本發(fā)明涉及生物科技的領域，具體涉及一種改進的細菌活菌計數方法。
背景技術：
現常用活菌計數法，是根據每個活的細菌能長出一個菌落的原理設計。取一定容量菌懸液，作一系列倍比稀釋，然后將定量稀釋液進行平板培養(yǎng)，根據培養(yǎng)出的菌落數，可算出培養(yǎng)物中的活菌數。此法靈敏度高，是一種檢測污染活菌數的方法，也是目前國際上許多國家所采用的方法。
在實際操作過程中，存在以下有待該進的方面：
1.試管長度較長﹑體積較大，占用滅菌鍋的空間也大。試管具有圓形的底部，因此在超凈臺操作時必須使用試管架，占用了超凈臺的內部空間，如果試管較多而試管架又較少時，就必須傾斜放置，操作比較麻煩。
2.一個平皿只能對樣品一個濃度梯度進行一次測樣，比如一個樣品在進行3種濃度梯度3個重復樣進行檢測時，必須使用9塊平皿。
3.菌懸液取樣量為0.1ml-0.2ml，0.1ml-0.2ml菌懸液含菌量在30-300之間才有計數的意義，也就是說每個重復樣平皿上要有30-300個單菌落，計數速度比較慢，雖然有先進的計數儀器但是推廣起來也有一定的難度。
4.菌懸液取樣量為0.1ml-0.2ml，0.1ml-0.2ml菌懸液含菌量在30-300之間，在操作過程中細菌難以完全分散，較易出現細菌分布不均勻從而出現連片或連線的情況，給計數帶來不便。
技術實現要素：
本發(fā)明主要解決的技術問題是提供一種改進的細菌活菌計數方法，使用青霉素瓶代替試管，減少了滅菌鍋的占用空間，同時在一塊平皿上可以實現對一個樣品在進行3種濃度梯度3個重復樣進行檢測，而不必使用9塊平皿，極大的提高細菌活菌計數效率，該方法是在原有平板涂布基礎改進而來，具有操作方便、節(jié)省實驗材料、重復數多、重復性好、效率高等優(yōu)點。
為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的一個技術方案是：提供了一種改進的細菌活菌計數方法，包括以下具體步驟：
a、分裝青霉素瓶無菌液體，先將空的青霉素瓶和瓶蓋經過滅菌處理后再經過40℃-120℃烘干至完全干燥后冷卻至室溫，然后用5ml微量移樣器依次向青霉素瓶中加入經過121℃×30min的滅菌處理后冷卻至室溫的4.5ml無菌生理鹽水，無菌操作取出瓶蓋蓋上，放置在超凈工作臺中備用；
b、震蕩稀釋，使用漩渦振蕩器對加有0.5ml待稀釋菌液的總裝量為5ml的青霉素瓶進行震蕩稀釋；
c、滴入細菌計數平板，用安裝上7號金屬針頭的注射器垂直滴在相應的細菌計數平板上，即，在直徑為9cm的平皿中滴入1-100滴；
d、靜置，上述操作完成后將平皿靜置一段時間；
e、計數，將靜置完成后的平皿置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，然后取出直接計數即可。
在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述的青霉素瓶和瓶蓋要配套且經過121℃×30min的滅菌處理。
在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述的震蕩稀釋的時間為15s-90s。
在本發(fā)明一個較佳實施例中，所述的平皿靜置的時間為5min-360min。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的改進的細菌活菌計數方法，使用青霉素瓶代替試管，減少了滅菌鍋的占用空間，同時在一塊平皿上可以實現對一個樣品在進行3種濃度梯度3個重復樣進行檢測，而不必使用9塊平皿，極大的提高細菌活菌計數效率，該方法是在原有平板涂布基礎改進而來，具有操作方便、節(jié)省實驗材料、重復數多、重復性好、效率高等優(yōu)點。
附圖說明
為了更清楚地說明本發(fā)明實施例中的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其它的附圖，其中：
