓液20g/l與采集到的微生物樣品按20g/l的接種量一起加入至裝有300ml上述新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中進行選擇培養(yǎng)，用通氣封口膜將錐形瓶密封，在28～30℃黑暗條件下選擇培養(yǎng)3天；(2)選擇培養(yǎng)3天后，將所述錐形瓶內(nèi)的選擇培養(yǎng)基充分搖勻，吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種到裝有300ml所述新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，重復(fù)4次，得到4組選擇培養(yǎng)基，用通氣封口膜將錐形瓶密封，在28～30℃黑暗條件下繼續(xù)選擇培養(yǎng)3-6天；(3)將培養(yǎng)3-6天后的4組選擇培養(yǎng)基作繼代篩選，具體操作為：分別將4組選擇培養(yǎng)基充分搖勻，吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種到裝有300ml所述新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，在28～30℃黑暗條件下繼續(xù)選擇培養(yǎng)3-6天后搖勻選擇培養(yǎng)基，再吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種新鮮選擇培養(yǎng)基上繼續(xù)選擇培養(yǎng)，將4組選擇培養(yǎng)基分別如此循環(huán)傳代30次后，挑選出其中玉米秸稈降解能力強的選擇培養(yǎng)基做進一步的復(fù)篩；復(fù)合菌系的復(fù)篩：(1)將所述復(fù)合菌系的初篩挑選出的玉米秸稈降解能力強的選擇培養(yǎng)基充分搖勻后，吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種到裝有300ml新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)12天，每隔3天分別測定一次錐形瓶內(nèi)的濾紙酶活、外切β-1,4-葡聚糖酶活、內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶活、β-葡聚糖酶活及半纖維素酶活；(2)繼續(xù)傳代和馴化處理，選取步驟(1)中濾紙酶活、外切β-1,4-葡聚糖酶活、內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶活、β-葡聚糖酶活和半纖維素酶活高的選擇培養(yǎng)基，吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種到裝有300ml新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，繼續(xù)在28～30℃黑暗條件下選擇培養(yǎng)3天后搖勻選擇培養(yǎng)基，再吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種新鮮選擇培養(yǎng)基上繼續(xù)選擇培養(yǎng)，如此循環(huán)傳代20次后，繼續(xù)測定以上指標，篩選出玉米秸稈降解能力最高、能夠穩(wěn)定遺傳的選擇培養(yǎng)基；(3)選取降解能力最高、能穩(wěn)定遺傳的選擇培養(yǎng)基進行復(fù)合菌系菌種的鑒定，通過對選擇培養(yǎng)基中的復(fù)合菌系進行16s-rrna測序確定出復(fù)合菌系包含有細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬。優(yōu)選的，所述制備選擇培養(yǎng)基步驟中加入的尿素、硫酸鎂、硫酸錳及磷酸氫二鈉，均為分析純，篩選過程中的制備水均為去離子水。優(yōu)選的，在所述復(fù)合菌系的初篩和復(fù)合菌系的復(fù)篩過程中通過目測觀察玉米秸稈的漂浮情況來判定玉米秸稈降解的程度，降解能力強的選擇培養(yǎng)基內(nèi)的玉米秸稈部分或全部漂浮到錐形瓶液面上，降解能力較弱的選擇培養(yǎng)基內(nèi)的玉米秸稈沉在錐形瓶底部，以篩選出降解能力最高、能穩(wěn)定遺傳的選擇培養(yǎng)基。