本申請請求2015年12月11日向中國國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的、專利申請?zhí)枮?01510922167.8的專利申請的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益，并且通過參照將其全文并入此處。
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物化學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
：，具體地，本發(fā)明涉及化合物制備領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種新化合物(式I)及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
：：線粒體氧化損傷與神經(jīng)退行性疾病包括干性老年性黃斑病(Dry-AMD)，青光眼(Glaucoma)，創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)，肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)，阿爾茲海默癥(AD)，帕金森氏病(PD)，亨廷頓氏病(HD)等在內(nèi)的許多神經(jīng)退行性疾病有關(guān)。其中，亨廷頓氏舞蹈病是一種大腦某些區(qū)域的神經(jīng)元日益衰弱的遺傳性疾病。通常在中年顯現(xiàn)疾病癥狀，包括肌肉協(xié)調(diào)能力喪失以及認(rèn)知能力下降。該疾病目前無法醫(yī)治。當(dāng)前，醫(yī)生只能給予患者抗抑郁藥或減輕運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)喪失的化合物，兩者均無法延緩疾病的進(jìn)程。XJB-5-131是一種具有很好靶向性的線粒體抗氧化劑，具備良好的生物活性，且已有研究表明，XJB-5-131在創(chuàng)傷性腦損傷的神經(jīng)退行性的動(dòng)物模型和亨廷頓氏病的動(dòng)物模型中，顯示出明顯的療效，具備良好的臨床應(yīng)用前景(例如可參見：NatureNeuroscience2012,15(10),1407；AccountsofChemicalResearch2008,41(1),87；J.Am.Chem.Soc.2005,127,12460，通過參照將其全文并入本文)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出一種理化性質(zhì)穩(wěn)定，且與XJB-5-131相比具備更好的潛在生物活性及線粒體抗氧化性的化合物。需要說明的是，本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列工作而完成的：通過將XJB-5-131進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化，獲得眾多的類似物，然后對各類似物進(jìn)行一系列生物學(xué)研究及動(dòng)物模型測試，以期篩選出生物活性好、靶向抗氧化性突出、理化性質(zhì)穩(wěn)定的新的線粒體抗氧化劑。結(jié)果，發(fā)明人篩選得到化合物(即式I所示化合物)，其理化性質(zhì)穩(wěn)定，與XJB-5-131相比水溶性更高，晶型更加穩(wěn)定，且生物活性好，藥用劑量小，體內(nèi)生物利用度高，副作用小，靶向抗氧化性突出。進(jìn)而進(jìn)行動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，化合物I能夠有效修復(fù)SD大鼠的眼部黃斑的損傷，阻止大鼠視網(wǎng)膜層細(xì)胞的凋亡，保護(hù)視網(wǎng)膜細(xì)胞，從而減輕大鼠的眼部癥狀。因而，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種化合物。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該化合物為式I所示的化合物或式I所示化合物的立體異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、氮氧化物、水合物、溶劑化物、代謝產(chǎn)物、藥學(xué)上可接受的鹽，其中，Cbz表示芐氧羰基，Bn表示芐基，Boc表示叔丁氧羰基。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的化合物理化性質(zhì)穩(wěn)定，且與XJB-5-131相比水溶性高，易于結(jié)晶，物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，且生物活性好，藥用劑量小，體內(nèi)生物利用度高，副作用小，靶向抗氧化性突出，能夠有效用于修復(fù)線粒體氧化損傷，預(yù)防或治療包括干性老年性黃斑病(Dry-AMD)，青光眼(Glaucoma)，創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)，肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)，阿爾茲海默癥(AD)，帕金森氏病(PD)，亨廷頓氏病(HD)等神經(jīng)退行性疾病。需要說明的是，除非其他方面表明，本發(fā)明的化合物的所有互變異構(gòu)形式都包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。另外，除非其他方面表明，本發(fā)明所描述的化合物的結(jié)構(gòu)式包括一個(gè)或多個(gè)不同的原子的富集同位素。本文中所使用的術(shù)語“水合物”是指本發(fā)明所提供的化合物或其鹽，其還包括化學(xué)量或非化學(xué)當(dāng)量通過非共價(jià)分子間力結(jié)合的水，也可說是溶劑分子是水所形成的締合物。術(shù)語“溶劑化物”是指一個(gè)或多個(gè)溶劑分子與本發(fā)明的化合物所形成的締合物。形成溶劑化物的溶劑包括，但并不限于，水，異丙醇，乙醇，甲醇，二甲亞砜，乙酸乙酯，乙酸，氨基乙醇。術(shù)語“氮氧化物”是指當(dāng)化合物含幾個(gè)胺官能團(tuán)時(shí)，可將1個(gè)或大于1個(gè)的氮原子氧化形成N-氧化物。N-氧化物的特殊實(shí)例是叔胺的N-氧化物或含氮雜環(huán)氮原子的N-氧化物?？捎醚趸瘎├邕^氧化氫或過酸(例如過氧羧酸)處理相應(yīng)的胺形成N-氧化物(參見AdvancedOrganicChemistry,WileyInterscience,第4版,JerryMarch)。尤其是，N-氧化物可用L.W.Deady的方法制備(Syn.Comm.1977,7,509-514)，其中例如在惰性溶劑，例如二氯甲烷中，使胺化合物與間氯過氧苯甲酸(mCPBA)反應(yīng)。