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HPV檢測中黏性樣本DNA提取方法與流程

文檔序號:11224175閱讀:2196來源:國知局

本發(fā)明涉及基因檢測領(lǐng)域,具體涉及一種hpv檢測中黏性樣本dna提取方法。



背景技術(shù):

人乳頭瘤病毒(hpv)可以通過多種途徑感染生殖道,從而導(dǎo)致尖銳濕疣以及宮頸病變,甚至可能引起宮頸癌的發(fā)生,從高危型hpv的持續(xù)感染到一般的宮頸癌前病變并最終發(fā)展為宮頸癌大約需要5~10年。因此,有針對性地進(jìn)行hpv的分型檢測對于宮頸癌的早期診斷和治療具有重要意義。

目前大都常用的基因芯片技術(shù)在檢測人乳頭瘤病毒(hpv)時(shí),會遇到樣本中有大量宮頸黏液,對提取dna操作時(shí)影響甚大。

在吸取樣本時(shí),如果遇到大量宮頸黏液,離心后沒辦法得到底部的沉淀,可能抑制擴(kuò)增。同時(shí),去上清時(shí)吸走黏液可能帶走大部分宮頸脫落細(xì)胞,使結(jié)果呈假陰性。此外,如果為了破壞那些黏液加入過量細(xì)胞裂解液的話,很大可能會影響dna模板含量,影響后續(xù)擴(kuò)增、雜交。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

為解決現(xiàn)有技術(shù)的hpv檢測過程中樣本黏液含量過高導(dǎo)致dna提取困難的技術(shù)問題,本發(fā)明提供一種解決上述問題的hpv檢測中黏性樣本dna提取方法。

一種hpv檢測中黏性樣本dna提取方法,運(yùn)用所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法需使用以下組分:

離心管、naoh溶液、生理鹽水、細(xì)胞裂解液。

所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法包括以下步驟:

步驟一:吸取1ml黏性樣本至所述離心管中;

步驟二:向所述離心管中加入100μl的所述naoh溶液,振蕩混勻后,消化處理一定時(shí)間;

步驟三:將所述離心管于13000rpm下離心10min后,去除上清液,保留細(xì)胞沉淀;

步驟四:向所述離心管中加入1ml所述生理鹽水,反復(fù)吹打混勻;

步驟五:重復(fù)所述步驟三和所述步驟四;

步驟六:再次重復(fù)所述步驟三,然后向所述離心管中加入50μl細(xì)胞裂解液,懸浮所述細(xì)胞沉淀;

步驟七:將所述離心管沸水浴加熱10min;

步驟八:將所述離心管于13000rpm下離心10min后,保留上清液作為檢測樣本。

在本發(fā)明提供的hpv檢測中黏性樣本dna提取方法的一種較佳實(shí)施例中,所述naoh溶液為1.75mol/l的naoh溶液。

在本發(fā)明提供的hpv檢測中黏性樣本dna提取方法的一種較佳實(shí)施例中,所述步驟二中消化處理10min。

相較于現(xiàn)有技術(shù),本發(fā)明提供的所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法具有以下有益效果:

一、所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法采用naoh溶液對宮頸黏液進(jìn)行處理。宮頸黏液的主要成分是糖蛋白,一定濃度的naoh溶液能有效的消化這部分蛋白質(zhì),使其轉(zhuǎn)化為稀液,離心時(shí)上清液與底部沉淀正常分離,細(xì)胞裂解液也以正常量添加。保證了后續(xù)的擴(kuò)增、雜交等操作的正常進(jìn)行,以及最終檢測結(jié)果的準(zhǔn)確無誤。

二、所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法在消化處理后不使用酸性試劑中和處理,而利用生理鹽水進(jìn)行多次洗滌,使所述細(xì)胞沉淀處于趨向于中性的弱堿性環(huán)境。此環(huán)境中的dna性狀更為穩(wěn)定,后續(xù)的檢測操作也更為方便。

三、所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法使得對黏性樣本的處理具有了一套通用的處理方法,無需根據(jù)樣本情況調(diào)整處理流程,提取效率得到明顯改善,保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果,降低了復(fù)查率。

具體實(shí)施方式

下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述,顯然,所描述的實(shí)施例僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例,而不是全部的實(shí)施例。

運(yùn)用所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法需使用以下組分:1.5ml的離心管、1.75mol/l的naoh溶液、生理鹽水、細(xì)胞裂解液。

所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法包括以下步驟:

步驟一:吸取1ml黏性樣本至所述離心管中;

步驟二:向所述離心管中加入100μl的所述naoh溶液,振蕩混勻后,消化處理10min;

步驟三:將所述離心管于13000rpm下離心10min后,去除上清液,保留細(xì)胞沉淀;

步驟四:向所述離心管中加入1ml所述生理鹽水,反復(fù)吹打混勻;

步驟五:重復(fù)所述步驟三和所述步驟四;

步驟六:再次重復(fù)所述步驟三,然后向所述離心管中加入50μl細(xì)胞裂解液,懸浮所述細(xì)胞沉淀;

步驟七:將所述離心管沸水浴加熱10min;

步驟八:將所述離心管于13000rpm下離心10min后,保留上清液作為檢測樣本。

相較于現(xiàn)有技術(shù),本發(fā)明提供的所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法具有以下有益效果:

一、所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法采用naoh溶液對宮頸黏液進(jìn)行處理。宮頸黏液的主要成分是糖蛋白,一定濃度的naoh溶液能有效的消化這部分蛋白質(zhì),使其轉(zhuǎn)化為稀液,離心時(shí)上清液與底部沉淀可正常分離,細(xì)胞裂解液也以正常量添加。保證了后續(xù)的擴(kuò)增、雜交等操作的正常進(jìn)行,以及最終檢測結(jié)果的準(zhǔn)確無誤。

二、所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法在消化處理后不使用酸性試劑中和處理,而利用生理鹽水進(jìn)行多次洗滌,使所述細(xì)胞沉淀處于趨向于中性的弱堿性環(huán)境。此環(huán)境中的dna性狀更為穩(wěn)定,后續(xù)的檢測操作也更為方便。

三、所述hpv檢測中黏性樣本dna提取方法使得對黏性樣本的處理具有了一套通用的處理方法,無需根據(jù)樣本情況調(diào)整處理流程,提取效率得到明顯改善,保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果,降低了復(fù)查率。

以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例,并非因此限制本發(fā)明的專利范圍,凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換,或直接或間接運(yùn)用在其它相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域,均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍之內(nèi)。



技術(shù)特征:

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種HPV檢測中黏性樣本DNA提取方法。所述HPV檢測中黏性樣本DNA提取方法包括NaOH消化處理、生理鹽水洗滌、懸浮沉淀、水浴加熱等步驟。本發(fā)明提供的所述HPV檢測中黏性樣本DNA提取方法解決了現(xiàn)有技術(shù)的HPV檢測過程中樣本黏液含量過高導(dǎo)致DNA提取困難的技術(shù)問題。

技術(shù)研發(fā)人員:劉岱璿;唐笑;田倩;何媛;周梅華;代冰;彭興旺
受保護(hù)的技術(shù)使用者:長沙金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
技術(shù)研發(fā)日:2017.06.21
技術(shù)公布日:2017.09.08
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