技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于清除果蔬表面ddt的微生物菌劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
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農(nóng)藥的普及曾為人類在農(nóng)業(yè)、林業(yè)、生產(chǎn)生活中防治病蟲害，保證農(nóng)產(chǎn)品增產(chǎn)增收、穩(wěn)產(chǎn)，控制瘧疾、斑疹傷寒等疾病起到不可磨滅的作用。但它的不利面也日益引起人們的關(guān)注，這些農(nóng)藥在動(dòng)物體內(nèi)長(zhǎng)期存留、難降解，能夠在生物體內(nèi)長(zhǎng)期富集、累積，使處于食物鏈較高層次的生物面臨生命威脅甚至是滅絕風(fēng)險(xiǎn)。
二氯二苯三氯乙烷(即ddt)，它具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、耐熱、耐酸、脂溶性強(qiáng)、持久性、難降解等特點(diǎn)，是一廣譜性有機(jī)氯殺蟲劑。ddt易溶于人體脂肪并累積，破壞人體免疫功能，降低體內(nèi)抗體產(chǎn)生，引起肝臟腫大，降低脾、胸腺、淋巴結(jié)等器官的代謝速率，干擾雌激素的合成等，給人們的生活健康帶來(lái)了巨大的問題。近年來(lái)，隨著人們生活水平的不斷提高，果蔬中的農(nóng)藥殘留已引起大眾關(guān)注，常規(guī)的ddt殘留清洗方法有洗滌劑、淘米水、堿水、鹽水等方法：洗滌劑對(duì)于ddt的去除效率極高，但其主要物質(zhì)成分是經(jīng)化學(xué)合成的，非純天然的，在清洗的過程中會(huì)造成環(huán)境的二次污染；淘米水為弱堿性水，含有一定的脂溶性物質(zhì)，可降低ddt的含量，但有些米可能本身就有ddt污染，存在不確定性及風(fēng)險(xiǎn)性；堿水浸泡清洗會(huì)使得果蔬中一些脂溶性的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)流失，且清洗時(shí)不易控制堿水的濃度；鹽水滲透性較強(qiáng)會(huì)，濃度高時(shí)會(huì)破壞果蔬表面的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，造成果蔬組織損傷，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)流失；而若只用清水清洗，則只能去掉部分ddt農(nóng)殘，且清洗時(shí)間長(zhǎng)，效率太低，另外ddt最終進(jìn)入水中循環(huán)易造成二次污染?，F(xiàn)有技術(shù)對(duì)此并沒有解決之策。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的就是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺點(diǎn)，提供了一種用于清除果蔬表面ddt的微生物菌劑及其制備方法，它綠色環(huán)保，純天然，無(wú)污染，在去除ddt過程中不會(huì)產(chǎn)生有毒有害的物質(zhì)，解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題。
本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：
一種用于清除果蔬表面ddt的微生物菌劑，由以下重量份數(shù)的組份組成：木糖：10-20份，海藻糖：10-30份，葡萄糖：10-20份，酵母膏：3-10份，乳糖：10-15份，植物提取液：30-50份，芽孢桿菌：6-8份，假單胞菌：5-8份，吐溫80：3-5份，氯化鐵：2-5份，水：700-2500份。
優(yōu)選的，所述假單胞菌為嗜中溫假單胞菌和/或熒光假單胞菌。
優(yōu)選的，所述植物提取液由如下方法制得：將海藻、香蕉、黃瓜、檸檬、蘆薈中的一種或幾種打碎，然后加入沒過上述碎屑的水并煮沸，最后冷卻至室溫后真空抽濾取抽濾液即得植物提取液。