一種腐熟劑，包含細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬的復(fù)合菌系及必要的輔料，所述包含細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬的復(fù)合菌系為所述腐熟劑的活性成分，所述包含細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬的復(fù)合菌系為權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌系。一種腐熟劑的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：擴大培養(yǎng)玉米秸稈降解菌復(fù)合菌系：(1)將包含有細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬的復(fù)合菌系的選擇培養(yǎng)基，按10g/l的接種量接入到已滅菌的裝有650ml新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶的溫度保持在32-34℃，在180r/min持續(xù)震蕩的狀態(tài)下培養(yǎng)24h后，作為擴大培養(yǎng)玉米秸稈降解菌復(fù)合菌系的種子液，全部移入已滅菌的發(fā)酵罐中，將發(fā)酵罐的溫度控制在32-34℃之間，在180r/min震蕩狀態(tài)下培養(yǎng)72h，即完成擴大培養(yǎng)玉米秸稈降解菌復(fù)合菌系的過程；制備固體培養(yǎng)基：將所述制備好的玉米秸稈200g/l、豆餅268g/l、尿素14g/l、氯化鈉8g/l、葡萄糖8g/l、硫酸錳0.4g/l、硫酸鎂0.8g/l及500ml去離子水混合為一體，至整個混合料捏在手中剛能搓開的狀態(tài)，形成固體培養(yǎng)基，用1mol/l的鹽酸或1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)固體培養(yǎng)基的ph至7.0～7.2；制備秸稈腐熟劑：將制備好的固體培養(yǎng)基裝于淺盤中，將裝有固體培養(yǎng)基的淺盤在溫度為121℃，壓力為0.12mpa的條件下滅菌20min，待淺盤冷卻后將擴大培養(yǎng)后的玉米秸稈降解菌復(fù)合菌系按30g/l的接種量接種到淺盤中，接種完成后，將淺盤置于固態(tài)發(fā)酵箱內(nèi)在34℃條件下，固態(tài)發(fā)酵72h，制得玉米秸稈腐熟劑，發(fā)酵期間保持固態(tài)發(fā)酵箱內(nèi)濕度在60％-70％，溫度在32-34℃；烘干：將淺盤固態(tài)發(fā)酵完全的玉米秸稈腐熟劑烘干，烘干溫度為40-50℃，烘干時間為12h-16h。優(yōu)選的，所述制得的固體培養(yǎng)基能過90目篩。一種腐熟劑在降解玉米秸稈中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)效果為：由于蚯蚓體內(nèi)含有能快速降解玉米秸稈中木質(zhì)纖維素的微生物群，因此本發(fā)明將活體蚯蚓破碎后與采集到的微生物樣品一起置于裝有新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶內(nèi)進行復(fù)合菌系的篩選，經(jīng)過復(fù)合菌系的初篩和復(fù)篩篩選取降解能力最高、能穩(wěn)定遺傳的選擇培養(yǎng)基進行復(fù)合菌系菌種的鑒定，將篩選出的復(fù)合菌系制作成玉米秸稈腐熟劑來降解玉米秸稈，利用蚯蚓體內(nèi)的微生物群與微生物樣品中的微生物菌種協(xié)同作用，能夠同步降解玉米秸稈中的纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，降解速度快、效率高。所述復(fù)合菌系的初篩和復(fù)篩過程中通過目測觀察玉米秸稈的漂浮情況來篩選出降解能力較高、能穩(wěn)定遺傳的選擇培養(yǎng)基，方法簡便，篩選效率高，且更易操作。復(fù)合菌系的復(fù)篩過程中以濾紙酶活、外切β-1,4-葡聚糖酶活、內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶活、β-葡聚糖酶活和半纖維素酶活作為秸稈降解優(yōu)勢菌系篩選依據(jù)。