專利名稱：：丹參酚酸或其鹽磷脂復合物及其制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及藥物制劑及食品化妝品添加劑領域，具體涉及丹參酚酸或其鹽磷脂復合物及其制備方法。
背景技術：
：丹參為唇形科植物丹參(5"37w'a肌'"o/r力/幼^e.)干燥根及根莖。性苦，微寒；歸心、心包、肝經(jīng)，具有祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩的功效。丹參的藥理活性成分主要分為兩大類，即脂溶性成分及水溶性成分。近年的藥效學研究證明丹參水溶性總酚酸物質(zhì)具有抗脂質(zhì)過氧化、消除自由基、抗肝纖維化、抗凝血和細胞保護、治療慢性腎功能不全等多種重要的生物活性，是治療冠心病、心絞痛的活性成分?，F(xiàn)有技術公開了利用丹參酚酸活血化瘀，改善微循環(huán)障礙，抗脂質(zhì)過氧化、消除自由基、抗衰老，抗菌抗炎的藥理作用，丹參酚酸還應用于美容、護膚、洗發(fā)用品等化妝品。丹參酚酸陸續(xù)分離及其結構確證了數(shù)十種水溶性有效成分，主要是酚酸類物質(zhì)原兒茶醛(protocatechualdehyde)、丹參素(danshensu)、咖啡酸(caffeicacid)、迷迭香酸(rosmarinicacid)、紫草酸(lithospermicacid)、丹參酚酸(salvianolicacid)A，B,C,D，E,F，G等。其中丹參酚酸B含量最高，藥理活性最強。丹參酚酸B可形成鹽，植物體內(nèi)可以鎂鹽形式存在。丹參酚酸B丹參酚酸B鎂鹽(M.W.718.614)(M.W.739.614)有文獻報道，丹參酚酸及其鹽水溶性極大，生物膜通透性極差，丹酚酸B口服生物利用度極低，自由活動大鼠口服后絕對生物利用度為2.3%，限制活動大鼠僅0.02%，而且給藥4h后發(fā)現(xiàn)仍有60X丹酚酸B在胃腸道中。因此改善丹參酚酸脂溶性，將有助于提高其生物膜通透性，提高生物利用度，增強藥效。磷脂復合物(phytosome或phospholipidcomplex)系指在非質(zhì)子傳遞體系溶劑中，藥物與磷脂以一定配比關系結合而形成的復合物。意大利學者Bombardelli等首先研究發(fā)現(xiàn)，某些天然活性成分與磷脂結合形成的復合物表現(xiàn)出與原化合物顯著不同的理化性質(zhì)和生物特性。由于磷脂分子的兩親性，其不僅是非常有效的乳化劑，更是細胞膜的重要組成部分。藥物通過與磷脂的極性基團相互作用而被固定，而磷脂的2個長脂肪酸鏈不參與復合反應，可自由移動，包裹了磷脂的極性部位，形成一個親脂性的表面，多個磷脂復合物分子有序排列，形成不同于脂質(zhì)體的球狀體，通常藥物分子與磷脂的比例為1:1或者1:2，因不同藥物而異。因此，磷脂復合物具有能夠增強藥物的脂溶性和穩(wěn)定性，增加生物膜滲透性，從而顯著提高藥物生物利用度；能夠延緩釋藥，降低體內(nèi)消除速率等優(yōu)點。尚未見關于丹參酚酸及其鹽的磷脂復合物的研究報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供丹參酚酸或其鹽的生物膜通透性高的復合物，具體涉及丹參酚酸或其鹽磷脂復合物及其制備方法。本發(fā)明所制備的復合物生物利用度高，而且制備工藝簡單，重現(xiàn)性好，適用于改善其他類似親水性分子藥物的吸收。本發(fā)明釆用丹參酚酸或其鹽為活性成分，與磷脂組成生物膜通透性高的復合物。本復合物的磷脂與丹參酚酸或其鹽的質(zhì)量比為0.110:1,優(yōu)選O.25:1。所述的丹參酚酸或其鹽來源于中藥丹參(&7Kya肌'f/or/7Wza^e.)經(jīng)過提取純化得到的水溶性提取物(可市購)。所述的丹參酚酸是以游離酸型或是鹽型尤其是鎂鹽形式存在。經(jīng)紫外分光光度法測定，其中以丹酚酸B計的丹參總酚酸的含量為50°/^100%;高效液相測定丹酚酸B的含量為不低于40%。本發(fā)明釆用的磷脂選自天然磷脂和/或合成磷脂。