一種用于清除果蔬表面ddt的微生物菌劑的制備方法，包括如下步驟：
s1、將乳糖、葡萄糖、酵母膏溶于水中；
s2、向s1得到的溶液中加入植物提取液；
s3、將s2得到的溶液進(jìn)行高壓滅菌不小于15min得到培養(yǎng)基；
s4、取適量s3得到的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)芽孢桿菌、假單胞菌至對(duì)數(shù)期；
s5、將s4得到的對(duì)數(shù)期菌液按照1％-5％的比例接種至剩余的s3得到的培養(yǎng)基中，其中假單胞菌與芽孢桿菌的接種比為0.5-1：2-4；然后以40-80ml/min通入無(wú)菌空氣，于25℃-37℃，100-150r/min，培養(yǎng)3-8d；
s6、發(fā)酵液ph值達(dá)到7.0-8.5，有效活菌數(shù)達(dá)到2-10*108cfu/ml，停止發(fā)酵，離心取上清液；
s7、將海藻糖，木糖，吐溫80，氯化鐵溶于s6得到的上清液中，過濾得最終產(chǎn)品。
優(yōu)選的，所述植物提取液按照如下步驟制備而成：
s21、選擇海藻、香蕉、黃瓜、檸檬、蘆薈的一種或幾種，然后打碎；
s22、加入重量相當(dāng)于s21中碎屑質(zhì)量2-5倍的水，然后煮沸；
s23、將s22得到的產(chǎn)品冷卻至室溫后真空抽濾得到的抽濾液即為植物提取液。
優(yōu)選的，在s3中，溫度不低于115℃。
優(yōu)選的，在s4中，菌種培養(yǎng)方法如下：
s41、將所用菌種于28℃-37℃活化1-2min,吸取0.5-2ul進(jìn)行平板劃線；
s42、挑取單菌落接種至s3得到的培養(yǎng)基進(jìn)行純種培養(yǎng)，通入無(wú)菌空氣，于28℃-37℃，50-80r/min，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：原料全部是可食用組分，既不會(huì)對(duì)身體造成傷害，也不會(huì)造成二次污染；所述菌種皆為廣譜性有益微生物，取自植物根系表面，非基因工程合成，具有環(huán)境友好性、安全性的特點(diǎn)；所用輔助物質(zhì)價(jià)格低，無(wú)毒無(wú)害，容易降低，不會(huì)造成二次污染；本發(fā)明對(duì)應(yīng)的產(chǎn)品可用于清除果蔬表面殘留的農(nóng)藥，降解果蔬表面的ddt，將ddt分解為簡(jiǎn)單的小分子化合物，有效降低ddt的毒性，從而避免ddt流入下水道繼續(xù)造成污染。
具體實(shí)施方式：
為能清楚說(shuō)明本方案的技術(shù)特點(diǎn)，下面通過具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)闡述。
一種用于清除果蔬表面ddt的微生物菌劑，由以下重量份數(shù)的組份組成：木糖：10-20份，海藻糖：10-30份，葡萄糖：10-20份，酵母膏：3-10份，乳糖：10-15份，植物提取液：30-50份，芽孢桿菌：6-8份，假單胞菌：5-8份，吐溫80：3-5份，氯化鐵：2-5份，水：700-2500份。
所述假單胞菌為嗜中溫假單胞菌和/或熒光假單胞菌；所述芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、蠟樣芽胞桿菌中的一種或幾種；所述芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、蠟樣芽胞桿菌中的一種或幾種。
所述植物提取液由如下方法制得：將海藻、香蕉、黃瓜、檸檬、蘆薈中的一種或幾種打碎，然后加入沒過上述碎屑的水并煮沸，最后冷卻至室溫后真空抽濾取上清液即得植物提取液。
一種用于清除果蔬表面ddt的微生物菌劑的制備方法，包括如下步驟：
s1、將乳糖、葡萄糖、酵母膏溶于水中；
s2、向s1得到的溶液中加入植物提取液；
s3、將s2得到的溶液進(jìn)行高壓滅菌不小于15min得到培養(yǎng)基；
s4、取適量s3得到的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)芽孢桿菌、假單胞菌至對(duì)數(shù)期；
