發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明一般而言涉及用于在體內(nèi)、體外和原位檢測染色體畸變的組合物和方法。本發(fā)明還涉及用于雜交、尤其是用于原位雜交(ish)的組合物，所述組合物包含用于檢測特定核苷酸序列(包括正常序列和與染色體畸變和/或感染性疾病相關(guān)的序列)的分子探針和包含足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的含水組合物。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及用于例如細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域的分子探針，并涉及包含這種分子探針的試劑盒。在其它實施方案中，本發(fā)明涉及使用這種分子探針來檢測染色體畸變或感染性疾病的方法，使用這種分子探針來診斷遺傳缺陷或疾病狀態(tài)的方法，以及使用這種分子探針來提供預(yù)后的方法。背景和描述許多病理性狀態(tài)，先天性缺陷和后天性疾病，都與染色體畸變有關(guān)，例如擴(kuò)增、非整倍性、潛在斷點(diǎn)、插入、倒位、缺失、重復(fù)、重排和易位。此外，致病性感染通常會導(dǎo)致受感染生物體內(nèi)存在感染性細(xì)菌、病毒或真菌的核酸序列。通過基因組dna、染色體、染色體片段或基因的體內(nèi)、體外或原位分析，確定與先天性缺陷、后天性疾病或感染性病原體相關(guān)的核苷酸序列的存在與否，可有助于臨床醫(yī)生作出合適診斷。例如，脆性x精神發(fā)育遲緩-1(fragilexmentalretardation-1，fmr1)基因的mrna5′utr(非翻譯區(qū))中的cgg三核苷酸重復(fù)序列的擴(kuò)增允許臨床醫(yī)生診斷脆性x綜合征。這種擴(kuò)增導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄沉默。然而，其它機(jī)制，例如fmr1的缺失和突變，也可能會導(dǎo)致脆性x綜合征。其結(jié)果，基因產(chǎn)物fmrp不存在或數(shù)量減少而導(dǎo)致疾病，與擴(kuò)增所導(dǎo)致的沉默和基因缺失是一樣。由數(shù)目異常所導(dǎo)致的疾病的一個實例是唐氏綜合征(downsyndrome)，也稱為三性體21(唐氏綜合征個體具有3拷貝的染色體21，而不是2拷貝)。特納氏綜合征(turnersyndrome)是單性體的一個實例，其中個體出生時就只有一條性染色體x。其它實例包括由染色體4部分缺失所致的wolf-hirschhorn綜合征和也稱為末端11q缺失癥的jacobsen綜合征。某些綜合征，例如charcot-marie-tooth病1a型可因例如染色體17上編碼周圍髓鞘質(zhì)蛋白22(pmp22)的基因重復(fù)而導(dǎo)致。在其它綜合征例如羅伯遜易位(robertsoniantranslocation)中，一條完整染色體與另一條在著絲粒處連接。羅伯遜易位僅發(fā)生在染色體13、14、15、21和22，羅伯遜易位的雜合載體的后代可能例如遺傳不平衡的三性體21，而引起唐氏綜合征。通過基因組dna、染色體、染色體片段或基因的體內(nèi)、體外或原位分析，確定與先天性缺陷、后天性疾病或感染性病原體相關(guān)的核苷酸序列的存在與否，對于臨床醫(yī)生在已經(jīng)診斷出疾病狀態(tài)之后選擇合適治療進(jìn)程而言，也是很有價值的。例如，her2基因已擴(kuò)增的乳癌患者可從herceptintm(曲妥單抗，能識別her2蛋白的單克隆抗體)治療中受益。在另一個實例中，臨床醫(yī)生可選擇給予egfr基因已擴(kuò)增的結(jié)直腸癌患者(西妥昔單抗)或vectibixtm(panitumumab)(特異性識別表皮生長因子受體(egfr)的治療性單克隆抗體)。通過基因組dna、染色體、染色體片段或基因的體內(nèi)、體外或原位分析，確定與先天性缺陷、后天性疾病或感染性病原體相關(guān)的核苷酸序列的存在與否，也有助于臨床醫(yī)生提供預(yù)后。因此，top2a基因已擴(kuò)增或缺失的乳癌患者比那些未擴(kuò)增或缺失的患者而言，預(yù)后更差。對核苷酸序列存在與否的檢測通常需要通過雜交、或需要通過相對鏈上堿基間的氫鍵結(jié)合(a+t或g+c)的核苷酸雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定化，來識別序列。在雜交的基礎(chǔ)實例中，核酸片段或序列與互補(bǔ)核酸片段或序列結(jié)合。通過雜交的檢測通常涉及使用經(jīng)設(shè)計可與核酸靶標(biāo)例如dna或rna序列結(jié)合或“雜交”的核酸探針。分子生物學(xué)領(lǐng)域已經(jīng)有眾所周知的技術(shù)，用于檢測染色體畸變。然而，迄今為止，還沒有允許廣泛而常規(guī)檢測染色體畸變的快速、方便、便宜和用戶友好的可用的測試。核酸雜交測定的效率和準(zhǔn)確度主要取決于以下3個因素中的至少一個：a)變性(即例如兩條核酸鏈的分離)條件，b)復(fù)性(即例如兩條核酸鏈重新退火)條件，和c)雜交后的洗滌條件。傳統(tǒng)的雜交實驗，例如ish測定，使用含甲酰胺的緩沖液，以使雙鏈核酸鏈變性。甲酰胺是一種溶劑，它通過置換松散而均勻結(jié)合的水合分子而對例如dna、rna及其類似物的螺旋狀態(tài)具有去穩(wěn)定效應(yīng)。此外，甲酰胺通過堿基watson-crick結(jié)合位點(diǎn)的‘甲酰胺化’而使dna、rna及其類似物的卷曲狀態(tài)穩(wěn)定。變性步驟之后是兩條核酸鏈互補(bǔ)鏈的重新退火，這是使用雜交的測定中最耗時間的。例如，在傳統(tǒng)的熒光原位雜交(fish)方案中，重新退火需要14-24小時，并且甚至至多需要72小時。傳統(tǒng)雜交時間的實例見圖1和圖2。迄今為止，認(rèn)為使用干擾核酸堿基watson-crick結(jié)合位點(diǎn)并因而破壞互補(bǔ)核酸堿基間氫鍵的離液劑，例如甲酰胺(其它離液劑包括胍離子(guanidiniumhydrogen)和尿素)，是降低互補(bǔ)鏈的解鏈溫度(tm)的唯一方式，如同變性步驟中所必需的一樣。然而，盡管使用離液劑降低了tm，這些試劑看來與在不含離液劑的含水溶液中進(jìn)行的雜交相比，明顯延長了雜交時間。甲酰胺在長時間處理中具有缺點(diǎn)。甲酰胺是有毒有害物質(zhì)，其使用和廢料都受到嚴(yán)格的法規(guī)管制。此外，使用高濃度甲酰胺看來會導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)、核結(jié)構(gòu)和/或染色體結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)上的破壞。本文所述的含水組合物允許在比現(xiàn)有技術(shù)具有若干潛在優(yōu)勢的條件下進(jìn)行核酸序列檢測，所述優(yōu)勢例如更快的雜交時間，更低的雜交溫度和更少毒性的雜交組合物。發(fā)明概述本發(fā)明提供用于檢測染色體畸變相關(guān)的核酸序列的組合物和方法。本發(fā)明的組合物和方法可用于使用堿基配對而雜交或結(jié)合的任何雜交技術(shù)和任何分子系統(tǒng)，例如dna、rna、pna、lna及其合成和天然類似物。本發(fā)明的組合物和方法允許用于染色體畸變相關(guān)核酸序列的高靈敏度的、技術(shù)簡單的、靈活可靠和/或快速的檢測。在一個實施方案中，本發(fā)明通過比用現(xiàn)有技術(shù)方法程度大得多地改變雜交反應(yīng)的溫度，提供定制雜交時間的能力。本發(fā)明的雜交組合物和方法保持了生物樣品的形態(tài)學(xué)，提供了無毒雜交組合物和程序，提供了低蒸發(fā)雜交技術(shù)，降低和/或取消了對封閉非特異性結(jié)合的需求，和/或允許使用多相探針，而無需封閉、去除或用其它方法破壞例如生物樣品中的重復(fù)序列的結(jié)合。在一個實施方案中，本發(fā)明提供的組合物包含檢測染色體畸變相關(guān)核苷酸序列的第一分子探針，以及包含足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的含水組合物。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供包含這種組合物的試劑盒。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供包含第一組合物和第二組合物的試劑盒，其中所述第一組合物包含檢測染色體畸變相關(guān)核苷酸序列的第一分子探針，第二組合物是包含足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的含水組合物。本文所提供的組合物和試劑盒可用于例如基因組dna、染色體、染色體片段和基因等的核酸的體內(nèi)、體外和/或原位分析，其使用例如以下技術(shù)：pcr、原位pcr、rna印跡、dna印跡、流式細(xì)胞術(shù)、放射自顯影、熒光顯微鏡術(shù)、化學(xué)發(fā)光、免疫組織化學(xué)、虛擬核型(virtualkaryotype)、基因測定、dna微陣列(例如陣列比較基因組雜交(陣列cgh))、基因表達(dá)譜、基因id、疊瓦陣列(tilingarray)、凝膠電泳、毛細(xì)管電泳和原位雜交例如fish、sish、cish。在一個實施方案中，所述組合物和試劑盒可用于核酸的體內(nèi)、體外或原位分析，用于分析正常狀態(tài)或疾病(例如先天性疾病、癌癥或感染)相關(guān)的染色體畸變，例如非整倍性、潛在斷點(diǎn)、插入、倒位、缺失、重復(fù)、基因擴(kuò)增、重排和易位。本文所提供的組合物和試劑盒也可用于檢測rna表達(dá)水平例如mrna及其互補(bǔ)dna(cdna)的變化。本發(fā)明的組合物和試劑盒可用于體外、體內(nèi)或原位樣品(包括例如哺乳動物樣品例如人類樣品)，例如骨髓涂片、血涂片、石蠟包埋的組織制備物、酶解的組織樣品、骨髓、羊水細(xì)胞、細(xì)胞離心(cytospin)制備物、印跡(imprint)等。其它用途包括使用fret和其它猝滅技術(shù)的基于溶液的雜交測定；用鏈霉抗生物素綴合物檢測生物素標(biāo)記，例如使用原位dakogenpointtm擴(kuò)增的檢測系統(tǒng)或tyramide信號放大(tsa)系統(tǒng)(k0620，dako)；或者用金屬(例如金和銀)直接標(biāo)記。在一個實施方案中，本發(fā)明提供檢測染色體dna中的靶標(biāo)的方法，所述方法包括：-提供與染色體dna中的靶標(biāo)雜交的至少一種分子探針，-提供染色體dna，-提供包含足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑不是二甲亞砜(dmso)，-將所述分子探針、所述染色體dna和所述雜交組合物混合在一起，其時間至少足以使所述分子探針與所述靶標(biāo)雜交，和-檢測所述靶標(biāo)。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供確定核酸序列中染色體畸變存在的方法，所述方法包括：-提供至少一種分子探針，-提供所述核酸序列，-提供包含足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑不是二甲亞砜(dmso)，-將所述分子探針、所述核酸序列和所述雜交組合物混合在一起，其時間至少足以使所述分子探針與所述核酸序列雜交，和-檢測所述至少一種分子探針，-并確定染色體畸變的存在。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供確定核酸序列中染色體畸變存在的方法，所述方法包括：-提供所述核酸序列，-提供包含至少一種分子探針和足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的雜交組合物，-將所述雜交組合物用于所述核酸，其時間至少足以使所述分子探針與核酸序列雜交，和-檢測所述至少一種分子探針，-并確定染色體畸變的存在，其中所述極性非質(zhì)子溶劑不是二甲亞砜(dmso)。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供確定核酸序列中染色體畸變存在的方法，所述方法包括：-提供所述核酸序列，-將權(quán)利要求1-50中任一項的組合物用于所述核酸序列，其時間至少足以使所述分子探針與核酸序列雜交，和-確定染色體畸變是否存在于所述核酸序列中。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供診斷染色體畸變相關(guān)的先天性遺傳疾病、癌癥或感染的方法，所述方法包括提供來自受試者的組織樣品，其中所述組織樣品包含核酸序列，確定染色體畸變是否存在于所述核酸序列中，和如果染色體畸變存在于所述組織樣品中則診斷所述先天性遺傳疾病、癌癥或感染。所述樣品可以是哺乳動物樣品。在一個實施方案中，所述樣品是人類樣品。本發(fā)明的雜交組合物和方法可例如不用甲酰胺或減少對甲酰胺的依賴性。例如，本發(fā)明的方法和組合物可降低雜交的能障，而不用甲酰胺。降低能障可減少雜交所需時間和/或降低雜交所需溫度。例如，本發(fā)明可允許在較低溫度(包括室溫)雜交，或可允許在較高溫度快速雜交。因此，在某些方面，本發(fā)明克服了雜交測定中的主要耗時步驟。本發(fā)明一方面是用于雜交的組合物或溶液。用于本發(fā)明的組合物包括含有至少一種核酸序列和足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的含水組合物。變性雙鏈核苷酸序列的有效量是能夠雜交的量。例如，用于測定極性非質(zhì)子溶劑的量是否對雜交有效的一個方式就是，確定所述極性非質(zhì)子溶劑，當(dāng)用于本文所述的雜交方法和組合物例如實施例1時，是否能產(chǎn)生可檢測信號和/或擴(kuò)增的核酸產(chǎn)物。極性非質(zhì)子溶劑有效量的非限制性實例包括例如約1％至約95％(v/v)。在某些實施方案中，極性非質(zhì)子溶劑的濃度為5％至60％(v/v)。在其它實施方案中，極性非質(zhì)子溶劑的濃度為10％至60％(v/v)。在再一些實施方案中，極性非質(zhì)子溶劑的濃度為30％至50％(v/v)。1％至5％、5％至10％、10％、10％至20％、20％至30％、30％至40％、40％至50％、或50％至60％(v/v)的濃度也是合適的。在某些實施方案中，極性非質(zhì)子溶劑的濃度可以是0.1％、0.25％、0.5％、1％、2％、3％、4％或5％(v/v)。在其它實施方案中，極性非質(zhì)子溶劑的濃度可以是7％、7，5％、8％、8.5％、9％、9.5％、10％、10.5％、11％、11.5％、12％、12.5％、13％、13.5％、14％、14.5％、15％、15.5％、16％、16.5％、17％、17.5％、18％、18.5％、19％、19.5％或20％(v/v)。依據(jù)本發(fā)明的另一方面，包含極性非質(zhì)子溶劑的含水組合物具有降低的毒性。例如，比傳統(tǒng)雜交溶液毒性更低的組合物可包含組合物，前提條件是所述組合物不含甲酰胺，或條件是所述組合物含有小于10％、或小于5％、或小于2％、或小于1％、或小于0.5％、或小于0.1％、或小于0.05％、或小于0.01％甲酰胺。一種低毒的組合物也可包含組合物，條件是所述組合物不含二甲亞砜(dmso)，或條件是所述組合物含有小于10％、5％、2％、或小于1％、或小于0.5％、或小于0.1％、或小于0.05％、或小于0.01％的dmso。在本發(fā)明的一方面，可根據(jù)極性非質(zhì)子溶劑的hansen溶度參數(shù)，來選擇用于本發(fā)明的合適極性非質(zhì)子溶劑。例如，合適的極性非質(zhì)子溶劑可具有的分散溶度參數(shù)介于17.7-22.0mpa1/2之間，極性溶度參數(shù)介于13-23mpa1/2之間，氫鍵溶度參數(shù)介于3-13mpa1/2之間。依據(jù)本發(fā)明的一方面，用于本發(fā)明的合適極性非質(zhì)子溶劑是環(huán)狀化合物。環(huán)狀化合物具有環(huán)狀基本結(jié)構(gòu)。實例包括本文所公開的環(huán)狀化合物。在其它實施方案中，所述極性非質(zhì)子溶劑可選自下式1-4：其中x為o，r1為烷基二基。依據(jù)本發(fā)明的另一方面，用于本發(fā)明的合適極性非質(zhì)子溶劑可選自下式5：其中x是任選的，如果存在則選自o或s；其中z是任選的，如果存在則選自o或s；其中a和b獨(dú)立地為o或n或s或烷基二基的一部分或伯胺；其中r為烷基二基；和其中y為o或s或c。式5的合適極性非質(zhì)子溶劑的實例在下式6-9中提供：依據(jù)本發(fā)明的又一實施方案，所述極性非質(zhì)子溶劑具有內(nèi)酯、砜、腈、亞硫酸或碳酸官能團(tuán)。這類化合物的特征是具有相當(dāng)高的介電常數(shù)、高偶極距和水溶性。依據(jù)本發(fā)明的另一方面，具有內(nèi)酯官能團(tuán)的極性非質(zhì)子溶劑是γ-丁內(nèi)酯(gbl)，具有砜官能團(tuán)的極性非質(zhì)子溶劑是環(huán)丁砜(sl)，具有腈官能團(tuán)的極性非質(zhì)子溶劑是乙腈(an)，具有亞硫酸官能團(tuán)的極性非質(zhì)子溶劑是亞硫酸乙二醇酯(gs)，具有碳酸官能團(tuán)的極性非質(zhì)子溶劑是碳酸亞乙酯(ec)、碳酸異丙二醇酯(pc)或硫代碳酸亞乙酯(etc)。附圖簡述圖1描繪了用第一標(biāo)記的fish探針對甲醛固定的石蠟包埋的組織切片(組織學(xué)標(biāo)本)進(jìn)行單基因座檢測的典型時間進(jìn)程。條帶代表用傳統(tǒng)溶液進(jìn)行的雜交(上)和用本發(fā)明組合物進(jìn)行的雜交(下)的典型時間進(jìn)程。每個時間進(jìn)程的左邊第一條帶代表脫蠟步驟；第二條帶代表加熱-預(yù)處理步驟；第三條帶代表消化步驟；第四條帶代表變性和雜交步驟；第五條帶代表嚴(yán)格性洗滌步驟；和第六條帶代表封固步驟。圖2描繪了用第一標(biāo)記的fish探針對細(xì)胞學(xué)標(biāo)本進(jìn)行單基因座檢測的典型時間進(jìn)程。條帶代表用傳統(tǒng)溶液進(jìn)行的雜交(上)和用本發(fā)明組合物進(jìn)行的雜交(下)的典型時間進(jìn)程。每個時間進(jìn)程的左邊第一條帶代表固定步驟；第二條帶代表變性和雜交步驟；第三條帶代表嚴(yán)格性洗滌步驟；和第四條帶代表封固步驟。發(fā)明詳述i.定義在本發(fā)明范圍內(nèi)，下列術(shù)語可理解如下：“生物樣品”可理解為一種或多種細(xì)胞或細(xì)胞碎片的任何體內(nèi)、體外或原位樣品。它可以是例如單細(xì)胞生物或多細(xì)胞生物、組織切片、細(xì)胞學(xué)樣品、染色體鋪片、純化的核酸序列、通過例如基于生物的系統(tǒng)或通過化學(xué)合成而制備的人工制備核酸序列、微陣列或其它形式的核酸芯片。在一個實施方案中，樣品是哺乳動物樣品，例如人、小鼠、貓、大鼠或犬的樣品。“核酸”、“核酸鏈”和“核酸序列”是指利用堿基配對而結(jié)合或雜交的任何核酸，包括具有由天然存在核苷酸和/或包含非標(biāo)準(zhǔn)核堿基(nucleobase)的核酸類似物而形成的主鏈和/或非標(biāo)準(zhǔn)主鏈(例如肽核酸(pna)或鎖核酸(lna))或核酸的任何衍生形式的寡聚物或聚合物。本文所用的術(shù)語“肽核酸”或“pna”是指具有攜帶懸垂核堿基(天然的和經(jīng)修飾的)的聚酰胺主鏈的合成聚合物，包括但不限于例如在以下文獻(xiàn)中涉及或聲稱是肽核酸的任何寡聚物或聚合物區(qū)段：美國專利號5,539,082、5,527,675、5,623,049、5,714,331、5,718,262、5,736,336、5,773,571、5,766,855、5,786,461、5,837,459、5,891,625、5,972,610、5,986,053、6,107,470、6,201,103、6,228,982和6,357,163、wo96/04000，所有文獻(xiàn)或其中所引用的任何參考文獻(xiàn)都通過引用結(jié)合到本文中。