本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體涉及兩個(gè)芝麻開花基因及其在植物光周期和開花時(shí)間調(diào)節(jié)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

芝麻(sesamumindicuml.)隸屬于胡麻科胡麻屬，是一種古老的油料作物，栽培歷史在5000年以上。目前，廣泛分布在南緯40度至北緯45度之間，集中于亞洲和非洲的熱帶、亞熱帶地區(qū)。它作為一種營養(yǎng)豐富、功能性強(qiáng)、保健效果好的貴重油料深受人們喜愛。芝麻油不飽和脂肪酸含量高達(dá)85％，富含抗氧化、抗癌、降血脂的芝麻素，被譽(yù)為“油料皇后”。芝麻為短日照植物，開花主要受光周期調(diào)控，不同地區(qū)的芝麻開花時(shí)間差異很大，可能是受到光周期調(diào)控基因影響。

對擬南芥、水稻等植物的研究表明，植物開花的光周期途徑是受到光敏色素、節(jié)律鐘、成花素等基因調(diào)控，其中一個(gè)關(guān)鍵基因constans(簡稱co)的變異對植物開花時(shí)間調(diào)節(jié)至關(guān)重要。co基因位于生物鐘的輸出途徑，是生物鐘和開花時(shí)間基因之間監(jiān)測日照長度的重要元件，它可以整合光信號和生物鐘信號，節(jié)律性地激活floweringlocust的表達(dá)，從而誘導(dǎo)開花。co基因編碼的蛋白均包含兩個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域：靠近氨基端的b-box結(jié)構(gòu)域即鋅指結(jié)構(gòu)域和靠近羧基端的cct結(jié)構(gòu)域。co基因的表達(dá)受晝夜節(jié)律鐘調(diào)控。不同物種中該基因拷貝數(shù)不同，co基因不同拷貝之間的功能存在差異。不完全統(tǒng)計(jì)，co基因者已經(jīng)從擬南芥、水稻、玉米、大豆、番茄、葡萄等近二十個(gè)物種中克隆得到，但是芝麻光周期調(diào)控基因的克隆和功能驗(yàn)證尚未見報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供芝麻sicol1和sicol2基因及其應(yīng)用。包括(1)克隆兩個(gè)芝麻開花基因sicol1和sicol2；(2)提供基因及其編碼蛋白的序列；(3)提供這兩個(gè)基因在育種中的應(yīng)用，尤其是在調(diào)節(jié)植物光周期以及開花時(shí)間中的應(yīng)用。

為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供一種芝麻sicol1基因，其具有如seqidno.1所示的核苷酸序列或者該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸形成的具有同等功能的核苷酸序列，以及芝麻sicol2基因，其具有如seqidno.2所示的核苷酸序列或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸形成的具有同等功能的核苷酸序列。

本發(fā)明還提供上述芝麻sicol1基因和sicol2基因的蛋白。芝麻sicol1基因的蛋白具有如seqidno.3所示的氨基酸序列或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。芝麻sicol2基因的蛋白具有如seqidno.4所示的氨基酸序列或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

本發(fā)明sicol1基因和sicol2基因(全稱sesamumindicumconstanslike1和2)是從芝麻品種“中芝13”中克隆到的兩個(gè)基因，sicol1基因和sicol2基因編碼蛋白的氨基酸序列間的同源性為70％，與擬南芥co蛋白的同源性分別為57％和61％。并且sicol1和sicol2蛋白與擬南芥co具有相同的保守結(jié)構(gòu)域：cct結(jié)構(gòu)域和鋅指結(jié)構(gòu)域。其中，cct結(jié)構(gòu)域是開花基因特有的一類結(jié)構(gòu)域。因此，可以推測sicol1和sicol2與擬南芥co基因類似，都具有促進(jìn)開花的功能。在cct結(jié)構(gòu)域中，芝麻sicol1和sicol2蛋白與擬南芥co蛋白分別存在五個(gè)和四個(gè)氨基酸的差異；在鋅指結(jié)構(gòu)域中，sicol1蛋白有兩個(gè)b-box，而sicol2蛋白的第一個(gè)b-box存在缺失。這些結(jié)構(gòu)和序列差異可能導(dǎo)致了芝麻sicol1和sicol2在調(diào)控芝麻開花過程中的功能差異。芝麻sicol1和sicol2基因在開花前期和開花期的葉片中表達(dá)量最高。芝麻sicol1和sicol2基因受光周期調(diào)控，在長、短光照下均呈節(jié)律性表達(dá)。

