本發(fā)明涉及體外檢測(cè)領(lǐng)域，尤其是直腸癌體外檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

全球結(jié)直腸癌每年新發(fā)病例數(shù)約 120 萬(wàn)，年病死人數(shù)超過 60 萬(wàn)，發(fā)病率居第 3 位病死率居第 4 位。近些年，結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。因此，結(jié)直腸癌的治療一直是國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。隨著靶向治療藥物表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)抑制劑西妥旨單抗(Cetuximab)和帕尼單抗(Panitumumab)的問世，結(jié)直腸癌的治療進(jìn)入了靶向治療時(shí)代。多個(gè)大樣本、多中心Ⅲ期臨床研究結(jié)果提示，KRAS 基因第 2 號(hào)外顯子第 12、13 位密碼子的突變狀態(tài)與阻斷 EGFR 的單克隆抗體——西妥昔單抗、帕尼單抗的療效明確相關(guān)，KRAS野生型的患者可以從西妥昔單抗和帕尼單抗的治療中獲得最大化的生存效益。不規(guī)范的檢測(cè)方法將導(dǎo)致部分 KRAS 基因突變型患者接受錯(cuò)誤的抗 EGFR 抑制劑治療，不僅治療效果不佳，也極大的浪費(fèi)了患者有限的治療窗口和經(jīng)濟(jì)實(shí)力。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為保證病理診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性，節(jié)約時(shí)間和人工，及時(shí)將患者信息反饋給治療醫(yī)生，本發(fā)明提供一種直腸癌體外檢測(cè)方法。

本發(fā)明產(chǎn)品包括幽門螺旋桿菌核酸及其耐藥基因突變檢測(cè)試劑盒（高分辨熔解曲線熒光 PCR法）、K-Ras 基因突變檢測(cè)試劑盒（高分辨熔解曲線熒光 PCR 法）、EGFR 基因突變檢測(cè)試劑盒（高分辨熔解曲線熒光 PCR 法）、CYP2C19 基因突變檢測(cè)試劑盒（高分辨熔解曲線熒光 PCR 法）、ALDH2基因突變檢測(cè)試劑盒（高分辨熔解曲線熒光 PCR 法）、ABCG1 基因突變檢測(cè)試劑盒（高分辨熔解曲線熒光 PCR 法）、MDR1 基因突變檢測(cè)試劑盒（高分辨熔解曲線熒光 PCR 法），由于上述試劑盒組成、生產(chǎn)工藝等均類似，因此，產(chǎn)品基因突變檢測(cè)試劑盒（高分辨熔解曲線熒光PCR 法）為代表，設(shè)計(jì)能力以 7 種試劑盒總體進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

工藝說(shuō)明：

原料入庫(kù)檢查

對(duì)原料的堿基對(duì)、質(zhì)量、純度、電傳導(dǎo)度、回收量、寡聚DNA 濃度等指標(biāo)進(jìn)行檢查，在此過程中會(huì)產(chǎn)生不合格品S11，此步驟委托第三方檢測(cè)公司進(jìn)行檢測(cè)。不合格品退回供應(yīng)商。

原料稱量.配置

稱量：采用移液槍輔助電子天平對(duì)KODDNA 聚合酶、脫氧腺苷三磷酸、脫氧胞苷三磷酸、脫氧鳥苷三磷酸、脫氧胸腺三磷酸等進(jìn)行稱量。分別將原料配置成以下四種中間體：酶試劑（含有干預(yù)反應(yīng)的成分）：常溫下，在潔凈臺(tái)上按一定比例混合KODDNA 聚合酶、脫氧腺苷三磷酸、脫氧胞苷三磷酸、脫氧鳥苷三磷酸、脫氧胸腺三磷酸等原料。引物/探針試劑（含有干預(yù)反應(yīng)的成分）：常溫下，在潔凈臺(tái)上按比例混合寡聚核苷酸3-端引物和5-端引物（不同項(xiàng)目堿基對(duì)序列不一樣），再混合Q-probe 探針（不同項(xiàng)目堿基對(duì)序列不一樣），加入定量硫酸鎂。

陽(yáng)性質(zhì)控品：常溫下，在潔凈臺(tái)上按比例混合緩沖劑及其檢測(cè)項(xiàng)目陽(yáng)性堿基對(duì)序列。

陰性質(zhì)控品：常溫下，在潔凈臺(tái)上按比例混合緩沖劑及其檢測(cè)項(xiàng)目陰性堿基對(duì)序列。

產(chǎn)品檢測(cè)對(duì)產(chǎn)品的敏感度、正確性及同時(shí)再現(xiàn)性指標(biāo)進(jìn)行抽樣檢測(cè)，檢測(cè)采用全自動(dòng)核酸提純及熒光定量PCR 分析系統(tǒng)對(duì)酶試劑、引物/探針試劑、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控相應(yīng)標(biāo)本進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)。

附圖說(shuō)明：

圖1是工藝流程圖。