由于液態(tài)發(fā)酵容易脹氣且不好運輸，因此在制備玉米秸稈腐熟劑時采用液體發(fā)酵和淺盤固態(tài)發(fā)酵相結(jié)合的方式，先將篩選到的復(fù)合菌系經(jīng)過液態(tài)發(fā)酵擴大復(fù)合菌系的菌數(shù)量，再將擴大數(shù)量后的復(fù)合菌系置于固體培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵后進行烘干制得玉米秸稈腐熟劑。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明，以下實施例旨在說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的進一步限定，不應(yīng)以此限制本發(fā)明的保護范圍。1、采集微生物樣品采集地來自銀川市周邊、永寧縣、賀蘭縣，石嘴山市的大武口區(qū)、惠農(nóng)區(qū)、平羅縣、吳忠市的利通區(qū)、紅寺堡區(qū)、青銅峽市、同心縣、鹽池縣，固原市的原州區(qū)、西吉縣、隆德縣、涇源縣和彭陽縣中衛(wèi)市的沙坡頭區(qū)、中寧縣和海原縣，采集這些地區(qū)的長期秸稈還田土壤、多年秸稈堆積處土壤、以腐熟的以秸稈和動物糞便腐熟為主的堆肥和堆肥改良土壤作為樣品供菌種篩選。2、制備選擇培養(yǎng)基制備玉米秸稈：收集干凈的玉米秸稈1kg，將玉米秸稈風(fēng)干后，用40g/lnaoh溶液浸泡24h，然后用清水將玉米秸稈沖洗數(shù)次直至沖洗液為中性，ph＝7.0，naoh能洗脫玉米秸稈上的臘質(zhì)層，破壞玉米秸稈內(nèi)部木質(zhì)素包裹，從而增加降解菌與纖維素的接觸面積，使得降解菌能更快的降解玉米秸稈，接著將浸泡后的玉米秸稈在80℃條件下烘干12-16h，將烘干后的玉米秸稈切成1cm-2cm長片段備用；制備蚯蚓液：收集活體蚯蚓5kg，清洗2-3遍以去除蚯蚓體表面的污物，接著加入蚯蚓質(zhì)量3倍的清水，將蚯蚓浸泡12h以上直至蚯蚓將體內(nèi)的沙子全部吐出，再將吐沙后的活體蚯蚓用濃度為75％的酒精浸泡2-3min，酒精的加入量為蚯蚓質(zhì)量的2倍，再用濃度為3％的次氯酸鈉溶液浸泡10-15min，次氯酸鈉溶液的加入量也為蚯蚓液質(zhì)量的2倍，以去除蚯蚓體表面的微生物，接著用組織勻漿機將蚯蚓破碎，制成蚯蚓液，將蚯蚓液分裝于自封袋中，每份重量為0.5kg，置于冰箱內(nèi)冷凍儲藏，冷凍溫度在-20℃，用時取出化凍使用；蚯蚓體內(nèi)存在的特殊微生物群能夠分解蛋白質(zhì)、脂肪和纖維等，因此將活體蚯蚓破碎后與采集到的微生物樣品一起置于裝有新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶內(nèi)進行復(fù)合菌系的篩選，利用蚯蚓體內(nèi)豐富的微生物群，達到快速降解玉米秸稈中纖維素的目的，以與微生物樣品中的微生物菌協(xié)同作用以快速降解玉米秸稈。制備選擇培養(yǎng)基：將制備好的玉米秸稈10g/l、尿素5g/l、豆渣1g/l、硫酸鎂0.1g/l、硫酸錳0.1g/l、磷酸氫二鈉5g/l及500ml去離子水混合形成選擇培養(yǎng)基，用1mol/l的鹽酸或1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至7.0-7.2，補足水至1,000ml，接著將選擇培養(yǎng)基在溫度為121℃，壓力為0.12mpa的條件下滅菌20min；所述尿素、硫酸鎂、硫酸錳及磷酸氫二鈉，均為分析純，篩選過程中的制備水均為去離子水。3、復(fù)合菌系的初篩(1)取制備好的蚯蚓液20g/l與采集到的微生物樣品按20g/l的接種量一起加入至裝有300ml上述新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中進行選擇培養(yǎng)，用通氣封口膜將錐形瓶密封，在28～30℃黑暗條件下選擇培養(yǎng)3天；(2)選擇培養(yǎng)3天后，將所述錐形瓶內(nèi)的選擇培養(yǎng)基充分搖勻，吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種到裝有300ml所述新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，重復(fù)4次，得到4組選擇培養(yǎng)基，用通氣封口膜將錐形瓶密封，在28～30℃黑暗條件下繼續(xù)選擇培養(yǎng)3-6天；(3)將培養(yǎng)3-6天后的4組選擇培養(yǎng)基作繼代篩選，具體操作為：分別將4組選擇培養(yǎng)基充分搖勻，吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