本發(fā)明包括通過各種方法獲得的如seqidno.1-2所示核苷酸序列或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸形成的具有同等功能的基因。

含有sicol1或sicol2核苷酸序列的克隆載體或各類表達(dá)載體、含有所述載體的宿主細(xì)胞，含有所述核苷酸序列的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。

上述編碼基因sicol1和sicol2在調(diào)節(jié)植物光周期和開花時(shí)間中的應(yīng)用。

本發(fā)明將sicol1和sicol2基因構(gòu)建表達(dá)載體pbi121，并在大腸桿菌dh5α中擴(kuò)繁。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的蘸花法，將pbi121攜帶的sicol1和sicol2基因轉(zhuǎn)入擬南芥，獲得擬南芥轉(zhuǎn)化植株。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，sicol1和sicol2具有增強(qiáng)植物對光周期的敏感性并促進(jìn)擬南芥開花的作用。

上述技術(shù)方案具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1、提供了芝麻sicol1和sicol2基因及其編碼的蛋白本身。

2、過表達(dá)sicol1和sicol2基因可改變植物生育期、促進(jìn)植物開花。過表達(dá)芝麻開花基因sicol1和sicol2明顯促進(jìn)植物(擬南芥)開花，使花期時(shí)間縮短，生育期縮短。因而，sicol1和sicol2具有調(diào)節(jié)花期，可用于解決雜交育種中的花期不遇問題、各種作物、蔬菜、水果、花卉的生育期控制問題、光周期敏感問題和引種問題。

附圖說明

圖1是本發(fā)明芝麻開花基因sicol1和sicol2編碼蛋白的結(jié)構(gòu)分析；圖1說明：“*”代表該位點(diǎn)的氨基酸序列完全一致，“:”代表該位點(diǎn)的氨基酸序列相似度較高，“.”代表該位點(diǎn)的氨基酸序列相似度較低；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例3的植物表達(dá)載體pbi121；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例4的克隆中間載體peasy-t1；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例5的芝麻開花基因sicol1促進(jìn)擬南芥開花圖；

圖5為本發(fā)明實(shí)施例6的芝麻開花基因sicol1促進(jìn)擬南芥開花圖；

圖6為本發(fā)明實(shí)施例7的芝麻開花基因sicol1促進(jìn)擬南芥開花圖；

圖7為本發(fā)明實(shí)施例8的芝麻開花基因sicol2促進(jìn)擬南芥開花圖；

圖8為本發(fā)明實(shí)施例9的芝麻開花基因sicol2促進(jìn)擬南芥開花圖；

圖9為本發(fā)明實(shí)施例10的芝麻開花基因sicol2促進(jìn)擬南芥開花圖；

圖10為本發(fā)明實(shí)施例11的芝麻開花基因sicol1和sicol2在芝麻不同組織的表達(dá)水平；

圖11為本發(fā)明實(shí)施例12的芝麻開花基因sicol1和sicol2在不同時(shí)期的芝麻葉片中的表達(dá)水平；

圖12為本發(fā)明實(shí)施例13的芝麻開花基因sicol1和sicol2在長、短日照下的表達(dá)水平。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例，對本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)描述。以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1：芝麻開花基因sicol1和sicol2的克隆

利用正向引物cccgggatgctgaagctcca(seqidno.5所示)和反向引物gagctctcagaaggacggga(seqidno.6所示)以及正向引物cccgggatgctgaaagtcga(seqidno.7所示)和反向引物gagctctcagaatgatggaa(seqidno.8所示)分別從芝麻品種“中芝13”中克隆。