s5、將s4得到的對(duì)數(shù)期菌液按照1％-5％的比例接種至剩余的s3得到的培養(yǎng)基中，其中假單胞菌與芽孢桿菌的接種比為0.5-1：2-4；然后以40-80ml/min通入無(wú)菌空氣，于25℃-37℃，100-150r/min，培養(yǎng)3-8d；
s6、發(fā)酵液ph值達(dá)到7.0-8.5，有效活菌數(shù)達(dá)到2-10*108cfu/ml，停止發(fā)酵，離心5min取上清液；
s7、將海藻糖，木糖，吐溫80，氯化鐵溶于s6得到的上清液中，過濾得最終產(chǎn)品。
所述植物提取液按照如下步驟制備而成：
s21、選擇海藻、香蕉、黃瓜、檸檬、蘆薈的一種或幾種，然后打碎；
s22、加入重量相當(dāng)于s21中碎屑質(zhì)量2-5倍的水，然后煮沸2min以上；
s23、將s22得到的產(chǎn)品冷卻至室溫后真空抽濾得到的抽濾液即為植物提取液。
在s3中，溫度不低于115℃。
在s4中，菌種培養(yǎng)方法如下：
s41、將所用菌種于28℃-37℃活化1-2min,吸取0.5-2ul進(jìn)行平板劃線；
s42、挑取單菌落接種至s3得到的培養(yǎng)基進(jìn)行純種培養(yǎng)，通入無(wú)菌空氣30-50ml/min，于28℃-37℃，50-80r/min，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。
實(shí)施例1：
s1、將乳糖15克、葡萄糖20克、酵母膏10克溶于水中，并用水定容至2500克備用；
s2、植物提取液是將20克海藻打碎，加入100g水煮沸，冷卻至室溫后真空抽濾取上清液備用；
s3、將上述s1得到的溶液和s2得到溶液混合，進(jìn)行120℃、20min的高壓滅菌得到培養(yǎng)基；
s4、將嗜中溫假單胞菌；地衣芽孢桿菌進(jìn)行單菌純種培養(yǎng)；所用菌種37℃活化1min,吸取1ul進(jìn)行平板劃線；
s5、挑取s4培養(yǎng)的單菌落接種至s3所述的培養(yǎng)基進(jìn)行單菌純種培養(yǎng)，以30ml/min通入無(wú)菌空氣，于37℃，80r/min培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。
s6、將對(duì)數(shù)期發(fā)酵種子按照3％的比例接種至s3的剩余培養(yǎng)基中，其中假單胞菌與芽孢桿菌的接種比為1：4，以40ml/min通入無(wú)菌空氣，于37℃，150r/min，培養(yǎng)8d；
s7、發(fā)酵液ph值達(dá)到8.5，有效活菌數(shù)達(dá)到10*108cfu/ml，停止發(fā)酵，離心5min取上清液；
s8、將海藻糖30克，木糖20克，吐溫805克，氯化鐵5克溶于s6得到的上清液中，過濾得最終產(chǎn)品；
s9、將s8得到的產(chǎn)品分別用于蘋果和韭菜表面的ddt降解處理1h，然后分別測(cè)ddt降解率，得到t1組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
實(shí)施例2：
s1、將乳糖10克、葡萄糖10克、酵母膏3克溶于水中，并用水定容至700克備用；
s2、植物提取液是將20克黃瓜打碎，加入80g水煮沸，冷卻至室溫后真空抽濾取上清液備用；
s3、將上述s1得到的溶液和s2得到溶液混合，進(jìn)行115℃、15min的高壓滅菌得到培養(yǎng)基；
s4、將熒光假單胞菌；凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行單菌純種培養(yǎng)；所用菌種37℃活化1min,吸取1ul進(jìn)行平板劃線；
s5、挑取s4培養(yǎng)的單菌落接種至s3所述的培養(yǎng)基進(jìn)行單菌純種培養(yǎng)，以30ml/min通入無(wú)菌空氣，于28℃，50r/min培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。
s6、將對(duì)數(shù)期發(fā)酵種子按照3％的比例接種至s3的剩余培養(yǎng)基中，其中假單胞菌與芽孢桿菌的接種比為0.5：2，以40ml/min通入無(wú)菌空氣，于25℃℃，100r/min，培養(yǎng)3d；