種到裝有300ml所述新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，在28～30℃黑暗條件下繼續(xù)選擇培養(yǎng)3-6天后搖勻選擇培養(yǎng)基，再吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種新鮮選擇培養(yǎng)基上繼續(xù)選擇培養(yǎng)，將4組選擇培養(yǎng)基分別如此循環(huán)傳代30次后，挑選出其中玉米秸稈降解能力強的選擇培養(yǎng)基做進一步的復(fù)篩；通過目測觀察各個錐形瓶內(nèi)選擇培養(yǎng)基的玉米秸稈的漂浮情況，來淘汰無分解和降解能力較弱的選擇培養(yǎng)基，降解能力強的選擇培養(yǎng)基內(nèi)的玉米秸稈部分或全部漂浮到錐形瓶液面上，降解能力較弱的選擇培養(yǎng)基內(nèi)的玉米秸稈基本沉在錐形瓶底部，從而挑選出玉米秸稈降解能力強的做進一步的復(fù)篩；(4)初篩測定結(jié)果初篩共挑選出18組玉米秸稈降解能力強的選擇培養(yǎng)基，將其按序號命名為yj-1、yj-2至yj-18。4、復(fù)合菌系的復(fù)篩(1)將所述復(fù)合菌系的初篩挑選出的玉米秸稈降解能力強的選擇培養(yǎng)基充分搖勻后，吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種到裝有300ml新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)12天，每隔3天分別測定一次錐形瓶內(nèi)的濾紙酶活、外切β-1,4-葡聚糖酶活、內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶活、β-葡聚糖酶活及半纖維素酶活；(2)繼續(xù)傳代和馴化處理，選取步驟(1)中濾紙酶活、外切β-1,4-葡聚糖酶活、內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶活、β-葡聚糖酶活和半纖維素酶活高的選擇培養(yǎng)基，吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種到裝有300ml新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，繼續(xù)在28～30℃黑暗條件下選擇培養(yǎng)3天后搖勻選擇培養(yǎng)基，再吸取20ml搖勻后的培養(yǎng)液接種新鮮選擇培養(yǎng)基上繼續(xù)選擇培養(yǎng)，如此循環(huán)重復(fù)20次后，繼續(xù)測定以上指標，篩選出降解能力最高、能夠穩(wěn)定遺傳的選擇培養(yǎng)基；降解能力強的選擇培養(yǎng)基內(nèi)的玉米秸稈部分或全部漂浮到錐形瓶液面上，降解能力較弱的選擇培養(yǎng)基內(nèi)的玉米秸稈基本沉在錐形瓶底部，從而篩選出玉米秸稈降解能力強的錐形瓶內(nèi)的選擇培養(yǎng)基重復(fù)；(3)復(fù)篩測定結(jié)果：分別對18組降解能力強的選擇培養(yǎng)基做了酶活性的測定計算，選出了各個酶活性最高的五組數(shù)據(jù)如下：表1酶活性(u/ml)yj-1yj-8yj-14yj-17yj-18濾紙酶活1.2111.4341.1731.4051.372外切β-1,4-葡聚糖酶活0.6540.3670.9590.5350.438內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶活1.2911.5851.3181.7541.381β-葡聚糖酶活0.9111.0650.7290.8430.838半纖維素酶活4.8364.8604.1294.7694.123由表1中數(shù)據(jù)看出yj-8組的濾紙酶活1.434u/ml、內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶活1.585u/ml、β-葡聚糖酶活1.065u/ml和半纖維素酶活4.860u/ml均高于其他組分，綜合考慮得出yj-8組降解玉米秸稈能力最強，由此作為繼續(xù)傳代培養(yǎng)的選擇培養(yǎng)基。將yj-8連續(xù)傳代20代后，再測定各個酶活性，濾紙酶活為1.320u/ml，內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶活為1.434u/ml、β-葡聚糖酶活為1.224u/ml、半纖維素酶活4.823u/ml，變化不顯著，說明yj-8在傳代培養(yǎng)中保持了良好的酶活性，能夠穩(wěn)定遺傳。