實(shí)施例2：芝麻開花基因sicol1和sicol2所用克隆的中間載體為peasy-t1(見圖3)。

從實(shí)施例1中擴(kuò)增獲得的pcr產(chǎn)物直接按照ta克隆方法克隆到peasy-t1上。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌dh5α，并在其中擴(kuò)繁，陽性克隆經(jīng)過測序篩選獲得sicol1和sicol2，其基因序列如seqidno.1和seqidno.2所示；由其編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列如seqidno.3和seqidno.4所示。

實(shí)施例3：芝麻開花基因sicol1和sicol2編碼蛋白的結(jié)構(gòu)分析

芝麻開花基因sicol1和sicol2基因編碼蛋白的氨基酸序列間的同源性為70％，與擬南芥co蛋白的同源性分別為57％和61％。并且sicol1和sicol2蛋白與擬南芥co具有相同的保守結(jié)構(gòu)域：cct結(jié)構(gòu)域和鋅指結(jié)構(gòu)域。其中，cct結(jié)構(gòu)域是開花基因特有的一類結(jié)構(gòu)域。因此，可以推測sicol1和sicol2與擬南芥co基因具有類似促進(jìn)開花的功能。在cct結(jié)構(gòu)域中，芝麻sicol1和sicol2蛋白與擬南芥co蛋白分別存在五個(gè)和四個(gè)氨基酸的差異；在鋅指結(jié)構(gòu)域中，sicol2的第一個(gè)b-box存在缺失，這些結(jié)構(gòu)和序列差異可能導(dǎo)致了芝麻sicol1和sicol2在調(diào)控開花過程中的功能差異。

實(shí)施例4：芝麻開花基因sicol1和sicol2植物表達(dá)載體

利用同源重組的方法將芝麻開花基因sicol1和sicol2與圖2所示的pbi121質(zhì)粒連接，構(gòu)建芝麻sicol1和sicol2基因的過表達(dá)載體。將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中，再采用蘸花法將農(nóng)桿菌導(dǎo)入擬南芥中。收集擬南芥的成熟種子(t0代種子)，將t0代擬南芥種子消毒后接種在含卡那霉素的ms篩選培養(yǎng)基上篩選陽性植株。提取陽性植株的葉片dna，分別利用正向引物cgacacttgccgctcag(seqidno.9所示)和反向引物acgacgccctcccatt(seqidno.10所示)以及正向引物atacaactggctttcgt(seqidno.11所示)和反向引物ccattggtgataggga(seqidno.12所示)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因植株的pcr分子鑒定，確認(rèn)sicol1和sicol2基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入的t1代陽性植株。將t1代種子繼續(xù)進(jìn)行卡那霉素篩選，提取陽性植株葉片基因組dna進(jìn)行pcr分子鑒定，確定t2代陽性植株。

應(yīng)用實(shí)施例：

實(shí)施例5：芝麻開花基因sicol1促進(jìn)擬南芥開花——轉(zhuǎn)化系ⅰ

從實(shí)施例3獲得的t2代陽性擬南芥轉(zhuǎn)化植株與親本(野生型col-0)在擬南芥生長間中一起培育(16小時(shí)光照/8小時(shí)黑暗的光周期，光強(qiáng)為120-μmol/m²·s)，直至轉(zhuǎn)基因植株開花。如圖4所示，其中左圖為轉(zhuǎn)基因植株，右圖為對照。圖4顯示芝麻開花基因sicol1轉(zhuǎn)化擬南芥，導(dǎo)致擬南芥對光周期敏感度增強(qiáng)，開花提前1周。說明芝麻sicol1基因具有開花活性，可以促進(jìn)植物開花。

