本發(fā)明涉及基因檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種帕金森病致病基因及檢測試劑盒。

背景技術(shù)：

帕金森病(Parkinson’s disease,PD；MIM 168600)，又稱震顫麻痹，是一種常見的運動系統(tǒng)障礙疾病，是僅次于阿爾茨海默病的第二大常見進行性神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。流行病學(xué)資料顯示其患病率與年齡有一定關(guān)系，65歲以上人群的患病率約1％左右，到85歲人群患病率增長至約4％～5％。PD的平均發(fā)病年齡為70歲，PD的標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率估計為8～18/10萬/年，終生患病風(fēng)險約為1.5％。此外，性別也可能影響PD的發(fā)病率，幾項前瞻性研究發(fā)現(xiàn)男性的發(fā)病率高于女性。PD運動系統(tǒng)典型癥狀為運動遲緩、靜止性震顫、肌強直和姿勢步態(tài)不穩(wěn)，這些癥狀主要由黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的進行性丟失引起，此外PD患者可表現(xiàn)出如自主神經(jīng)功能紊亂等非運動系統(tǒng)癥狀，甚至可能早于運動系統(tǒng)癥狀出現(xiàn)。PD不僅累及大腦和腦干，對其它器官(心臟、膀胱及腸道)也有影響。目前PD的主要治療僅能控制癥狀，常用的藥物治療只能減輕PD的運動系統(tǒng)癥狀，并不能延緩疾病的進展，甚至?xí)霈F(xiàn)一些運動系統(tǒng)的副作用，如開關(guān)現(xiàn)象和運動困難等。此外，在PD疾病發(fā)展過程中特別是晚期，非運動系統(tǒng)癥狀也很常見，如自主神經(jīng)功能紊亂、認(rèn)知障礙、抑郁、嗅覺和感覺缺失以及睡眠障礙等。PD是一種慢性疾病，其起病隱匿，病情進展緩慢，從診斷到死亡的平均生存期可持續(xù)15年甚至更久，但PD病情嚴(yán)重時可出現(xiàn)各種嚴(yán)重并發(fā)癥，對患者造成嚴(yán)重困擾甚至引起死亡。因PD具有病程長和致殘率高等特點，對患者的社會功能和生活質(zhì)量造成了嚴(yán)重的危害，給患者及其家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)和煩惱。

一些環(huán)境因素，例如鄉(xiāng)下生活、農(nóng)耕作業(yè)、飲用井水和接觸殺蟲劑等，已被確定是PD發(fā)病的危險因素。流行病學(xué)研究顯示10％～30％的PD患者有家族史，PD患者一級親屬PD的發(fā)生風(fēng)險是正常人2～7倍。雙胞胎研究也表明遺傳因素在PD發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。大部分患者的PD是散發(fā)的，有5％～10％的患者屬于遺傳型PD，其遺傳模式包括常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳和X連鎖遺傳等。目前已確定的與常染色體顯性遺傳有關(guān)的基因包括SNCA、LRRK2、VPS35、UCHL1、GIGYF2、HTRA2、EIF4G1、DNAJC13、CHCHD2、TMEM230和RIC3。與常染色體隱性遺傳相關(guān)的基因包括Parkin、PINK1、DJ-1、ATP13A2、DNAJC6、SYNJ1、PRKN、PLA2G6、FBXO7、SYNJ1和VPS13C。PD易感基因包括GBA、MAPT、GAK、HLA-DRA、BST1、FGF20、STX1B和STBD1等。

自1997年第一個致病基因SNCA(theα-synuclein gene)被鑒定可能導(dǎo)致常染色體顯性遺傳PD以來，遺傳因素在PD發(fā)生中的作用越來越受到關(guān)注。目前報道約10％左右PD患者具有陽性家族史(其中1個以上有血緣關(guān)系的親屬表現(xiàn)出類似癥狀)，其余大多數(shù)為散發(fā)性PD。目前對家族性PD的相關(guān)基因及基因突變和遺傳因素對散發(fā)性PD發(fā)生的影響均有一定的研究，此外越來越多的研究證實了一些PD相關(guān)基因的基因多態(tài)性與PD發(fā)病風(fēng)險相關(guān)。