術(shù)語“代謝產(chǎn)物”是指具體的化合物或其鹽在體內(nèi)通過代謝作用所得到的產(chǎn)物。一個(gè)化合物的代謝產(chǎn)物可以通過所屬領(lǐng)域公知的技術(shù)來進(jìn)行鑒定，其活性可以通過如本發(fā)明所描述的那樣采用試驗(yàn)的方法進(jìn)行表征。這樣的產(chǎn)物可以是通過給藥化合物經(jīng)過氧化，還原，水解，酰氨化，脫酰氨作用，酯化，脫脂作用，酶裂解等等方法得到。相應(yīng)地，本發(fā)明包括化合物的代謝產(chǎn)物，包括將本發(fā)明的化合物與哺乳動(dòng)物充分接觸一段時(shí)間所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。本發(fā)明化合物的各種藥學(xué)上可接受的鹽形式都是有用的。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指那些鹽形式對于制藥化學(xué)家而言是顯而易見的，即它們基本上無毒并能提供所需的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、適口性、吸收、分布、代謝或排泄。其他因素，在性質(zhì)上更加實(shí)用，對于選擇也很重要，這些是：原材料的成本、結(jié)晶的容易、產(chǎn)率、穩(wěn)定性、吸濕性和結(jié)果原料藥的流動(dòng)性。簡單地講，藥物組合物可以通過有效成分與藥學(xué)上可接受的載體制備得到。本發(fā)明所使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指本發(fā)明的化合物的有機(jī)鹽和無機(jī)鹽。藥學(xué)上可接受的鹽在所屬領(lǐng)域是為我們所熟知的，如文獻(xiàn)：S.M.Bergeetal.,describepharmaceuticallyacceptablesaltsindetailinJ.PharmaceuticalSciences,66:1-19,1977.所記載的。藥學(xué)上可接受的無毒的酸形成的鹽包括，但并不限于，與氨基基團(tuán)反應(yīng)形成的無機(jī)酸鹽有鹽酸鹽，氫溴酸鹽，磷酸鹽，硫酸鹽，高氯酸鹽，和有機(jī)酸鹽如乙酸鹽，草酸鹽，馬來酸鹽，酒石酸鹽，檸檬酸鹽，琥珀酸鹽，丙二酸鹽，或通過書籍文獻(xiàn)上所記載的其他方法如離子交換法來得到這些鹽。其他藥學(xué)上可接受的鹽包括己二酸鹽，蘋果酸鹽，2-羥基丙酸鹽，藻酸鹽，抗壞血酸鹽，天冬氨酸鹽，苯磺酸鹽，苯甲酸鹽，重硫酸鹽，硼酸鹽，丁酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，環(huán)戊基丙酸鹽，二葡萄糖酸鹽，十二烷基硫酸鹽，乙磺酸鹽，甲酸鹽，反丁烯二酸鹽，葡庚糖酸鹽，甘油磷酸鹽，葡萄糖酸鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基-乙磺酸鹽，乳糖醛酸鹽，乳酸鹽，月桂酸鹽，月桂基硫酸鹽，蘋果酸鹽，丙二酸鹽，甲磺酸鹽，2-萘磺酸鹽，煙酸鹽，硝酸鹽，油酸鹽，棕櫚酸鹽，撲酸鹽，果膠酸鹽，過硫酸鹽，3-苯基丙酸鹽，苦味酸鹽，特戊酸鹽，丙酸鹽，硬脂酸鹽，硫氰酸鹽，對甲苯磺酸鹽，十一酸鹽，戊酸鹽，等等。通過適當(dāng)?shù)膲A得到的鹽包括堿金屬，堿土金屬，銨和N+(C1-4烷基)4的鹽。本發(fā)明也擬構(gòu)思了任何所包含N的基團(tuán)的化合物所形成的季銨鹽。水溶性或油溶性或分散產(chǎn)物可以通過季銨化作用得到。堿金屬或堿土金屬鹽包括鈉鹽，鋰鹽，鉀鹽，鈣鹽，鎂鹽，等等。藥學(xué)上可接受的鹽進(jìn)一步包括適當(dāng)?shù)?、無毒的銨，季銨鹽和抗平衡離子形成的胺陽離子，如鹵化物，氫氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C1-8磺酸化物和芳香磺酸化物。胺鹽，例如但不限于N,N’-二芐基乙二胺鹽，氯普魯卡因鹽，膽堿鹽，氨鹽，異丙胺鹽，芐星青霉素(benzathine)鹽，膽堿(cholinate)鹽，賴氨酸鹽，葡甲胺(meglumine)鹽，哌嗪鹽，氨丁三醇鹽，二乙醇胺鹽和其它羥烷基胺鹽，乙二胺鹽，N-甲基還原葡糖胺鹽，普魯卡因鹽，N-芐基苯乙胺鹽，1-對-氯芐基-2-吡咯烷-1’-基甲基-苯并咪唑鹽和其它烷基胺鹽，哌嗪鹽和三(羥甲基)氨基甲烷鹽；堿土金屬鹽，例如但不限于鋇鹽，鈣鹽和鎂鹽；過渡金屬鹽，例如但不限于鋅鹽。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可以用常規(guī)化學(xué)方法由母體化合物、堿性或酸性部分來合成。一般而言，該類鹽可以通過使這些化合物的游離酸形式與化學(xué)計(jì)量量的適宜堿(如Na、Ca、Mg或K的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等)反應(yīng)，或者通過使這些化合物的游離堿形式與化學(xué)計(jì)量量的適宜酸反應(yīng)來進(jìn)行制備。該類反應(yīng)通常在水或有機(jī)溶劑或二者的混合物中進(jìn)行。一般地，在適當(dāng)?shù)那闆r中，需要使用非水性介質(zhì)如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。在例如“Remington′sPharmaceuticalSciences”，第20版，MackPublishingCompany，Easton，Pa.，(1985)；和“藥用鹽手冊：性質(zhì)、選擇和應(yīng)用(HandbookofPharmaceuticalSalts：Properties，Selection，andUse)”，StahlandWermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)中可找到另外一些適宜鹽的列表。另外，本發(fā)明公開的化合物、包括它們的鹽，也可以以它們的水合物形式或包含其溶劑(例如乙醇、DMSO，等等)的形式得到，用于它們的結(jié)晶。本發(fā)明公開化合物可以與藥學(xué)上可接受的溶劑(包括水)固有地或通過設(shè)計(jì)形成溶劑化物；因此，本發(fā)明旨在包括溶劑化的和未溶劑化的形式。如本發(fā)明所使用的術(shù)語“治療”任何疾病或病癥，在其中一些實(shí)施例中指改善疾病或病癥(即減緩或阻止或減輕疾病或其至少一種臨床癥狀的發(fā)展)。在另一些實(shí)施例中，“治療”指緩和或改善至少一種身體參數(shù)，包括可能不為患者所察覺的身體參數(shù)。在另一些實(shí)施例中，“治療”指從身體上(例如穩(wěn)定可察覺的癥狀)或生理學(xué)上(例如穩(wěn)定身體的參數(shù))或上述兩方面調(diào)節(jié)疾病或病癥。在另一些實(shí)施例中，“治療”指預(yù)防或延遲疾病或病癥的發(fā)作、發(fā)生或惡化。