pna上的懸垂核堿基例如嘌呤堿基或嘧啶堿基，可通過接頭與主鏈連接，所述接頭例如在pct/us02/30573或其中所引用的任何參考文獻(xiàn)中提及的接頭之一。在一個實施方案中，pna具有n-(2-氨基乙基)-甘氨酸)主鏈?？砂凑誴ct/us02/30573或其中所引用的任何參考文獻(xiàn)所述，來合成(并任選標(biāo)記)pna。pna與dna和rna雜交緊密，并具有高度序列特異性，因為pna主鏈不帶電荷。因此，短pna探針可表現(xiàn)出與較長dna或rna探針相當(dāng)?shù)奶禺愋?。pna探針在與互補(bǔ)dna或rna結(jié)合中也可表現(xiàn)出更高特異性。本文所用的術(shù)語“鎖核酸”或“l(fā)na”是指包含至少一個或多個lna亞基的寡聚物或聚合物。本文所用的術(shù)語“l(fā)na亞基”是指含有連接核糖的2′-氧與4′-碳的亞甲基橋的核糖核苷酸。通?？蓞⒁妅urreck，eur.j.biochem.，270：1628-44(2003)。核酸和核酸類似物的實例也包括核苷酸單體聚合物，所述單體包括雙鏈和單鏈脫氧核糖核苷酸(dna)、核糖核苷酸(rna)、其α-異頭物形式、其合成和天然類似物等。核酸鏈可完全由脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、肽核酸(pna)、鎖核酸(lna)、其合成或天然類似物、或其混合物組成。dna、rna或本文所定義的其它核酸都可用于本發(fā)明的方法和組合物?！皹O性非質(zhì)子溶劑”是指有機(jī)溶劑，其偶極距為約2德拜單位或更高，在或鄰近環(huán)境溫度即約20℃時水溶性為至少約5％(體積)，并且在大約中性ph(即5-9的范圍，或在6-8的范圍)不經(jīng)歷明顯的氫交換。極性非質(zhì)子溶劑包括以下所討論的按照hansen溶度參數(shù)定義的那些?！巴榛笔侵竿ㄟ^從母體烷、烯或炔的兩個不同碳原子中的各自除去一個氫原子而得到的、具有兩個一價基團(tuán)中心的飽和或不飽和、支鏈、直鏈或環(huán)狀烴基。“含水溶液”可理解為含有水、甚至少量水的溶液。例如，含1％水的溶液就可理解為含水溶液。除非另有說明，否則“雜交”可理解為結(jié)合了雜交過程的變性和重新退火步驟?！半s交組合物”是指用于進(jìn)行雜交過程(例如使探針與核酸序列結(jié)合)的本發(fā)明含水溶液。雜交組合物可包含例如至少一種極性非質(zhì)子溶劑、至少一種核酸序列和雜交溶液。雜交組合物不包含酶或其它成分，例如用于擴(kuò)增生物樣品中的核酸的三磷酸脫氧核苷(dntp)?！半s交溶液”是指用于本發(fā)明雜交組合物的含水溶液。雜交溶液的詳細(xì)討論如下，并且可包含例如緩沖劑、促進(jìn)劑、螯合劑、鹽、去垢劑和封閉劑?！皃cr組合物”是指用于進(jìn)行雜交程序以擴(kuò)增核酸序列的本發(fā)明含水溶液。pcr組合物可包含例如至少一種極性非質(zhì)子溶劑、至少一種用于擴(kuò)增核酸的酶、一組核酸寡核苷酸引物、dntp混合物和pcr溶液?！皃cr溶液”是指用于本發(fā)明pcr組合物的含水溶液。pcr溶液可包含例如緩沖劑、促進(jìn)劑、螯合劑、鹽和去垢劑。術(shù)語“檢測”當(dāng)用于例如檢測染色體畸變相關(guān)核苷酸序列的分子探針時，是指分子探針與至少部分核苷酸序列或所述序列鄰近的核苷酸序列雜交，這允許使用者確定所述序列的存在與否。術(shù)語“標(biāo)記”，例如染色體畸變的標(biāo)記，是指與染色體畸變相關(guān)的、并且在使用或不用一種或多種其它標(biāo)記時可用于檢測染色體畸變存在與否的任何序列?！癶ansen溶度參數(shù)”和“hsp”是指以下內(nèi)聚能(溶解度)參數(shù)：(1)分散溶度參數(shù)(δd，“d參數(shù)”)，其度量得自原子力的非極性相互作用；(2)極性溶度參數(shù)(δp，“p參數(shù)”)，其度量永久偶極-永久偶極之間的相互作用；和(3)氫鍵溶度參數(shù)(δh，“h參數(shù)”)，其度量電子交換。hansen溶度參數(shù)進(jìn)一步定義如下?！爸貜?fù)序列”可理解為是指快速重新退火(大約25％)和/或中速重新退火(大約30％)的哺乳動物基因組組分?？焖僦匦峦嘶鸾M分含有小的(長度為幾個核苷酸)高度重復(fù)序列，通常以串聯(lián)形式存在(例如衛(wèi)星dna)，而中速重新退火組分含有散在分布的重復(fù)dna。散在分布的重復(fù)序列可分為sine(短散在分布的重復(fù)序列)或line(長散在分布的重復(fù)序列)，這兩者都屬于靈長類的反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子。sine和line包括但不限于alu重復(fù)序列、kpn重復(fù)序列、二核苷酸重復(fù)序列、三核苷酸重復(fù)序列、四核苷酸重復(fù)序列、五核苷酸重復(fù)序列和六核苷酸重復(fù)序列。alu重復(fù)序列構(gòu)成大部分人類sine，其特征是大約280-300bp的共有序列，由兩個類似序列排列成頭尾相連的二聚體而組成。除了sine和line之外，重復(fù)序列也存在于染色體末端的染色體端粒和染色體著絲粒，其含有僅存在于染色體中心區(qū)的獨(dú)特重復(fù)序列。然而，不同于隨機(jī)分散在整個基因組、端粒和著絲粒中的sine和line，重復(fù)序列位于染色體的某區(qū)域內(nèi)。對于甲酰胺的毒性標(biāo)識，“無毒”和“降低的毒性”是按照“1999年5月31日歐洲議會和委員會的各成員國涉及危險制劑的分類、包裝和標(biāo)識的法律、法規(guī)和管理規(guī)定的指令1999/45/ec”(ecb.jrc.it/legislation/1999l0045ec.pdf)(“指令(directive)”)來定義的。按照該指令，用以下分類級別來定義毒性：t+“劇毒”；t“有毒”；c“腐蝕”；xn“有害”；xi“刺激”。風(fēng)險術(shù)語(“r術(shù)語”)描述了所分類毒性的風(fēng)險。甲酰胺被列為t(有毒)和r61(對未出生胎兒可導(dǎo)致傷害)。下列所有化學(xué)品的毒性均低于甲酰胺∶乙腈(xn、r11、r20、r21、r22、r36)；環(huán)丁砜(xn、r22)；γ-丁內(nèi)酯(xn、r22、r32)；和碳酸亞乙酯(xi、r36、r37、r38)。在本申請的提交時，三硫代碳酸亞乙酯和亞硫酸乙二醇酯尚未被標(biāo)記?！胺肿犹结槨笔侵浮昂怂帷碧结樆颉昂怂犷愃莆铩碧结?。本文所用的術(shù)語“探針”可理解為能檢測特定核苷酸序列的核酸鏈，其可完全由dna、rna、pna、lna、其合成或天然類似物、或其混合物組成。另外，探針中的堿基可通過并非磷酸二酯鍵的其它鍵而連接，只要它不阻止雜交。檢測特定突變的分子探針是與具有該突變特征的靶序列結(jié)合的探針。術(shù)語“結(jié)合”是“雜交”的同義詞。當(dāng)兩個分子雜交時，它們通過一種或多種類型的化學(xué)鍵、通過互補(bǔ)堿基配對或通過形成氫鍵，而形成兩個分子的組合。術(shù)語“靶序列”是指有待檢測的核堿基序列。“染色體畸變”或染色體異常是指正常染色體序列的變異形式，例如染色體數(shù)目上的改變(非整倍性)、基因拷貝數(shù)的改變(擴(kuò)增、缺失、重復(fù)、非整倍性)、潛在斷點(diǎn)、插入、倒位、重排或易位。ii.組合物本發(fā)明提供用于雜交的組合物，所述組合物包含分子探針和含水組合物(包含足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑)。一般而言，這種組合物可包含本文所述的任何分子探針和任何含水組合物。a.分子探針適用于本發(fā)明的分子探針描述于例如美國專利公布號2005/0266459，其通過引用結(jié)合到本文中。一般而言，分子探針通常是雙鏈或單鏈核酸，包括例如dna、rna、pna和lna。探針可以是任何合適長度，用于檢測靶標(biāo)。通常，探針是由不同大小的較小片段組成(例如各自約50bp至約500bp)，使得探針總共跨越約30kb至約2mb。例如，探針長度可以是1-100、1-10、7-15、10-200、10-20、10-30、10-50、20-40、30-50、40-60、50-70、50-100、50-150、60-80、70-90或80-100kb。探針可用于檢測、定量、識別或分析核酸分子或與探針結(jié)合的其它分子。一般而言，探針可制備如下：即通過化學(xué)合成或通過克隆擴(kuò)增特定dna序列，將所述dna插入載體，并在合適宿主細(xì)胞中擴(kuò)增載體和插入片段。常用載體包括細(xì)菌質(zhì)粒、粘粒、細(xì)菌人工染色體(bac)、pi衍生的人工染色體(pac)或酵母人工染色體(yac)。然后提取所擴(kuò)增的dna并純化，用作探針。用于制備和/或合成探針的方法是本領(lǐng)域已知的，例如公開于pct/us02/30573。在一個實施方案中，用于本發(fā)明方法和組合物的探針包括獨(dú)特片段以及重復(fù)片段。核酸類似物探針，例如pna探針，通常是較短的意義明確的探針，通常包含10-15個核堿基。pna探針通常由若干單獨(dú)探針組成，各自具有10-25個核堿基單位。在一個實施方案中，本發(fā)明提供單一分子探針。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供一對分子探針。在其它實施方案中，本發(fā)明提供2、3、4、5、10個或更多探針或探針對。在一個實施方案中，使用不同且對稱的探針對(distinctandbalancedpairofprobes)，正如美國專利號6,730,474所述，其通過引用結(jié)合到本文中。不同且對稱的探針對各自可與例如涉及易位的不同染色體雜交，或與潛在斷點(diǎn)側(cè)翼區(qū)雜交。在另一個實施方案中，可使用兩組雜交探針，其一組或多組包含pna探針，正如美國專利號7,105,294所述，其通過引用結(jié)合到本文中。在一個實施方案中，使用至少兩組雜交探針，至少一組能與染色體中潛在畸變相關(guān)的特定核酸序列雜交，而至少另一組能與另一個或同一個染色體中潛在畸變相關(guān)的特定核酸序列雜交。有若干類型的探針可用于與核酸樣品雜交(通?？蓞⒁妔zeles，actamicrobiol.immunol.hungarica，49∶69-80(2002))。這些探針包括基因組dna或cdna的短序列，整條染色體涂染(chromosomepaint)、染色體重復(fù)序列和整個基因組。就基因組探針而言，哺乳動物基因組中的頻繁重復(fù)序列具有相當(dāng)少的進(jìn)化保守性。因此，整個核dna或基因組dna可用作物種特異性探針。染色體涂染是收集源自單一染色體類型的dna序列，并可識別分裂中期和間期核中的特定染色體類型。不同染色體類型也具有獨(dú)特重復(fù)序列，其可被靶向用于探針雜交(參見cremer等，hum.genet.，74：346-52(1986))。靶向獨(dú)特單拷貝序列的大的插入探針是可用于雜交測定的探針種類的另一實例。這些探針可以在粘粒、細(xì)菌人工染色體(bac)、pi衍生的人工染色體(pac)或酵母人工染色體(yac)中。有了這些大探針，雜交效率與探針大小成反比。但是，可使用小至2kb的探針(參見同上)。一般而言，探針類型決定了探針可檢測的特征類型。沿著整條染色體雜交的探針(整條染色體涂染)用于統(tǒng)計某條染色體的數(shù)目，顯示易位或識別染色體外染色質(zhì)片段。較小的探針也可用于檢測畸變，例如缺失、擴(kuò)增、倒位、重復(fù)和非整倍性。在另一個實例中，基因座特異性探針混合物可用于檢測和統(tǒng)計特定染色體。兩個或更多個不同顏色的基因座特異性探針可用于例如通過信號分離原位雜交來檢測易位，而重復(fù)序列特異性著絲粒探針混合物可用于檢測和統(tǒng)計特定染色體。一般而言，區(qū)分密切相關(guān)序列的能力與雜交探針的長度成反比，因為隨著探針長度增加，野生型復(fù)合物和突變型復(fù)合物之間的熱穩(wěn)定性差異下降。通常需要長度大于10bp的探針以獲取正確識別獨(dú)特有機(jī)體或目標(biāo)臨床狀態(tài)所需的序列多樣性。例如，可使用長度15kb的探針，對特異性dna序列(例如abl基因)進(jìn)行可靠的染色。另一方面，與非靶序列相比，非常短的寡聚物(＜10個堿基對)中精細(xì)至單個堿基(點(diǎn)突變)的序列差異都足以區(qū)別與互補(bǔ)核酸靶序列的雜交。在一個實施方案中，至少一組原位雜交探針可包含一種或多種pna探針，正如美國專利號7,105,294所述。pna是具有肽(n-(2-氨基乙基)-甘氨酸)主鏈并帶有懸垂嘌呤和嘧啶堿基的合成聚合物。因為與dna和rna相反，pna主鏈不帶電荷，所以pna/dna和pna/rna的相互作用比相應(yīng)的dna/dna或dna/rna的相互作用更強(qiáng)。因此，pna探針可以比dna探針或rna探針更短，同時還保留類似的特異性。pna探針在與互補(bǔ)dna或rna結(jié)合中還表現(xiàn)出更高特異性，因為pna/dna(或pna/rna)堿基錯配比起dna/dna(或rna/rna)雙鏈體中的類似錯配而言，更不穩(wěn)定。另外，pna對蛋白酶和核酸酶的酶促降解具有相當(dāng)?shù)哪褪苄??；蛘撸蛄硗猓鲜鋈魏渭夹g(shù)中的至少一組雜交探針可包含一種或多種鎖核酸(lna)探針，正如wo99/14226所述，其通過引用結(jié)合到本文中。lna含有2′和4′碳之間的額外橋連鍵，導(dǎo)致剛性3′-內(nèi)橋構(gòu)象和隨之而來的用于雜交的核苷酸主鏈的預(yù)組織。lna/dna和lna/rna的相互作用比相應(yīng)的dna/dna和dna/rna的相互作用更強(qiáng)烈，正如更高解鏈溫度所示。因此，降低雜交所需能量的本發(fā)明的方法和組合物特別適用于用lna探針的雜交。在一個實施方案中，探針可包含可檢測標(biāo)記(提供分析可識別信號并允許檢測探針-靶雜合體的分子)。本文所用的可檢測標(biāo)記是指可與寡聚物或聚合物直接或間接連接并因而可通過儀器或方法來檢測寡聚物或聚合物的部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何標(biāo)記方法，包括酶促方法和化學(xué)方法，都可用于標(biāo)記本發(fā)明方法和組合物所用的探針。在一個實施方案中，可檢測標(biāo)記可與探針直接連接。在另一個實施方案中，可檢測標(biāo)記可與探針間接連接，例如通過使用接頭。在其它實施方案中，探針可以不被標(biāo)記?？蓹z測標(biāo)記可以是例如熒光染料、生色團(tuán)、自旋標(biāo)記、放射性同位素、酶、半抗原、量子點(diǎn)(quantumdot)、小珠、氨基己基、芘和化學(xué)發(fā)光化合物，例如吖啶橙。可用于本發(fā)明方法的熒光染料包括但不限于ir染料、dyomics染料、藻紅蛋白、顏料藍(lán)(cascadeblue)、俄勒崗綠488、pacificblue、羅丹明綠、5(6)-羧基熒光素、花青染料(即cy2、cy3、cy3.5、cy5、cy5.5、cy7)(二乙基-氨基)香豆素、熒光素(即fitc)、四甲基羅丹明、麗絲胺、德克薩斯紅、amca、tritc和alexa染料。可用于本發(fā)明的半抗原包括但不限于5(6)-羧基熒光素、2，4-二硝基苯基、地高辛配基、羅丹明、溴脫氧尿苷、乙酰氨基芴(acetylaminoflurene)、苦味酸汞、雌二醇和生物素。可用于本發(fā)明的酶包括但不限于大豆過氧化物酶、堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶。在一個實施方案中，標(biāo)記可以是放射性標(biāo)記，例如31p、33p或32s。在另一個實施方案中，可用半抗原例如地高辛配基或生物素來標(biāo)記探針。也可用重金屬顆?；蚓哂酗@色或熒光底物的酶來標(biāo)記探針。還可用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何其它標(biāo)記來標(biāo)記探針。當(dāng)存在不止一種探針時，可用不同標(biāo)記來標(biāo)記每種探針。例如，在一個實施方案中，當(dāng)進(jìn)行fish并且雜交混合物含有不同且對稱的探針對組時，如美國專利號6,730,474所述，可用相對強(qiáng)度不同的標(biāo)記來標(biāo)記探針。在使用顯色原位雜交(cish)的實施方案中，雜交混合物可含有設(shè)計為用一種或多種常規(guī)有機(jī)顯色劑來檢測的至少一組探針，對于銀染原位雜交(sish)，雜交混合物可含有設(shè)計為用銀顆粒檢測的至少一組探針，正如以下文獻(xiàn)所述：powellrd等，“metallographicinsituhybridization(金相原位雜交)，”hum.pathol.，38：1145-59(2007)。在一個實施方案中，一旦加入顯色劑后，就可以檢測探針-核酸序列雜合體的形成，所述顯色劑例如抗體(其可以是單克隆抗體，并且其自身可包含標(biāo)記)、酶的熒光或顯色底物、或技術(shù)人員已知的任何其它合適顯色劑。在某些實施方案中，探針可用于通過檢測樣品染色模式與正常對照樣品相比的變化，來檢測染色體結(jié)構(gòu)中的變化?？捎梅肿犹结榿頇z測的染色體改變的非詳盡的實例包括非整倍性、基因擴(kuò)增、缺失(包括基因缺失)、基因融合、易位、重復(fù)、插入或倒位。本文所用的非整倍性是指與正常整倍體狀態(tài)相比的任何偏差，或者具有少于或多于正常染色體二倍體數(shù)目的狀態(tài)。本文所用的擴(kuò)增是指特定dna片段拷貝數(shù)的增加。這種dna片段包括例如基因或一整條染色體。本文所用的缺失是指遺傳事件，其中核酸序列從染色體中被除去。本文所用的基因融合是指兩個基因的dna的意外連接。基因融合可通過易位或倒位而發(fā)生，并可產(chǎn)生雜合蛋白或者因一個基因的順式調(diào)節(jié)元件(例如增強(qiáng)子或啟動子)的并列而錯誤調(diào)節(jié)另一個基因轉(zhuǎn)錄。本文所用的易位是指遺傳事件，其中一條染色體的一部分核酸序列從該染色體上移出并連接到不同染色體上。本文所用的重復(fù)是指在染色體或染色體區(qū)段中核苷酸序列的重復(fù)。重復(fù)可導(dǎo)致核苷酸序列以與所復(fù)制序列線性并列的方式重復(fù)。本文所用的插入是指遺傳事件，其中核酸序列被引入到染色體中的兩點(diǎn)之間。本文所用的倒位是遺傳事件，其中核酸序列在染色體中的方向被顛倒了。本文所用的染色體斷點(diǎn)是指染色體中染色體斷裂成兩片的位置。在某些實施方案中，分子探針可側(cè)接例如基因兩側(cè)的約500,000bp的區(qū)域。