實(shí)施例6：芝麻開花基因sicol1促進(jìn)擬南芥開花——轉(zhuǎn)化系ⅱ

從實(shí)施例3獲得的t2代陽性擬南芥轉(zhuǎn)化植株與親本(野生型col-0)在擬南芥生長間中一起培育(16小時(shí)光照/8小時(shí)黑暗的光周期，光強(qiáng)為120-μmol/m²·s)，直至轉(zhuǎn)基因植株開花。如圖5所示，其中左圖為轉(zhuǎn)基因植株，右圖為對照。圖5顯示芝麻開花基因sicol1轉(zhuǎn)化擬南芥，導(dǎo)致擬南芥對光周期敏感度增強(qiáng)，開花提前1周。說明芝麻sicol1基因具有開花活性，可以促進(jìn)植物開花。

實(shí)施例7：芝麻開花基因sicol1促進(jìn)擬南芥開花——轉(zhuǎn)化系ⅲ

從實(shí)施例3獲得的t2代陽性擬南芥轉(zhuǎn)化植株與親本(野生型col-0)在擬南芥生長間中一起培育(16小時(shí)光照/8小時(shí)黑暗的光周期，光強(qiáng)為120-μmol/m²·s)，直至轉(zhuǎn)基因植株開花。如圖6所示，其中左圖為轉(zhuǎn)基因植株，右圖為對照。圖6顯示芝麻開花基因sicol1轉(zhuǎn)化擬南芥，導(dǎo)致擬南芥對光周期敏感度增強(qiáng)，開花提前1周。說明芝麻sicol1基因具有開花活性，可以促進(jìn)植物開花。

實(shí)施例8：芝麻開花基因sicol2促進(jìn)擬南芥開花——轉(zhuǎn)化系ⅰ

從實(shí)施例3獲得的t2代陽性擬南芥轉(zhuǎn)化植株與親本(野生型col-0)在擬南芥生長間中一起培育(16小時(shí)光照/8小時(shí)黑暗的光周期，光強(qiáng)為120-μmol/m²·s)，直至轉(zhuǎn)基因植株開花。如圖7所示，其中左圖為轉(zhuǎn)基因植株，右圖為對照。圖7顯示芝麻開花基因sicol2轉(zhuǎn)化擬南芥，導(dǎo)致擬南芥對光周期敏感度增強(qiáng)，開花提前1周。說明芝麻sicol2基因具有開花活性，可以促進(jìn)植物開花。

實(shí)施例9：芝麻開花基因sicol2促進(jìn)擬南芥開花——轉(zhuǎn)化系ⅱ

從實(shí)施例3獲得的t2代陽性擬南芥轉(zhuǎn)化植株與親本(野生型col-0)在擬南芥生長間中一起培育(16小時(shí)光照/8小時(shí)黑暗的光周期，光強(qiáng)為120-μmol/m²·s)，直至轉(zhuǎn)基因植株開花。如圖8所示，其中左圖為轉(zhuǎn)基因植株，右圖為對照。圖8顯示芝麻開花基因sicol2轉(zhuǎn)化擬南芥，導(dǎo)致擬南芥對光周期敏感度增強(qiáng)，開花提前1周。說明芝麻sicol2基因具有開花活性，可以促進(jìn)植物開花。

實(shí)施例10：芝麻開花基因sicol2促進(jìn)擬南芥開花——轉(zhuǎn)化系ⅲ

從實(shí)施例3獲得的t2代陽性擬南芥轉(zhuǎn)化植株與親本(野生型col-0)在擬南芥生長間中一起培育(16小時(shí)光照/8小時(shí)黑暗的光周期，光強(qiáng)為120-μmol/m²·s)，直至轉(zhuǎn)基因植株開花。如圖9所示，其中左圖為轉(zhuǎn)基因植株，右圖為對照。圖9顯示芝麻開花基因sicol2轉(zhuǎn)化擬南芥，導(dǎo)致擬南芥對光周期敏感度增強(qiáng)，開花提前1周。說明芝麻sicol2基因具有開花活性，可以促進(jìn)植物開花。