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還提供了一種前面所述化合物的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括以下步驟：將3-炔-1-丁醇與咪唑和叔丁基二苯基氯硅烷接觸，以便獲得(3-炔-1-丁基氧基)叔丁基二苯基硅醚；將3-甲基丁醛與(R)-叔丁基亞磺酰胺、硫酸鎂和PPTS接觸，以便獲得(R)-((E)-異戊亞胺)-叔丁基亞磺酰胺；將(3-炔-1-丁基氧基)叔丁基二苯基硅醚與(R)-((E)-異戊亞胺)-叔丁基亞磺酰胺接觸，以便獲得8-叔丁基二苯硅氧基-2-甲基-5-辛烯-(S)-4-氮-(R)-叔丁基亞磺酰胺；將8-叔丁基二苯硅氧基-2-甲基-5-辛烯-(S)-4-氮-(R)-叔丁基亞磺酰胺與碳酸氫鈉固體接觸，以便獲得(S,E)-叔丁基-(8-羥基-2-甲基-5-辛烯)氨基甲酸酯；將(S,E)-叔丁基-(8-羥基-2-甲基-5-辛烯)氨基甲酸酯與瓊斯試劑接觸，以便獲得(S,E)-5-((叔丁基羰基)氨基)-7-甲基-3辛烯酸；將(S,E)-5-((叔丁基羰基)氨基)-7-甲基-3辛烯酸與(S)-4-芐基-3-惡唑烷酮接觸，以便獲得叔丁基((S，E)-8-((S)-4-芐基-2-唑烷酮)-2-甲基-8-羰基-5-烯基)-氨基甲酸酯；將叔丁基((S，E)-8-((S)-4-芐基-2-唑烷酮)-2-甲基-8-羰基-5-烯基)-氨基甲酸酯與四氫呋喃和芐溴接觸，以便獲得叔丁基((4S,7S，E)-7-芐基—8-((S)-4-芐基-唑烷酮)-2-甲基-8-羰基-5-烯基)-氨基甲酸酯；將叔丁基((4S,7S，E)-7-芐基—8-((S)-4-芐基-唑烷酮)-2-甲基-8-羰基-5-烯基)-氨基甲酸酯與雙氧水、一水合氫氧化鋰和硫代硫酸鈉接觸，以便獲得(2S，5S，E)-2-芐基-5-((叔丁氧羰基)氨基)-7-甲基-3-辛烯酸；將(2S，5S，E)-2-芐基-5-((叔丁氧羰基)氨基)-7-甲基-3-辛烯酸與(S)-5-((芐氧羰基)氨基)-2-((R)-3-甲基-2((S)-吡咯烷-2-甲酰胺基)-丁酰胺基)戊酸甲酯接觸，以便獲得(S)-2-((R)-2-((S)-1-(2S，5S，E)-2-芐基-5-((叔丁氧羰基)氨基)-7-甲基-3-辛烯)吡咯烷基-2-甲酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-((芐氧羰基)氨基)戊酸甲酯；以及將(S)-2-((R)-2-((S)-1-(2S，5S，E)-2-芐基-5-((叔丁氧羰基)氨基)-7-甲基-3-辛烯)吡咯烷基-2-甲酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-((芐氧羰基)氨基)戊酸甲酯與氫氧化鈉接觸，得到粗產(chǎn)物，然后將粗產(chǎn)物與4-氨基2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物、1-羥基苯并三唑、碳化二亞胺和4-二甲氨基吡啶接觸，以便獲得前面所述的化合物。由此，利用該方法能夠高效地制備式I所示化合物，且步驟少，成本低，獲得的化合物穩(wěn)定性好，生物活性和線粒體靶向抗氧化性突出。其中，當(dāng)可用于治療時(shí)，治療有效量的式I所示化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可作為未加工的化學(xué)藥品給予，還可作為藥物組合物的活性成分提供。因而，根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明還提供了一種藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該藥物組合物包含前面所述的化合物。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的藥物組合物能夠有效修復(fù)線粒體氧化損傷，從而能夠有效用于預(yù)防或治療干性老年黃斑病變(Dry-AMD)，青光眼(Glaucoma)，創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)，肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)，阿爾茲海默癥(AD)，帕金森氏病(PD)，亨廷頓氏病(HD)等神經(jīng)退行性疾病。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該藥物組合物進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、輔劑、媒介物或它們的任意組合。合適的載體、輔劑和賦形劑對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是熟知的并且詳細(xì)描述于例如AnselH.C.etal.,Ansel’sPharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems(2004)Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia；GennaroA.R.etal.,Remington：TheScienceandPracticeofPharmacy(2000)Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia；和RoweR.C.,HandbookofPharmaceuticalExcipients(2005)PharmaceuticalPress,Chicago中。本文所使用的術(shù)語“治療有效量”是指足以顯示出有意義的患者益處的各活性組分的總量。當(dāng)使用單獨(dú)的活性成分單獨(dú)給藥時(shí)，該術(shù)語僅指該成分。當(dāng)組合應(yīng)用時(shí)，該術(shù)語則是指不論組合、依次或同時(shí)給藥時(shí)，都引起治療效果的活性成分的組合量。式I所示化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽如上所述。從與制劑其他成分相容以及對其接受者無害的意義上來講，載體、稀釋劑或賦形劑必須是可接受的。根據(jù)本公開內(nèi)容的另一方面，還提供用于制備藥物制劑的方法，該方法包括將式I所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混勻。本發(fā)明所使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指這樣的化合物、原料、組合物和/或劑型，它們在合理醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)，適用于與患者組織接觸而無過度毒性、刺激性、變態(tài)反應(yīng)或與合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比相對稱的其他問題和并發(fā)癥，并有效用于既定用途。通常，本發(fā)明的化合物通過用于發(fā)揮類似效用的物質(zhì)的任何常規(guī)施用方式以治療有效量被施用。