用于tyms標(biāo)記并包含約500,000bp側(cè)翼區(qū)的探針實例是：ctd-2304h22；rp11-841c6；rp11-464l8：rp11-631m21；ctd-2573m23；ctd-3162g8g8；ctd-3232f7；rp11-170j2；rp11-252g7；rp11-699p24；rp11-805b24；ctd-3237f7；rp11-230p17；ctd-2359h18；rp11-1120h10；ctd-2509f1；rp11-431c15；rp11-361o6；rp11-1066c16；ctd-2359h18；rp11-1066g14；rp11-1034p14；rp11-1034p22；ctd-3114p12；rp11-787a12；rp11-787c12；ctd-3149j12；rp11-195p12；ctd-2595p20；ctd-2168e8；rp11-621g7；ctd-3023m8；rp11-748b19；ctd-2064p19；rp11-461k16；rp11-630f5；ctd-3021e11；ctd-3028i7；rp11-1021k17；rp11-729g15；rp11-104i5；rp11-595d13；rp11-436o7；ctd-2646f10；rp11-104a15；ctd-2024f12；ctd-2169m24；rp11-140d22；rp11-848a7；ctd-2060d6；ctd-2298k5；ctd-3022j6；rp11-29p22；rp11-790o10；rp11-89p6；rp11-91i8；rp11-694n4；rp11-752i11；rp11-324g2；cta-186d6；rp11-88c10；rp11-608n7；rp11-732l14；rp11-324g2；rp11-705o1；rp11-839o23；rp11-683j11；rp11-815l4；rp11-720l2；rp11-179k3；rp11-778p8；rp11-823f8；rp11-791m5；rp11-672l10；rp11-827m19；rp11-19j12；rp11-607c2；rp11-267c19；ctd-3214n24；rp11-1035e2；ctd-2004f18；ctd-3155l20；ctd-2281a22；ctd-3231l23；ctd-2014p18；rp11-1150c18；rp11-170j1；ctc-790i9；rp11-76h24；rp11-48i21；ctc-775a10；ctd-2034o18；rp11-431c11；rp11-50c2；ctd-2208g7；ctd-2345g8；rp11-797c9；rp11-133d9；rp11-655d4；rp11-14p20；rp11-103b23；rp11-806l2；rp11-145b19；ctd-2593j12；ctd-3215i7；rp11-381d10；rp11-769o8；rp11-95h4；rp11-552e8；rp11-914p23；rp11-904f1；rp11-164c14；ctd-3040a20；rp11-1152e8；ctd-3065d24；ctd-3243b17；ctd-3243d18；ctd-3243d19；ctd-3113h2；rp11-1120e20；ctd-3046i16；rp11-635j20；rp11-114m20；rp11-1018m4；cta-344n3；rp11-137k7；rp11-689c9；rp11-1005b18；rp11-126m20；ctd-2134i3；rp11-701f4；ctd-3236j23；ctd-3047l19；ctd-3240g16；ctd-3148n6；rp11-22j24；rp11-1094d2；ctd-2182k19；rp11-107a13；rp11-134p22；rp11-636p15；rp11-78f17；ctd-2221p22；ctd-2011m14；rp11-626b11；和rp11-27k24。在其它實施方案中，探針可結(jié)合在編碼或不編碼基因的染色體區(qū)內(nèi)。例如，探針可與5-fu途徑相關(guān)的染色體區(qū)結(jié)合，所述途徑包括胸苷酸合酶(tyms)、二氫葉酸還原酶(dhfr)、胸苷磷酸化酶(tp)、二氫嘧啶脫氫酶(dpd)、亞甲基四氫葉酸還原酶(mthfr)、胸苷激酶(tk)和5-甲基四氫葉酸-同型半胱氨酸-甲基轉(zhuǎn)移酶(甲硫氨酸合酶，mtr)。在一個實施方案中，分子探針檢測先天性遺傳疾病例如脆性x綜合征。可被檢測的其它先天性遺傳疾病包括例如唐氏綜合征、特納氏綜合征、wolf-hirschhorn綜合征、jacobsen綜合征、charcot-marie-tooth病1a型和羅伯遜易位。在一個實施方案中，分子探針檢測癌性病癥，例如實體瘤，包括例如膀胱癌、乳癌、宮頸癌、結(jié)直腸癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、皮膚癌或子宮癌。在一個實施方案中，分子探針檢測造血系統(tǒng)惡性腫瘤，例如急性淋巴性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤或非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin’slymphoma)。在一個實施方案中，分子探針檢測b細(xì)胞惡性腫瘤或t細(xì)胞惡性腫瘤。在另一個實施方案中，分子探針檢測感染性病原體，例如細(xì)菌、病毒或真菌。例如，病原體可以是例如eb病毒、人乳頭瘤病毒或單純皰疹病毒。在另一個實例中，病原體可以是例如大腸桿菌(escherichiacoli)、肺炎克雷伯氏菌(klebsiellapneumoniae)、銅綠假單胞菌(pseudomonasaeruginosa)、幽門螺桿菌(helicobacterpylori)、莢膜組織胞漿菌(histoplasmacapsulatum)、皮炎芽生菌(blastomycesdermatitidis)、球孢子菌(coccidioidesspecies)、新生隱球菌(cryptococcusneoformans)、格特隱球菌(cryptococcusgattii)或單純皰疹病毒。在一個實施方案中，分子探針檢測以下的畸變(包括例如重排、擴(kuò)增或缺失)：alk、bcl2、bcl3、bcl6、bcl10、bcl12、bcr(22q11)、ccnd1、cyclind1(11q23)、e2a(19p13)、egfr(7p11.2)、etv6(tel)(12p13)、fip1l1、her2(erbb2)(17q21.1)、igh(14q32)、igk(2p11)、igl(22q11)、malt1、mll(all-1、htrx1、hrx)(11q23)、myc(c-myc)(8q24)、pax5、pdgfra、pdgfrb、sil、tcf3(e2a、itf1)、tcl1a、tcrad、tcrb、tcrg、端粒、tlx1、tlx3(hox11l2、rnx)或top2a。例如，探針可用于檢測兒童癌癥中的常見基因重排，其特征是etv6和aml1(也稱為runx1和cbfa2)的融合。在一個實施方案(包括例如在造血系統(tǒng)惡性腫瘤的情況下)中，分子探針檢測易位，例如選自以下的易位：t(1；14)(q34；q11)、t(1；19)(q23；p13)、t(2；5)、t(2；18)(q12；q21)、t(2；8)、t(4；11)、t(4；11)(q21；q23)、t(6；11)(q27；q23)、t(7；22)(p22；q12)、t(8；14)、t(8；22)、t(9；11)(p22；q23)、t(9；22)(q34；q11)、t(10；14)(q24；q11)、t(11；14)、t(11；14)(p13；q11)、t(11；19)(q23；p13)、t(14；18)(q23；q21)、t(14；18)、t(18；22)(q21；q11)和t(21；22)(q22；q12)。在另一個實施方案中，分子探針檢測缺失，例如tal1的缺失。在又一個實施方案中，分子探針檢測基因擴(kuò)增，例如egfr、myc、top2a或her2的擴(kuò)增。在這種情況下，探針可與參考探針配對。例如，檢測egfr的探針可與檢測c彈7的探針配對，檢測myc的探針可與檢測cen-8的探針配對，而檢測her2的探針可與檢測cen-17的探針配對。對于可用于本發(fā)明組合物和方法以檢測非血液病的探針，示例性靶標(biāo)包括例如base、brca1、ccnd1、ccne1、dcd、e2f3、n-myc/mycn、cox-2/ptgs2、lrig1、era、htert、mln64/stard3、pgr、snai1、src、top1、tubb1、aib1、dlc-1、edd、pip4k2b/5k、sil、tbx2、c-kit、vegf、vcam-1、tie-1、ts/tyms、psma、psa、pap、p15、p16、bcl1、bcl2、mtor、timp1、esr1、pten、mdm2/cdk4、met、c-met、erb1、fgfr1、igf1r、net、fgfr3、abcb1、tmprss2、brca2、top2b、ercc1、akt1、akt2、akt3、hras、nras、raf1、her3、her4、ent1、rrm1、rrm2、rrm2b、pik3ca、aurk4、aurkb、aurkc、mapt/tau、ttbk1、tubb、vegfr、ccnd3、cdk6、cdk2、cdc2、hdac、esr2、scube2、birc5、fasn、dhfr、tp/ecgf1、tymp、dpyd、tk1、hmgic、abca2、abcb11、abcc1、abcc2、abcc3、abcc4、abcc5、abcg2、mvp、atp7a、atp7b、slc29a1、slc28a1、slc19a1、tubb4、tuba、map4、map7、stmn1、kif5b、hspa5、psmd14、fpgs、gstp1、gpx、gclc、ggt2、mt、akr1b1、hmgb1、hmgb2、xpa、xpd、msh2、mlh1、pms2、apex1、mgmt、glo1、rb1、gml、cdkn1a、cdkn2a、cdkn1b、erbb2、kras2、itgb1、jun、fos、nfkb1、tp53、tp73、bcl2l1、mcl1、bax、birc4、tnfrsf6、casp3、casp8、hspb1、malat1(α)t(11；19)(q11；q13.4)、mhlb1t(11；19)(q11；q13.4)、col1a1t(17；22)(q22；q13)、pdgfbt(17；22)(q22；q13)、fkhrt(2；13)&t(1；13)、etv6t(12；15)(p13；q25)、ntrk3t(12；15)(p13；q25)、tls/fust(12；16)(q13；p11)、chopt(12；16)(q13；p11)、ewst(12；22)(q13；q12)、ews/fli1t(11；22)(q24；q12)和fli1t(11；22)(q24；q12)。對于可用于本發(fā)明組合物和方法以檢測血液病的探針，示例性靶標(biāo)包括例如用于檢測例如以下慢性骨髓增生性疾病的靶標(biāo)的探針：ablt(9；22)(q34；q11)、prdm16del(1p36.32)、del(21q22.12)、runx1/aml1del(1p36.32)、del(21q22.12)、cep8、pdgfrb、nup98、fgfr1和ass；用于檢測例如以下急性骨髓性白血病的靶標(biāo)的探針：etot(8；21)(q22；q22)、aml1t(8；21)(q22；q22)、cbfbetainv(16)(p13q22)或t(16；16)(p13；q22)、myh11inv(16)(p13q22)或t(16；16)(p13；q22)、af9t(9；11)、pmlt(15；17)(q22；q21)、plzft(11；17)(q23；q21)、numat(11；17)(q13；q21)、npmt(5；17)(q23；q12)、rarαt(15；17)(q22；q21)t(11；17)(q23；q21)t(11；17)(q13；q21)t(5；17)(q23；q21)、evi1t(3；v)(q26；v)、gr6t(3；3)(q21；q26)、rpn1t(3；3)(q21；q26)、dekt(6；9)、cant(6；9)、mlf1t(3；5)(...；q23)、fust(16；21)、ergt(16；21)、nup98t(7；11)、hox9at(7；11)、moz/myst3t(8；16)(p11；p13)、cbpt(8；16)(p11；p13)、p300t(8；22)(p11；q13)、tif2/grip-1/ncoa-2inv(8)(p11q13)和mkl1；用于檢測例如以下前體b細(xì)胞和t細(xì)胞贅生物的靶標(biāo)的探針：pbx1t(1；19)(q23；p13.3)+var.、ablt(9；22)(q34；q11)、af4/aff1t(4；11)(q21；q23)、aml1/runx1t(12；21)(p13；q22)、il3t(5；14)(q31；q32)、hlft(17；19)、ikzf1del(7)(p12.2)、cdkn2a/cdkn2bdel(9)(p21.3)、tal11p32畸變、lmo2t(11；14)(p13；q11)+var.、lmo1t(11；14)(p15；q11)、hox11t(10；14)(q24；q11)+var.、tal2t(7；9)(q34；q32)和tan1t(7；9)(q34；q34)；用于檢測例如以下成熟b細(xì)胞贅生物的靶標(biāo)的探針：cep12、atm、d13s25、d13s319、tp53、p53、tnfaip3del(6)(q23.3-q24.1)、cdk6bcl1t(11；14)(q13；q32)+var.、irf4t(6；14)(p25；q32)、c-maft(14；16)(q32；q23)、fgfr3t(4；14)(p16；q32)和mum2/3t(1；14)(q21；q32)；和用于檢測例如以下成熟t細(xì)胞和nk細(xì)胞贅生物的靶標(biāo)的探針：npmt(2；5)(p23；q35)、ass、rb1和atm。對于可用于本發(fā)明組合物和方法以檢測著絲粒的探針，示例性靶標(biāo)包括例如cep1、cep2、cep3、cep4、cep5、cep6、cep7、cep8、cep9、cep10、cep11、cep12、cep13、cep14、cep15、cep16、cep17、cep18、cep19、cep20、cep21、cep22、cep23、cepx和cepy。對于可用于本發(fā)明組合物和方法的探針，示例性靶標(biāo)也包括例如cep18(18p11.1-q11.1)、cepx(xp11.1-q11.1)、cepy(yp11.1-q11.1)、lsi13(13q14)、lsi21(21q22.13-q22.2)、cep3(3p11.1-q11.1)、cep7(7p11.1-q11.1)、lsi(p169p21)、cep17(17p11.1-q11.1)、cep1(d1z5)1p11.1-q11.1、cep11q12、cep2(d2z1)2p11.1-q11.1、cep3(d3z1)3p11.1-q11.1、cep44p11-q11、cep6(d6z1)6p11.1-q11、cep6(d6z1)6p11.1-q11.1、cep7(d7z1)7p11.1-q11.1、cep8(d8z2)8p11.1-q11.1、cep99p11-q11、cep1010p11.1-q11.1、cep11(d11z1)11p11.11-q11.11、cep11(d11z1)11p11.11-q11、cep12(d12z3)12p11.1-q11、lsi13(13q14)、lsi13(rb1)、cep15(d15z1)15p11.2、cep15(d15z4)15p11.1-q11.1、cep16(d16z3)16q11.2、cep17(d17z1)17p11.1-q11.1、cep18(d18z1)18p11.1-q11.1、cep20(d20z1)20p11.1-q11.1、lsi21、lsi22(bcr)、cepx(dxz1)xp11.1-q11.1、cepx(dxz1)/y(dyz1)*xp11.1-q11.1yq12、cepx(dxz1)/y(dyz3)xp11.1-q11.1yp11.1-q11.1、cepy(dyz1)yq12、cepy(dyz1)、cepy(dyz3)yp11.1-q11.1、lsi1p36/lsi1q25和lsi19q13/19p13、lsi4q12、lsi9q34、lsi13(rb1)13q14、lsi13(rb1)、lsi(13q34)、lsi13(13q14)、lsi21、lsi22(bcr)、lsialk、lsiaml1/eto、lsi雄激素受體基因(xq12)、lsiapi2/malt1t(11；18)(q21；q21)、lsiatm(11q22.3)、lsiatm/cep11、lsibcl2、lsibcr/abl+9q34、lsibcr/abl、lsicbfb、lsiccnd1(11q13)、lsichop(12q13)、lsicsf1r(5q33-q34)/d5s23，d5s721、lsic-myc(8q24.12-q24.13)、lsicyclind1(11q13)/cep11、lsid13s25(13q14.3)、lsid13s319(13q14.3)、lsid13s319(13q14.3)/lsi13q34、lsid20s108(20q12)、lsid5s23/d5s721、cep9、cep15、lsid7s486(7q31)/cep7、lsid7s522(7q31)/cep7、lsiegfr/cep7、lsiegr1(5q31)/d5s23、d5s721、lsietv6(tel)(12p13)、lsiewsr1(22q12)、lsifkhr(13q14)、lsifus(16p11)、lsiigh、lsiigh/bcl2、lsiigh/ccnd1、lsiigh/fgfr3、lsiigh/maf、lsiigh/malt1t(14；18)(q32；q21)、lsiigh/myc、cep8、lsimalt1(18q21)、lsimll、lsimyb(6q23)、lsimyc、lsin-myc(2p24.1)、lsin-myc(2p24)/cep2s、lsip16(9p21)/cep9、lsip53(17p13.1)、lsip53/lsiatm和lsid13s319/lsi13q34/cep12、lsipml/rara、lsipten(10q23)/cep10、lsirara、lsisyt(18q11.2)、lsitel/aml1、lsitcf3/pbx1、lsitcrα/delta、lsitop2a、lsitp53/cep17、lsiznf217(20q13.2)、lsip58(1p36)lsi1q25、lsid5s23、d5s721、lsiegr1/lsid5s23、d5s721、lsin25/arsa、lsituple1/lsiarsa、lsituple1(hira)/telvysion22qs、lsikal/cepx、lsilis1/lsirara、lsid15s10/cep15(d1521)/pml、lsid15s11/cep15(d1521)、lsigabrb3/cep15(d1521)、lsisnrpn/cep15(d1521)/lsipml、lsismsregion/lsirara、lsinsd1(5q35)、lsisry/cepx、lsisry、lsists/lsicepx、lsielne/lsid7s486、d7s522、lsiwhs/cep4、ceb108/t71p、vij2yrm2052(u32389)2p、3ptel25(d3s4559)3p、4p022(d4s3359、6244599)4p、c84c11/t75p、6ptel486p、vij2yrm2185(g31341)7p、afm197xg5(d8s504、199153)8p、305j7-t79p、10p006(z96139)10p、vij2(d11s2071、u12896)11p、vij3(savh27，u57865)12p、stsg608831stsg60893816p、282m16/sp617p、vij2yrm2102(d18s552)18p、129f16/sp619p、20p18(d20s1157)20p、dxys129，dxys153xp/yp、vij2yrm21231qtel10(d1s3738、9043912)1q、vij2yrm2112(d2s447)2qtel472q、3qtel05(d3s4560)3q、afma224xh1(d4s2930)4q、gs35o8/t75qtel702(d5s2907)5q、vij2yrm21586q、vij2yrm2185(sts2000h、g31341)7q、vij2yrm20538q、vij2yrm2241(d9s325)9q、10qtel24(d10s2490、6244631)10q、d11s103711q、vij2yrm219612q、vij2yrm2002(d13s327)13q、d14s142014q、wi-5214(d15s396)(g04801)15q、16q013(z96319)16q、d17s928z2364617q、vij2yrm205018qtel11stsg193afm254vd5cu18-010l/cu18-010rsts-f04195tigr-a008p37stsg5296318q、d19s238e19q、20qtel1420q、vij2yrm202921q、ms607(x58044)acr22q和estcdy16c07(對于sybl1-作圖在粘粒c8.2(z43206)xq/yq內(nèi))。