實(shí)施例11：芝麻開花基因sicol1和sicol2在芝麻葉片中表達(dá)量較高

以actin7基因作為內(nèi)參基因，通過實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測芝麻開花基因sicol1和sicol2在芝麻品種“中芝13”的根、莖、葉、蒴果和種子中的表達(dá)。如圖10所示，sicol1和sicol2均在芝麻葉片中高表達(dá)。擴(kuò)增actin7的正向引物和反向引物序列分別為：ggaaccaccactgaggacaat(seqidno.13所示)和acaggagctagaaacagcaaaga(seqidno.14所示)；擴(kuò)增sicol1的正向引物和反向引物序列分別為：aagcaacgacgataatggga(seqidno.15所示)和ctgacacgaattgtagtaatcaagg(seqidno.16所示)；擴(kuò)增sicol2的正向引物和反向引物序列分別為：ctccaatccaggtgccgact(seqidno.17所示)和aacatctgctccacttcgact(seqidno.18所示)。

實(shí)施例12：芝麻開花基因sicol1和sicol2在現(xiàn)蕾前的芝麻葉片中表達(dá)量最高

利用實(shí)施例11中的引物，以actin7基因作為內(nèi)參基因，通過實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測芝麻開花基因sicol1和sicol2在芝麻品種“中芝13”不同時(shí)期葉片中的表達(dá)情況，包括播種后14天、21天、28天、30天、33天、36天、38天、40天和50天的芝麻植株。其中，30天和40天分別為芝麻植株出現(xiàn)花蕾和開花的時(shí)期。如圖11所示，芝麻sicol1和sicol2基因在播種后28天表達(dá)量最高，即現(xiàn)蕾前表達(dá)量最高；表明sicol1和sicol2基因可能具有決定芝麻開花的功能。

實(shí)施例13：芝麻開花基因sicol1和sicol2在長、短光照條件下節(jié)律性表達(dá)

利用實(shí)施例11中的引物，以actin7基因作為內(nèi)參基因，通過實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測芝麻開花基因sicol1和sicol2在長、短光照處理?xiàng)l件下的芝麻品種“中芝13”葉片中的表達(dá)水平。短光照處理?xiàng)l件為播種后14天開始每天從8點(diǎn)到17點(diǎn)光照處理9小時(shí)，直至開花。長光照處理?xiàng)l件為播種后14天每天從5點(diǎn)到19點(diǎn)光照處理14個(gè)小時(shí)。如圖12所示，芝麻sicol1和sicol2基因在長、短光照條件下，均在4點(diǎn)表達(dá)量最高；芝麻sicol1和sicol2基因在長、短光照條件下，分別在0點(diǎn)和16點(diǎn)表達(dá)量最低；表明sicol1和sicol2基因受到光周期調(diào)控，呈現(xiàn)晝夜節(jié)律表達(dá)。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)該視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。

序列表

<110>中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所

<120>芝麻sicol1和sicol2基因及其應(yīng)用

<160>8

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>1065

<212>dna

<213>芝麻(sesamumindicuml.)

