本發(fā)明屬于醫(yī)藥化工領(lǐng)域，具體涉及到一種白芨膠提取工藝。

背景技術(shù)：

白芨（Bletilla striata），屬多年生草本球根植物（塊根），中醫(yī)認(rèn)為白芨味苦、甘而澀，性微寒，入肺經(jīng)。具有止血、消腫的功能，可治療生瘡出血、癰疽腫毒、潰瘍、手足皸裂?！段寄媳静荨分^其“治痛傷肺氣，補(bǔ)肺虛，止咳嗽，消肺疹咳血，收斂肺氣”。白芨的主要成分是白芨膠，主要成分是葡萄甘露聚糖的大量水溶性的多糖，廣泛用于食品加工、醫(yī)藥及日化產(chǎn)品領(lǐng)域。白芨膠具有調(diào)節(jié)身體代謝，調(diào)節(jié)細(xì)胞中生長(zhǎng)因子的含量，能增強(qiáng)血小板第三因子活性，顯著縮短凝血時(shí)間及凝血酶原形成時(shí)間，抑制纖維蛋白溶酶活性，對(duì)局部出血有很好的治療效果；同時(shí)白芨膠還具有抗?jié)冏饔?，并可治療胃及十二指腸潰瘍。由于白芨有高度鉆性，可在胃內(nèi)形成膠狀膜，從而促使?jié)兠嬗希黄浯伟总改z還具有消炎抗菌的功效，白芨中的有益成分對(duì)葡萄球菌及鏈球菌有抑菌作用，可在局部形成一保護(hù)膜，能控制及防止胃部感染；再次白芨膠還可以作為輔料添加到藥品中，延長(zhǎng)主藥的停滯時(shí)間，降低藥物的毒性。

近年來對(duì)白芨多糖介入治療肝癌進(jìn)行了系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)，并在臨床應(yīng)用研究中證實(shí)白芨多糖具有阻斷肝癌供血?jiǎng)用}及其側(cè)枝循環(huán)的功效，能有效抑制肝癌的生長(zhǎng)和復(fù)發(fā)。白芨多糖是一種安全、有效的抗癌藥物和肝動(dòng)脈栓塞劑，運(yùn)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)治療肝癌時(shí)，其療效優(yōu)于免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、抗血管生成藥物以及傳統(tǒng)的單純ＴＡＣＥ治療。錢駿等研究發(fā)現(xiàn)，將白芨多糖作為肝動(dòng)脈栓塞劑，并結(jié)合化療藥和肝動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)能明顯抑制肝細(xì)胞癌的生長(zhǎng)，白芨多糖的介入治療肝癌具有其優(yōu)越性和廣闊的發(fā)展前途。此外，相關(guān)研究還表明，在治療潰瘍型結(jié)腸炎、手術(shù)中止血、急性上消化道大出血以及促進(jìn)傷口皮膚愈合等方面，白芨多糖也有著廣闊的應(yīng)用空間。作為一種天然高分子材料，白芨多糖是極有發(fā)展前途的生物敷料材料，具有良好的生物相容性和生物可降解性。彭銳研究發(fā)現(xiàn)，以明膠和白芨膠為支架材料，把中藥提取物復(fù)合到其中，通過冷凍干燥法制備海綿狀多孔材料，空隙分布均勻，互相連通，用于培養(yǎng)小鼠成纖維細(xì)胞，能夠使細(xì)胞更好地黏附生長(zhǎng)。

由于科技的發(fā)展白芨的功能逐步透明化，白芨市場(chǎng)需求也日漸擴(kuò)大，近年來我國(guó)大部分地區(qū)的野生白芨遭到過度采挖，導(dǎo)致其野生自然資源急劇減少，瀕臨滅絕，被國(guó)家列為重點(diǎn)保護(hù)的野生藥用植物之一。而增加白芨的市場(chǎng)供應(yīng)方法一則是增加白芨的種植面積，加大植物組織培養(yǎng)力度，二則是增加白芨藥用功效成分的利用效率。本發(fā)明是基于后者開展的系列研究。目前白芨的提取工藝大多是粗放的水提醇沉法，提取效率不高，提取物純度不高，應(yīng)用范圍相對(duì)較窄。為了加大白芨生物資源開發(fā)，開展白芨的有效功效成分提取等深加工項(xiàng)目，增加藥物提取效率和利用率，增加藥用資源的副增加值，變得很有意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種白芨膠提取方法，主要包括浸泡-切片-熱水回流提取-濃縮-酶解-脫色-離心-醇沉-大孔吸附-離子交換吸附-脫水干燥等工藝步驟，經(jīng)大量的平行對(duì)比試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，最終確定白芨膠的最佳提取參數(shù)，工藝具體包含以下步驟：