其中，天然磷脂選自大豆卵磷脂和/或蛋黃卵磷脂；合成磷脂選自氫化大豆卵磷脂和/或氫化蛋黃卵磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的一種或一種以上磷脂混合物。本發(fā)明的丹參酚酸磷脂復合物的制備方法是將磷脂溶解于一定量適宜介電常數(shù)小的溶劑中，加入丹參酚酸或其鹽；或在一定量適宜溶劑中同時加入磷脂和丹參酚酸或其鹽，反應適當時間，至反應體系澄清，回收溶劑，干燥，粉碎，過篩即得。本發(fā)明所述的介電常數(shù)小的有機溶劑為非質(zhì)子傳遞溶劑，選自丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚、二氧環(huán)己垸、正己垸、甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中的一種或一種以上的溶劑混合物。本發(fā)明所述磷脂與丹參酚酸或其鹽在溶劑中反應溫度為1080'C,反應時間為0.5~48小時，減壓干燥或冷凍干燥除去有機溶劑后，加入惰性溶劑使沒有形成復合物的丹參酚酸或其鹽沉淀后分離，而復合物溶于惰性溶劑，除去惰性溶劑后，得到純化的丹參酚酸或其鹽的磷脂復合物。所述的丹參酚酸或其鹽與磷脂在有機溶劑中混合反應溫度優(yōu)選2050°C，反應時間優(yōu)選218小時；優(yōu)選充入氮氣條件下加熱攪拌；純化丹參酚酸或其鹽的磷脂復合物時加入的惰性溶劑優(yōu)選氯仿。上述制備的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物溶于油相中，可制成磷脂復合物油性制劑，其中，丹參酚酸或其鹽的磷脂復合物與油相的質(zhì)量比為1:0.5~20。上述的油相是中鏈和/或長鏈脂肪酸甘油酯，其中，所述的中鏈脂肪酸甘油酯是具有8-10個碳原子鏈長的脂肪酸甘油單、雙、三或其混合物；所述的長鏈脂肪酸甘油酯是具有12-18個碳原子鏈長的甘油單、雙、三酯或其混合物。必要時，上述油相中還含有兩親性物質(zhì)，所述的兩親性物質(zhì)選自LABRADFILM1944CS、PLUROLOLEIQUECC497、聚乙二醇辛基苯基醚、單硬脂酸丙二醇、單硬脂酸乙二酯、司盤60、司盤80或司盤80中的一種或幾種。所述的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物的油性制劑可以直接用軟膠囊囊材包裹制成軟膠囊，或加入吸附型材料使其固化后添加藥用輔料制備成各種制劑，如片劑、膠囊、微丸、顆粒劑、凝膠劑、栓劑、貼劑等制劑形式，可通過胃腸道、口腔、直腸、皮膚等給藥途徑應用。上述所制備的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物可以加入藥用輔料，制備成各種制劑，如膠囊、片劑、顆粒劑、混懸劑、栓劑、凝膠劑、貼劑等劑型，可通過胃腸道、口腔、直腸、皮膚等給藥途徑應用。上述發(fā)明制備的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物可以采用本領域技術人員常用技術用于保健食品添加劑。上述發(fā)明制備的丹參酚酸及其鹽磷脂復合物可以采用本領域技術人員常用技術用于美容、護膚、洗發(fā)等化妝品領域。本發(fā)明將丹參酚酸或其鹽制備成磷脂復合物后，通過下述生物利用度和Caco-2細胞試驗的比較，證實其脂溶性明顯改善，說明本發(fā)明丹參酚酸或其鹽磷脂復合物具有顯著的有益效果和實用性。一、丹參酚酸或其鹽與所形成的磷脂復合物在不同溶劑中溶解性能丹參酚酸或其鹽與磷脂形成復合物后，其親脂性有明顯改善。按照《中國藥典》2005版二部溶解度測定方法，分別稱取丹參酚酸或其鹽粉末、丹參酚酸或其鹽與磷脂的物理混合物(按照磷脂復合物配比)、丹參酚酸或其鹽磷脂復合物，于25'C土2'C加入一定容量溶劑中，每5分鐘強力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，如無目視可見的溶質(zhì)顆粒時，即視為完全溶解。