本發(fā)明涉及一種hpv高危18型恒溫檢測試劑盒，特別涉及一種不依賴于高能能量分子的恒溫擴增技術(shù)。
背景技術(shù)：
1983年，mullis等發(fā)明了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（pcr）技術(shù)，30多年間，pcr技術(shù)得到長足發(fā)展，由于其在靈敏度和特異性方面的優(yōu)勢，pcr技術(shù)被迅速運用到科學(xué)研究和臨床研究的各個方面。這種類似于dna的天然復(fù)制過程的pcr技術(shù)，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
與傳統(tǒng)的pcr技術(shù)相比，恒溫擴增技術(shù)主要利用重組酶的活性，不進行核酸解鏈和退火即可在恒溫條件下（如37℃）進行核酸的擴增，因此不需要昂貴的儀器，也避免了高溫對酶的損耗。同時恒溫擴增技術(shù)在體系中不需要加入過量的引物，降低了引物與模板錯配或生成引物二聚體的可能性。恒溫擴增技術(shù)日益受到重視。
人乳頭瘤病毒（hpv）被分類成“高風(fēng)險”病毒，可引起細(xì)胞變異，并且可以導(dǎo)致生殖器官癌癥，子宮頸癌、陰道癌、肛門和陰莖的癌癥都有可能由hpv引起的。其中子宮頸癌是人體最常見的癌瘤之一，不但在女性生殖器官癌瘤中占首位，而且是女性各種惡性腫瘤中最多見的癌瘤。根據(jù)29個省、市，自治區(qū)回顧調(diào)查我國宮頸癌死亡率占總癌癥死亡率的第四位，占女性癌的第二位。因此人乳頭瘤病毒的檢測對于篩查子宮頸癌有著重要意義。
本發(fā)明hpv高危18型恒溫檢測試劑盒將恒溫擴增技術(shù)應(yīng)用到hpv高危18型的檢測上，縮短了反應(yīng)時間，降低了體系對反應(yīng)條件的要求，大大地提高了檢測的效率，有利于臨床的診斷及治療。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種hpv高危18型恒溫檢測試劑盒，包括反應(yīng)液，啟動液，反應(yīng)酶系，hpv高危18型特異性引物。
hpv高危18型恒溫檢測試劑盒反應(yīng)液的具體成分如下：
tris-hcl（ph8.3）50mm
kcl60mm
二硫蘇糖醇2mm
甜菜堿1m
海藻糖5.5%
peg5.5%
bsa0.1mg/ml
hpv高危18型恒溫檢測試劑盒啟動液的具體組分如下：
氯化鎂10mm
hpv高危18型恒溫檢測試劑盒反應(yīng)酶系的具體組分如下：
dntps200um
聚合酶bsu50u
單鏈結(jié)合蛋白262ng/ul
重組酶（e.colirect）360ng/ul
上游引物200nm
下游引物200nm
hpv高危18型恒溫檢測試劑盒特異性引物序列如下：
上游引物：ggaccgaaaacggtgtatataaaagatgtgag
下游引物：atcaggtagcttgtagggtcgccgtgttgga
本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明的恒溫擴增結(jié)果好，特異性好，靈敏度高。
附圖說明
圖1為實施例1的電泳結(jié)果圖。
具體實施方式
下面結(jié)合具體的實驗，進一步說明hpv高危18型恒溫檢測試劑盒的優(yōu)勢。
實施例1：本實施例用hela細(xì)胞作為樣本，用人基因組dna作為陰性對照。取兩個200ul反應(yīng)管，分別標(biāo)記為反應(yīng)管1和反應(yīng)管2。在分別加入20ul反應(yīng)液、5ul反應(yīng)酶系到反應(yīng)管1和2中，在反應(yīng)管1中加入2ulhela細(xì)胞，在反應(yīng)管2中加入2ul人基因組dna作為陰性對照，用滅菌水補足體系到45ul，混勻后再分別加入5ul啟動液。
選擇恒溫水浴鍋提供反應(yīng)所需要的恒溫環(huán)境，設(shè)置恒溫水浴鍋溫度為37℃，反應(yīng)時間為30min。
反應(yīng)結(jié)束后，取10ul產(chǎn)物，用2%的瓊脂糖凝膠進行電泳。
從圖中可以看出，在250bp處有清晰的電泳條帶，為樣本的目的條帶，陰性對照泳道干凈，說明本發(fā)明的恒溫擴增結(jié)果好，特異性好，靈敏度高。
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