（1）取白芨用40-55℃溫?zé)崴M(jìn)行浸泡，水料質(zhì)量比為4-7:1，浸泡時(shí)間3-5小時(shí)，浸泡之后切片，備用；

（2）按照質(zhì)量比1:12-20的比例，在白芨片中加入純化水，先用180W-250W超聲波處理15-25min，再進(jìn)行加熱回流提取，回流提取時(shí)間30-60min，回流提取溫度80-90℃，回流提取結(jié)束后分離渣液，渣料重復(fù)回流提取2-3次；

（3）合并回流提取液，濃縮至比重為1.03-1.10止；

（4）待濃縮液冷卻到40-55℃時(shí)，加入濃縮物質(zhì)量0.8-2.0%的酶制劑進(jìn)行水解，水解時(shí)間40-60min，然后加入濃縮物質(zhì)量0.3-0.5%的活性炭進(jìn)行吸附脫色脫藥味，處理時(shí)間20-35min，最后離心分離收集上清液；

（5）按體積比1:5-8的比例，在上清液中加入無(wú)水乙醇，醇沉18-26h后，離心收取沉淀，沉淀用無(wú)水乙醇洗滌2-3次；

（6）洗滌后的沉淀加入蒸餾水溶解，溶液依次經(jīng)過大孔吸附樹脂和離子交換樹脂處理，過柱后收集濾液；

（7）濾液濃縮干燥，即得白芨膠。

所述切片厚度為1.5-3mm。

所述酶制劑為胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、羧基肽酶、氨基肽酶中一種或任意比幾種。

所述大孔吸附樹脂為DB-8、DB-301、HPD-100或NKA-9。

所述離子交換樹脂為DEAE-01、DEAE-52、DEAE-cellulose（二乙氨基乙基纖維素）或CL-6B。

本發(fā)明白芨膠的分離提取純化精制工藝，步步相扣，旨在提高白芨中藥材的提取率和提取物的純度；白芨的主要功效成分是白芨膠，白芨膠是一種葡萄甘露聚糖，水溶性極強(qiáng)，所以采用熱水回流法主提，為了提升提取的有效回收率，進(jìn)行了大量的平行試驗(yàn)和正交試驗(yàn)分析，最終得出提取時(shí)物料的要求，提取溫度、提取時(shí)間、提取次數(shù)等最佳參數(shù)。對(duì)干的白芨浸泡后切片再超聲，破壞植物細(xì)胞，有利于藥用有效成分的溶出；提取物中含有大量的淀粉、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，采用酶法處理，酶水解除去蛋白質(zhì)；用活性炭處理解決了白芨粗提取物有顏色而且有強(qiáng)烈中藥味的劣勢(shì)；最后通過大孔吸附樹脂和離子交換樹脂，進(jìn)一步除去少量的蛋白質(zhì)和礦物離子，最終產(chǎn)品為無(wú)臭無(wú)味，不溶于乙醇的粉末，提取物純度較高，可以大量用在食品精加工、醫(yī)藥和化妝品領(lǐng)域，本發(fā)明方法減少了雜質(zhì)，保證了產(chǎn)品功效的穩(wěn)定性，其本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，易操作，適于工業(yè)化生產(chǎn)和市場(chǎng)推廣應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明保護(hù)范圍不局限于所述內(nèi)容。

實(shí)施例1：

（1）取干白芨用40℃溫?zé)崴M(jìn)行浸泡，水料質(zhì)量比為4:1，浸泡5小時(shí)后進(jìn)行切片，切片厚度為2mm，備用；

（2）按照質(zhì)量比為1:12的比例，在白芨片中加入純化水，先用200w超聲波處理22min，再進(jìn)行加熱回流提取，回流提取時(shí)間50min，回流提取溫度85℃，回流結(jié)束后分離渣液，渣料重復(fù)回流提取3次；

（3）合并回流提取液，濃縮至比重為1.03止；

（4）待濃縮液溫度冷卻到45℃時(shí)，加入濃縮物質(zhì)量1.0%酶制劑(胰蛋白酶+羧肽酶，質(zhì)量比1:1)進(jìn)行水解，水解時(shí)間50min，然后加入濃縮物質(zhì)量0.3%的活性炭進(jìn)行吸附脫色脫藥味，處理時(shí)間25min，最后離心分離收集上清液；