圖1是本發(fā)明改進的細菌活菌計數方法的一較佳實施例的結構流程圖。
具體實施方式
下面將對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發(fā)明的一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
如圖1所示，本發(fā)明實施例包括：
一種改進的細菌活菌計數方法，包括以下具體步驟：
a、分裝青霉素瓶無菌液體，先將空的青霉素瓶和瓶蓋經過滅菌處理后再經過40℃-120℃烘干至完全干燥后冷卻至室溫，然后用5ml微量移樣器依次向青霉素瓶中加入經過121℃×30min的滅菌處理后冷卻至室溫的4.5ml無菌生理鹽水，無菌操作取出瓶蓋蓋上，放置在超凈工作臺中備用；
b、震蕩稀釋，使用漩渦振蕩器對加有0.5ml待稀釋菌液的總裝量為5ml的青霉素瓶進行震蕩稀釋；
c、滴入細菌計數平板，用安裝上7號金屬針頭的注射器垂直滴在相應的細菌計數平板上，即，在直徑為9cm的平皿中滴入1-100滴；
d、靜置，上述操作完成后將平皿靜置一段時間；
e、計數，將靜置完成后的平皿置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，然后取出直接計數即可。
上述中，所述的青霉素瓶和瓶蓋要配套且經過121℃×30min的滅菌處理，使用青霉素瓶代替試管，減少了滅菌鍋的占用空間，同時由于青霉素瓶的底部是水平的，可直接放置在超凈工作臺內，節(jié)省空間。
進一步的，所述的震蕩稀釋的時間為15s-90s；所述的平皿靜置的時間為5min-360min。
本發(fā)明使用安裝上7號金屬針頭注射器垂直滴在相應的細菌計數平板上，在直徑為9cm的平皿中可滴入1-100滴，在一塊平皿上可以實現對一個樣品在進行3種濃度梯度3個重復樣進行檢測，而不必使用9塊平皿。
本發(fā)明使用7號金屬針頭代替微量移樣器，經過上萬次的滴定試驗證明，7號金屬針頭自然滴落液體的體積為0.01ml，相應的其中含有3-30個活菌即可滿足細菌計數的要求。
本發(fā)明使用7號金屬針頭代替微量移樣器，相應的其中含有3-30個活菌即可滿足細菌計數的要求，0.01ml液體分布的面積約為0.5-2cm2，細菌分布均勻，難以出現細菌連片或連線生長的現象。
實施例：（以乳酸菌發(fā)酵液液體細菌計數為例）
1.將乳酸菌發(fā)酵液液體充分震蕩均勻；
2.用1ml微量移液器吸入0.5ml發(fā)酵液放入含4.5ml生理鹽水的青霉素瓶中，記為10-1次方；
3.將青霉素瓶置漩渦振蕩器中震蕩25s；
4.用1ml微量移液器吸入0.5ml10-1次方的菌懸液放入含4.5ml生理鹽水的青霉素瓶中，記為10-2次方；
5.將青霉素瓶置漩渦振蕩器中震蕩25s；
6.依次類推，分別得到10倍稀釋的菌懸液；
7.選取合適梯度的菌懸液，用安裝有7號金屬針頭的注射器垂直滴入乳酸菌固體平皿中，每個濃度梯度滴3滴，一共3個濃度梯度共9滴；
8.將乳酸菌固體平皿靜置30min后放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)后計數。
綜上所述，本發(fā)明的改進的細菌活菌計數方法，使用青霉素瓶代替試管，減少了滅菌鍋的占用空間，同時在一塊平皿上可以實現對一個樣品在進行3種濃度梯度3個重復樣進行檢測，而不必使用9塊平皿，極大的提高細菌活菌計數效率，該方法是在原有平板涂布基礎改進而來，具有操作方便、節(jié)省實驗材料、重復數多、重復性好、效率高等優(yōu)點。
以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內容所作的等效結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其它相關的技術領域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內。