<400>1

atgctgaagctccaaaacagccccatgaaacacggcggcgccgccaggagcacctggccc60

cgtggctgcgacacttgccgctcagctgcatccgccgtctactgccgcacgcacttggcc120

tacctctgcaccagctgcgatacccgcatacacgccgacaaccacttatctccccgccac180

gagcgcgtatgggtctgcgaggcctgcgaaagctctcccgcggccctcatatgcaaagcc240

gattcagcttccctctgctccgcctgcgacgccgacatccactcggccaaccctctcgcc300

cgccgccaccaccgcgtccccatcctgccgattccaggtactctctacggcccctcagcc360

gccaacgctgacggagtcatagtccgccggtcgatggatgaagaagctgaggatgaggat420

gaggatgaagcagcttcatggctattatacaaccctacaatcaagaacggcgatgaagac480

caaagcaacgacgataatgggagggcgtcgtttggcggagaggcggatgagtatttagcc540

cttgattactacaattcgtgtcagaataatcagttcaacaatggatacagtattaatcag600

cagcaaccatgtcagagttttcctcaacgtagctactgcagcgacagtgttgtcccaatc660

ccacctgcatacagttatcctgcttcaatttctcaaactgttgcgcttccattaatggat720

catgtcgggggggttccggaaccagcaacaagtgaagtttcagtctcccaaacacgacct780

ccaaaaggaaccatcgaactcttctcaggccctcctgtccaaattccaacacagctttct840

ccaacagacagagaggccagagtgttgagatatagagagaagaagaagaaccggaagttt900

gagaagacaatcaggtatgcgtcgagaaaggcttatgcagaaaccaggccgaggatcaaa960

ggtcgatttgccaagagatcaggagatgcagaagccgaagtggatcagctgttctctaca1020

tctctagtaagcgagagcgcgttcagcgtcgtcccgtccttctga1065

<210>2

<211>999

<212>dna

<213>芝麻(sesamumindicuml.)

<400>2

atgctgaaagtcgaaaacagcgccggaaacgaccccggaggcgccagatacaactggctt60

tcgtcccgccgccagccgttctggctgtgcgaagcctgtgaacgcgctccggcagccttc120

ctatgcaaggctgacgccgcgtccctctgtgcggcctgtgattctgatatccactccgcc180

aaccctctcgcccgccgccaccatcgcgtacccattccgcaggttcctaatacactctac240

ggcccttctgctcctggattaataactgggccggcggcaggagatgcagaggaagaattc300

ttgactcaggaagctgatgagactgttgatggagaagatgaagatgaagcagcttcatgg360

ctgctgctgaatcctgtcaagaatggcgacaaccaaagccatgacaacgggccgacggca420

gcgctctttggtggaacgatggatgagtatttggaccttgatgactacaattcatgccag480

aatagtcagttcaatgagcacttcaccaaccagcagcaacattacagcgacagcgttgtg540

ccaacacagtaccagaaagtaaaggattgttttcaattgggcttggagtatgaggtctcc600

aacactgcatacagctatcctaattcaatgtctcacaatgtttccctatcaccaatggat660

gttggagtagttccagaatcaacaatgactgaaatttccatctcccaccaacggcccccg720

aaagggacgatcgatcttttctcaggccctccaatccaggtgccgactcagctgactcca780

atggacagagaagcccgagttctgaggtacagagagaagaagaagacgaggaagttcgag840

aagacaataaggtacgcatcaagaaaagcttatgcagaaaccagaccccggatcaaaggt900

cgattcgccaagagaaaagatgttggagtcgaagtggagcagatgtttgctgcacctcta960

atgggagaaagtgaatatggaattgttccatcattctga999

<210>3

<211>354

<212>prt

<213>芝麻(sesamumindicuml.)

<400>3

metleulysleuglnasnserprometlyshisglyglyalaalaarg

151015

serthrtrpproargglycysaspthrcysargseralaalaserala

202530

valtyrcysargthrhisleualatyrleucysthrsercysaspthr

354045

argilehisalaaspasnhisleuserproarghisgluargvaltrp

505560

valcysglualacysgluserserproalaalaleuilecyslysala

65707580

aspseralaserleucysseralacysaspalaaspilehisserala

859095

asnproleualaargarghishisargvalproileleuproilepro

100105110

glythrleutyrglyproseralaalaasnalaaspglyvalileval

115120125

argargsermetaspgluglualagluaspgluaspgluaspgluala

130135140

alasertrpleuleutyrasnprothrilelysasnglyaspgluasp

145150155160

glnserasnaspaspasnglyargalaserpheglyglyglualaasp

165170175

glutyrleualaleuasptyrtyrasnsercysglnasnasnglnphe

180185190

asnasnglytyrserileasnglnglnglnprocysglnserphepro

195200205

glnargsertyrcysseraspservalvalproileproproalatyr

210215220

sertyrproalaserileserglnthrvalalaleuproleumetasp

225230235240

hisvalglyglyvalprogluproalathrsergluvalservalser

245250255

glnthrargproprolysglythrilegluleupheserglypropro

260265270

valglnileprothrglnleuserprothraspargglualaargval

275280285

leuargtyrargglulyslyslysasnarglyspheglulysthrile

290295300

argtyralaserarglysalatyralagluthrargproargilelys

305310315320

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325330335

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