可用于本發(fā)明組合物和方法的示例性探針也包括例如結(jié)合在hiv亞型a、b、c、d、ae、f、ag、g和o的pol基因的in區(qū)內(nèi)的探針；結(jié)合在hiv-1的pr基因和pol基因的rt區(qū)內(nèi)的探針；和用于檢測沙眼衣原體(chlamydiatrachomatis)的隱蔽性質(zhì)粒的探針；用于檢測淋病奈瑟氏菌(neisseriagonorrhoeae)的opa基因的探針；結(jié)合在染色體1-12和16-20的p和q亞端粒、近端著絲粒染色體13、14、15、21和22的q亞端粒、以及xp/yp和xq/yq擬常染色體區(qū)(pseudo-autosomalregion)亞端粒的探針；結(jié)合在hla-a的外顯子2或3的探針；結(jié)合在hla-b外顯子2或3的探針；結(jié)合在hla-c外顯子2或3的探針；結(jié)合在hla-drb1外顯子2的探針；結(jié)合在hla-dpb1外顯子2的探針；和結(jié)合在hla-dqb1外顯子2的探針。b.含水組合物(1)溶劑選擇可根據(jù)極性非質(zhì)子溶劑的hansen溶度參數(shù)，選擇用于本發(fā)明的合適的極性非質(zhì)子溶劑。實驗測定和/或計算溶劑hsp的方法是本領(lǐng)域已知的，已經(jīng)報道了超過1200種化學(xué)品的hsp。例如，可根據(jù)折射率，以合理的準(zhǔn)確度計算d參數(shù)，或可在建立了臨界溫度和摩爾體積之后，通過與類似大小、形狀和組成的已知溶液進(jìn)行比較，從圖表中得到d參數(shù)?？蓮囊阎紭O距估計p參數(shù)(參見例如mcclellana.l.，tablesofexperimentaldipolemoments(w.h.freeman1963))，使用公式1：公式1：δp＝37.4(偶極距)/v1/2其中v是摩爾體積。對于計算h參數(shù)，沒有公式。相反，通常根據(jù)基團(tuán)貢獻(xiàn)來確定h參數(shù)。hsp表征可方便地用球形示意圖來直觀表示，實驗所測合適參考溶劑的hsp在球心。球的半徑(r)表示仍然能允許“良”相互作用發(fā)生的參考溶劑hsp的最大可容許變異。良溶劑在球內(nèi)，而不良溶劑在外。用公式2可測定基于它們相應(yīng)hsp值的兩種溶劑間的距離ra：公式2：(ra)2＝4(δd1-δd2)2+(δp1-δp2)2(δh1-δh2)2其中下標(biāo)1表示參考樣品，下標(biāo)2表示試驗化學(xué)品，所有值的單位都是mpa1/2。良溶度需要ra小于溶度球的實驗所測半徑ro。兩種溶劑間相對能量差，即red數(shù)，可通過獲取ra與ro之比而求得，如公式3中所示。公式3：red＝ra/rored數(shù)小于1.0，表示高親和性；red數(shù)等于或接近1.0，表示邊界條件；red數(shù)逐漸升高，表示親和性逐漸降低。在某些實施方案中，本發(fā)明極性非質(zhì)子溶劑的d參數(shù)介于17.7-22.0mpa1/2之間。這種相對高的d參數(shù)通常與具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)和/或具有硫或鹵素結(jié)構(gòu)的溶劑有關(guān)。線狀化合物可能不屬于用于本發(fā)明的最合適溶劑，但如果它們的p和h參數(shù)在下述范圍內(nèi)，也可以考慮。因為在公式2中d參數(shù)乘以4，所以限制是一半ro。另外，應(yīng)當(dāng)注意，在21上下或更高的d值通常代表固體。在某些實施方案中，本發(fā)明極性非質(zhì)子溶劑的p參數(shù)介于13-23mpa1/2之間。這種特別高的p參數(shù)通常與具有高偶極距并可能也具有相對低分子體積的溶劑有關(guān)。例如，對于接近60cc/mole的v，偶極距應(yīng)介于4.5-3.1之間。對于接近90cc/mole的v，偶極距應(yīng)介于5.6-3.9之間。在某些實施方案中，本發(fā)明極性非質(zhì)子溶劑的h參數(shù)介于3-13mpa1/2之間。通常，具有醇基的極性非質(zhì)子溶劑不用于本發(fā)明的組合物和方法，因為這類溶劑的h參數(shù)太高。極性非質(zhì)子溶劑的摩爾體積也可能有關(guān)，因為它進(jìn)入到三個hansen溶度參數(shù)的評價中。隨著摩爾體積變小，液體傾向于快速蒸發(fā)。隨著摩爾體積變大，液體傾向于進(jìn)入上述d和p參數(shù)范圍的固體區(qū)。因此，本發(fā)明的極性非質(zhì)子溶劑相當(dāng)接近hsp空間的液體/固體分界線。在某些實施方案中，本發(fā)明的極性非質(zhì)子溶劑具有內(nèi)酯、砜、腈、亞硫酸和/或碳酸官能團(tuán)。這類化合物的特征是具有相當(dāng)高的介電常數(shù)、高偶極距和水溶性。具有內(nèi)酯官能團(tuán)的示例性極性非質(zhì)子溶劑是γ-丁內(nèi)酯(gbl)，具有砜官能團(tuán)的示例性極性非質(zhì)子溶劑是環(huán)丁砜(sl；四氫噻吩-二氧化物)，具有腈官能團(tuán)的示例性極性非質(zhì)子溶劑是乙腈(an)，具有亞硫酸官能團(tuán)的示例性極性非質(zhì)子溶劑是亞硫酸乙二醇酯(gs)，而具有碳酸官能團(tuán)的示例性極性非質(zhì)子溶劑是碳酸亞乙酯(ec)、碳酸異丙二醇酯(pc)或三硫代碳酸亞乙酯(etc)。這些示例性溶劑的結(jié)構(gòu)提供如下，它們的hansen溶度參數(shù)、red數(shù)和摩爾體積見表1。表1n/a＝不適用。可用于本發(fā)明的其它合適極性非質(zhì)子溶劑是環(huán)狀化合物，例如ε-己內(nèi)酯和n-甲基吡咯烷酮。另外，取代的吡咯烷酮(pyrolidinone)和氮在5-元或6-元環(huán)內(nèi)的相關(guān)結(jié)構(gòu)，以及具有兩個腈基、或一個溴和一個腈基的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，也可適用于本發(fā)明。其它合適的極性非質(zhì)子溶劑可含有環(huán)尿烷基(nhcoo-)。然而，并非所有這種化合物都是合適的，因為當(dāng)用于本發(fā)明的雜交組合物時1，3-二甲基-2-咪唑烷酮不產(chǎn)生信號。本領(lǐng)域技術(shù)人員可按本文所述篩選可用于本發(fā)明組合物和方法的化合物。適用于本發(fā)明的示例性的化學(xué)品見下表2和表3。表2表2根據(jù)它們的hansen溶度參數(shù)，給出用于本發(fā)明組合物和方法的潛在化學(xué)品的示例性列表。其它化合物當(dāng)然也滿足這些要求。這些化學(xué)品中的某些已經(jīng)用于現(xiàn)有技術(shù)的雜交和/或pcr溶液(例如二甲亞砜(dmso)已經(jīng)用于雜交和pcr溶液，環(huán)丁砜(sl)已經(jīng)用于pcr溶液)，但大部分沒有。然而，現(xiàn)有技術(shù)并不認(rèn)為這些化合物可有利地用于減少雜交時間和/或降低溫度，正如本申請所公開的。表3并非所有列于表2和表3的化學(xué)品都適用于本發(fā)明的組合物和方法。例如，盡管dmso列于表2，因為其hansen溶度參數(shù)(hsp)落入上述范圍，但是dmso在本發(fā)明組合物和方法中不能起到減少雜交時間和/或降低溫度的作用。因此，在某些實施方案中，含水組合物不含dmso作為極性非質(zhì)子溶劑。然而，用本文提供的指導(dǎo)來篩選合適化合物，包括測試實施例之一所提供的化合物，在普通技術(shù)人員的技術(shù)范圍之內(nèi)。例如，在某些實施方案中，合適的極性非質(zhì)子溶劑所具有的hsp應(yīng)在上述范圍之內(nèi)，其結(jié)構(gòu)示于上式1-9。(2)組合物、緩沖劑和溶液(a)雜交溶液傳統(tǒng)的雜交溶液是本領(lǐng)域已知的。這類溶液可包括例如緩沖劑、促進(jìn)劑、螯合劑、鹽、去垢劑和封閉劑。例如，緩沖劑可包括ssc、hepes、sspe、pipes、tmac、tris、set、磷酸鉀、檸檬酸、焦磷酸鈉等。緩沖劑濃度可以是0.5x至50x。通常，緩沖劑濃度是2x至10x。促進(jìn)劑可包括聚合物(例如ficoll、pvp、肝素、硫酸葡聚糖、蛋白質(zhì)(例如bsa)、二醇(例如乙二醇、甘油、1，3-丙二醇甘油、丙二醇或二甘醇)、其組合(例如demhardt氏溶液和blotto)、以及有機(jī)溶劑(例如甲酰胺、二甲基甲酰胺、dmso等)。促進(jìn)劑濃度可以是1％至80％或0.1x至10x。通常，甲酰胺濃度是25％至75％，而dmso、硫酸葡聚糖和二醇濃度是5％至10％。螯合劑可包括edta、egta等。螯合劑濃度可以是0.1mm至10mm。通常，螯合劑濃度是0.5mm至5mm。鹽可包括氯化鈉、磷酸鈉、磷酸鎂等。鹽濃度可以是1mm至750mm。通常，鹽濃度是10mm至500mm。去垢劑可包括吐溫、sds、triton、chaps、去氧膽酸等。去垢劑濃度可以是0.01％至10％。通常，去垢劑濃度是0.1％至1％。核酸封閉劑可包括酵母trna、均聚物dna、變性的鮭魚精子dna、鯡魚精子dna、人類總dna、cot1dna等。封閉核酸濃度可以是0.05mg/ml至100mg/ml。在文獻(xiàn)中，傳統(tǒng)的雜交溶液有很大差異。例如，傳統(tǒng)的雜交溶液可包含5x或6xssc、0.01medta、5xdernhardt氏溶液、0.5％sds和100mg/ml剪切變性的鮭魚精子dna。另一種傳統(tǒng)的雜交溶液可包含50mmhepes、0.5mnacl和0.2mmedta。用于生物標(biāo)本rna檢測的fish的典型雜交溶液可包括例如2xssc、10％硫酸葡聚糖、2mm氧釩基-核糖核苷復(fù)合物、50％甲酰胺、0.02％無rna酶的bsa和1mg/ml大腸桿菌trna。用于生物標(biāo)本dna檢測的fish的典型雜交溶液可包括例如2xssc、10％硫酸葡聚糖、50％甲酰胺和例如0.3mg/ml鮭魚精子dna或0.1mg/mlcot1dna。其它典型雜交溶液可包含40％甲酰胺、10％硫酸葡聚糖、30mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、封閉pna或cot-1dna，和在某些情況下0.1μg/μl人類總dna(thd)。本發(fā)明的組合物可包含雜交溶液，其含有上述傳統(tǒng)雜交溶液的任何組分以及至少一種極性非質(zhì)子溶劑。傳統(tǒng)組分的濃度可以是與傳統(tǒng)雜交溶液中所用的相同濃度，或者可以是更高或更低濃度，或者可完全省略不用。例如，如果本發(fā)明的組合物包含nacl和/或磷酸鹽緩沖液時，它們的濃度可以是0-1200mmnacl和/或0-200mm磷酸鹽緩沖液。在某些實施方案中，鹽濃度可以是例如300mmnacl和5mm磷酸鹽緩沖液，或600mmnacl和10mm磷酸鹽緩沖液。如果本發(fā)明的組合物包含促進(jìn)劑例如硫酸葡聚糖、二醇或dmso，硫酸葡聚糖濃度可以是5％至40％，二醇濃度可以是0.1％至10％，dmso可以是0.1％至10％。在某些實施方案中，硫酸葡聚糖的濃度可以是10％或20％，乙二醇、1，3-丙二醇或甘油的濃度可以是1％至10％。在某些實施方案中，dmso的濃度可以是1％。在某些實施方案中，含水組合物不包含dmso作為促進(jìn)劑。在某些實施方案中，含水組合物不包含甲酰胺作為促進(jìn)劑，或者包含甲酰胺，條件是所述組合物含有小于10％、或小于5％、或小于2％、或小于1％、或小于0.5％、或小于0.1％、或小于0.05％、或小于0.01％。如果本發(fā)明的組合物包含檸檬酸，其濃度范圍可以是1mm至50mm，ph范圍可以是5.0至8.0。在某些實施方案中，檸檬酸濃度可以是10mm，ph可以是6.2。本發(fā)明的組合物可包含能減少與例如細(xì)胞膜的非特異性結(jié)合的試劑，例如鮭魚精子或少量人類總dna，或者例如，它們可包含能封閉例如重復(fù)序列與靶標(biāo)結(jié)合的封閉劑，例如大量人類總dna或重復(fù)序列富集dna或特定封閉劑例如pna或lna的片段和序列。這些試劑的濃度可以是0.01-100μg/μl或0.01-100μm。例如，在某些實施方案中，這些試劑可以是0.1μg/μl人類總dna或0.1μg/μl非人類dna，例如鯡魚精子、鮭魚精子或小牛胸腺dna或5μm封閉pna。本發(fā)明一方面是用于雜交的組合物或溶液。用于本發(fā)明的組合物包含含有核酸序列和足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的含水組合物。變性雙鏈核苷酸序列的有效量是能夠雜交的量。例如，用于測定極性非質(zhì)子溶劑的量是否對雜交有效的一個方式就是，確定所述極性非質(zhì)子溶劑，當(dāng)用于本文所述的雜交方法和組合物例如實施例1時，是否能產(chǎn)生可檢測信號和/或擴(kuò)增的核酸產(chǎn)物。極性非質(zhì)子溶劑有效量的非限制性實例包括例如約1％至約95％(v/v)。在某些實施方案中，極性非質(zhì)子溶劑的濃度為5％至60％(v/v)。在其它實施方案中，極性非質(zhì)子溶劑的濃度為10％至60％(v/v)。在再一些實施方案中，極性非質(zhì)子溶劑的濃度為30％至50％(v/v)。1％至5％、5％至10％、10％、10％至20％、20％至30％、30％至40％、40％至50％、或50％至60％(v/v)的濃度也是合適的。在某些實施方案中，極性非質(zhì)子溶劑的濃度可以是0.1％、0.25％、0.5％、1％、2％、3％、4％或5％(v/v)。在其它實施方案中，極性非質(zhì)子溶劑的濃度可以是7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、10％、10.5％、11％、11.5％、12％、12.5％、13％、13.5％、14％、14.5％、15％、15.5％、16％、16.5％、17％、17.5％、18％、18.5％、19％、19.5％或20％(v/v)。當(dāng)一種或多種核酸探針存在于本發(fā)明的組合物時，所述探針可用可檢測化合物(例如酶、生色團(tuán)、熒光染料和半抗原)直接或間接標(biāo)記，如上所述。dna探針濃度可以是0.1-100ng/μl。例如，在某些實施方案中，探針濃度可以是1-10ng/μl。pna探針濃度可以是0.5-5000nm。例如，在某些實施方案中，探針濃度可以是5-1000nm。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包含40％極性非質(zhì)子溶劑(v/v)(例如碳酸亞乙酯，“ec”)、10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液和1-10ng/μl探針的混合物。本發(fā)明的另一種示例性組合物包含15％ec、20％硫酸葡聚糖、600mmnacl、10mm磷酸鹽緩沖液和0.1μg/μl人類總dna的混合物。又一種示例性組合物包含15％ec、20％硫酸葡聚糖、600mmnacl、10mm檸檬酸ph6.2和0.1μg/μl非人類dna(例如鯡魚精子、鮭魚精子或小牛胸腺)或0.5％甲酰胺或1％二醇(例如乙二醇、1，3丙二醇或甘油)。(b)極性非質(zhì)子溶劑不同的極性非質(zhì)子溶劑可賦予本發(fā)明組合物不同特性。例如，對極性非質(zhì)子溶劑的選擇可促進(jìn)組合物的穩(wěn)定性，因為某些極性非質(zhì)子溶劑會隨時間降解。例如，極性非質(zhì)子溶劑碳酸亞乙酯分解成乙二醇(其是相當(dāng)穩(wěn)定的分子)和二氧化碳(其可與水反應(yīng)形成碳酸，改變本發(fā)明組合物的酸度)。不受理論的束縛，據(jù)信在碳酸亞乙酯分解時ph的改變使本發(fā)明組合物的雜交效果降低。然而，可通過降低組合物的ph，通過添加檸檬酸作為緩沖液(ph6.2)，替代傳統(tǒng)的磷酸鹽緩沖液(其通常在約ph7.使用4)，和/或通過添加乙二醇(濃度例如介于0.1％至10％，或介于0.5％至5％，例如1％、2％、3％等)，改善穩(wěn)定性。例如，使用10mm檸檬酸緩沖液，本發(fā)明組合物在2-8℃可保持穩(wěn)定大約8個月。如果組合物貯存在低溫(例如-20℃)時也可改善穩(wěn)定性。另外，在某些條件下，某些極性非質(zhì)子溶劑可使本發(fā)明組合物分離成多相體系。對于不同的極性非質(zhì)子溶劑而言，得到多相體系的條件可以不同。然而，通常，隨著極性非質(zhì)子溶劑濃度增加，相數(shù)增加。例如，包含低濃度碳酸亞乙酯(即小于20％)的組合物可以單相形式存在，而包含更高濃度碳酸亞乙酯的組合物可分離成兩相、或甚至三相。舉例來說，包含15％碳酸亞乙酯的組合物在室溫下以單相存在，而包含40％碳酸亞乙酯的組合物在室溫下由粘稠的下相(總體積的大約25％)和不太粘稠的上相(總體積的大約75％)組成。另一方面，某些極性非質(zhì)子溶劑在室溫下可以兩相形式存在，甚至在低濃度時。例如，環(huán)丁砜、γ-丁內(nèi)酯、三硫代碳酸亞乙酯、亞硫酸乙二醇酯和碳酸異丙二醇酯在濃度為10、15、20或25％(20％硫酸葡聚糖、600mmnacl、10mm檸檬酸緩沖液)時，在室溫下以兩相形式存在。也可通過調(diào)節(jié)本發(fā)明組合物的溫度來改變相數(shù)。通常，隨著溫度上升，相數(shù)減少。例如，在2-8℃，包含40％碳酸亞乙酯的組合物可分離成三相體系。也可通過調(diào)節(jié)組合物中硫酸葡聚糖和/或鹽的濃度，來改變相數(shù)。一般而言，降低硫酸葡聚糖濃度(傳統(tǒng)濃度為10％)和/或鹽濃度，可減少相數(shù)。然而，根據(jù)組合物中特定極性非質(zhì)子溶劑及其濃度，可甚至用更高濃度的鹽和硫酸葡聚糖產(chǎn)生單相。例如，通過增加硫酸葡聚糖和鹽的濃度，包含少量ec(例如15％、10％、5％)的組合物可工作良好，同時仍然保持單相體系。在一個具體的實施方案中，包含her2基因dna探針、cen7pna探針、15％ec、20％硫酸葡聚糖、600mmnacl和10mm磷酸鹽緩沖液的組合物甚至在-20℃以單相形式存在。在其它實施方案中，組合物在-20℃是液體。某些極性非質(zhì)子溶劑在一相或另一相中可產(chǎn)生更強(qiáng)信號。例如，40％亞硫酸乙二醇酯在下相產(chǎn)生強(qiáng)烈信號，而在上相無信號。同樣，某些種類的探針在一相或另一相中可產(chǎn)生更強(qiáng)烈的信號。例如，pna探針傾向于在下相、而不是上相中顯示出更強(qiáng)烈信號。因此，本發(fā)明的多相體系可用于方便地檢查樣品的不同方面。例如，兩相體系可用于分離帶有pna探針標(biāo)記的樣品和帶有dna探針的樣品。其它用途包括分離具有例如某些雜交優(yōu)勢的特定相，使得所分離的相可用作單相體系。在分離特定相之前或之后，可加入探針和/或樣品?？捎帽景l(fā)明的單相組合物、本發(fā)明多相組合物的單一相、或本發(fā)明多相組合物的任何一相或多相的混合物，來進(jìn)行雜交。例如，在單相體系中，可提取一定體積的樣品用于雜交。在多相體系中，可從目標(biāo)相(例如上相、下相或中相)中提取一定體積的樣品用于雜交?；蛘?，在提取一定體積的混合樣品用于雜交之前，可將多相體系中的各相混合。然而，根據(jù)組合物的不同，多相體系可產(chǎn)生強(qiáng)烈而不均勻的局部背景染色。盡管，加入少量甲酰胺將會減低單相體系中的背景，但它對具有高濃度(例如40％)極性非質(zhì)子溶劑的多相體系卻沒什么效果。另外，隨著甲酰胺濃度的增加，需要更高濃度的探針和/或更長的雜交時間來保持強(qiáng)烈信號強(qiáng)度。(c)對于具體應(yīng)用的優(yōu)化可以改變本發(fā)明的組合物，以優(yōu)化具體應(yīng)用的結(jié)果。例如，可以改變極性非質(zhì)子溶劑、鹽、促進(jìn)劑、封閉劑和氫離子(即ph)的濃度，以改善具體應(yīng)用的結(jié)果。例如，可改變極性非質(zhì)子溶劑濃度，以改善信號強(qiáng)度和背景染色。通常，隨著極性非質(zhì)子溶劑濃度增加，信號強(qiáng)度增加且背景染色降低。例如，與包含5％ec的組合物相比，包含15％ec的組合物傾向于顯示出更強(qiáng)的信號和更少的背景。然而，對于具有低濃度極性非質(zhì)子溶劑(例如0％至20％)的組合物，如果增加鹽和/或硫酸葡聚糖的濃度，則可改善信號強(qiáng)度。例如，用5％至10％ec，當(dāng)鹽濃度比傳統(tǒng)鹽濃度升高大約8-16倍(即大約1200mmnacl、20mm磷酸鹽緩沖液)時，可觀察到強(qiáng)烈信號。同樣，如果使用較低濃度的極性非質(zhì)子溶劑，通常需要較高濃度的硫酸葡聚糖以保持良好信號和背景強(qiáng)度。因此，也可改變鹽和硫酸葡聚糖的濃度，以改善信號強(qiáng)度和背景染色。通常，隨著鹽和硫酸葡聚糖的濃度增加，信號強(qiáng)度增加，背景染色降低。