適宜的劑量范圍取決于多種因素，例如所治療疾病的嚴(yán)重性、施用對象的年齡和相對健康狀況、所用化合物的效力、施用的途徑和形式、施用所針對的適應(yīng)癥以及相關(guān)醫(yī)學(xué)執(zhí)業(yè)者的偏好和經(jīng)驗(yàn)。治療所述疾病領(lǐng)域的普通技術(shù)人員無需過多實(shí)驗(yàn)依靠個(gè)人知識(shí)和本申請的公開內(nèi)容即能確定用于給定疾病的本發(fā)明化合物的治療有效量。通常，本發(fā)明的化合物以藥物制劑形式施用，所述的藥物制劑包括那些適于口服(包括口腔和舌下)、直腸、鼻、局部、肺、陰道或胃腸外(包括肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi))施用的藥物制劑或適于吸入或吹入施用形式的藥物制劑。優(yōu)選的施用方式通常為口服，使用合適的日劑量方案，可根據(jù)疾痛程度對其進(jìn)行調(diào)整?？蓪⒈景l(fā)明的一種或多種化合物與一種或多種常規(guī)輔劑、載體或稀釋劑一起置于藥物組合物和單位劑量形式中。藥物組合物和單位劑量形式可包含常規(guī)比例的常規(guī)成分，含或不含另外的活性化合物或成分，單位劑量形式可以含有與所應(yīng)用的計(jì)劃日劑量范圍相稱的任何適宜的有效量的活性成分。藥物組合物的應(yīng)用形式可以是固體例如片劑或填充膠囊劑、半固體、粉末、緩釋制劑或液體例如溶液劑、混懸劑、乳劑、酏劑或口服使用的填充膠囊劑；或是用于直腸或陰道施用的栓劑形式；或是用于胃腸外使用的無菌注射用溶液形式。本發(fā)明的化合物可以配制成各種口服施用的劑量形式。藥物組合物和劑量形式可以包含本發(fā)明的一種或多種化合物或其可藥用鹽作為活性成分?？伤幱玫妮d體可以是固體或液體。固體形式的制劑包括：散劑、片劑、丸劑、膠囊劑、扁囊劑、栓劑和可分散的顆粒劑。固體載體可以是一種或多種物質(zhì)，其也可以用作稀釋劑、矯味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、防腐劑、片劑崩解劑或包囊材料。在散劑中，載體通常為研細(xì)的固體，其與研細(xì)的活性成分形成混合物。在片劑中，活性成分通常與具有必需粘合能力的載體以適宜的比例相混合并壓制成所需的形狀和大小。適宜的載體包括但不限于碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點(diǎn)蠟、可可脂等。術(shù)語“制劑”旨在包括含有包囊材料作為載體以提供膠囊的活性化合物的制劑，在所述膠囊中帶有或不帶有載體的活性成分被與之結(jié)合的該載體所包圍。類似地，還包括扁囊劑和錠劑。片劑、散劑、膠囊劑、丸劑、扁囊劑和錠劑均是適于口服施用的固體形式。其它適于口服施用的形式包括液體形式的制劑(包括乳劑、糖漿、酏劑、水性溶液劑、水性混懸劑)或旨在使用前即刻轉(zhuǎn)變?yōu)橐后w形式制劑的固體形式的制劑。乳劑可以在溶液例如丙二醇水溶液中制備或可以含有乳化劑例如卵磷脂、脫水山梨醇單油酸酯或阿拉伯膠。水性溶液劑可通過將活性成分溶解在水中并加入適宜的著色劑、矯味劑、穩(wěn)定劑和增稠劑來制備。水性混懸劑可通過用粘性物質(zhì)例如天然或合成的膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和其它公知的懸浮劑將研細(xì)的活性成分分散在水中來制備。液體形式的制劑包括溶液劑、混懸劑和乳劑，除了活性成分外其還可以含有著色劑、矯味劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、人造的和天然的甜味劑、分散劑、增稠劑、增溶劑等。本發(fā)明的化合物可被配制用于胃腸外施用(例如，通過注射如快速濃注或連續(xù)輸注施用)并且可以以單位劑量形式存在于安瓿、預(yù)先灌裝的注射器、小容量輸液中或存在于添加了防腐劑的多劑量容器中。組合物可采用的形式有例如在油性或水性賦形劑中的混懸劑、溶液劑或乳劑，例如在聚乙二醇水溶液中的溶液劑。油性或非水性載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑的例子包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄欖油)和注射用有機(jī)酯(例如油酸乙酯)，并且可含有制劑物質(zhì)如防腐劑、濕潤劑、乳化劑或懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘?，活性成分可以為粉末形式，其獲得方法是將無菌固體進(jìn)行無菌分裝或通過將溶液凍干以便在使用前用適宜的賦形劑例如無菌、無熱原的水進(jìn)行構(gòu)建。本發(fā)明的化合物可被配制用于以軟膏劑、乳膏劑或洗劑形式或以透皮貼劑形式局部施用于表皮。軟膏劑和乳膏劑可以例如用添加了適宜的增稠劑和/或膠凝劑的水性或油性基質(zhì)進(jìn)行配制。洗劑可以用水性或油性基質(zhì)配制并且通常還含有一種或多種乳化劑、穩(wěn)定劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑或著色劑。適用于在口中局部施用的制劑包括：在經(jīng)矯味的基質(zhì)中包含活性劑的錠劑，所述經(jīng)矯味的基質(zhì)通常是蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠；在惰性基質(zhì)中含有活性成分的軟錠劑，所述惰性基質(zhì)例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠；以及在合適的液體載體中包含活性成分的漱口劑。本發(fā)明的化合物可被配制用于以栓劑形式施用?？墒紫葘⒌腿埸c(diǎn)蠟如脂肪酸甘油酯混合物或可可脂熔化，并將活性成分例如通過攪拌均勻分散。然后將熔融的均勻混合物倒入合適大小的模具中，使其冷卻并固化。本發(fā)明的化合物可被配制用于陰道施用。除活性成分外還含有本領(lǐng)域公知載體的陰道栓、衛(wèi)生栓、乳青劑、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧劑是適宜的。本發(fā)明的化合物可被配制用于經(jīng)鼻施用。可將溶液劑或混懸劑通過常規(guī)方法、例如用滴管、吸管或噴霧器直接應(yīng)用于鼻腔。制劑可以是單劑量或多劑量形式。對于滴管或吸管的多劑量形式，這可以通過由患者施用適宜的、預(yù)定體積的溶液劑或混懸劑來實(shí)現(xiàn)。對于噴霧器，這可以例如通過計(jì)量霧化噴霧泵來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的化合物可被配制用于氣霧劑施用，特別是施用于呼吸道并且包括鼻內(nèi)施用?；衔锿ǔ＞哂行〉牧６?，例如5微米或更小數(shù)量級(jí)的粒度。所述的粒度可通過本領(lǐng)域公知的方法、例如通過微粉化獲得?；钚猿煞忠院羞m宜拋射劑如含氯氟烴(CFC)例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷或者二氧化碳或其它適宜氣體的加壓包裝提供。