本發(fā)明所涉及的藥品近似溶解度以下列名詞術語表示易溶解，系指溶質(zhì)lg能在溶劑l~10ml中溶解；溶解，系指溶質(zhì)lg能在溶劑10~30ml中溶解；微溶，系指溶質(zhì)lg能在溶劑100M000ml中溶解；幾乎不溶，系指溶質(zhì)lg在溶劑10000ml中不能完全溶解。試驗結果表明，丹參酚酸或其鹽的磷脂復合物的脂溶性明顯大于丹參酚酸或其鹽以及丹參酚酸或其鹽與磷脂的物理混合物。表1是丹參酚酸及其鹽在不同溶劑中近似溶解度。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>二、丹參酚酸或其鹽與所形成的磷脂復合物差示熱掃描分析采用動態(tài)熱流式掃描(NETZSCH-GeratebauGmbH,德國，DSC/1/GPhoenix,以金屬鋁作為參比試劑，測定丹參酚酸或其鹽、物理混合物、磷脂復合物差示熱曲線。結果顯示，丹參酚酸或其鹽與磷脂形成復合物后，磷脂放熱峰消失，丹參酚酸鹽吸熱峰前移；而丹參酚酸或其鹽與磷脂物理混合后，雖然磷脂放熱峰前移，但是仍然存在。試驗結果驗證了丹參酚酸或其鹽與磷脂形成的磷脂復合物不是簡單的物理混合物，而是一種新的結合狀態(tài)(見圖l)。三、丹參酚酸或其鹽與磷脂復合物紫外掃描分析采用紫外分光光度計分別對磷脂、丹參酚酸、丹參酚酸鹽、不同配比丹參酚酸磷脂復合物、丹參酚酸鹽磷脂復合物的甲醇溶液進行紫外掃描。上述磷脂復合物分別來源于具體實例1~5。試驗結果顯示，丹參酚酸或其鹽與磷脂復合物具體有相似的紫外吸收曲線，具有相同最大吸收波長(285~289nm和204~207nm)。分別計算其在286nm及204nm的百分吸光系數(shù)E=。結果表明不同配比磷脂復合物具有特定E=。表2是丹參酚酸及其鹽與不同配比磷脂復合物(甲醇溶液)百分吸光系數(shù)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>四、丹參酚酸磷脂復合物在Caco-2細胞中的吸收以Caco-2細胞為模型，考察丹參酚酸、丹參酚酸與磷脂物理混合物、丹參酚酸磷脂復合物中丹參酚酸B的轉(zhuǎn)運。計算轉(zhuǎn)運系數(shù)Papp(cm/s)。試驗分為丹參酚酸溶液組、丹參酚酸與磷脂物理混合物組和丹參酚酸磷脂復合物組，給藥劑量以丹參酚酸B計算為400ng/ml，采用高效液相測定丹參酚酸B含量。試驗結果表明，溶液組、物理混合物組和磷脂復合物組丹參酚酸B的轉(zhuǎn)運系數(shù)(Pa卯)(Apical-Basolateral)分別為(4.1±0.4)Xl(Tcm/s、(6.0±0.5)X10—Ws和(39.9±0.3)Xl(Tcm/s。磷脂復合物組丹參酚酸B的轉(zhuǎn)運系數(shù)提高了約10倍。結果證實，本發(fā)明復合物能顯著改善藥物生物膜透過率。五、大鼠口服丹參酚酸磷脂復合物油性制劑生物利用度試驗取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，禁食不禁水12小時后，灌胃給藥，于一定時間點眶后靜脈叢取血，肝素抗凝。分為溶液組和磷脂復合物油制劑組，每組6只，參照相對生物利用度試驗方法，數(shù)據(jù)經(jīng)3p97軟件計算AUC值，計算相對生物利用度。給藥劑量以丹參酚酸B計算為200mg/kg。高效液相測定血漿中丹參酚酸B含量。結果SD大鼠口服丹參酚酸組Jt/C^。2849.7±289ng/ml.h，磷脂復合物組JC/C。^^12823.6土500ng/ml.h,相對生物利用度為450%。結果證實，本發(fā)明復合物能夠顯著提高藥物口服生物利用度。圖1是丹參酚酸及其鹽磷脂復合物差示熱曲線，其中，A:丹參酚酸；B:丹參酚酸磷脂復合物C:丹參酚酸鹽；D:丹參酚酸鹽磷脂復合物；E:磷脂；F:丹參酚酸磷脂物理混合物；G:丹參酚酸鹽磷脂物理混合物。具體實施例方式下列實施例旨在進一步具體描述本發(fā)明，而不是以任何形式限制本發(fā)明。實施例l丹參酚酸磷脂復合物(磷脂:丹參酚酸=1:3)稱取2.56g大豆卵磷脂溶于乙酸乙酯100ml中，50'C加熱，加入丹參酚酸7.64g，反應2小時，減壓回收溶劑，加入適量氯仿，充分振搖，過濾除去沉淀，濾液干燥，粉碎，即得黃色固體粉末。