例如，傳統(tǒng)鹽濃度的大約2-4倍的鹽濃度(即300mmnacl5mm磷酸鹽緩沖液)產(chǎn)生強(qiáng)烈信號和低背景。然而，令人驚奇的是，使用甚至完全不含鹽的本發(fā)明組合物時發(fā)生雜交。在無鹽條件下，通過增加促進(jìn)劑和/或極性非質(zhì)子溶劑的濃度，可改善信號強(qiáng)度。同樣，隨著硫酸葡聚糖濃度從0％增至20％，信號強(qiáng)度增加。然而，甚至在硫酸葡聚糖濃度為0％時可觀察到良好信號。在低硫酸葡聚糖條件下，通過增加極性非質(zhì)子溶劑和/或鹽的濃度，可改善信號強(qiáng)度。另外，可改變用于本發(fā)明組合物的探針類型，以改善結(jié)果。例如，在本發(fā)明某些方面，與dna/pna探針組合相比，在本發(fā)明組合物中dna/dna探針組合可表現(xiàn)出低背景，或反之亦然。另一方面，在低鹽和/或低極性非質(zhì)子溶劑濃度下，與dna探針相比，pna探針傾向于顯示更強(qiáng)烈信號。事實上，在沒有極性非質(zhì)子溶劑時，pna探針也顯示信號，而在沒有極性非質(zhì)子溶劑時，dna探針則顯示微弱信號或無信號。ii.試劑盒本發(fā)明也提供包含本發(fā)明組合物的試劑盒。因此，試劑盒可包含一種或多種分子探針(如上所述)和含水組合物(如上所述)。在一個實施方案中，探針不立即顯示(例如因為它們沒有熒光團(tuán)或生色團(tuán)標(biāo)記)，試劑盒還包含顯色劑，例如抗體(其可以是單克隆抗體，并且其可具有可檢測標(biāo)記)、酶的熒光或顯色底物、鏈霉抗生物素綴合物，或技術(shù)人員已知的任何其它合適的顯色劑。在一個實施方案中，試劑盒還包含可用于檢測染色體畸變的其它試劑和/或組合物。在一個實施方案中，試劑盒還可包含蛋白酶，例如胃蛋白酶或蛋白酶k。在一個實施方案中，試劑盒還可包含一種或多種預(yù)處理溶液、蛋白酶、嚴(yán)格洗滌緩沖劑、熒光封固劑、洗滌緩沖劑、信號放大溶液和蓋玻片密封劑。例如，在一個實施方案中，細(xì)胞學(xué)fish試劑盒還可包含一種或多種洗滌緩沖劑、嚴(yán)格性緩沖劑、熒光封固劑和蓋玻片密封劑。在一個實施方案中，組織學(xué)fish試劑盒還可包含一種或多種預(yù)處理溶液、胃蛋白酶、洗滌緩沖劑、嚴(yán)格性緩沖劑、熒光封固劑和蓋玻片密封劑。在一個實施方案中，cish試劑盒還可包含過氧化物酶組件(block)、cish抗體混合物、紅色底物緩沖劑、藍(lán)色底物緩沖劑、紅色顯色劑和藍(lán)色顯色劑。在另一個實施方案中，試劑盒還可包含使用說明書。iii.應(yīng)用、方法和使用本發(fā)明還提供使用上述組合物和試劑盒的方法，所述方法用于檢測染色體畸變、診斷疾病、監(jiān)測治療性治療過程、監(jiān)測已經(jīng)完成治療的患者的疾病復(fù)發(fā)。一般而言，這種方法使用一種或多種上述雜交條件。例如，本發(fā)明提供用本發(fā)明組合物檢測染色體畸變的方法。檢測可涉及診斷、選擇合適的治療和/或監(jiān)測患者的疾病復(fù)發(fā)。在一個實施方案中，本發(fā)明提供確定核酸序列中是否存在染色體畸變的方法，所述方法包括：-提供檢測染色體畸變的分子探針，-提供所述核酸序列，-提供包含1％(v/v)至95％(v/v)的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的含水組合物，-將所述分子探針、所述核酸序列和所述含水組合物混合在一起，其時間至少足以使所述分子探針與所述核酸序列雜交，和-確定所述分子探針是否已經(jīng)與所述核酸序列雜交，從而確定染色體畸變是否存在于所述核酸序列中。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供確定核酸序列中是否存在染色體畸變的方法，所述方法包括：-提供所述核酸序列，-將包含檢測染色體畸變的分子探針和1％(v/v)至95％(v/v)的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的含水組合物用于所述核酸，其時間至少足以使所述分子探針與核酸序列雜交，和-確定所述分子探針是否與所述核酸序列雜交，從而確定染色體畸變是否存在于所述核酸序列中。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供確定核酸序列中是否存在染色體畸變的方法，所述方法包括：-提供所述核酸序列，-將包含至少一種極性非質(zhì)子溶劑和檢測染色體畸變的分子探針的本發(fā)明含水化合物用于所述核酸序列，其時間至少足以使所述分子探針與核酸序列雜交，和-確定所述分子探針是否與所述核酸序列雜交，從而確定染色體畸變是否存在于所述核酸序列中。本發(fā)明還提供診斷染色體畸變相關(guān)的先天性遺傳疾病、癌癥或感染的方法，所述方法包括：-提供來自受試者的組織樣品，其中所述組織樣品包含核酸序列，-按照本發(fā)明方法，確定染色體畸變是否存在于所述核酸序列中，和-如果染色體畸變存在于所述組織樣品中，則診斷所述先天性遺傳疾病、癌癥或感染。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法可用于確定患者是否能從特定治療中受益。例如，her已擴(kuò)增2的乳癌患者可從herceptintm(曲妥單抗)治療中受益，過量表達(dá)egfr的結(jié)直腸癌患者可從(西妥昔單抗)或vectibixtm(panitumumab)的治療中受益。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法可用于監(jiān)測疾病進(jìn)程或緩解。在另一個實施方案中，本發(fā)明的方法可用于評價患者的預(yù)后。例如，本發(fā)明的方法可與臨床病理學(xué)數(shù)據(jù)一起，用于評價患者的預(yù)后。在一個實施方案中，所述方法可用于確定her2基因擴(kuò)增的存在，并使用該信息來提供ii期、結(jié)節(jié)陽性乳癌患者的預(yù)后。top2a缺失或擴(kuò)增的存在也可用于評價乳癌患者的預(yù)后。a.分析樣品本發(fā)明的方法和組合物可全部或部分用于細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)或分子生物學(xué)領(lǐng)域的所有類型的雜交應(yīng)用。依據(jù)一個實施方案，本發(fā)明方法中的第一或第二核酸序列存在于生物樣品中。這些樣品的實例包括組織樣品、細(xì)胞制備物、細(xì)胞碎片制備物、以及分離或富集的細(xì)胞組分制備物。樣品可源自不同組織(例如乳房、肺、結(jié)直腸、前列腺、肺、頭頸部、胃、胰臟、食道、肝臟和膀胱或其它相關(guān)組織及其贅生物)、任何細(xì)胞懸液、血液樣品、細(xì)針吸出物、腹水、痰、腹膜洗液、肺部洗液、尿、糞、細(xì)胞刮取物、細(xì)胞涂片、細(xì)胞離心涂片或細(xì)胞涂片離心(cytoprep)細(xì)胞?？捎脴?biāo)準(zhǔn)方案分離和處理樣品。細(xì)胞碎片制備物可通過例如細(xì)胞勻漿、凍融處理或細(xì)胞破碎而獲取?？筛鶕?jù)獲取樣品的目的并根據(jù)其場所的常規(guī)方法的不同，采用多種不同方式處理分離的樣品。通常用不同試劑處理樣品，以保藏組織，用于隨后的樣品分析，或者可直接分析樣品。廣泛用于保藏樣品的方法實例是經(jīng)福爾馬林固定，然后石蠟包埋和冷凍保藏。細(xì)胞學(xué)包括檢查來自生物樣品的單個細(xì)胞和/或染色體鋪片。樣品的細(xì)胞學(xué)檢查首先是獲取細(xì)胞標(biāo)本，這通常是通過以下方式而達(dá)到：通過刮取、擦拭或刷取某區(qū)域(例如就宮頸標(biāo)本而言)、或通過采集體液(例如得自胸腔、膀胱或脊柱的那些)、或通過細(xì)針吸出或穿刺活檢(例如就內(nèi)部腫瘤而言)。在常規(guī)手工細(xì)胞學(xué)制備中，將樣品移至液體懸浮材料中，再將液體中的細(xì)胞直接轉(zhuǎn)移或通過基于離心的處理步驟，轉(zhuǎn)移到顯微鏡載玻片上，進(jìn)行觀察。在典型的自動化細(xì)胞學(xué)制備中，將過濾裝置放入液體懸液中，過濾裝置同時可分散細(xì)胞并將細(xì)胞捕獲到濾膜上。再取出濾膜并貼放在顯微鏡載玻片上。將細(xì)胞固定在顯微鏡載玻片上，然后通過下述任何技術(shù)進(jìn)行分析。對于中期鋪片，細(xì)胞培養(yǎng)物通常經(jīng)秋水仙堿或其它合適的紡錘體極破壞劑處理，以將細(xì)胞周期終止在中期。然后將細(xì)胞固定并印跡到(spottedonto)顯微鏡載玻片上，用甲醛處理，洗滌并在乙醇中脫水。然后加入探針，通過下述任何技術(shù)分析樣品。在使用細(xì)胞學(xué)樣品的傳統(tǒng)雜交實驗中，將含有標(biāo)本的玻片浸泡在甲醛緩沖液中，洗滌，然后在乙醇中脫水。再加入探針，給標(biāo)本蓋上蓋玻片。將玻片在足以變性標(biāo)本中任何核酸的溫度下孵育(例如5分鐘，在82℃)，然后在足以允許雜交的溫度下孵育(例如在45℃過夜)。雜交之后，除去蓋玻片，對標(biāo)本進(jìn)行高嚴(yán)格性洗滌(例如在65℃10分鐘)，接著是一系列低嚴(yán)格性洗滌(例如在室溫下2x3分鐘)。然后樣品經(jīng)脫水和封固，用于分析。組織學(xué)包括檢查組織薄片中的細(xì)胞。為了制備組織樣品用于組織學(xué)檢查，將組織片固定在合適固定劑(通常是醛，例如甲醛或戊二醛)中，然后包埋在融化石蠟中。再在切片機(jī)上對含有組織樣品的蠟塊進(jìn)行切片，得到含有組織的石蠟薄片，通常厚度為2-10微米。再將標(biāo)本放在顯微鏡載玻片上，風(fēng)干并加熱，使標(biāo)本粘附在載玻片上。再將殘余石蠟溶于合適溶劑(通常是二甲苯、甲苯或其它)中。這些所謂的脫蠟溶劑再用洗滌-脫水類試劑除去，然后通過下述任何技術(shù)來分析樣品?；蛘?，可從冷凍標(biāo)本制備切片，快速固定在10％福爾馬林或其它合適的固定劑中，再用脫水劑浸泡，然后分析樣品。在使用組織學(xué)樣品的傳統(tǒng)雜交實驗中，將經(jīng)福爾馬林固定、石蠟包埋的組織標(biāo)本切成2-6μm的切片并收集在載玻片上。石蠟被融化(例如30-60分鐘，在60℃)并通過用二甲苯(或二甲苯替代品)洗滌例如2x5分鐘而除去(脫蠟)。使樣品復(fù)水，洗滌和預(yù)處理(例如在95-100℃10分鐘)。載玻片經(jīng)洗滌并用胃蛋白酶或其它合適的滲透劑在37℃處理例如3-15分鐘。載玻片經(jīng)洗滌(例如2x3分鐘)，脫水并使用探針。給標(biāo)本蓋上蓋玻片，并將玻片在足以變性標(biāo)本中任何核酸的溫度下孵育(例如5分鐘，在82℃)，然后在足以允許雜交的溫度下孵育(例如在45℃過夜)。雜交之后，除去蓋玻片，對標(biāo)本進(jìn)行高嚴(yán)格性洗滌(例如10分鐘，在65℃)，接著是一系列低嚴(yán)格性洗滌(例如2x3分鐘，在室溫下)。然后樣品經(jīng)脫水和封固，用于分析。b.雜交技術(shù)本發(fā)明的組合物和方法可全部或部分用于本領(lǐng)域已知用于細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)樣品的所有類型的核酸雜交技術(shù)。這種技術(shù)包括例如原位雜交(ish)、熒光原位雜交(fish；包括多色fish、纖維-fish等)、顯色原位雜交(cish)、銀染原位雜交(sish)、比較基因組雜交(cgh)、染色體涂染和原位陣列。一般而言，雜交技術(shù)例如cgh、fish、cish和sish使用大的、主要是非特異性核酸探針，所述探針以不同的嚴(yán)格性與細(xì)胞染色體中的基因或基因片段雜交。這類探針可衍生自粘?？寺?cosmicclone)、yac克隆或其它克隆的dna片段。使用大探針使原位雜交技術(shù)非常靈敏。然而，在傳統(tǒng)雜交測定中成功使用大基因組探針取決于封閉來自例如廣泛存在于基因組中的重復(fù)序列的不想要的背景染色。這種封閉步驟是耗時而昂貴的。如本文所述，本發(fā)明的方法和組合物有利地減少和/或消除對這種封閉步驟的需要。然而，在一個實施方案中，按照本領(lǐng)域已知方法例如公開于pct/us02/30573的方法，重復(fù)序列可被抑制?？芍苯踊蜷g接使用熒光染料(例如fish)、有機(jī)顯色劑(例如cish)、銀顆粒(例如sish)或其它金屬顆粒(例如金促進(jìn)的熒光原位雜交，goldfish)，來檢測細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)樣品中的結(jié)合探針。因此，根據(jù)檢測方法，得自待檢樣品的細(xì)胞群體可通過熒光顯微鏡術(shù)或常規(guī)明視野光學(xué)顯微鏡來觀察。對細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)樣品的雜交測定是測定特定dna序列的數(shù)目、大小和/或位置的重要工具。例如，在cgh中，將全基因組染色并與正常參考基因組比較，用于檢測具有異?？截悢?shù)的區(qū)域。通常，來自受試者組織和正常對照組織的dna用不同顏色的探針來標(biāo)記。將dna混合物合并并加入到正常染色體的中期鋪片(或加入到微陣列芯片，對于陣列cgh或基質(zhì)-cgh)。然后比較顏色比例，識別具有異?？截悢?shù)的區(qū)域。當(dāng)需要多色圖像和/或當(dāng)方案要求定量信號時，通常使用fish。該技術(shù)通常要求制備細(xì)胞學(xué)樣品，標(biāo)記探針，變性靶染色體和探針，將探針與靶序列雜交并檢測信號。通常，雜交反應(yīng)對靶序列進(jìn)行熒光染色，使它們的位置、大小或數(shù)目可用熒光顯微鏡術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)或其它合適儀器來測定。范圍從全基因組到幾千堿基對的dna序列都可用fish來研究。fish也可用于中期鋪片和間期核。fish已經(jīng)成功用于對中期染色體、間期核、染色質(zhì)纖維和裸dna分子的重復(fù)dna序列和單拷貝dna序列作圖，并通過大重復(fù)家族(1argerepeatedfamily)、尤其是核糖體dna和主要串聯(lián)排列家族(majortandemarrayfamily)的定位而用于染色體識別和核型分析。fish的一個最重要應(yīng)用就是在人和其它真核模型物種的特定疾病相關(guān)基因中檢測單拷貝dna序列，和檢測感染因子。fish可用于檢測例如在出生前診斷、造血系統(tǒng)癌癥和實體瘤中的染色體非整倍性；檢測基因異常例如癌基因擴(kuò)增、基因缺失或基因融合；染色體結(jié)構(gòu)異常例如易位、重復(fù)、插入或倒位；鄰近基因綜合征(contiguousgenesyndrome)例如微缺失綜合征(microdeletionsyndrome)；各種治療的遺傳效應(yīng)；體細(xì)胞中的病毒核酸和染色體中的病毒整合位點(diǎn)等。在多色fish中，每條染色體染上不同顏色，使得可以確定正常染色體，異常染色體正是從中衍生出來的。這種技術(shù)包括多色fish(m-fish；speicher等，nat.genet.，12：368-75(1996))、光譜核型分析(sky；schrock等，science，273：494-97(1996))、組合二元關(guān)系標(biāo)記(combinedbinaryrationlabeling)(cobra；tanke等，eur.j.hum.genet.，7：2-11(1999))、變色核型分析(color-changingkaryotyping)(henegariu等，nat.genet.，23：263-64(1999))、多色顯帶分析(muller等，hum.genet.，100：271-78(1997))、高分辨率多色顯帶分析(chudoba等，cytogenet.cellgenet.，84：156-60(1999))、端粒多色fish(tm-fish；henegariu等，lab.invest.，81：483-91(2001))、信號分離fish(ssfish)和信號融合fish。cish和sish可用于與fish相同的許多應(yīng)用，并具有允許分析基礎(chǔ)組織形態(tài)學(xué)的額外優(yōu)勢，例如用于組織病理學(xué)應(yīng)用。本發(fā)明的組合物也可全部或部分用于涉及雜交的所有類型的分子生物學(xué)技術(shù)，包括印跡和探針(例如dna印跡、rna印跡等)、陣列和擴(kuò)增技術(shù)(包括傳統(tǒng)的pcr、rt-pcr、突變pcr、不對稱pcr、熱啟動pcr、反向pcr、多重pcr、巢式pcr、定量pcr和原位pcr)。原位pcr是在載玻片上的細(xì)胞(例如上述細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)樣品)內(nèi)發(fā)生的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。通常，當(dāng)樣品粘附到載玻片上之后，使細(xì)胞復(fù)水和滲透，然后與包含聚合酶、dntp和引物的合適pcr試劑混合物混合。pcr可在專用儀器例如geneamp原位pcr系統(tǒng)1000(perkinelmerbiosystems，fostercity，ca)上進(jìn)行，并可用標(biāo)記探針或通過在擴(kuò)增期間摻入標(biāo)記dntp來檢測擴(kuò)增產(chǎn)物。本發(fā)明的組合物將會改善傳統(tǒng)的和原位pcr分析的效率，例如通過降低變性和雜交的溫度和/或減少進(jìn)行擴(kuò)增循環(huán)的所需時間。c.雜交條件使用本發(fā)明組合物的雜交方法可包括將所述組合物用于包含靶核酸序列(很可能呈雙鏈形式)的樣品。通常，為了保證探針與靶序列雜交，將樣品和組合物加熱，以變性靶核酸。變性期間，極性非質(zhì)子溶劑與序列相互作用并促進(jìn)靶標(biāo)的變性和探針重新退火到靶標(biāo)。與甲酰胺相比，本發(fā)明所述的極性非質(zhì)子溶劑顯著地加速了該過程并降低了雜交條件的苛刻性和毒性。可采用與使用傳統(tǒng)溶液進(jìn)行雜交同樣的測定方法，使用本發(fā)明組合物進(jìn)行雜交。然而，本發(fā)明的組合物允許更短的雜交時間。例如，加熱預(yù)處理、消化、變性、雜交、洗滌和封固步驟可使用與傳統(tǒng)溶液所用的體積、溫度、試劑和孵育時間相同的條件。大的變化存在于本領(lǐng)域已知的傳統(tǒng)雜交方案中。例如，某些方案規(guī)定了沒有探針存在時可能的雙鏈核苷酸的單獨(dú)變性步驟，然后接著是雜交步驟。本發(fā)明的組合物可用于本領(lǐng)域已知的任何傳統(tǒng)的雜交方案。或者，可以從傳統(tǒng)方法來改變并優(yōu)化使用本發(fā)明組合物的測定，例如通過減少雜交時間，升高或降低變性和/或雜交的溫度、和/或增加或減少雜交體積。例如，在某些實施方案中，當(dāng)變性溫度是60-100℃，雜交溫度是20-60℃時，本發(fā)明的組合物將會產(chǎn)生強(qiáng)烈信號。在其它實施方案中，當(dāng)變性溫度是60-70℃、70-80℃、80-90℃或90-100℃，雜交溫度是20-30℃、30-40℃、40-50℃或50-60℃時，本發(fā)明的組合物將會產(chǎn)生強(qiáng)烈信號。在其它實施方案中，當(dāng)變性溫度是72、82或92℃，雜交溫度是40、45或50℃時，本發(fā)明的組合物將會產(chǎn)生強(qiáng)烈信號。在其它實施方案中，當(dāng)變性時間是0-10分鐘，雜交時間是0分鐘至24小時時，本發(fā)明的組合物將會產(chǎn)生強(qiáng)烈信號。在其它實施方案中，當(dāng)變性時間是0-5分鐘，雜交時間是0分鐘至8小時時，本發(fā)明的組合物將會產(chǎn)生強(qiáng)烈信號。在其它實施方案中，當(dāng)變性時間是0、1、2、3、4或5分鐘，雜交時間是0分鐘、5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘、180分鐘或240分鐘時，本發(fā)明的組合物將會產(chǎn)生強(qiáng)烈信號。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，在某些情況下，例如rna檢測時，不需要變性步驟。