PD遺傳機制復(fù)雜，具有遺傳及臨床異質(zhì)性，目前的遺傳學(xué)研究表明至少有25個疾病位點和20個致病基因與PD發(fā)病有關(guān)，其中13個疾病位點和11個致病基因與常染色體顯性遺傳PD有關(guān)，具體發(fā)病機制復(fù)雜，目前不甚清楚。目前已發(fā)現(xiàn)的遺傳學(xué)病因僅能解釋約5％的PD，仍有較多的家族性PD和散發(fā)性PD的病因不明，某些已明確的疾病位點如1p32和1q32等尚未鑒定出致病基因。據(jù)了解，目前尚無GALNT2基因與PD發(fā)病關(guān)系的研究報道，也暫無該基因所在位置1q42.13與PD相關(guān)的報道。

由于PD遺傳機制復(fù)雜，具有臨床及遺傳異質(zhì)性，目前缺乏快速、準(zhǔn)確的檢測技術(shù)應(yīng)用于PD致病基因的檢測。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種帕金森病致病基因及檢測試劑盒，其中帕金森病致病基因為GALNT2；針對其編碼區(qū)序列設(shè)計診斷引物，發(fā)明檢測試劑盒應(yīng)用于PCR體外擴增基因組DNA，結(jié)合Sanger測序，檢測PD致病基因GALNT2基因的突變，應(yīng)用于臨床基因診斷，具有檢測方便、便捷，準(zhǔn)確率達到100％等優(yōu)勢。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種帕金森病致病基因，所述帕金森病致病基因為GALNT2基因編碼區(qū)(第四外顯子)第466位堿基發(fā)生G→A改變的基因，包含所述帕金森病致病基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.33所示的序列。

作為本發(fā)明的同一技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供了一種帕金森病致病基因的檢測試劑盒，所述檢測試劑盒包括引物，所述引物為根據(jù)GALNT2基因所有外顯子及其外顯子-內(nèi)含子交界區(qū)序列設(shè)計的引物，所述引物用于PCR擴增，所述PCR擴增的產(chǎn)物包括GALNT2基因外顯子及其外顯子-內(nèi)含子交界區(qū)的核苷酸序列。

上述的檢測試劑盒，優(yōu)選的，所述引物的核苷酸序列為以下引物對中的至少一對：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32。

上述的檢測試劑盒，優(yōu)選的，所述檢測試劑盒還包括用于PCR的DNA擴增酶和緩沖液。

上述的檢測試劑盒，優(yōu)選的，所述用于PCR的DNA擴增酶為Taq DNA聚合酶。

上述的檢測試劑盒，優(yōu)選的，所述Taq DNA聚合酶的酶活為5U/μl。

上述的檢測試劑盒，優(yōu)選的，所述緩沖液為PCR Buffer、MgCl₂和dNTP Mix。

上述的檢測試劑盒，優(yōu)選的，所述MgCl₂的濃度為25mM、所述dNTP Mix的濃度為10mM。

上述的檢測試劑盒，優(yōu)選的，所述引物、DNA擴增酶和緩沖液的體積比為2:0.15:4.82。

本發(fā)明的創(chuàng)新點在于：

本發(fā)明公開了一種在常染色體顯性遺傳PD患者中發(fā)現(xiàn)的致病基因及其編碼的蛋白質(zhì)，首次揭示了定位于1q42.13區(qū)間內(nèi)的GALNT2基因為一個中國漢族常染色體顯性遺傳PD家系的致病基因，同時鑒定出該家系的致病突變?yōu)镚ALNT2p.V156M的雜合突變。本發(fā)明提供了一種常染色體顯性遺傳PD致病基因突變的檢測方法，采用檢測試劑盒使檢測變得簡便和易行，本發(fā)明將進一步加深人類在分子病理水平上對PD的認(rèn)識，為今后開展相應(yīng)基因診斷、產(chǎn)前篩查、靶向藥物設(shè)計和臨床治療提供重要的遺傳學(xué)依據(jù)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：