(4)通過對選擇培養(yǎng)基yj-8中的復(fù)合菌系進行16s-rrna測序確定出復(fù)合菌系包含有細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬。5、一種腐熟劑，包含細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬的復(fù)合菌系及必要的輔料，所述包含細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬的復(fù)合菌系為所述腐熟劑的活性成分。6、一種腐熟劑的制備方法擴大培養(yǎng)玉米秸稈降解菌復(fù)合菌系：將包含有細菌myroides、ignatzschineria、alcaligenes、bacteroides、escherichia、macellibacteroides、kerstersia及arcobacter菌屬的復(fù)合菌系的選擇培養(yǎng)基，按10g/l的接種量接入到已滅菌的裝有650ml新鮮選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶的溫度保持在32-34℃，在180r/min持續(xù)震蕩的狀態(tài)下培養(yǎng)24h后，作為擴大培養(yǎng)玉米秸稈降解菌復(fù)合菌系的種子液，全部移入已滅菌的發(fā)酵罐中，將發(fā)酵罐的溫度控制在32-34℃之間，在180r/min震蕩狀態(tài)下培養(yǎng)72h，即完成擴大培養(yǎng)玉米秸稈降解菌復(fù)合菌系的過程；制備固體培養(yǎng)基：將所述制備好的玉米秸稈200g/l、豆餅268g/l、尿素14g/l、氯化鈉8g/l、葡萄糖8g/l、硫酸錳0.4g/l、硫酸鎂0.8g/l及500ml去離子水混合為一體，至整個混合料捏在手中剛能搓開的狀態(tài)，形成固體培養(yǎng)基，用1mol/l的鹽酸或1mol/l氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)固體培養(yǎng)基的ph至7.0～7.2；所述制得的固體培養(yǎng)基能過90目篩。制備秸稈腐熟劑：將制備好的固體培養(yǎng)基裝于淺盤中，將裝有固體培養(yǎng)基的淺盤在溫度為121℃，壓力為0.12mpa的條件下滅菌20min，待淺盤冷卻后將擴大培養(yǎng)后的玉米秸稈降解菌復(fù)合菌系按30g/l的接種量接種到淺盤中，接種完成后，將淺盤置于固態(tài)發(fā)酵箱內(nèi)在34℃條件下，固態(tài)發(fā)酵72h，制得玉米秸稈腐熟劑，發(fā)酵期間保持固態(tài)發(fā)酵箱內(nèi)濕度在60％-70％，溫度在32-34℃；烘干：將淺盤固態(tài)發(fā)酵完全的玉米秸稈腐熟劑烘干，烘干溫度為40-50℃，烘干時間為12h-16h。7、一種腐熟劑在降解玉米秸稈中的應(yīng)用將上述制備好的玉米秸稈腐熟劑應(yīng)用到玉米秸稈上進行降解測試，在制備好的1cm-2cm的玉米秸稈段中按玉米秸稈重量的1‰加入秸稈腐熟劑混合均勻形成秸稈降解腐熟堆，1號降解腐熟堆內(nèi)加入本發(fā)明制備的玉米秸稈腐熟劑，2號降解腐熟堆內(nèi)加入其他品牌的秸稈腐熟劑，3號降解腐熟堆不加秸稈腐熟劑做空白對照，調(diào)節(jié)三個降解腐熟堆內(nèi)的含水量均在65％-70％，三個降解腐熟堆的長均在1m，寬均在0.5m，高均在0.6m，放置15天讓三個降解腐熟堆充分發(fā)酵，待發(fā)酵結(jié)束后分別測定三個降解腐熟內(nèi)氮、磷、鉀和有機質(zhì)的含量。下表是三個降解腐熟堆內(nèi)氮、磷、鉀和有機質(zhì)的測試結(jié)果。表2降解腐熟堆內(nèi)氮、磷、鉀和有機質(zhì)的含量氮含量(％)磷含量(％)鉀含量(％)有機質(zhì)(％)1號1.071.632.5745.442號0.741.022.1932.963號0.610.271.5825.61由表2看出，1號腐熟堆內(nèi)的氮、磷、鉀和有機質(zhì)的含量均明顯高于其他兩組，本發(fā)明制備出的玉米秸稈腐熟劑在降解玉米秸稈過程中能夠釋放更多的營養(yǎng)物質(zhì)，增加土壤有機質(zhì)，能夠明顯改善土壤結(jié)構(gòu)提高土壤肥力。當前第1頁12