因此，使用本發(fā)明組合物的雜交可以在不到8小時內(nèi)完成。在其它實施方案中，雜交可以在不到6小時內(nèi)完成。在再一些實施方案中，雜交可以在4小時內(nèi)完成。在其它實施方案中，雜交可以在3小時內(nèi)完成。在又一些實施方案中，雜交可以在2小時內(nèi)完成。在其它實施方案中，雜交可以在1小時內(nèi)完成。在再一些實施方案中，雜交可以在30分鐘內(nèi)完成。在其它實施方案中，它們的雜交可發(fā)生在15分鐘內(nèi)。雜交甚至可發(fā)生在10分鐘內(nèi)或不到5分鐘內(nèi)。圖1和圖2分別說明了在組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)樣品上進(jìn)行的雜交的典型時間進(jìn)程，其使用本發(fā)明組合物與使用傳統(tǒng)溶液進(jìn)行的雜交相比較。隨著雜交時間的改變，探針濃度也可不同，以產(chǎn)生強(qiáng)烈信號和/或降低背景。例如，隨著雜交時間減少，探針量可增加，以改善信號強(qiáng)度。另一方面，隨著雜交時間減少，探針量可以減少，以改善背景染色。本發(fā)明的組合物令人驚奇地消除了雜交期間對封閉步驟的需求，即通過封閉例如重復(fù)序列與靶dna的結(jié)合而改善信號和背景強(qiáng)度。因此，不需要使用人類總dna、封閉pna、cot-1dna或來自任何其它來源的dna，作為封閉劑。然而，在使用本發(fā)明組合物時，還可通過向雜交反應(yīng)中加入能減少非特異性結(jié)合(例如與細(xì)胞膜結(jié)合)的試劑，進(jìn)一步降低背景水平，所述試劑例如少量人類總dna或非人類來源的dna(例如鮭魚精子dna)。本發(fā)明的含水組合物還提供了明顯降低組合物所含的核酸序列濃度的可能性。通常，與傳統(tǒng)的探針濃度相比，探針濃度可降低2-8倍。例如，如果her2dna探針和cen17pna探針用于本發(fā)明的組合物，它們的濃度可分別降低至其在傳統(tǒng)雜交溶液中濃度的1/4和1/2。該特征，以及不需要封閉用dna(例如封閉pna或cot1)，允許在自動化儀器系統(tǒng)中增加探針體積，與傳統(tǒng)組合物系統(tǒng)所用的傳統(tǒng)的10μl體積相比，這減少了因蒸發(fā)而帶來的損失，詳細(xì)討論如下。降低探針濃度也降低了背景。然而，降低探針濃度與雜交時間成負(fù)相關(guān)，即濃度越低，所需雜交時間越長。然而，甚至當(dāng)極低濃度的探針與本發(fā)明含水組合物一起使用時，雜交時間仍然比用傳統(tǒng)溶液更短。本發(fā)明的組合物通常允許比傳統(tǒng)雜交溶液更好的信噪比。例如，與在傳統(tǒng)溶液中雜交過夜相比，使用某些探針，使用本發(fā)明組合物的一小時雜交將會產(chǎn)生類似背景和更強(qiáng)烈信號。當(dāng)不加探針時沒有觀察到背景。當(dāng)使用本發(fā)明組合物時，也可改變和優(yōu)化傳統(tǒng)的測定方法，這取決于系統(tǒng)是否是手動、半自動或自動化的。例如，半自動或自動化系統(tǒng)將會從使用本發(fā)明組合物而得到的短雜交時間中受益。短雜交時間可減少在這類系統(tǒng)中使用傳統(tǒng)溶液所遇到的困難。例如，使用半自動和自動化系統(tǒng)的一個問題就是，雜交期間樣品會發(fā)生明顯蒸發(fā)，因為這類系統(tǒng)需要小的樣品體積(例如10-150μl)、升高的溫度和延長的雜交時間(例如14小時)。因此，在傳統(tǒng)雜交溶液中的組分比例相當(dāng)恒定。然而，因為本發(fā)明組合物允許更快的雜交，所以減少了蒸發(fā)，允許在用于半自動和自動化系統(tǒng)的雜交組合物中組分比例的靈活性增加。例如，兩種自動化儀器用于使用本發(fā)明組合物來進(jìn)行雜交。包含40％碳酸亞乙酯的組合物已經(jīng)用于儀器，其公開于pct申請dk2008/000430，包含15％碳酸亞乙酯的組合物已經(jīng)用于hybrimasterhs-300(alokaco.ltd，japan)。當(dāng)本發(fā)明的組合物用于hybrimasterhs-300時，該儀器可進(jìn)行快速fish雜交，用水代替?zhèn)鹘y(tǒng)有毒的甲酰胺混合物，因而改善了安全性并減少了蒸發(fā)。如果將水潤濕的條帶貼到aloka儀器的反應(yīng)單元(雜交室)的內(nèi)部蓋子上，如美國專利申請公布號2005/0281711所述，甚至?xí)M(jìn)一步減少蒸發(fā)。自動化圖像分析的另一個問題就是所需的圖像數(shù)，所需的大量存儲空間和采集圖像所需的時間。本發(fā)明的組合物通過產(chǎn)生與傳統(tǒng)溶液相比非常強(qiáng)烈信號，而解決了該問題。因為本發(fā)明組合物產(chǎn)生非常強(qiáng)烈信號，所以可以用比傳統(tǒng)溶液所需的更低的放大倍數(shù)來作圖并且仍然可以對其進(jìn)行檢測和分析，例如通過算法。因為放大倍數(shù)更低，焦平面更寬，所以本發(fā)明組合物減少或消除了對采集樣品連續(xù)切片的需要。結(jié)果是總體成像快得多，因為本發(fā)明組合物需要更少連續(xù)切片或不需要連續(xù)切片，并且各圖像覆蓋大得多的面積。另外，總體分析時間更快，因為總圖像文件小得多。因此，本發(fā)明的組合物和方法解決了傳統(tǒng)的雜交溶液和方法相關(guān)的許多問題。通過以下非限制性實施例，可以更清楚地理解本說明書，所述實施例構(gòu)成了本說明書的組合物的優(yōu)選實施方案。除非在實施例中或其它地方另有說明，否則在本說明書和權(quán)利要求書中所用的表達(dá)成分?jǐn)?shù)量、反應(yīng)條件等的所有數(shù)字都可理解為在所有情況下被術(shù)語“約”修飾。因此，除非另有相反說明，否則以下說明書和所附權(quán)利要求書中給出的數(shù)字參數(shù)都是近似值，其可根據(jù)意圖在本文中獲取的所需性質(zhì)的不同而異。至少而并非試圖將等同方案原則的應(yīng)用限制在權(quán)利要求書的范圍之內(nèi)，每個數(shù)字參數(shù)應(yīng)當(dāng)視為按照有效數(shù)字的數(shù)值和通常的四舍五入方式。盡管寬范圍給出的數(shù)字范圍和參數(shù)是近似值，但是在具體實施例中給出的數(shù)值是盡可能精確地報告的。然而，任何數(shù)值必定具有來自其各自測試的標(biāo)準(zhǔn)差的某些誤差。以下實施例說明了本發(fā)明，并且不應(yīng)視為以任何方式限制本發(fā)明。實施例對于本發(fā)明具體的實施方案，將會詳細(xì)給出參考。盡管參考這些實施方案描述了本發(fā)明，但可以理解，它們不得視為將本發(fā)明限制至這些實施方案。相反，本發(fā)明覆蓋了替代、修改和等同方案，其可按照所附權(quán)利要求書的定義而包括在本發(fā)明之內(nèi)。以下實施例中所用的試劑來自dako的組織學(xué)fish輔助試劑盒(k5599)和細(xì)胞學(xué)fish輔助試劑盒(k5499)(dakodenmarka/s，glostrupdenmark)。試劑盒含有完成經(jīng)福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片標(biāo)本的fish程序所需的所有關(guān)鍵試劑，除了探針之外。按照制造商描述制備所有樣品。dako雜交儀(s2450，dako)用于消化、變性和雜交步驟。在雜交后一周內(nèi)，使用裝有dapi、fitc、德克薩斯紅單濾色鏡和fitc/德克薩斯紅雙濾色鏡的leicadm6000b熒光顯微鏡，在10x、20x、40x物鏡和100x油鏡下，對fish載玻片進(jìn)行評價。使用olympusbx51光學(xué)顯微鏡，在4x、10x、20x、40x和60x物鏡下，對cish載玻片進(jìn)行評價。在以下實施例中，“硫酸葡聚糖”是指分子量mw＞500,000的硫酸葡聚糖的鈉鹽(d8906，sigma)。所有濃度的極性非質(zhì)子溶劑都以體積(v/v)百分比計。磷酸鹽緩沖液是指含有nah2po4，·2h2o(磷酸二氫鈉-二水合物)和na2hpo4·h2o(磷酸氫二鈉-一水合物)的磷酸緩沖溶液。檸檬酸緩沖液是指含有檸檬酸鈉(na3c6h5o7，2h2o；1.06448，merck)和檸檬酸-一水合物(c6h8o7，h2o；1.00244，merck)的檸檬酸緩沖溶液。通用組織學(xué)fish/cish程序(實施例1-20)將帶有經(jīng)福爾馬林固定、石蠟包埋(ffpe)的來自人(扁桃體、乳癌、腎和結(jié)腸)的多組織陣列切片的載玻片在60℃加熱30-60分鐘，在二甲苯浴中脫蠟，在乙醇浴中復(fù)水，然后移入洗滌緩沖液。再將樣品在預(yù)處理溶液中在至少95℃預(yù)處理10分鐘，洗滌2x3分鐘。然后將樣品用胃蛋白酶rtu在37℃消化3分鐘，洗滌2x3分鐘，在一系列乙醇中脫水，蒸發(fā)并風(fēng)干。按照所述，在單獨(dú)實驗下，將樣品與10μlfish探針一起孵育。將樣品再通過嚴(yán)格性洗滌，在65℃洗滌10分鐘，再洗滌2x3分鐘，然后在一系列乙醇中脫水，蒸發(fā)并風(fēng)干。最終，將載玻片用15μl抗褪色封固劑封固。完成染色之后，觀察人員連續(xù)評價染色載玻片的信號強(qiáng)度、形態(tài)學(xué)和背景，進(jìn)行評分。通用細(xì)胞學(xué)fish程序(實施例21-22)將帶有中期制備物的載玻片在3.7％甲醛中固定2分鐘，洗滌2x5分鐘，在一系列乙醇中脫水，蒸發(fā)并風(fēng)干。按照所述，在單獨(dú)實驗下，將樣品與10μlfish探針一起孵育。將樣品再通過嚴(yán)格性洗滌，在65℃洗滌10分鐘，再洗滌2x3分鐘，然后在一系列乙醇中脫水，蒸發(fā)并風(fēng)干。最終，將載玻片用15μl抗褪色封固劑封固。最終，將載玻片用15μl抗褪色封固劑封固。完成染色之后，觀察人員連續(xù)評價染色載玻片的信號強(qiáng)度、形態(tài)學(xué)和背景，按照組織切片評分指南所述，進(jìn)行評分。組織切片評分指南在0-3級量表上評價信號強(qiáng)度，其中0表示無信號，3表示強(qiáng)烈信號。在0-3級量表上評價細(xì)胞/組織結(jié)構(gòu)，其中0表示無結(jié)構(gòu)和無核邊界，3表示完整結(jié)構(gòu)和清晰核邊界。介于0和3之間，有額外的0.5級，除非觀察人員可評價信號強(qiáng)度、組織結(jié)構(gòu)和背景。根據(jù)0-3級量表上的分級系統(tǒng)，對信號強(qiáng)度進(jìn)行評分。0無信號可見。1信號強(qiáng)度微弱。2信號強(qiáng)度中等。3信號強(qiáng)度強(qiáng)烈。該評分系統(tǒng)允許使用1/2級。根據(jù)0-3級量表上的分級系統(tǒng)，對組織和核結(jié)構(gòu)進(jìn)行評分。0組織結(jié)構(gòu)和核邊界完全被破壞。1組織結(jié)構(gòu)和/或核邊界差。該級別包括某些區(qū)域具有空核的情況。2組織結(jié)構(gòu)和/或核邊界可見，但核邊界不清晰。該級別包括少量核是空的情況。3組織結(jié)構(gòu)和核邊界完整而清晰。該評分系統(tǒng)允許使用1/2級。根據(jù)0-3級量表上的分級系統(tǒng)，對背景進(jìn)行評分。0無或幾乎無背景可見。1有些背景。2中等背景。3高背景。該評分系統(tǒng)允許使用1/2級。實施例1本實施例比較了經(jīng)本發(fā)明組合物或傳統(tǒng)雜交溶液處理的樣品的信號強(qiáng)度和細(xì)胞形態(tài)學(xué)，作為變性溫度的函數(shù)。fish探針組合物i：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％甲酰胺(15515-026，invitrogen)、5μm封閉pna(參見kirstenvangnielsen等，pnasuppressionmethodcombinedwithfluorescenceinsituhybridisation(fish)techniqueinprinsandpnatechnologiesinchromosomalinvestigation，第10章(franckpellestor編著)(novasciencepublishers，inc.2006))、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針(rp11-1143e20，大小192kb)。fish探針組合物ii：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％碳酸亞乙酯(03519，fluka)、5μm封閉pna、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針(rp11-1143e20，大小192kb)。如果存在，不同粘度的各相在使用前混合。按照指示，將fish探針變性5分鐘并在45℃雜交60分鐘。結(jié)果：信號評分為“3”分，是在20x物鏡下清晰可見。實施例2本實施例比較了經(jīng)本發(fā)明組合物或傳統(tǒng)雜交溶液處理的樣品的信號強(qiáng)度和背景染色，作為雜交時間的函數(shù)。fish探針組合物i：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％甲酰胺、5μm封閉pna、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。fish探針組合物ii：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％碳酸亞乙酯、5μm封閉pna、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。如果存在，不同粘度的各相在使用前混合。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育14小時、4小時、2小時、60分鐘、30分鐘、15分鐘、0分鐘。結(jié)果：信號評分為“3”分，是在20x物鏡下清晰可見。實施例3本實施例比較了經(jīng)具有不同極性非質(zhì)子溶劑的本發(fā)明組合物或傳統(tǒng)雜交溶液處理的樣品的信號強(qiáng)度。fish探針組合物i：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％甲酰胺、5μm封閉pna、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。fish探針組合物ii：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％碳酸亞乙酯(ec)、5μm封閉pna、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。fish探針組合物iii：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％碳酸異丙二醇酯(pc)(540013，aldrich)、5μm封閉pna、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。fish探針組合物iv：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％環(huán)丁砜(sl)(t22209，aldrich)、5μm封閉pna、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。fish探針組合物v：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％乙腈(an)(c02ciix，lab-scan)、5μm封閉pna、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。fish探針組合物vi：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％γ-丁內(nèi)酯(gbl)(b103608，aldrich)、5μm封閉pna、7,5ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。如果存在，不同粘度的各相在使用前混合。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘。結(jié)果：信號評分為“3”分，是在20x物鏡下清晰可見。實施例4本實施例比較了經(jīng)具有不同濃度極性非質(zhì)子溶劑的本發(fā)明組合物處理的樣品的信號強(qiáng)度。fish探針組合物：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、10-60％碳酸亞乙酯(按照指示)、5μm封閉pna、7.5ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的igk-恒定區(qū)dna基因探針((ctd-3050e15、rp11-1083e8；大小227kb)和7.5ng/μlfitc標(biāo)記的igk-可變區(qū)基因dna探針(ctd-2575m21、rp11-122b6、rp11-316g9；大小350和429kb)。如果存在，不同粘度的各相在使用前混合。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘。結(jié)果：信號評分為“3”分，是在20x物鏡下清晰可見。實施例5本實施例比較了經(jīng)有或沒有pna封閉的組合物處理的樣品的信號強(qiáng)度和背景強(qiáng)度。fish探針組合物：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％碳酸亞乙酯、7.5ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。如果存在，不同粘度的各相在使用前混合。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘。結(jié)果：信號評分為“3”分，是在20x物鏡下清晰可見。實施例6本實施例比較了經(jīng)本發(fā)明組合物處理的樣品的信號強(qiáng)度，作為探針濃度和雜交時間的函數(shù)。fish探針組合物：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％碳酸亞乙酯、和10、7.5、5或2.5ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針(按照指示)。如果存在，不同粘度的各相在使用前混合。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育3小時、2小時和1小時。結(jié)果：信號評分為“3”分，是在20x物鏡下清晰可見。實施例7本實施例比較了經(jīng)本發(fā)明組合物處理的樣品的信號強(qiáng)度，作為鹽、磷酸鹽和緩沖液的濃度的函數(shù)。fish探針組合物：10％硫酸葡聚糖、([nacl]、[磷酸鹽緩沖液]、[tris緩沖液]如結(jié)果所示)、40％碳酸亞乙酯、7.5ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。如果存在，不同粘度的各相在使用前混合。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘。結(jié)果：信號評分為“3”分，是在20x物鏡下清晰可見。實施例8本實施例比較了經(jīng)本發(fā)明組合物處理的樣品的信號強(qiáng)度，作為硫酸葡聚糖濃度的函數(shù)。fish探針組合物：0、1、2、5或10％硫酸葡聚糖(按照指示)、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％碳酸亞乙酯、5ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的sil-tal1基因dna探針(rp1-278o13；大小67kb)和6ng/μlfitcsil-tal1(icrfc112-112c1794、rp11-184j23、rp11-8j9、ctd-2007b18、133b9；大小560kb)。