本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及一種用鹽溶醇沉提取絨促性素的方法。
背景技術(shù)：
絨促性素（Chorionic Gonadotrophin）系自健康孕婦尿中提取、精制而成的一種天然促性腺激素，具有類似黃體生成素的功能。對女性可促進卵泡的成熟及排卵，并維持黃體的功能。對男性，能刺激睪丸間質(zhì)細胞的發(fā)育，增加雄激素分泌，促使睪丸下降和男性第二性征發(fā)育。與尿促性素合用，可模擬生理性的促黃體生成素高峰，而觸發(fā)排卵。臨床上絨促性素至今仍是治療月經(jīng)失調(diào)、無排卵性不孕癥、先兆流產(chǎn)和習(xí)慣性流產(chǎn)、隱睪癥、男性性功能低下等的首選藥物。
國際上從20年代就開始研究，1927年Zondek和Ascbheim首先發(fā)現(xiàn)妊娠婦女尿中存在著促性腺激素，1936年Brown和Venning找到在妊娠第60-80天，尿中絨促性素分泌達到最高峰。
1928年Zondek和Ascbheim 首先用乙醇沉淀法，從孕婦尿中取得了活性物質(zhì)，其它研究者則進行應(yīng)用吸附劑從尿中直接吸附絨促性素的研究，這包括1932年Katzman和Doisy用苯甲酸吸附法，1943年Katzman等人用人造沸石層析吸附法，1954年Loraine和Brown用高嶺土吸附法，1959年難波修一等人用離子交換樹脂吸附法等，用這些方法所取得的絨促性素再用各種純化方法進行純化。目前國際上生產(chǎn)的絨促性素的純度2500-5000iu/mg，科研的水平則達到10000iu/mg。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種鹽溶醇沉從絨促性素粗品中提取絨促性素的方法，利用絨促性素是一種糖蛋白，一定濃度的鹽溶液能夠促進蛋白質(zhì)溶解的性質(zhì)，抽提過程中，調(diào)節(jié)抽提液中鹽的成分及其濃度，使絨促性素溶解于抽提液中，然后在抽提液中加入一定濃度的乙醇，使絨促性素沉淀析出。
一種鹽溶醇沉從絨促性素粗品中提取絨促性素的方法，其特征在于：將效價約10 iu/mg絨促性素粗品中加入抽提液溶解，然后乙醇沉淀、脫水、干燥，所得絨促性素效價約400 iu/mg。
在發(fā)明的技術(shù)方案中，其特征還在于所述抽提法包括如下步驟：
1.抽提
1.1抽提液的配制：
稱取乙酸鈉1.36kg、無水氯化鈣0.166kg、氯化鈉2.92kg，加入純化水溶解并稀釋至100L；然后向該溶液中滴加冰乙酸，調(diào)節(jié)pH值至5.0-5.2，再加95%乙醇，使乙醇濃度為50%，攪拌混合均勻，置溫度8-12℃條件下保存。
1.2 抽提：
將1kg效價約10 iu/mg的絨促性素粗制品慢慢加到抽提液15L-25L，在溶液溫度8-12℃條件下攪拌5小時，靜置過夜。
2.乙醇沉淀
2.1次日虹吸上清液，離心，每1kg離心渣干粉加抽提液3.3L，在溶液溫度8-12℃條件下攪拌1小時，離心取上清液。
2.2合并二次上清液，按1L：(2L-3L)比例加 -20℃以下95%乙醇，邊攪邊加，并繼續(xù)攪拌30分鐘，在溫度8-12℃條件下靜置過夜。
3.脫水、干燥
次日虹吸除去上清液，下層沉淀離心收集，沉淀物再用丙酮或無水乙醇脫水，置六罐離心機中離心，棄去上清液，沉淀物置用五氧化二磷或無水氯化鈣作干燥劑的真空干燥箱中真空干操，干燥后的即為絨促性素。
經(jīng)檢測，絨促性素效價約為400iu/mg。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是：
將效價約10 iu/mg絨促性素粗品中加入抽提液溶解，然后乙醇沉淀、脫水、干燥，所得絨促性素效價約400 iu/mg，穩(wěn)定性也大大提高。
具體實施方式
實施例1
1.抽提
1.1抽提液的配制：
稱取乙酸鈉1.36kg、無水氯化鈣0.166kg、氯化鈉2.92kg，加入純化水溶解并稀釋至100L；然后向該溶液中滴加冰乙酸，調(diào)節(jié)pH值至5.0，再加95%乙醇，使乙醇濃度為50%，攪拌混合均勻，置溫度9℃條件下保存。
1.2 抽提：
將1kg效價為11iu/mg絨促性素粗制品慢慢加到抽提液20L，在溶液溫度9℃條件下攪拌5小時，靜置過夜。
2.乙醇沉淀
2.1次日虹吸上清液，離心，每1kg離心渣干粉加抽提液3.3L，在溶液溫度9℃條件下攪拌1小時，離心取上清液。
2.2合并二次上清液，按1：2.6比例加 -20℃的95%乙醇，邊攪邊加，并繼續(xù)攪拌30分鐘，在溫度9℃條件下靜置過夜。
3.脫水、干燥
次日虹吸除去上清液，下層沉淀離心收集，沉淀物再用丙酮脫水，置六罐離心機中離心，棄去上清液，沉淀物置用五氧化二磷作干燥劑的真空干燥箱中真空干操，干燥后的即為絨促性素。
經(jīng)檢測，絨促性素效價為431 iu/mg。
實施例2
1.抽提
1.1抽提液的配制：
稱取乙酸鈉1.36kg、無水氯化鈣0.166kg、氯化鈉2.92kg，加入純化水溶解并稀釋至100L；然后向該溶液中滴加冰乙酸，調(diào)節(jié)pH值至5.2，再加95%乙醇，使乙醇濃度為50%，攪拌混合均勻，置溫度10℃條件下保存。
1.2 抽提：
將1kg效價為9iu/mg絨促性素粗制品慢慢加到抽提液22L，在溶液溫度10℃條件下攪拌5小時，靜置過夜。
2.乙醇沉淀
2.1次日虹吸上清液，離心，每1kg離心渣干粉加抽提液3.3L，在溶液溫度10℃條件下攪拌1小時，離心取上清液。
2.2合并二次上清液，按1L：2.2L比例加 -20.5℃的95%乙醇，邊攪邊加，并繼續(xù)攪拌30分鐘，在溫度10℃條件下靜置過夜。
3.脫水、干燥
次日虹吸除去上清液，下層沉淀離心收集，沉淀物再用無水乙醇脫水，置六罐離心機中離心，棄去上清液，沉淀物置用無水氯化鈣作干燥劑的真空干燥箱中真空干操，干燥后的即為絨促性素。
經(jīng)檢測，絨促性素效價為413 iu/mg。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護范圍。