s7、發(fā)酵液ph值達(dá)到7.0，有效活菌數(shù)達(dá)到2*108cfu/ml，停止發(fā)酵，離心5min取上清液；
s8、將海藻糖10克，木糖10克，吐溫803克，氯化鐵2克溶于s6得到的上清液中，過濾得最終產(chǎn)品；
s9、將s8得到的產(chǎn)品分別用于蘋果和韭菜表面的ddt降解處理1h，然后分別測(cè)ddt降解率，得到t2組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
實(shí)施例3：
s1、將乳糖13克、葡萄糖15克、酵母膏7克溶于水中，并用水定容至1600克備用；
s2、植物提取液是將20克香蕉打碎，加入蒸60g餾水煮沸，冷卻至室溫后真空抽濾取上清液備用；
s3、將上述s1得到的溶液和s2得到溶液混合，進(jìn)行115℃、15min的高壓滅菌得到培養(yǎng)基；
s4、將嗜中溫假單胞菌；蠟樣芽胞桿菌進(jìn)行單菌純種培養(yǎng)；所用菌種37℃活化1min,吸取1ul進(jìn)行平板劃線；
s5、挑取s4培養(yǎng)的單菌落接種至s3所述的培養(yǎng)基進(jìn)行單菌純種培養(yǎng)，以30ml/min通入無(wú)菌空氣，于32℃，65r/min培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。
s6、將對(duì)數(shù)期發(fā)酵種子按照3％的比例接種至s3的剩余培養(yǎng)基中，其中假單胞菌與芽孢桿菌的接種比為0.8：3，以40ml/min通入無(wú)菌空氣，于31℃，130r/min，培養(yǎng)6d；
s7、發(fā)酵液ph值達(dá)到7.5，有效活菌數(shù)達(dá)到6*108cfu/ml，停止發(fā)酵，離心5min取上清液；
s8、將海藻糖20克，木糖15克，吐溫804克，氯化鐵3.5克溶于s6得到的上清液中，過濾得最終產(chǎn)品；
s9、將s8得到的產(chǎn)品分別用于蘋果和韭菜表面的ddt降解處理1h，然后分別測(cè)ddt降解率，得到t3組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
實(shí)施例4：
s1、將乳糖15克、葡萄糖20克、酵母膏10克溶于水中，并用水定容至2500克備用；
s2、植物提取液是將20g檸檬打碎，加入40g水煮沸，冷卻至室溫后真空抽濾取上清液備用；
s3、將上述s1得到的溶液和s2得到溶液混合，進(jìn)行120℃、20min的高壓滅菌得到培養(yǎng)基；
s4、將熒光假單胞菌；地衣芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、蠟樣芽胞桿菌進(jìn)行單菌純種培養(yǎng)；所用菌種37℃活化1min,吸取1ul進(jìn)行平板劃線；
s5、挑取s4培養(yǎng)的單菌落接種至s3所述的培養(yǎng)基進(jìn)行菌種培養(yǎng)，以30ml/min通入無(wú)菌空氣，于37℃，80r/min培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。
s6、將對(duì)數(shù)期發(fā)酵種子按照3％的比例接種至s3的剩余培養(yǎng)基中，其中假單胞菌與芽孢桿菌的接種比為1：4，以40ml/min通入無(wú)菌空氣，于37℃，150r/min，培養(yǎng)8d；
s7、發(fā)酵液ph值達(dá)到8.5，有效活菌數(shù)達(dá)到10*108cfu/ml，停止發(fā)酵，離心5min取上清液；
s8、將海藻糖30克，木糖20克，吐溫805克，氯化鐵5克溶于s6得到的上清液中，過濾得最終產(chǎn)品；
s9、將s8得到的產(chǎn)品分別用于蘋果和韭菜表面的ddt降解處理1h，然后分別測(cè)ddt降解率，得到t4組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
實(shí)施例5：
s1、將乳糖10克、葡萄糖10克、酵母膏3克溶于水中，并用水定容至700克備用；