實施例2丹參酚酸磷脂復合物(磷脂:丹參酚酸=1:1)稱取5.3g大豆卵磷脂溶于乙酸乙酯100ml中，40'C加熱，加入丹參酚酸4.96g，反應4小時，減壓回收溶劑，加入適量氯仿，充分振搖，過濾除去沉淀，濾液干燥，粉碎，即得黃色固體粉末。實施例3丹參酚酸磷脂復合物(磷脂:丹參酚酸=2:1)稱取6.2g大豆卵磷脂溶于乙酸乙酯100ml中，30'C加熱，加入丹參酚酸3.lg，反應4小時，減壓回收溶劑，加入適量氯仿，充分振搖，過濾除去沉淀，濾液干燥，粉碎，即得黃色固體粉末。實施例4丹參酚酸磷脂復合物(磷脂:丹參酚酸=4:1)稱取8.68大豆卵磷脂溶于乙酸乙酯1001111中，室溫，加入丹參酚酸2.lg,反應8小時，減壓回收溶劑，加入適量氯仿，充分振搖，過濾除去沉淀，濾液干燥，粉碎，即得黃色固體粉末。實施例5丹參酚酸鹽磷脂復合物(磷脂:丹參酚酸鹽=1:1)稱取1.lg大豆卵磷脂溶于四氫呋喃100ml中，40'C加熱，加入丹參酚酸鹽1.0g，反應12小時，減壓回收溶劑，加入適量氯仿，充分振搖，過濾除去沉淀，濾液干燥，粉碎，即得黃色固體粉末。實施例6稱取丹參酚酸2.0g溶于丙酮50ml中，室溫使之溶解，加入大豆卵磷脂0.5g,反應24小時，減壓回收溶劑，干燥，粉碎，即得黃色固體粉末。實施例7稱取10.0g蛋黃卵磷脂溶于乙酸乙酯100ml中，40'C加熱使之溶解，加入丹參酚酸1.0g，反應12小時，減壓回收溶劑，干燥，粉碎，即得黃色固體粉末。實施例8稱取1.lg合成磷脂二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)溶于四氫呋喃100ml中，加熱至40'C,使之溶解，加入丹參酚酸1.0g，反應4小時，減壓回收溶劑，干燥，粉碎，即得黃色固體粉末。實施例9稱取1.2g大豆卵磷脂溶于乙酸乙酯50ml中，加熱至80'C,使之溶解，加入丹參酚酸1.lg,邊反應邊充入氮氣，反應1小時，減壓回收溶劑，干燥，粉碎，即得黃色固體粉末。加入10g中鏈脂肪酸甘油酯，攪拌均勻，得到丹參酚酸磷脂復合物油制劑。實施例10稱取6.0g氫化大豆卵磷脂和4.0g丹參酚酸鹽，加入200ml乙醇-四氫呋喃混合溶液中，室溫，反應36小時，回收溶劑，干燥，粉碎，得到黃色固體粉末。加入2g司盤80和50g中鏈脂肪酸甘油酯，攪拌均勻，得到丹參酚酸鹽磷脂復合物油制劑。實施例11稱取1.5g大豆卵磷脂和1.0g丹參酚酸酸鹽，加入50ml甲醇-四氫呋喃混合溶液中，室溫反應24小時，回收溶劑，干燥，粉碎，得到黃色固體粉末。加入1.0gPLUROL^0LEIQUECC497,9g長鏈脂肪酸甘油酯，攪拌均勻，得到丹參酚酸鹽磷脂復合物油制劑。實施例12用丹參酚酸鹽油制劑制備軟膠囊處方組成丹參酚酸鹽油制劑(約相當于200mg丹參酚酸鹽)0.5g(實施例11方法制得)工藝過程將丹參酚酸鹽油制劑及明膠、甘油、山梨醇、水配制明膠溶液，置鋪展箱中備用。在室溫25土2'C、相對濕度40%的條件下用滴制法制成膠丸，在25士2'C、相對濕度40%的條件下冷風干燥24小時即得。權利要求1、丹參酚酸或其鹽磷脂復合物，其特征在于由丹參酚酸或其鹽為活性成分，與磷脂制成磷脂復合物，所述的磷脂與丹參酚酸或其鹽的質(zhì)量比為0.1～10∶1。2、按權利要求1所述的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物，其特征在于所述的磷脂與丹參酚酸或其鹽的質(zhì)量比為0.25:1。3、按權利要求1或2所述的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物，其特征在于所述的丹參酚酸或其鹽是以中藥丹參為原料，經(jīng)過提取純化得到的水溶性提取物，其中丹參酚酸是以游離酸型或鹽型形式存在，以紫外分光光度法測定，其中以丹酚酸B計的丹參總酚酸的含量為50%~100%;以高效液相測定丹酚酸B的含量為不低于40%。4、按權利要求1所述的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物，其特征在于所述的其特征在于所述的磷脂選自天然磷脂和/或合成磷脂。