（5）按體積比1:6的比例，在上清液中加入無(wú)水乙醇，醇沉18h，離心收取沉淀，對(duì)沉淀用無(wú)水乙醇洗滌3次；

（6）洗滌后的沉淀加入蒸餾水進(jìn)行溶解，依次經(jīng)過大孔吸附樹脂（NKA-9）和離子交換樹脂（CL-6B），過柱后收集濾液；

（7）濾液濃縮干燥，即得白芨膠。

對(duì)提取的白芨膠采用苯酚-硫酸總糖測(cè)定法和3,5-二硝基水楊酸比色還原糖測(cè)定法進(jìn)行多糖含量測(cè)定，測(cè)得白芨膠的提取率為23.5%，白芨膠的純度達(dá)到95.21%；將白芨膠配成1%的水溶液進(jìn)行鑒別鑒定，白芨多糖膠溶液可以直接進(jìn)行Feling反應(yīng)，不產(chǎn)生沉淀，但經(jīng)鹽酸或硫酸處理后能夠發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)；說明提取的白芨多糖純度較高，雜質(zhì)含量較少，可以應(yīng)用在食品添加劑及醫(yī)用材料方面。

實(shí)施例2

（1）取干白芨用50℃溫?zé)崴M(jìn)行浸泡，水料質(zhì)量比為6:1，浸泡4小時(shí)后進(jìn)行切片，切片厚度為3mm，備用；

（2）按照質(zhì)量比為1:18的比例，在白芨片中加入純化水，先用180W超聲波處理18min，再進(jìn)行加熱回流提取，回流提取時(shí)間45min，回流提取溫度88℃，回流結(jié)束后分離渣液，渣料重復(fù)回流提取3次；

（3）合并回流提取液，濃縮至比重為1.05止；

（4）待濃縮液溫度冷卻到45℃時(shí)，加入濃縮物質(zhì)量1.2%酶制劑(胰蛋白酶)進(jìn)行水解，水解時(shí)間55min，再加入濃縮物質(zhì)量0.4%的活性炭進(jìn)行吸附脫色脫藥味，處理時(shí)間20min，然后進(jìn)行離心分離收取上清液；

（5）按體積比1:5的比例，在上清液中加入無(wú)水乙醇，醇沉24h，離心收取沉淀，對(duì)沉淀用無(wú)水乙醇洗滌2次；

（6）洗滌后的沉淀加入蒸餾水進(jìn)行溶解，依次經(jīng)過大孔吸附樹脂（HPD-100）和離子交換樹脂（DEAE-cellulose），過柱后收集濾液；

（7）濾液濃縮干燥，即得白芨膠。

對(duì)提取的白芨膠采用苯酚-硫酸總糖測(cè)定法和3,5-二硝基水楊酸比色還原糖測(cè)定法進(jìn)行多糖含量測(cè)定，測(cè)得白芨膠的提取率為24.7%，白芨膠的純度達(dá)到93.3%。白及膠配成1%的水溶液進(jìn)行鑒別鑒定, 精制白芨多糖膠溶液直接進(jìn)行Feling反應(yīng)，不產(chǎn)生沉淀，但經(jīng)鹽酸或硫酸處理后能夠發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)。

實(shí)施例3

（1）取干白芨用46℃溫?zé)崴M(jìn)行浸泡，水料質(zhì)量比為4.5:1，浸泡4.5小時(shí)后進(jìn)行切片，切片厚度為1.5mm，備用；

（2）按照質(zhì)量比為1:16的比例，在白芨片中加入純化水，先用250W超聲波處理15min，再進(jìn)行加熱回流提取，回流提取時(shí)間60min，回流提取溫度85℃，回流結(jié)束后分離渣液，渣料重復(fù)回流提取3次；

（3）合并回流提取液，濃縮至比重為1.09止；

（4）待濃縮液溫度冷卻到55℃時(shí)，加入濃縮物質(zhì)量1.5%酶制劑(木瓜蛋白酶+氨肽酶，質(zhì)量比2:1)進(jìn)行水解，水解時(shí)間55min，然后加入濃縮物質(zhì)量0.4%的活性炭進(jìn)行吸附脫色脫藥味，處理時(shí)間30min，然后進(jìn)行離心分離收取上清液；

（5）按體積比1:7的比例，在上清液中加入無(wú)水乙醇，醇沉22h，離心收取沉淀，對(duì)沉淀用無(wú)水乙醇洗滌3次；

（6）洗滌后的沉淀加入蒸餾水進(jìn)行溶解，依次經(jīng)過大孔吸附樹脂（DB-8）和離子交換樹脂（DEAE-01），過柱后收集濾液；

（7）濾液濃縮干燥，即得白芨膠。

對(duì)提取的白芨膠采用苯酚-硫酸總糖測(cè)定法和3,5-二硝基水楊酸比色還原糖測(cè)定法進(jìn)行多糖含量測(cè)定，測(cè)得白芨膠的提取率為23.0%，白芨膠的純度達(dá)到94.05%。白及膠配成1%的水溶液進(jìn)行鑒別鑒定, 精制白芨多糖膠溶液直接進(jìn)行Feling反應(yīng)，不產(chǎn)生沉淀，但經(jīng)鹽酸或硫酸處理后能夠發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)。