氣霧劑還可合適地含有表面活性劑如卵磷脂。藥物劑量可通過計(jì)量閥控制?；蛘?，活性成分可以以干燥粉末形式、例如在適宜粉末基質(zhì)如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羥丙基甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮中的化合物的粉末混合物形式提供。粉末載體將在鼻腔中形成凝膠。粉末組合物可以以單位劑量形式例如以明膠膠囊劑或藥筒或泡罩包裝形式存在可通過吸入器由其中施用粉末。需要時(shí)，制劑可以用適于緩釋或控釋施用活性成分的腸溶包衣進(jìn)行制備。例如，本發(fā)明的化合物可被配制成透皮或皮下藥物遞送裝置。當(dāng)必須緩釋化合物時(shí)和當(dāng)患者對治療方案的依從性至關(guān)重要時(shí)，這些遞送系統(tǒng)是有利的。透皮遞送系統(tǒng)中的化合物經(jīng)常附著在皮膚粘著性固體載體上。所關(guān)注的化合物也可以與滲透促進(jìn)劑、例如月桂氮革酮(1-十二烷基氮雜環(huán)庚-2-酮)組合使用。可通過手術(shù)或注射將緩釋遞送系統(tǒng)皮下插入到皮下層。皮下植入物將化合物包囊在液體可溶性膜、例如硅橡膠或生物可降解的聚合物例如聚乳酸中。藥物制劑優(yōu)選為單位劑量形式。在該形式中，制劑被細(xì)分為含有適宜量活性成分的單位劑量。單位劑量形式可以是成套包裝的制劑，包裝中含有離散量的制劑，例如成套包裝的片劑、膠囊劑和在小瓶中的粉末或安瓶劑。另外，單位劑量形式可以是膠囊劑、片劑、扁囊劑或錠劑本身，或者其可以是成套包裝形式中適宜數(shù)量的這些形式中的任何一種。其它適宜的藥用載體和它們的制劑在Remington：TheScienceandPracticeofPharmacy1995Martin，E.W編輯，MackPublishingCompany，第19版，Easton，Pennsylvania中有描述。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還提供了前面所述的化合物或者藥物組合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于預(yù)防或治療神經(jīng)退行性疾病。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述神經(jīng)退行性疾病為干性老年性黃斑，青光眼，創(chuàng)傷性腦損傷，肌萎縮性側(cè)索硬化癥，阿爾茲海默癥，帕金森氏病，亨廷頓氏病。需要說明的是，本發(fā)明的化合物及藥物組合物除了對人類治療有益以外，還可應(yīng)用于獸醫(yī)治療寵物、引進(jìn)品種的動(dòng)物和農(nóng)場的動(dòng)物中的哺乳動(dòng)物。另外一些動(dòng)物的實(shí)例包括馬、狗和貓。在此，本發(fā)明的化合物包括其藥學(xué)上可接受的衍生物。本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。附圖說明本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中：圖1-圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例，pH穩(wěn)定性考察的結(jié)果；圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例，化合物I對Erastin誘導(dǎo)HT1080細(xì)胞鐵死亡的抑制作用檢測結(jié)果；圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例，化合物I對雙氧水的損傷ARPE-19細(xì)胞的恢復(fù)作用檢測結(jié)果；圖5顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例，化合物I的視覺電生理檢測檢測結(jié)果。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的方案進(jìn)行解釋。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下面的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。實(shí)施例1制備化合物I一、中間體13合成：首先，按照下列合成路線，合成中間體13：步驟一：化合物5合成將化合物4(10g，37.6mmol)溶解于甲醇(150mL)，冷卻至0℃，往其中滴加二氯亞砜(22g，0.19mmol)。在攪拌下，反應(yīng)液逐步升至室溫，持續(xù)攪拌12h。將反應(yīng)液減壓濃縮，得化合物5(11.7g)，收率98％。步驟二：化合物2合成將化合物1(6.45g，30mmol)和D-Valine甲酯鹽酸鹽(5.53g，33mmol)溶解于二氯甲烷(200mL)，冷卻至0℃。往上述溶液中加入1-羥基苯并三唑(4.46g，33mmol)，碳化二亞胺(6.3g，33mmol)以及DIEA(8.51g，66mmol)。反應(yīng)液逐步升至室溫，攪拌12h，以鹽酸水溶液(100mL，1M)淬滅，二氯甲烷萃取(200mL×3)。合并有機(jī)相，以飽和氯化鈉水溶液洗滌(100mL)。分液，收集有機(jī)相，干燥、濃縮。剩余物經(jīng)硅膠柱層析分離得到化合物2(9.1g),收率93％。步驟三：化合物3合成將化合物2(2.0g，6.1mmol)溶解于四氫呋喃/甲醇/水(8mL/4mL/2mL)，冷卻至0℃，往其中滴加氫氧化鋰溶液(10mL，1M水溶液)。反應(yīng)液在0℃攪拌2h。減壓除去大部分四氫呋喃，剩余物以鹽酸水溶液(20mL，1M)進(jìn)行酸化，然后以乙酸乙酯萃取(50mL×2)。合并有機(jī)相，以飽和氯化鈉水溶液洗滌(30mL)。分液，收集有機(jī)相，干燥、濃縮，得白色固體化合物3(1.8g)，收率95％。步驟三：化合物6合成將化合物3(5g，15.9mmol)和化合物5(6g，19mmol)溶解于二氯甲烷(100mL)，冷卻至0℃。往上述溶液中加入1-羥基苯并三唑(2.36g，17.5mmol)，碳化二亞胺(3.34g，17.5mmol)以及三乙胺(3.21g，31.8mmol)。反應(yīng)液在0-15℃攪拌6h，然后以鹽酸水溶液(20mL,1M)淬滅，二氯甲烷萃取(100mL×2)。合并有機(jī)相，以飽和氯化鈉水溶液洗滌(50mL)。分液，收集有機(jī)相，干燥、濃縮。剩余物經(jīng)硅膠柱層析分離得到化合物6(8.5g),收率93％。步驟四：化合物13合成將化合物6(1.2g，2.08mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，冷卻至0℃，往其中滴加TFA(4mL)。反應(yīng)液逐步升至室溫，持續(xù)攪拌2h。減壓濃縮除去溶劑及大量的三氟乙酸，然后加入乙酸乙酯和飽和碳酸鈉水溶液至Ph＝8-9。以乙酸乙酯萃取(50mL×2)。