(1)本發(fā)明提供了一種帕金森病致病基因，通過對PD家系進行外顯子組測序及Sanger測序分析，鑒定了一個新的常染色體顯性遺傳PD致病基因——GALNT2，該基因定位于1q42.13區(qū)間內(nèi)，針對其編碼區(qū)序列設(shè)計診斷引物，發(fā)明檢測試劑盒應(yīng)用于PCR體外擴增基因組DNA，結(jié)合Sanger測序，檢測PD致病基因GALNT2基因的突變，應(yīng)用于臨床基因診斷。

(2)本發(fā)明提供了一種用于檢測帕金森病致病基因的檢測試劑盒，通過設(shè)計PCR擴增的致病基因GALNT2所有外顯子及其外顯子-內(nèi)含子交界區(qū)序列的引物，提供了一種用于PD致病基因突變的檢測試劑盒，該試劑盒檢測方便、便捷，準(zhǔn)確率達到100％。

(3)本發(fā)明用于檢測帕金森病致病基因的檢測試劑盒應(yīng)用于PD致病基因突變的檢測，有利于明確PD患者的分子診斷及分型，用于開展基因診斷和遺傳咨詢，應(yīng)用于PD家系患者子代產(chǎn)前診斷，指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育。此外，新的PD致病基因的克隆，結(jié)合遺傳或表觀遺傳修飾因素調(diào)節(jié)基因表達及構(gòu)建相應(yīng)的動物模型將為揭示PD的發(fā)病機理提供重要線索，進一步闡明該疾患的發(fā)病機制，有助個體化診斷及治療。

附圖說明

為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整的描述。

圖1為PD家系圖，其中M表示定位在1號染色體上GALNT2基因c.466G>A(p.V156M)突變，N表示正常(normal)。

圖2為PD家系成員GALNT2基因測序結(jié)果圖；其中A表示正常者(Ⅲ:6)測序圖；B表示患者(Ⅲ:4)測序圖示c.466G>A(p.V156M)突變。

圖3為GALNT2基因編碼蛋白同源性比較分析(BLAST結(jié)果)。

具體實施方式

以下結(jié)合說明書附圖和具體優(yōu)選的實施例對本發(fā)明作進一步描述，但并不因此而限制本發(fā)明的保護范圍。

實施例

以下實施例中所采用的材料和儀器均為市售。

實施例1：

一種帕金森病致病基因，其包含基因突變的核苷酸序列為(SEQ ID NO.33)：

TCTGCCTGTTCTCTGAAGGGctaaacaagctgtggctgctctgggggtcattgttcagaggaccatctttctcttcctgcaggtgtcagcggaagcagtggcgggtggatctgccggccaccagcgtggtgatcacgtttcacaatgaagccaggtcggccctactcaggaccAtggtcaggtgaggccaggagatgcattacctgtcaggggtgttaagacattagctgtgtcCCAGGCACAGTCAGACCAG。

正常的核苷酸序列為(SEQ ID NO.34)：

tctgcctgttctctgaagggctaaacaagctgtggctgctctgggggtcattgttcagaggaccatctttctcttcctgcaggtgtcagcggaagcagtggcgggtggatctgccggccaccagcgtggtgatcacgtttcacaatgaagccaggtcggccctactcaggaccGtggtcaggtgaggccaggagatgcattacctgtcaggggtgttaagacattagctgtgtcccaggcacagtcagaccag。

該致病基因是采用以下方法鑒定的：

采集到一個三代常染色體顯性遺傳PD家系(圖1)成員的外周靜脈血樣本10ml，經(jīng)EDTA-K₂抗凝，常規(guī)苯酚-氯仿法提取基因組DNA，將提取得到的基因組DNA經(jīng)分光光度計測DNA濃度和OD值后稀釋至100ng/μl，用于后續(xù)外顯子組測序。

本次共采集了家系內(nèi)11名成員(包括4名患者和7名正常者)的血液樣本及相關(guān)詳細(xì)臨床資料，家系內(nèi)PD患者臨床表現(xiàn)為運動遲緩、靜止性震顫和一些非運動系統(tǒng)表現(xiàn)(腿部疼痛、失眠)，左旋多巴治療有效，具有診斷意義的典型癥狀。詳細(xì)臨床表現(xiàn)列于表1中。