如果存在，不同粘度的各相在使用前混合。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘。不封閉。結(jié)果：注意：本實驗沒有得到評分為“3”的結(jié)果，因為sil-tal1德克薩斯紅標(biāo)記的探針僅為67kb并且來自未優(yōu)化制備物。實施例9本實施例比較了經(jīng)本發(fā)明組合物處理的樣品的信號強(qiáng)度，作為硫酸葡聚糖、鹽、磷酸鹽和極性非質(zhì)子溶劑的濃度的函數(shù)。fish探針組合物ia：34％硫酸葡聚糖、0mmnacl、0mm磷酸鹽緩沖液、0％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物ib：34％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、0％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物ic：34％硫酸葡聚糖、600mmnacl、10mm磷酸鹽緩沖液、0％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物iia：32％硫酸葡聚糖、0mmnacl、0mm磷酸鹽緩沖液、5％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物iib：32％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、5％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物iic：32％硫酸葡聚糖、600mmnacl、10mm磷酸鹽緩沖液、5％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物iiia：30％硫酸葡聚糖、0mmnacl、0mm磷酸鹽緩沖液、10％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物iiib：30％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、10％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物iiic：30％硫酸葡聚糖、600mmnacl、10mm磷酸鹽緩沖液、10％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物iva：28％硫酸葡聚糖、0mmnacl、0mm磷酸鹽緩沖液、15％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物ivb：28％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、15％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針組合物ivc：28％硫酸葡聚糖、600mmnacl、10mm磷酸鹽緩沖液、15％碳酸亞乙酯、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針(大小218kb)和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。fish探針參考v：標(biāo)準(zhǔn)售賣的含有封閉pna的her2pharmdx探針混合物(k5331，dako)的小管。雜交過夜20小時。所有組合物以單相存在。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘，不封閉，除了fish探針參考v之外，后者具有pna封閉并雜交20小時。結(jié)果：注意：組合物iva給出強(qiáng)烈dna信號，其中無鹽。這用標(biāo)準(zhǔn)fish組合物(其中dna結(jié)合是鹽依賴型的)是不可能的。實施例10本實施例比較了經(jīng)本發(fā)明組合物處理的樣品的信號強(qiáng)度，作為高鹽(4x正常)條件下的極性非質(zhì)子溶劑和硫酸葡聚糖的濃度的函數(shù)。fish探針組合物i：0％碳酸亞乙酯、29％硫酸葡聚糖、1200mmnacl、20mm磷酸鹽緩沖液、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。組合物是單相。fish探針組合物ii：5％碳酸亞乙酯、27％硫酸葡聚糖、1200mmnacl、20mm磷酸鹽緩沖液、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。組合物是單相。fish探針組合物iii：10％碳酸亞乙酯、25％硫酸葡聚糖、1200mmnacl、20mm磷酸鹽緩沖液、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。組合物是單相。fish探針組合物iv(未測試)：20％碳酸亞乙酯、21％硫酸葡聚糖、1200mmnacl、20mm磷酸鹽緩沖液、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針和50nmfitc標(biāo)記的cen-7pna探針。組合物具有兩相。結(jié)果：注意：組合物ii僅用5％ec就得到良好dna信號，用10％ec就得到強(qiáng)烈dna信號。實施例11本實施例比較了經(jīng)本發(fā)明組合物的不同相處理的樣品的信號強(qiáng)度和背景。fish探針組合物：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％碳酸亞乙酯、8ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的her2基因dna探針和600nmfitc標(biāo)記的cen-17pna探針。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘。不封閉。結(jié)果：注意：在這些實驗中，上相比下相具有更多背景。實施例12本實施例類似于上一個實施例，但使用不同dna探針并用gbl替代ec。fish探針組合物：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％gbl、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針和600nmfitc標(biāo)記的cen-17pna探針。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘。不封閉。結(jié)果：實施例13本實施例檢查了本發(fā)明組合物中的相數(shù)，作為極性非質(zhì)子溶劑和硫酸葡聚糖的濃度的函數(shù)。fish探針組合物：10％或20％硫酸葡聚糖；300mmnacl；5mm磷酸鹽緩沖液；0、5、10、15、20、25、30％ec；10ng/μl探針。結(jié)果：注意：15％ec、20％硫酸葡聚糖得到以上單相溶液中的最好的高信號強(qiáng)度。兩相20％ec比15％.甚至具有更高信號強(qiáng)度(數(shù)據(jù)未顯示)。實施例14本實施例比較了經(jīng)本發(fā)明不同組合物處理的樣品的信號強(qiáng)度和背景，作為探針濃度和雜交時間的函數(shù)。fish探針組合物i：10ng/μlher2txred標(biāo)記的dna探針(標(biāo)準(zhǔn)濃度)和標(biāo)準(zhǔn)濃度的cen7fitc標(biāo)記的pna探針(50nm)；15％ec；20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm磷酸鹽緩沖液。fish探針組合物ii：5ng/μlher2txred標(biāo)記的dna探針(1/2的標(biāo)準(zhǔn)濃度)和標(biāo)準(zhǔn)濃度(50nm)fitc標(biāo)記的cen7pna探針；15％ec；20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm磷酸鹽緩沖液。fish探針組合物iii：2.5ng/μlher2txred標(biāo)記的dna探針(1/4的標(biāo)準(zhǔn)濃度)和1/2標(biāo)準(zhǔn)濃度(25nm)的cen7pna探針；15％ec；20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm磷酸鹽緩沖液。組合物i-iii以單相形式存在。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育3小時、2小時和1小時。結(jié)果：信號評分為“3”分，是在20x物鏡下清晰可見。b.g.：背景實施例15本實施例比較了經(jīng)本發(fā)明組合物處理的樣品的信號強(qiáng)度和背景，作為封閉劑的函數(shù)。fish探針組合物：15％ec；20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm磷酸鹽緩沖液；2.5ng/μlher2txred標(biāo)記的dna探針(1/4的標(biāo)準(zhǔn)濃度)和1/2的標(biāo)準(zhǔn)濃度(300nm)fitc標(biāo)記的cen17pna探針。樣品用以下試劑封閉：(a)無；(b)0.1μg/μlcot1(15279-011，invitrogen)；(c)0.3μg/μlcot1；或(d)0.1μg/μl人類總dna，然后用本發(fā)明組合物雜交。所有樣品都以單相形式存在。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘。結(jié)果：注意：無封閉的背景水平明顯低于無封閉的標(biāo)準(zhǔn)fish通常觀察到的水平。相比之下，如果標(biāo)準(zhǔn)fish組合物不含封閉劑，信號通常不能讀出。實施例16本實驗比較了用本發(fā)明的組合物去除背景染色的不同方式。所有組合物都含有15％ec、20％硫酸葡聚糖、600mmnacl、10mm磷酸鹽緩沖液、2.5ng/μlher2dna探針(1/4的標(biāo)準(zhǔn)濃度)、300nmcen17pna探針(1/2的標(biāo)準(zhǔn)濃度)和一種以下背景降低劑：a)5μm封閉pna(參見kirstenvangnielsen等，pnasuppressionmethodcombinedwithfluorescenceinsituhybridisation(fish)techniqueinprinsandpnatechnologiesinchromosomalinvestigation，第10章(franckpellestor編著)(novasciencepublishers，inc.2006))b)0.1μg/μlcot-1dnac)0.1μg/μl人類總dna(thd)(超聲處理的未標(biāo)記的thd)d)0.1μg/μl剪切鮭魚精子dna(am9680，ambion)e)0.1μg/μl小牛胸腺dna(d8661，sigma)f)0.1μg/μl鯡魚精子dna(d7290，sigma)g)0.5％甲酰胺h)2％甲酰胺i)1％乙二醇(1.09621，merck)j)1％甘油(1.04095，merck)k)1％1，3-丙二醇(533734，aldrich)l)1％h2o(對照)所有樣品都以單相形式存在。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃在ffpe組織切片上孵育60和120分鐘。結(jié)果：注意：所有背景降低劑，除了封閉pna以外，都表現(xiàn)出降低背景的效果。因此，針對重復(fù)dna序列的特異性封閉是不需要的。實施例17本實驗比較了使用兩種不同極性非質(zhì)子溶劑的上相和下相的信號強(qiáng)度。fish探針組合物i：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％三硫代碳酸亞乙酯(et)(e27750，aldrich)、5μm封閉pna、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。fish探針組合物ii：10％硫酸葡聚糖、300mmnacl、5mm磷酸鹽緩沖液、40％亞硫酸乙二醇酯(gs)(g7208，aldrich)、5μm封閉pna、10ng/μl德克薩斯紅標(biāo)記的ccnd1基因dna探針。將fish探針在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘。結(jié)果：實施例18.本實驗檢查了不同極性非質(zhì)子溶劑形成單相體系的能力。所有組合物都含有：20％硫酸葡聚糖、600mmnacl、10mm磷酸鹽緩沖液、以及10、15、20或25％的以下極性非質(zhì)子溶劑之一：環(huán)丁砜γ-丁內(nèi)酯三硫代碳酸亞乙酯亞硫酸乙二醇酯碳酸異丙二醇酯結(jié)果：所檢查的所有濃度的所有極性非質(zhì)子溶劑在所用的組合物中都得到至少兩相體系。然而，這并不排除這些化合物可在其它組合物條件下得到單相體系。實施例19本實驗檢查了本發(fā)明組合物在多ffpe組織切片的顯色原位雜交(cish)分析中的使用。fish探針組合物i：4.5ng/μltcradfitc標(biāo)記的基因dna探針(1/4的標(biāo)準(zhǔn)濃度)(rp11-654a2、rp11-246a2、ctp-2355l21、rp11-158g6、rp11-780m2、rp11-481c14；大小1018kb)；15％ec；20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm檸檬酸緩沖液，ph6.0。fish探針組合物ii：4.5ng/μltcradfitc標(biāo)記的基因dna探針(1/4的標(biāo)準(zhǔn)濃度)(大小1018kb)；15％ec；20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm檸檬酸緩沖液，ph6.0；0.1ug/ul剪切鮭魚精子dna。fish探針組合物iii：300nm各種單獨(dú)的fitc標(biāo)記的pnacen17探針(1/2的標(biāo)準(zhǔn)濃度)；15％ec；20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm檸檬酸緩沖液，ph6.0。使用dakoduocish方案(sk108)和用于分離探針的組合物分析所有樣品，除了嚴(yán)格性洗滌進(jìn)行20分鐘、而不是10分鐘，而且不用duocish紅色顯色劑步驟之外。結(jié)果：注意：信號強(qiáng)度非常強(qiáng)烈。因為高水平的背景，所以無法判斷將鮭魚精子dna加入到組合物ii中是否減低了背景。使用10x物鏡觀察例如扁桃體，其通常具有較少背景，信號清晰可見。如果組織具有高背景，使用20x物鏡，信號清晰可見。實施例20本實施例比較了經(jīng)具有兩種dna探針的本發(fā)明組合物處理的ffpe組織切片的信號強(qiáng)度和背景。fish探針組合物i：9ng/μlighfitc標(biāo)記的基因dna探針(rp11-151b17、rp11-112h5、rp11-101g24、rp11-12f16、rp11-47p23、ctp-3087c18；大小612kb)；6.4ng/μlmyctxred標(biāo)記的dna探針(，ctd-2106f24、ctd-2151c21、ctd-2267h22；大小418kb)；15％ec；20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm檸檬酸緩沖液，ph6.0。fish探針組合物ii：9ng/μlighfitc標(biāo)記的基因dna探針；6.4ngmyctxred標(biāo)記的dna探針；15％ec、20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm檸檬酸緩沖液，ph6.0；0.1ug/ul剪切鮭魚精子dna。注意：高背景可能是因為使用標(biāo)準(zhǔn)探針濃度這一事實。實施例21本實驗檢查了本發(fā)明組合物在細(xì)胞學(xué)樣品中的使用。fish探針組合物：15％ec；20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm磷酸鹽緩沖液；5ng/μlher2txred標(biāo)記的dna探針(1/2的標(biāo)準(zhǔn)濃度)和1/2標(biāo)準(zhǔn)濃度的cen7(25nm)。將fish探針在中期染色體鋪片上在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育30分鐘，都不封閉。結(jié)果：用本發(fā)明組合物沒有觀察到染色體顯帶(r顯帶模式)，與傳統(tǒng)ish溶液相反，后者通常顯示r顯帶。觀察到間期核和中期染色體的低的均勻紅色背景染色。實施例22本實施例比較了有或無封閉時dna探針對細(xì)胞學(xué)樣品、中期鋪片的信號強(qiáng)度和背景。fish探針組合物i：6ng/μltcrad德克薩斯紅標(biāo)記的基因dna探針(標(biāo)準(zhǔn)濃度)(ctp-31666k20、ctp-2373n7；大小301kb)和4.5ng/μlfitc標(biāo)記的基因dna探針(1/4的標(biāo)準(zhǔn)濃度)；15％ec、20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm檸檬酸緩沖液，ph6.0。fish探針組合物ii：6ng/μltcrad德克薩斯紅標(biāo)記的基因dna探針(標(biāo)準(zhǔn)濃度)(大小301kb)和4.5ng/μlfitc標(biāo)記的基因dna探針(1/4的標(biāo)準(zhǔn)濃度)；15％ec、20％硫酸葡聚糖；600mmnacl；10mm檸檬酸緩沖液，ph6.0；0.1ug/ul剪切鮭魚精子dna。將fish探針在中期鋪片上在82℃孵育5分鐘，然后在45℃孵育60分鐘。結(jié)果：用本發(fā)明組合物又沒有觀察到染色體顯帶(r顯帶模式)。另外，沒有觀察到間期核或中期染色體的背景染色。更多的實施方案實施方案1.一種雜交組合物，所述組合物包含：(a)檢測染色體畸變相關(guān)核苷酸序列的第一分子探針，(b)足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑，和(c)雜交溶液，其中所述核苷酸序列是染色體畸變的標(biāo)記，而且其中所述極性非質(zhì)子溶劑不是二甲亞砜(dmso)。實施方案2.實施方案1的雜交組合物，其中所述染色體畸變是非整倍性、潛在斷點(diǎn)、插入、倒位、缺失、重復(fù)、基因擴(kuò)增、重排或易位。實施方案3.實施方案1-2的雜交組合物，其中所述染色體畸變與先天性遺傳疾病、癌癥或感染相關(guān)。實施方案4.實施方案3的雜交組合物，其中所述染色體畸變與癌癥相關(guān)。實施方案5.實施方案4的雜交組合物，其中所述第一分子探針檢測alk、bcl2、bcl3、bcl6、bcl10、bcl12、bcr、ccnd1、e2a、egfr、etv6、fip1l1、her2、igh、igk、igl、malt1、mll(all-1、htrx1、hrx)、myc(c-myc)、pax5、pdgfra、pdgfrb、sil、tcf3(e2a、itf1)、tcl1a、tcrad、tcrb、tcrg，端粒、tlx1、tlx3(hox11l2、rnx)或top2a。實施方案6.