合并有機(jī)相，以飽和氯化鈉水溶液洗滌(50mL)。分液，收集有機(jī)相，干燥、濃縮，得白色泡沫狀固體化合物13(1.27g),收率98％。二、合成化合物I根據(jù)本發(fā)明的方法，結(jié)合下列合成路線，制備化合物I，具體如下：1、化合物8合成：將化合物7(40g，0.57mol)和咪唑(43g，0.63mol)溶解于二氯甲烷中(1L)，攪拌10分鐘。將叔丁基二苯基氯硅烷(150g，0.55mol)溶解于二氯甲烷(500L)，然后滴加至上述溶液。在常溫下反應(yīng)攪拌20h。濃縮反應(yīng)混合物，經(jīng)硅膠柱層析分離得到化合物8(162g)，收率96％。2、化合物11合成：將化合物9(32.1mL，0.29mol)溶解于二氯甲烷(1.5L)。往其中陸續(xù)加入化合物10(30g,0.25mol)，硫酸鎂(146g，1.21mol)和PPTS(6.2g，0.025mol)。以上混合物在室溫下攪拌反應(yīng)20h，后經(jīng)硅藻土過濾、濃縮。剩余物經(jīng)硅膠柱層析分離得到化合物11(42g)，收率91％。3、化合物12合成：將化合物8(9.8g，27.9mmol)溶解于干燥二氯甲烷(162mL)，往其中加入Cp2Zr鹽酸鹽(7.7g，29.8mmol)，常溫?cái)嚢?0min。將上述黃色反應(yīng)液冷卻至0℃，往其中緩慢加入AlMe3(14.9mL，2.0M甲苯溶液，29.8mmol)。然后繼續(xù)攪拌10min。將化合物11溶解于干燥二氯甲烷(27mL)，加入上述溶液中，攪拌反應(yīng)12h。冰浴下，往上述反應(yīng)液中緩慢加入冰水(10mL)，再加入鹽酸水溶液(20mL,1M)。攪拌、分液。水相以二氯甲烷(100mL)萃取，合并有機(jī)相，以飽和氯化鈉溶液(150mL)洗滌。收集有機(jī)相，干燥、濃縮。剩余物經(jīng)硅膠柱層析分離得到化合物12(8.6g),收率92％。4、化合物14合成：將化合物12(20g，40mmol)溶解于1,4-二氧六環(huán)(120mL)，冷卻至0℃，攪拌下滴加濃鹽酸(40mL)。反應(yīng)液在室溫下攪拌16h，以乙酸乙酯萃取(200mL×3)。將水相保留，往其中加入1,4-二氧六環(huán)(200mL)，攪拌5min，將反應(yīng)液冷卻至0℃，緩慢加入碳酸氫鈉固體(81g，0.96mol)，接著滴加(Boc)2O(10.5g，48mmol)。以上反應(yīng)液在常溫下攪拌8h，然后以乙酸乙酯萃取(200mL×3)，有機(jī)相合并后以飽和氯化鈉洗滌(200mL)，干燥、濃縮。剩余物經(jīng)硅膠柱層析分離得到化合物14(9g),收率87％。5、化合物15合成：將化合物14(3g，11.8mmol)溶解于丙酮(150mL)，冷卻至0℃，攪拌。向上述溶液中加入瓊斯試劑(11.8mL，2.5M)，反應(yīng)液在冰浴條件下攪拌2h。往上述反應(yīng)液中加入異丙醇(5mL)，攪拌5min，過濾。往所得濾液中加入水(50mL)和乙酸乙酯(300mL)。攪拌、分液。有機(jī)相以飽和氯化鈉(100mL)洗滌。分液，收集有機(jī)相，干燥、濃縮。剩余物經(jīng)硅膠柱層析分離得到化合物15(3g)，收率94％。6、化合物17合成：將化合物15(2.6g，9.6mmol)溶解于干燥四氫呋喃(50mL)，冷卻至-78℃。往以上溶液中加入三乙胺(1.46mL，10.4mmol)和PivCl(1.25mL，10mmol)。反應(yīng)液在-78℃攪拌20min，升至室溫，攪拌30min。然后將反應(yīng)液再冷卻至-78℃。在另一反應(yīng)瓶中，將化合物16(1.99g，11mmol)溶解于干燥四氫呋喃(50mL)，冷卻至-78℃，滴加入正丁基鋰(4.2mL，2.5M四氫呋喃溶液)，攪拌20min。將化合物16的鋰鹽溶液滴加至上述含化合物15的反應(yīng)液，逐步升至室溫，繼續(xù)攪拌18h。往上述反應(yīng)液中加入飽和氯化銨(25mL)，水(30mL)及乙酸乙酯(100mL)。攪拌、分液。收集有機(jī)相，水相再以乙酸乙酯(50mL)萃取。將有機(jī)相合并，以飽和氯化鈉(50mL)洗滌。分液，收集有機(jī)相，干燥、濃縮。剩余物經(jīng)硅膠柱層析分離得到化合物17(2.6g)，收率63％。7、化合物18合成：將化合物17(3.3g，7.67mmol)溶解于干燥四氫呋喃(67mL)，冷卻至-78℃。取NaHMDS(4.22mL，2M四氫呋喃溶液)，以干燥四氫呋喃(5mL)進(jìn)行稀釋，然后滴加入上述溶液中。反應(yīng)液在-78℃攪拌30min后，往其中加入芐溴(13.1g，76.7mmol)。以上反應(yīng)液保持在-45℃，攪拌12h，以飽和氯化銨(50mL)淬滅反應(yīng)，然后以乙酸乙酯進(jìn)行萃取(100mL×3)，收集有機(jī)相，并以飽和氯化鈉(100mL)洗滌。分液，收集有機(jī)相，干燥、濃縮。剩余物經(jīng)硅膠柱層析分離得到化合物18(3.3g)，收率83％。8、化合物19合成：將化合物18(1.5g，2.9mmol)溶解于四氫呋喃/水(25mL，體積比4:1)，冷卻至0℃，往其中加入雙氧水(1.2mL，30％)，接著加入一水合氫氧化鋰(480mg，11.5mmol)，攪拌1h。往以上反應(yīng)液加入硫代硫酸鈉飽和溶液(10mL)，再以飽和磷酸二氫鈉調(diào)節(jié)pH＝5。以乙酸乙酯(50mL)萃取，收集有機(jī)相，干燥、濃縮。剩余物經(jīng)硅膠柱層析分離得到化合物19(1g)，收率94％。9、化合物20合成：將化合物19(0.2g，0.55mmol)和化合物13(314.0mg，0.66mmol)溶解于干燥二氯甲烷(5mL)，冷卻至0℃。往上述溶液中加入HATU(274.0mg，0.72mmol)和DIEA(142.0mg，1.1mmol)。反應(yīng)液逐步升至室溫，攪拌3h，濃縮除去溶劑，加入乙酸乙酯(30mL)和稀鹽酸(20mL，1M)，攪拌后萃取。分液，收集有機(jī)相，干燥、濃縮得到化合物20(465mg)無需純化直接由于下一步反應(yīng)。10、化合物I合成：將化合物20(465mg，0.55mmol)溶解于四氫呋喃/甲醇/水(2mL/0.5mL/0.5mL)，冷卻至0℃，往其中滴加氫氧化鋰溶液(1.1mL，1M水溶液)。在攪拌下，反應(yīng)液逐步升至室溫，持續(xù)攪拌2h。濃縮除去溶劑，以鹽酸水溶液(1M)調(diào)pH＝2-3，然后以乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有機(jī)相，以飽和氯化鈉水溶液洗滌(50mL)。分液，收集有機(jī)相，干燥、濃縮，得粗品酸(380mg)，直接用于下一步縮合反應(yīng)。將粗產(chǎn)物酸(380mg，0.55mmol)和4-氨基2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(97mg，0.57mmol)溶解于干燥二氯甲烷(5mL)，冷卻至0℃。往上述溶液中加入HATU(232mg，0.61mmol)，DIEA(121mg，0.94mmol)。