s2、植物提取液是將5克海藻、5克香蕉、5克黃瓜、5克檸檬、5克蘆薈打碎，加入水煮沸，冷卻至室溫后真空抽濾取上清液備用；
s3、將上述s1得到的溶液和s2得到溶液混合，進(jìn)行115℃、15min的高壓滅菌得到培養(yǎng)基；
s4、將嗜中溫假單胞菌，熒光假單胞菌；地衣芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、蠟樣芽胞桿菌進(jìn)行菌種培養(yǎng)；所用菌種37℃活化1min,吸取1ul進(jìn)行平板劃線；
s5、挑取s4培養(yǎng)的單菌落接種至s3所述的培養(yǎng)基進(jìn)行單菌純種培養(yǎng)，以30ml/min通入無(wú)菌空氣，于28℃，50r/min培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。
s6、將對(duì)數(shù)期發(fā)酵種子按照3％的比例接種至s3的剩余培養(yǎng)基中，其中假單胞菌與芽孢桿菌的接種比為0.5：2，以40ml/min通入無(wú)菌空氣，于25℃℃，100r/min，培養(yǎng)3d；
s7、發(fā)酵液ph值達(dá)到7.0，有效活菌數(shù)達(dá)到2*108cfu/ml，停止發(fā)酵，離心5min取上清液；
s8、將海藻糖10克，木糖10克，吐溫803克，氯化鐵2克溶于s6得到的上清液中，過濾得最終產(chǎn)品；
s9、將s8得到的產(chǎn)品分別用于蘋果和韭菜表面的ddt降解處理1h，然后分別測(cè)ddt降解率，得到t5組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
實(shí)施例6：
s1、將乳糖13克、葡萄糖15克、酵母膏7克溶于水中，并用水定容至1600克備用；
s2、植物提取液是將5克海藻、5克香蕉、5克黃瓜、5克檸檬、5克蘆薈打碎，加入水煮沸，冷卻至室溫后真空抽濾取上清液備用；
s3、將上述s1得到的溶液和s2得到溶液混合，進(jìn)行115℃、15min的高壓滅菌得到培養(yǎng)基；
s4、將嗜中溫假單胞菌和熒光假單胞菌；地衣芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、蠟樣芽胞桿菌進(jìn)行菌種培養(yǎng)；所用菌種37℃活化1min,吸取1ul進(jìn)行平板劃線；
s5、挑取s4培養(yǎng)的單菌落接種至s3所述的培養(yǎng)基進(jìn)行單菌純種培養(yǎng)，以30ml/min通入無(wú)菌空氣，于32℃，65r/min培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期。
s6、將對(duì)數(shù)期發(fā)酵種子按照3％的比例接種至s3的剩余培養(yǎng)基中，其中假單胞菌與芽孢桿菌的接種比為0.8：3，以40ml/min通入無(wú)菌空氣，于31℃，130r/min，培養(yǎng)6d；
s7、發(fā)酵液ph值達(dá)到7.5，有效活菌數(shù)達(dá)到6*108cfu/ml，停止發(fā)酵，離心5min取上清液；
s8、將海藻糖20克，木糖15克，吐溫804克，氯化鐵3.5克溶于s6得到的上清液中，過濾得最終產(chǎn)品；
s9、將s8得到的產(chǎn)品分別用于蘋果和韭菜表面的ddt降解處理1h，然后分別測(cè)ddt降解率，得到t6組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
統(tǒng)計(jì)結(jié)果見下表：
上述具體實(shí)施方式不能作為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，對(duì)本發(fā)明實(shí)施方式所做出的任何替代改進(jìn)或變換均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
本發(fā)明未詳述之處，均為本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員的公知技術(shù)。