表1：常染色體顯性遺傳PD家系成員基本信息

+表示癥狀明顯；-表示不詳或無明顯癥狀。

將采集到的基因組DNA進行外顯子組測序：對PD家系內(nèi)2個典型患者(Ⅲ:5和Ⅲ:9)的基因組DNA進行外顯子組測序，獲得核苷酸變異數(shù)據(jù)。

測序流程為：將基因組DNA隨機打斷成隨機片段并建立隨機片段文庫；采用NimbleGen SeqCap EZ(生物素化寡DNA核酸探針)人全外顯子捕獲系統(tǒng)，對目標(biāo)片段進行富集；運用第二代高通量ABI SOLiDTM4.0測序儀，進行高通量的測序。外顯子組測序獲得原始數(shù)據(jù)經(jīng)過去污染、質(zhì)量控制等過濾處理后，比對人類參考基因組，獲得比對到基因組上的Unique mapped reads(單一定位讀取片段)，即得到核苷酸變異數(shù)據(jù)。

生物信息學(xué)分析：對外顯子組測序獲得的核苷酸變異數(shù)據(jù)，通過與正常人核苷酸變異數(shù)據(jù)庫(如dbSNP132、1000基因組計劃、HapMap和中國炎黃一號)對比，排除已知的核苷酸多態(tài)和人群中有一定頻率的核苷酸多態(tài)，優(yōu)先在兩個患者者同時存在的變異，結(jié)合生物信息學(xué)軟件預(yù)測結(jié)果，進一步縮小候選變異數(shù)目為85個，確定候選基因及變異。

通過設(shè)計針對候選基因變異的引物、位點特異性PCR擴增、Sanger測序和家系內(nèi)突變-表型共分離分析等，結(jié)果顯示，PD家系內(nèi)2個典型患者(Ⅲ:5和Ⅲ:9)GALNT2基因編碼區(qū)(NM_004481.4,NP_004472.1)第466位堿基發(fā)生G→A改變(c.466G>A,p.V156M)，該突變?yōu)镻D家系的致病基因突變。

引物設(shè)計：候選基因變異的基因標(biāo)準(zhǔn)序列來自于UCSC(http://genome.ucsc.edu/)，應(yīng)用Primer3(version 4.0.0,http://primer3.ut.ee/)軟件設(shè)計用于檢測候選基因變異的引物并合成，然后利用Primer-BLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)驗證引物特異性。

根據(jù)上述方法，本發(fā)明合成的正向引物為：5’-tctgcctgttctctgaaggg-3’(即SEQ ID NO.7)；反向引物為：5’-ctggtctgactgtgcctgg-3’(即SEQ ID NO.8)；引物對SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8僅針對GALNT2基因候選變異c.466G>A(p.V156M)所在外顯子(4號外顯子)，但是在實際的應(yīng)用過程中，突變位點可能會存在于GALNT2基因的任一位置上。若突變位點出現(xiàn)在該基因其他區(qū)域，針對GALNT2基因編碼區(qū)序列設(shè)計的以下引物對中的至少一對也能實現(xiàn)對PD致病基因GALNT2突變的檢測，并達到相同或相似的技術(shù)效果：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32。

實施例2：一種帕金森病致病基因的檢測試劑盒。

前述PD致病基因的檢測試劑盒，其具體成分和含量列于表2中。

表2：實施例1的PD致病基因的檢測試劑盒成分表

實施例3：一種實施例2的檢測試劑盒在帕金森病致病基因檢測中的應(yīng)用。

分別以正常者(Ⅲ:6)和患者(Ⅲ:4)為被檢者，進行如下操作：

1、基因組DNA提?。翰杉瘍晌槐粰z者外周靜脈血樣本10ml，經(jīng)EDTA-K2抗凝，常規(guī)苯酚-氯仿法提取基因組DNA，分光光度計測DNA濃度和OD值后稀釋至100ng/μl備用。