反應(yīng)液逐步升至室溫，攪拌3h，濃縮除去有機(jī)溶劑，加入稀鹽酸(20Ml,1M)，乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有機(jī)相，以飽和氯化鈉水溶液洗滌(50mL)。分液，收集有機(jī)相，干燥、濃縮。剩余物經(jīng)硅膠柱層析初步純化后進(jìn)行HPLC制備得到化合物I(83mg)三步收率18％。目標(biāo)分子結(jié)構(gòu)含有氮氧自由基，因其順磁性特性，無法利用常規(guī)核磁進(jìn)行表征。方法是以抗壞血酸將氮氧自由基還原為氮羥基，從而進(jìn)行核磁表征。同時(shí)對于兩個(gè)分子都進(jìn)行了質(zhì)譜的表征。結(jié)果如下：1HNMR(400MHz,CDCl3)ppm7.33-7.29(m,6H),7.21-7.15(m,4H),5.63-5.49(m,4H),5.27-5.09(m,4H),4.55-4.46(m,3H),4.15-4.12(m,3H),3.48-3.09(m,8H),2.78-2.75(m,2H),2.30-2.20(m,4H),1.89-1.73(m,5H),1.56-1.49(m,4H),1.42-1.33(m,10H),1.26-1.13(m,12H),0.99-0.95(m,6H),0.87(d,J＝6.4Hz,6H)化合物IMS(ESI)：959.6[M+1]+；氮羥基化合物：960.8[M+1]+也即，本實(shí)施例制備獲得的化合物包含以下結(jié)構(gòu)：其中，上述各化合物的名稱分別為：化合物1：(S)-1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidine-2-carboxylicacid，N-叔丁氧羰基-L-脯氨酸；化合物2：(S)-tert-butyl2-(((R)-1-methoxy-3-methyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)pyrrolidine-1-carboxylate，(S)-叔丁基2-(((R)-1-甲氧基-3-甲基-1-氧代-2-丁基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸；化合物3：(R)-2-((S)-1-(tert-butoxycarbonyl)pyrrolidine-2-carboxamido)-3-methylbutanoicacid，(R)-2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-甲酰氨基)-3-甲基丁酸；化合物4：(S)-2-amino-5-(((benzyloxy)carbonyl)amino)pentanoicacid，(S)-2-氨基-5-((芐氧基羰基)氨基)戊酸；化合物5：(S)-methyl2-amino-5-(((benzyloxy)carbonyl)amino)pentanoatehydrochloride，(S)-2-氨基-5-((芐氧羰基)氨基)戊酸甲酯鹽酸鹽；化合物6：(S)-tert-butyl2-(((R)-1-(((S)-5-(((benzyloxy)carbonyl)amino)-1-methoxy-1-oxopentan-2-yl)amino)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)pyrrolidine-1-carboxylate，(S)-叔丁基2-(((R)-1-(((s)-5-(((芐氧基)羰基)氨基)-1-甲氧基-1-氧代-2-戊基)氨基)-3-甲基-1-氧代-2-丁基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸；化合物7：but-3-yn-1-ol，3-炔-1-丁醇；化合物8：(but-3-yn-1-yloxy)(tert-butyl)diphenylsilane，(3-炔-1-丁基氧基)叔丁基二苯基硅醚；化合物9：3-methylbutanal，3-甲基丁醛；化合物10：(R)-2-methylpropane-2-sulfinamide，(R)-叔丁基亞磺酰胺；化合物11：(R,E)-2-methyl-N-(3-methylbutylidene)propane-2-sulfinamide，(R)-((E)-異戊亞胺)-叔丁基亞磺酰胺；化合物12：(R)-N-((S,E)-8-((tert-butyldiphenylsilyl)oxy)-2-methyloct-5-en-4-yl)-2-methylpropane-2-sulfinamide，8-叔丁基二苯硅氧基-2-甲基-5-辛烯-(S)-4-氮-(R)-叔丁基亞磺酰胺；化合物13：(S)-methyl5-(((benzyloxy)carbonyl)amino)-2-((R)-3-methyl-2-((S)-pyrrolidine-2-carboxamido)butanamido)pentanoate，(S)-5-((芐氧羰基)氨基)-2-((R)-3-甲基-2((S)-吡咯烷-2-甲酰胺基)-丁酰胺基)戊酸甲酯；化合物14：(S,E)-tert-butyl(8-hydroxy-2-methyloct-5-en-4-yl)carbamate，(S,E)-叔丁基-(8-羥基-2-甲基-5-辛烯)氨基甲酸酯；化合物15：(S,E)-5-((tert-butoxycarbonyl)amino)-7-methyloct-3-enoicacid，(S,E)-5-((叔丁基羰基)氨基)-7-甲基-3辛烯酸；化合物16：(S)-4-benzyloxazolidin-2-one，(S)-4-芐基-3-惡唑烷酮；化合物17：tert-butyl((S,E)-8-((S)-4-benzyl-2-oxooxazolidin-3-yl)-2-methyl-8-oxooct-5-en-4-yl)carbamate，叔丁基((S，E)-8-((S)-4-芐基-2-唑烷酮)-2-甲基-8-羰基-5-烯基)-氨基甲酸酯；化合物18：tert-butyl((4S,7S,E)-7-benzyl-8-((S)-4-benzyl-2-oxooxazolidin-3-yl)-2-methyl-8-oxooct-5-en-4-yl)carbamate，叔丁基((4S,7S，E)-7-芐基—8-((S)-4-芐基-唑烷酮)-2-甲基-8-羰基-5-烯基)-氨基甲酸酯；化合物19：(2S,5S,E)-2-benzyl-5-((tert-butoxycarbonyl)amino)-7-methyloct-3-enoicacid，(2S，5S，E)-2-芐基-5-((叔丁氧羰基)氨基)-7-甲基-3-辛烯酸；化合物20：(S)-methyl2-((R)-2-((S)-1-((2S,5S,E)-2-benzyl-5-((tert-butoxycarbonyl)amino)-7-methyloct-3-enoyl)pyrrolidine-2-carboxamido)-3-methylbutanamido)-5-(((benzyloxy)carbonyl)amino)pentanoate，(S)-2-((R)-2-((S)-1-(2S，5S，E)-2-芐基-5-((叔丁氧羰基)氨基)-7-甲基-3-辛烯)吡咯烷基-2-甲酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)-5-((芐氧羰基)氨基)戊酸甲酯。