實施方案1-4中任一項的雜交組合物，其中所述第一分子探針檢測選自以下的非血液病的靶標(biāo)：base、brca1、ccnd1、ccne1、dcd、e2f3、n-myc/mycn、cox-2/ptgs2、lrig1、era、htert、mln64/stard3、pgr、snai1、src、top1、tubb1、aib1、dlc-1、edd、pip4k2b/5k、sil、tbx2、c-kit、vegf、vcam-1、tie-1、ts/tyms、psma、psa、pap、p15、p16、bcl1、bcl2、mtor、timp1、esr1、pten、mdm2/cdk4、met、c-met、erb1、fgfr1、igf1r、net、fgfr3、abcb1、tmprss2、brca2、top2b、ercc1、akt1、akt2、akt3、hras、nras、raf1、her3、her4、ent1、rrm1、rrm2、rrm2b、pik3ca、aurk4、aurkb、aurkc、mapt/tau、ttbk1、tubb、vegfr、ccnd3、cdk6、cdk2、cdc2、hdac、esr2、scube2、birc5、fasn、dhfr、tp/ecgf1、tymp、dpyd、tk1、hmgic、abca2、abcb11、abcc1、abcc2、abcc3、abcc4、abcc5、abcg2、mvp、atp7a、atp7b、slc29a1、slc28a1、slc19a1、tubb4、tuba、map4、map7、stmn1、kif5b、hspa5、psmd14、fpgs、gstp1、gpx、gclc、ggt2、mt、akr1b1、hmgb1、hmgb2、xpa、xpd、msh2、mlh1、pms2、apex1、mgmt、glo1、rb1、gml、cdkn1a、cdkn2a、cdkn1b、erbb2、kras2、itgb1、jun、fos、nfkb1、tp53、tp73、bcl2l1、mcl1、bax、birc4、tnfrsf6、casp3、casp8、hspb1、malat1(α)t(11；19)(q11；q13.4)、mhlb1t(11；19)(q11；q13.4)、col1a1t(17；22)(q22；q13)、pdgfbt(17；22)(q22；q13)、fkhrt(2；13)&t(1；13)、etv6t(12；15)(p13；q25)、ntrk3t(12；15)(p13；q25)、tls/fust(12；16)(q13；p11)、chopt(12；16)(q13；p11)、ewst(12；22)(q13；q12)、ews/fli1t(11；22)(q24；q12)和fli1t(11；22)(q24；q12)。實施方案7.實施方案1-4中任一項的雜交組合物，其中所述第一分子探針檢測選自以下的血液病的靶標(biāo)：ablt(9；22)(q34；q11)、prdm16del(1p36.32)del(21q22.12)、runx1/aml1del(1p36.32)del(21q22.12)、cep8、pdgfrb、nup98、fgfr1、ass、etot(8；21)(q22；q22)、aml1t(8；21)(q22；q22)、cbfbetainv(16)(p13q22)t(16；16)(p13；q22)、myh11inv(16)(p13q22)t(16；16)(p13；q22)、af9t(9；11)、pmlt(15；17)(q22；q21)、plzft(11；17)(q23；q21)、numat(11；17)(q13；q21)、npmt(5；17)(q23；q12)、rarαt(15；17)(q22；q21)t(11；17)(q23；q21)t(11；17)(q13；q21)t(5；17)(q23；q21)、evi1t(3；v)(q26；v)、gr6t(3；3)(q21；q26)、rpn1t(3；3)(q21；q26)、dekt(6；9)、cant(6；9)、mlf1t(3；5)(...；q23)、fust(16；21)、ergt(16；21)、nup98t(7；11)、hox9at(7；11)、moz/myst3t(8；16)(p11；p13)、cbpt(8；16)(p11；p13)、p300t(8；22)(p11；q13)、tif2/grip-1/ncoa-2inv(8)(p11q13)、mkl1、pbx1t(1；19)(q23；p13.3)+var.、ablt(9；22)(q34；q11)、af4/aff1t(4；11)(q21；q23)、aml1/runx1t(12；21)(p13；q22)、il3t(5；14)(q31；q32)、hlft(17；19)、ikzf1del(7)(p12.2)、cdkn2a/cdkn2bdel(9)(p21.3)、tal11p32畸變、lmo2t(11；14)(p13；q11)+var.、lmo1t(11；14)(p15；q11)、hox11t(10；14)(q24；q11)+var.、tal2t(7；9)(q34；q32)、tan1t(7；9)(q34；q34)、cep12、atm、d13s25、d13s319、tp53、p53、tnfaip3del(6)(q23.3-q24.1)、cdk6bcl1t(11；14)(q13；q32)+var.、irf4t(6；14)(p25；q32)、c-maft(14；16)(q32；q23)、fgfr3t(4；14)(p16；q32)、mum2/3t(1；14)(q21；q32)、npmt(2；5)(p23；q35)、ass、rb1和atm。實施方案8.實施方案1-4中任一項的雜交組合物，其中所述第一分子探針檢測選自以下的著絲粒：cep1、cep2、cep3、cep4、cep5、cep6、cep7、cep8、cep9、cep10、cep11、cep12、cep13、cep14、cep15、cep16、cep17、cep18、cep19、cep20、cep21、cep22、cep23、cepx和cepy。實施方案9.實施方案4的雜交組合物，其中所述癌癥是腎上腺皮質(zhì)癌、膀胱癌、腦癌、燒傷癌(burncancer)、乳癌、宮頸癌、結(jié)直腸癌、結(jié)腸癌、直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、食道癌、腎癌、白血病、肝癌、肺癌、胃癌、膠質(zhì)瘤、造血系統(tǒng)癌癥、頭頸部癌、黑素瘤、淋巴瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、肉瘤、皮膚癌(非黑素瘤)、睪丸癌、甲狀腺癌或子宮癌。實施方案10.實施方案9的雜交組合物，其中所述癌癥是乳癌，所述第一分子探針檢測her2。實施方案11.實施方案9的雜交組合物，其中所述癌癥是結(jié)直腸癌，所述第一分子探針檢測egf2。實施方案12.實施方案4的雜交組合物，其中所述癌癥是造血系統(tǒng)惡性腫瘤。實施方案13.實施方案12的雜交組合物，其中所述第一分子探針檢測選自以下的染色體畸變：t(1；14)(q34；q11)、t(1；19)(q23；p13)、t(2；5)、t(2；18)(q12；q21)、t(2；8)、t(4；11)、t(4；11)(q21；q23)、t(6；11)(q27；q23)、t(7；22)(p22；q12)、t(8；14)、t(8；22)、t(9；11)(p22；q23)、t(9；22)(q34；q11)、t(10；14)(q24；q11)、t(11；14)、t(11；14)(p13；q11)、t(11；19)(q23；p13)、t(14；18)(q23；q21)、t(14；18)、t(18；22)(q21；q11)，和t(21；22)(q22；q12)。實施方案14.實施方案1-13中任一項的雜交組合物，所述組合物還包含第二分子探針。實施方案15.實施方案14的雜交組合物，其中所述第二分子探針檢測參考序列。實施方案16.實施方案15的雜交組合物，其中所述參考序列是著絲粒序列。實施方案17.實施方案16的雜交組合物，其中所述分子探針在實施方案8中定義。實施方案18.實施方案14的雜交組合物，其中所述第一分子探針和所述第二分子探針檢測側(cè)接一個或多個潛在斷點(diǎn)的序列或在所述潛在斷點(diǎn)內(nèi)的序列。實施方案19.實施方案14-18中任一項的雜交組合物，所述組合物還包含第三分子探針。實施方案20.實施方案1-19中任一項的雜交組合物，其中所述第一分子探針是dna探針、pna探針或lna探針。實施方案21.實施方案14-20中任一項的雜交組合物，其中所述第二分子探針是dna探針、pna探針或lna探針。實施方案22.實施方案19-21中任一項的雜交組合物，其中所述第三分子探針是dna探針、pna探針或lna探針。實施方案23.實施方案1-22中任一項的雜交組合物，其中所述分子探針還包含標(biāo)記。實施方案24.實施方案23的雜交組合物，其中所述標(biāo)記是生色團(tuán)、熒光團(tuán)、生物素、dig、抗體-半抗原、染料或酶。實施方案25.實施方案1-24中任一項的雜交組合物，其中所述雜交組合物中的極性非質(zhì)子溶劑濃度范圍為1％(v/v)至95％(v/v)。實施方案26.實施方案1-25中任一項的雜交組合物，其中所述雜交組合物中的極性非質(zhì)子溶劑濃度范圍為5％(v/v)至10％(v/v)。實施方案27.實施方案1-25中任一項的雜交組合物，其中所述雜交組合物中的極性非質(zhì)子溶劑濃度范圍為10％(v/v)至20％(v/v)。實施方案28.實施方案1-25中任一項的雜交組合物，其中所述雜交組合物中的極性非質(zhì)子溶劑濃度范圍為20％(v/v)至30％(v/v)。實施方案29.實施方案1-28中任一項的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑是無毒的。實施方案30.實施方案1-29中任一項的雜交組合物，前提條件是所述雜交組合物不含甲酰胺。實施方案31.實施方案1-30中任一項的雜交組合物，前提條件是所述雜交組合物含有小于10％甲酰胺。實施方案32.實施方案1-31中任一項的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑具有內(nèi)酯、砜、亞硫酸、腈和/或碳酸官能團(tuán)。實施方案33.實施方案1-32中任一項的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑的分散溶度參數(shù)范圍為17.7mpa1/2至22.0mpa1/2，極性溶度參數(shù)范圍為13mpa1/2至23mpa1/2，氫鍵溶度參數(shù)范圍為3mpa1/2至13mpa1/2。實施方案34.實施方案1-33中任一項的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑具有環(huán)狀基本結(jié)構(gòu)。實施方案35.實施方案1-34中任一項的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑選自：r1-c≡n，其中x為o，r1為烷基二基，其中x是任選的，如果存在則選自o或s，其中z是任選的，如果存在則選自o或s，其中a和b獨(dú)立地為o或n或s或烷基二基的一部分或伯胺，其中r為烷基二基，和其中y為o或s或c。實施方案36.實施方案1-35中任一項的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑選自：乙酰苯胺、乙腈、n-乙?；量┩橥?、4-氨基吡啶、苯甲酰胺、苯并咪唑、1，2，3-苯并三唑、二氧化丁二烯、碳酸2，3-丁二醇酯、γ-丁內(nèi)酯、己內(nèi)酯(ε)、氯馬來酸酐、2-氯環(huán)己酮、碳酸氯代乙二醇酯、氯硝甲烷、檸康酸酐、巴豆酸內(nèi)酯、5-氰基-2-硫尿嘧啶、環(huán)丙腈、硫酸二甲酯、二甲砜、1，3-二甲基-5-四唑、1，5-二甲基四唑、1，2-二硝基苯、2，4-二硝基甲苯、二苯砜、1，2-二硝基苯、2，4-二硝基甲苯、二苯砜、ε-己內(nèi)酰胺、乙磺酰氯、亞膦酸二乙酯、n-乙基四唑、碳酸亞乙酯、三硫代碳酸亞乙酯、硫酸乙二醇酯、亞硫酸乙二醇酯、糠醛、2-呋喃甲腈、2-咪唑、靛紅、異噁唑、丙二腈、4-甲氧基芐腈、1-甲氧基-2-硝基苯、α溴代特窗酸甲酯、1-甲基咪唑、n-甲基咪唑、3-甲基異噁唑、n-甲基嗎啉-n-氧化物、苯甲砜、n-甲基吡咯烷酮、甲基環(huán)丁砜、4-甲苯磺酸甲酯、3-硝基苯胺、硝基苯并咪唑、2-硝基呋喃、1-亞硝基-2-吡咯烷酮、2-硝基噻吩、2-噁唑烷酮、9，10-菲醌、n-苯基悉尼酮、鄰苯二甲酸酐、皮考啉腈(2-氰基吡啶)、1，3-丙磺酸內(nèi)酯、β-丙醇酸內(nèi)酯、碳酸異丙二醇酯、4h-吡喃-4-硫酮、4h-吡喃-4-酮(γ-吡喃酮)、噠嗪、2-吡咯烷酮、糖精、琥珀腈、對氨基苯磺酰胺、環(huán)丁砜、2，2，6，6-四氯環(huán)己酮、四氫噻喃氧化物、四氫噻吩砜(環(huán)丁砜)、噻唑、2-硫尿嘧啶、3，3，3-三氯丙烯、1，1，2-三氯丙烯、1，2，3-三氯丙烯、硫雜環(huán)丁烷-二氧化物和硫雜環(huán)丁烷。實施方案37.實施方案1-35中任一項的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑選自：實施方案38.實施方案1-35中任一項的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑是：實施方案39.實施方案1-38中任一項的雜交組合物，所述組合物還包含至少一種選自以下的額外組分：緩沖劑、鹽、促進(jìn)劑、螯合劑、去垢劑和封閉劑。實施方案40.實施方案39的雜交組合物，其中所述促進(jìn)劑是硫酸葡聚糖，所述鹽是氯化鈉和/或磷酸鈉。實施方案41.實施方案40的雜交組合物，其中硫酸葡聚糖濃度是5％至40％，氯化鈉濃度是0mm至1200mm，和/或磷酸鈉濃度是0mm至50mm。實施方案42.實施方案41的雜交組合物，其中硫酸葡聚糖濃度是10％至30％，氯化鈉濃度是300mm至1200mm，和/或磷酸鈉濃度是5mm至20mm。實施方案43.實施方案39的雜交組合物，其中所述促進(jìn)劑選自：甲酰胺、甘油、丙二醇、1，2-丙二醇、二甘醇、乙二醇、二醇和1，3-丙二醇，所述緩沖劑是檸檬酸緩沖劑。實施方案44.實施方案43的雜交組合物，其中甲酰胺濃度為0.1-5％，甘油、丙二醇、1，2-丙二醇、二甘醇、乙二醇、二醇和1，3-丙二醇的濃度為0.1％至10％，檸檬酸緩沖劑濃度為1mm至50mm。實施方案45.實施方案39的雜交組合物，其中所述封閉劑選自：人類總dna、鯡魚精子dna、鮭魚精子dna和小牛胸腺dna。實施方案46.實施方案45的雜交組合物，其中所述人類總dna、鯡魚精子dna、鮭魚精子dna和小牛胸腺dna的濃度是0.01-10μg/μl。實施方案47.實施方案1-46中任一項的雜交組合物，所述組合物包含40％的至少一種極性非質(zhì)子溶劑、10％硫酸葡聚糖、300mm氯化鈉和5mm磷酸鈉。實施方案48.實施方案1-46中任一項的雜交組合物，所述組合物包含15％的至少一種極性非質(zhì)子溶劑、20％硫酸葡聚糖、600mm氯化鈉、10mm磷酸鈉和0.1μg/μl人類總dna。實施方案49.實施方案1-46中任一項的雜交組合物，所述組合物包含15％的至少一種極性非質(zhì)子溶劑、20％硫酸葡聚糖、600mm氯化鈉、10mm檸檬酸緩沖劑ph6.2和0.1μg/μl鯡魚精子dna、或鮭魚精子dna、或小牛胸腺dna、或0.5％甲酰胺、或1％乙二醇、或1％1，3-丙二醇、或1％甘油。實施方案50.實施方案1-49中任一項的雜交組合物，其中所述含水組合物在室溫下包含不止一相。實施方案51.一種包含實施方案1-41中任一項的組合物的試劑盒。實施方案52.一種試劑盒，所述試劑盒包含：(a)檢測染色體畸變相關(guān)核苷酸序列的第一分子探針，和(b)包含足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑不是二甲亞砜(dmso)。實施方案53.實施方案51和52的試劑盒，所述試劑盒還包含顯色劑。實施方案54.實施方案51和52的試劑盒，其中所述試劑盒經(jīng)設(shè)計用于細(xì)胞學(xué)。實施方案55.實施方案51和52的試劑盒，其中所述試劑盒經(jīng)設(shè)計用于組織學(xué)。實施方案56.實施方案52的試劑盒，其中所述極性非質(zhì)子溶劑按照實施方案25-38中任一項的定義。實施方案57.實施方案51-56中任一項的試劑盒，其中所述試劑盒經(jīng)設(shè)計用于fish或cish實驗。實施方案58.一種檢測染色體dna中的靶標(biāo)的方法，所述方法包括：-提供與染色體dna中的靶標(biāo)雜交的至少一種分子探針，-提供染色體dna，-提供包含足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑不是二甲亞砜(dmso)，-將所述分子探針、所述染色體dna和所述雜交組合物混合在一起，其時間至少足以使所述分子探針與所述靶標(biāo)雜交，和-檢測所述靶標(biāo)。實施方案59.確定核酸序列中染色體畸變存在的方法，所述方法包括：-提供至少一種分子探針，-提供所述核酸序列，-提供包含足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的雜交組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑不是二甲亞砜(dmso)，-將所述分子探針和所述核酸序列和所述雜交組合物混合在一起，其時間至少足以使所述分子探針與所述核酸序列雜交，和-檢測所述至少一種分子探針，-并確定染色體畸變的存在。實施方案60.確定核酸序列中染色體畸變存在的方法，所述方法包括：-提供所述核酸序列，-提供包含至少一種分子探針和足以變性雙鏈核苷酸序列的有效量的至少一種極性非質(zhì)子溶劑的雜交組合物，-將所述雜交組合物用于所述核酸，其時間至少足以使所述分子探針與核酸序列雜交，和-檢測所述至少一種分子探針，-并確定染色體畸變的存在，其中所述極性非質(zhì)子溶劑不是二甲亞砜(dmso)。實施方案61.實施方案58-60中任一項的方法，其中所述極性非質(zhì)子溶劑按照實施方案25-38中任一項的定義。實施方案62.確定核酸序列中染色體畸變存在的方法，所述方法包括：-提供所述核酸序列，-將實施方案1-50中任一項的組合物用于所述核酸序列，其時間至少足以使所述分子探針與核酸序列雜交，和-確定染色體畸變是否存在于所述核酸序列中。實施方案63.實施方案58-62中任一項的方法，其中提供足夠量的能量使所述第一和第二核酸雜交。實施方案64.實施方案63的方法，其中通過加熱所述雜交組合物和核酸序列而提供能量。實施方案65.實施方案64的方法，其中通過使用微波、熱浴、加熱板、加熱線、珀耳帖元件、感應(yīng)加熱或加熱燈來進(jìn)行所述加熱步驟。實施方案66.實施方案58-65中任一項的方法，其中所述核酸序列是雙鏈的并且所述分子探針是單鏈的，所述核酸序列是雙鏈的并且所述分子探針是雙鏈的，所述核酸序列是單鏈的并且所述分子探針是單鏈的，或者所述核酸序列是單鏈的并且所述分子探針是雙鏈的。實施方案67.實施方案58-66中任一項的方法，其中所述變性和雜交步驟單獨(dú)發(fā)生。實施方案68.實施方案58-67中任一項的方法，其中所述雜交步驟包括所述雜交組合物、分子探針和核酸序列的加熱和冷卻步驟。實施方案69.實施方案58-68中任一項的方法，其中所述雜交步驟需要不到8小時。實施方案70.實施方案69的方法，其中所述雜交步驟需要不到1小時。實施方案71.實施方案58-70中任一項的方法，其中所述冷卻步驟需要不到1小時。實施方案72.實施方案71的方法，其中所述冷卻步驟需要不到30分鐘。實施方案73.實施方案58-72中任一項的方法，其中所述核酸序列是在生物樣品內(nèi)。實施方案74.實施方案73的方法，其中所述生物樣品是組織樣品。實施方案75.實施方案58-74中任一項的方法，其中所述含水組合物在室溫下包含一相。實施方案76.實施方案58-74中任一項的方法，其中所述含水組合物在室溫下包含多相。實施方案77.實施方案76的方法，其中所述含水組合物的各層混合在一起。實施方案78.實施方案58-77中任一項的方法，所述方法還包括封閉步驟。實施方案79.一種診斷染色體畸變相關(guān)的先天性遺傳疾病、癌癥或感染的方法，所述方法包括：-提供來自受試者的組織樣品，其中所述組織樣品包含核酸序列，-按照實施方案58-78中任一項的方法，確定染色體畸變是否存在于所述核酸序列中，和-如果染色體畸變存在于所述組織樣品中，則診斷所述先天性遺傳疾病、癌癥或感染。實施方案80.組合物在雜交測定中的用途，所述雜交測定用于檢測染色體畸變相關(guān)的核苷酸序列，所述組合物包含檢測染色體畸變相關(guān)核苷酸序列的分子探針和雜交組合物，所述雜交組合物包含1％(v/v)至95％(v/v)的至少一種極性非質(zhì)子溶劑。實施方案81.實施方案1-50中任一項的組合物在實施方案80中的用涂。當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12