2、PCR擴增：利用實施例2設(shè)計的檢測試劑盒將步驟1中提取的基因組DNA進行擴增得到PCR擴增產(chǎn)物。PCR反應(yīng)體系(25μl)的成分為：1μl的DNA模板(即步驟1提取的基因組DNA)；2.5μl的10×PCR Buffer；2.0μl的25mM MgCl₂；0.32μl的10mM dNTP Mix；1.0μl實施例2的正向引物(10μmol/L)；1.0μl實施例2的反向引物(10μmol/L)；0.15μl的Taq DNA聚合酶(5U/μl)，加滅菌雙蒸水(ddH₂O)至25μl。PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性3分鐘，95℃變性40秒，58℃退火35秒，72℃延伸40秒，重復(fù)變性、退火和延伸三個步驟35個循環(huán)，最后72℃延伸5分鐘，4℃保存。將PCR擴增產(chǎn)物于6％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，凝膠經(jīng)固定液(固定液包括450ml的蒸餾水、50ml的無水乙醇和2.5ml的冰醋酸液)固定，染色液(染色液包括1g的硝酸銀和500ml的蒸餾水)染色，顯色液(顯色液包括500ml的蒸餾水、3.75g的氫氧化鈉和2.5ml的甲醛)顯帶，得到電泳圖譜。

3、產(chǎn)物純化：分析步驟2中得到的電泳圖譜，選擇電泳圖譜中帶型單一且濃度較高與目標(biāo)片段大小一致的PCR產(chǎn)物進行產(chǎn)物純化。產(chǎn)物純化反應(yīng)體系：蝦堿性磷酸酶(SAP，1U/μl)0.8μl，核酸外切酶I(EXO I，20U/μl)0.2μl，10×SAP Buffer 0.2μl，ddH₂O 0.3μl，PCR產(chǎn)物8.5μl。產(chǎn)物純化反應(yīng)條件：在溫度為37℃下反應(yīng)120分鐘，然后轉(zhuǎn)入80℃下反應(yīng)15分鐘，得到PCR產(chǎn)物純品，于4℃保溫，備用。

4、Sanger測序：將步驟3中制備得到的PCR產(chǎn)物純品按BigDye 3.1 Sequencing kit(BigDye 3.1 Sequencing kit由Applied Biosystems公司提供)試劑盒進行測序PCR得到測序產(chǎn)物。測序PCR反應(yīng)體系為1/16反應(yīng)體系(10μl)：2μl PCR產(chǎn)物純品(DNA)，0.5μl的BigDye，1.75μl的5×BigDye Seq Buffer，1μl的測序引物(3.2pmol/μl，測序引物采用實施例2的正向引物或反向引物)，4.75μl的ddH₂O。測序PCR反應(yīng)條件：96℃下變性30秒，55℃退火15秒，60℃延伸3分鐘，重復(fù)變性、退火和延伸步驟33個循環(huán)，維持4℃，得到測序產(chǎn)物，取出備用。

將測序產(chǎn)物進行純化：采用乙醇/EDTA/乙酸鈉(NaAc)法純化測序產(chǎn)物，10μl反應(yīng)體系，96孔板。具體操作步驟如下：在96孔板中每孔加入1μl 125mM EDTA與1μl 3M NaAc混合液；再于每孔中加入25μl無水乙醇，用鋁箔紙密封后震蕩混勻4次，于室溫放置15分鐘；然后置于離心機中以2800×g離心30分鐘，馬上倒置96孔板，再離心至185×g停止離心(從離心機啟動到達185×g停止，離心時間共1分鐘)；接著于每孔中加入35μl 70％乙醇，于4℃下以1650×g離心15分鐘，馬上倒置96孔板，離心至185×g停止離心(從離心機啟動到達185×g停止，離心時間共1分鐘)；重復(fù)上述步驟一次，置于室溫；待乙醇揮發(fā)干凈后，于每孔中加入10μl高度去離子甲酰胺(Hi-Di Formamide)溶解DNA；待測序產(chǎn)物完全溶解后置于96℃變性5分鐘后，迅速置于冰中冷卻15分鐘。采用美國Applied Biosystems公司自動基因分析儀3500測序分析純化后的測序產(chǎn)物得到測序圖(參見圖2)。其中A表示正常者(Ⅲ:6)測序圖；B表示患者(Ⅲ:4)測序圖。從圖2中可知，PD家系患者(Ⅲ:4)1號染色體上GALNT2基因編碼區(qū)第466位堿基發(fā)生G→A改變。