5、按權利要求4所述的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物，其特征在于所述的天然磷脂選自大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂；所述的合成磷脂選自氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰膽堿或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中的一種或兩種或兩種以上的混合物。6、權利要求1的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物的制備方法，其特征在于通過下述步驟稱取處方量的磷脂和丹參酚酸或其鹽，加入介電常數(shù)小的有機溶劑，混合、反應后，減壓干燥或冷凍干燥除去有機溶劑后，加入惰性溶劑，使未形成復合物的丹參酚酸或其鹽沉淀后與復合物分離，除去惰性溶劑后，得純化的丹參酚酸及其鹽磷脂復合物。7、按權利要求6所述的方法，其特征在于所述的介電常數(shù)小的有機溶劑選自丙酮、乙酸乙酯、四氫呋喃、氯仿、二氯甲烷、二氧環(huán)己垸、正己垸、乙醚、甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中的一種或一種以上的混合溶劑。8、按權利要求6所述的方法，其特征在于所述的磷脂與丹參酚酸或其鹽在有機溶劑中的混合、反應溫度為1080'C，反應時間為0.5~48小時。9、按權利要求6所述的方法，其特征在于所述的丹參酚酸或其鹽與磷脂在有機溶劑中混合、反應溫度為2050'C,反應時間為218小時；所述的惰性溶劑為氯仿。10、按權利要求6所述的方法，其特征在于所述的制得的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物溶于油相中，制成磷脂復合物油性制劑，其中，丹參酚酸及其鹽磷脂復合物與油相的質(zhì)量比為1:0.5~20。11、按權利要求IO所述的方法，其特征在于所述的油相是中鏈和/或長鏈脂肪酸甘油酯，其中，所述的中鏈脂肪酸甘油酯選自具有8-10個碳原子鏈長的脂肪酸甘油單、雙、三或其混合物；所述的長鏈脂肪酸甘油酯選自具有12-18個碳原子鏈長的甘油單、雙、三酯或其混合物。12、按權利要求10所述的方法，其特征在于所述的油相還含有兩親性物質(zhì)，選自LABRADFILM1944CS、PLUROLOLEIQUECC497、聚乙二醇辛基苯基醚、單硬脂酸丙二醇、單硬脂酸乙二酯、司盤60、司盤80或司盤80中的一種或幾種。13、按權利要求10所述的方法，其特征在于所述的磷脂復合物油性制劑用軟膠囊囊材包裹制成軟膠囊；或加入吸附型材料制成可制成經(jīng)胃腸道、口腔黏膜、直腸或皮膚途徑給藥的制劑。14、按權利要求6所述的方法，其特征在于所述的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物加入藥學上適合的輔料，制成經(jīng)胃腸道、口腔黏膜、直腸或皮膚途徑給藥的制劑。15、權利要求l的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物在制備保健食品添加劑中的應用。16、權利要求l的丹參酚酸或其鹽磷脂復合物在制備化妝品中的應用。全文摘要本發(fā)明涉及藥物制劑及食品化妝品添加劑領域，提供丹參酚酸或其鹽磷脂復合物及其制備方法。本發(fā)明采用丹參酚酸或其鹽為活性成分，與磷脂制成生物膜通透性高的復合物。所制備的復合物，其理化性質(zhì)改變，使丹參酚酸及其鹽的親脂性增加，并利用磷脂與細胞膜的高度親和性，促進丹參酚酸及其鹽分子與細胞膜結合而增加其生物膜通透性。將丹參酚酸及其鹽磷脂復合物溶于一種或多種中及長鏈脂肪酸甘油酯中制備成組合物，動物試驗表明可顯著提高丹參酚酸的生物利用度。本發(fā)明制備工藝簡單，重現(xiàn)性好，適用于改善其他類似親水性分子藥物的吸收。文檔編號A61K31/343GK101199508SQ20071017094公開日2008年6月18日申請日期2007年11月23日優(yōu)先權日2007年11月23日發(fā)明者張文鑫,王建新,韓麗妹,高東燕申請人:復旦大學