實(shí)施例2理化性質(zhì)測定1、pH穩(wěn)定性考察配制pH分別為pH1.2和8.0緩沖液，具體如下：pH＝1.2鹽酸溶液：取765ul濃鹽酸于容量瓶，稀釋至100ml，即得。pH＝8.0磷酸鹽緩沖溶液：0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液(溶液A)：取磷酸二氫鉀2.722g，加水溶解，并稀釋至100ml；0.2mol/L氫氧化鈉溶液(溶液B)：取氫氧化鈉800mg，加水溶解，并稀釋至100ml；取溶液A25ml，溶液B23.05ml，加水稀釋至100ml，即得。孵育設(shè)計(jì)和實(shí)施如下：化合物I儲(chǔ)備液配制：將1g實(shí)施例1制備獲得的化合物I溶于容量瓶中，加乙腈至10ml，得到濃度為100mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后，于37℃預(yù)孵3min的10ml緩沖溶液中加入10.0μL的化合物I儲(chǔ)備液，使其終濃度為100μg/mL。分別在反應(yīng)t＝0、1、4和20小時(shí)后，取樣300μL，上機(jī)測試。均采用LC-MS標(biāo)準(zhǔn)曲線法檢測含量。在以上不同時(shí)間點(diǎn)采集相關(guān)收據(jù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，化合物I色譜峰面積及保留時(shí)間均無明顯變化。結(jié)果表明，實(shí)施例1制備獲得的化合物I在不同pH的緩沖液中穩(wěn)定性良好(見圖1-2)。如圖1-2所示，化合物I在pH8.0和1.2值情況下的穩(wěn)定性，化合物4個(gè)小時(shí)內(nèi)酸性和堿性條件下，都比較穩(wěn)定的；而20小時(shí)后，酸性條件下化合物I有部分分解。2、緩沖液中溶解度測試將10mg化合物I固體(實(shí)施例1制備獲得的)加入10ml緩沖溶液中，使之過飽和，加蓋擰緊，在37℃下恒溫?cái)嚢?4h。靜置，取上清液，過濾上機(jī)測試。采用LC-MS標(biāo)準(zhǔn)曲線法檢測含量，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對照，從而計(jì)算各個(gè)pH緩沖液中的溶解度。在pH＝7.4的情況下，化合物I的溶解度為0.6mg/mL。結(jié)果表明，相對化合物XJB-5-131，本發(fā)明的化合物I在溶解度有較大提高，將有助于藥物吸收。實(shí)施例3化合物I對Erastin誘導(dǎo)HT1080細(xì)胞鐵凋亡(Ferroptosis)有抑制作用將稀釋好的細(xì)胞加至96孔板中貼壁生長后，加入10μMErastin誘導(dǎo)HT1080細(xì)胞鐵凋亡(Ferroptosis)狀態(tài)，然后加入不同濃度下的化合物I，每個(gè)濃度6孔孵育24h后，用CTG(CellTiter-Glo)的方法檢測細(xì)胞活力，得到化合物I的半數(shù)最大有效濃度為EC50＝275.2nM。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：化合物I對Erastin誘導(dǎo)HT1080細(xì)胞誘導(dǎo)鐵死亡的抑制作，表明我們的化合物I具有靶向線粒體，能夠消除細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的自由基(見圖3)。實(shí)施例4雙氧水誘導(dǎo)ARPE細(xì)胞死亡將稀釋好的細(xì)胞加至96孔板中，貼壁生長后，加入不同濃度的H2O2(300μmol/L)，正常組加入培養(yǎng)基，每個(gè)濃度6孔。貼壁生長后，加入不同濃度的藥物(1×10-10～1×10-5mol/L)，每個(gè)濃度6孔，對照組加入等體積的DMSO和培養(yǎng)液混合液(不含藥物)。加入H2O2(30％和50％左右增殖抑制率的濃度)，37℃下孵育一定時(shí)間后，再加入MTT溶液后孵育4h/37℃，倒出大部分培養(yǎng)液，再加入100mLDMSO溶解紫色結(jié)晶體，酶標(biāo)儀讀值得出OD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：化合物I對雙氧水的損傷ARPE-19細(xì)胞有恢復(fù)作用(見圖4)。如圖4所示，在300μmol/L雙氧水的誘導(dǎo)下，化合物I對ARPE-19細(xì)胞的恢復(fù)作用。實(shí)施例5干性老年性黃斑病變(Dry-AMD)檢測通過對24只SD大鼠檢疫結(jié)束后，進(jìn)行視覺電生理檢測并記錄FERG。根據(jù)FERGb波振幅將動(dòng)物隨機(jī)分三組(n＝8)，正常組，模型組，化合物I治療組(I組，以實(shí)施例1制備獲得的化合物I進(jìn)行給藥)。模型組和治療組造模，用10000Lux白色冷光源光照箱中光照8h，光照結(jié)束后，將動(dòng)物轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房正常飼養(yǎng)。建模成功后，正常組和模型組分別玻璃體給予空白生理鹽水，化合物I治療組(I組，以實(shí)施例1制備獲得的化合物I進(jìn)行給藥)分別玻璃體給予0.1mg/kg。通過FERG波振幅，連續(xù)觀察兩周時(shí)間，記錄a波和b波振幅。兩周之后，動(dòng)物處死后進(jìn)行取材，行HE染色切片觀察視網(wǎng)膜厚度變化等。結(jié)果表明：在0.05mM的濃度下，化合物I的b波振幅變化值比模型組有顯著性差異(見圖5)。如圖5所示，SD大鼠在白光光照8h情況下，化合物I在0.05mM的情況對b波有顯著性差異，說明化合物I能夠保護(hù)視網(wǎng)膜細(xì)胞的凋亡。在本說明書的描述中，參考術(shù)語“一個(gè)實(shí)施例”、“一些實(shí)施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少一個(gè)實(shí)施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不一定指的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任何的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解：在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下可以對這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由權(quán)利要求及其等同物限定。當(dāng)前第1頁1 2 3 當(dāng)前第1頁1 2 3