5、突變分析：PCR產(chǎn)物純品進行Sanger測序后，比對參考基因組標(biāo)準(zhǔn)序列，鑒定GALNT2基因編碼區(qū)(NM_004481.4,NP_004472.1)第466位堿基是否發(fā)生G→A改變(c.466G>A,p.V156M)。進一步使用生物信息學(xué)軟件SIFT(http://sift.jcvi.org)，Polyphen-2(http://genetics.bwh.harvard.edu/pph2/)和MutationMaster(http://www.mutationtaster.org/)進行預(yù)測，預(yù)測突變是否影響功能和致病，進一步明確基因突變與疾病的關(guān)系，預(yù)測該突變?yōu)橹虏⌒酝蛔儭?/p>

鑒定基因突變后，NCBI-BLAST(http://blast.st-va.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)對比其它生物中的同源基因編碼蛋白(圖3)，從圖3中可知：GALNT2基因編碼蛋白的156位纈氨酸(V)在多個物種中高度保守。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制。雖然本發(fā)明已以較佳實施例揭示如上，然而并非用以限定本發(fā)明。任何熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神實質(zhì)和技術(shù)方案的情況下，都可利用上述揭示的方法和技術(shù)內(nèi)容對本發(fā)明技術(shù)方案做出許多可能的變動和修飾，或修改為等同變化的等效實施例。因此，凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案的內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所做的任何簡單修改、等同替換、等效變化及修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案保護的范圍內(nèi)。

SEQUENCE LISTING

<110> 中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院

<120> 帕金森病致病基因及檢測試劑盒

<130> 無

<160> 34

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

cttcctccgc tcctcccc 18

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gagagggcag gggacagg 18

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

tcatcagtgc atccccagg 19

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

atgctcagtc cactcccaat 20

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

gccatggatg tgatttctgg a 21

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

caggtgaaag cgacgtactg 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

tctgcctgtt ctctgaaggg 20

<210> 8

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

ctggtctgac tgtgcctgg 19

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

agtgtgtagc tcctccaacc 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

gttcacgcct cattagcacc 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

ccaaggagat aatcggccct 20

<210> 12

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

tctggtagag ggagacagaa a 21

<210> 13

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

ggttggcatg gggttgtg 18

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

tactccctgc gttacacctc 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

ccctgtgcct gcctaatact 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

gggagtggtg atcagatgct 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

ttaagctgtg aggaatgggg 20

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

caaagaagct ggaacctggg 20

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

caagggtgct ggcaatctaa 20

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

gcaaggatcg attaagccca 20

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

gcttggtgtg tctgctgttg 20

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

ctcaaacagc ccaaggtcag 20

<210> 23

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

aggtgcaaat ggagtgatgc 20

<210> 24

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

gcacctgggt agctgaattc 20

<210> 25

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

ccctgttctc ctcagcagat 20

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

atttcccctc tgctgcttct 20

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

ctctcgttcc tgtcacctgt 20

<210> 28

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

caactcctgc tctctctggg 20

<210> 29

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

tcgatgcccc ttctttcctt 20

<210> 30

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

ctttgagagg cagcacagag 20

<210> 31

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

acaaggtcct gaattcacac g 21

<210> 32

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

gatcaccaga ctccacccaa 20

<210> 33

<211> 253

<212> DNA

<213> 人類

<400> 33

tctgcctgtt ctctgaaggg ctaaacaagc tgtggctgct ctgggggtca ttgttcagag 60

gaccatcttt ctcttcctgc aggtgtcagc ggaagcagtg gcgggtggat ctgccggcca 120

ccagcgtggt gatcacgttt cacaatgaag ccaggtcggc cctactcagg accatggtca 180

ggtgaggcca ggagatgcat tacctgtcag gggtgttaag acattagctg tgtcccaggc 240

acagtcagac cag 253

<210> 34

<211> 253

<212> DNA

<213> 人類

<400> 34

tctgcctgtt ctctgaaggg ctaaacaagc tgtggctgct ctgggggtca ttgttcagag 60

gaccatcttt ctcttcctgc aggtgtcagc ggaagcagtg gcgggtggat ctgccggcca 120

ccagcgtggt gatcacgttt cacaatgaag ccaggtcggc cctactcagg accgtggtca 180

ggtgaggcca ggagatgcat tacctgtcag gggtgttaag acattagctg tgtcccaggc 240

acagtcagac cag 253