技術(shù)特征：

1.一種玉米微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)開發(fā)方法，其特征在于，所述開發(fā)方法包括：

將n個(gè)具有多態(tài)性的玉米樣本等質(zhì)量混合，獲得混合樣本，其中n＞1；

提取所述混合樣本的基因組；

將所述混合樣本的基因組片段化，獲得基因組片段；

將多個(gè)具有簡(jiǎn)單重復(fù)序列的探針作為探針組，利用所述探針組中的每個(gè)探針?lè)謩e與所述基因組片段進(jìn)行雜交，獲得多個(gè)雜交溶液，對(duì)多個(gè)所述雜交溶液中成功雜交的基因組片段分別進(jìn)行純化，得到多個(gè)純化的雜交基因組片段；

將多個(gè)所述純化的雜交基因組片段等質(zhì)量混合后，利用高通量測(cè)序檢測(cè)混合后的所述純化的雜交基因組片段，獲得第一高通量測(cè)序片段；

從所述第一高通量測(cè)序片段中，篩選有效的所述高通量測(cè)序片段，所述有效的高通量測(cè)序片段包括微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)內(nèi)的微衛(wèi)星標(biāo)記；

根據(jù)所述有效的高通量測(cè)序片段中的微衛(wèi)星標(biāo)記的兩側(cè)序列的同源性對(duì)所述有效的高通量測(cè)序片段進(jìn)行分類，同一類的所述有效的高通量測(cè)序片段為同一個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的所述有效的高通量測(cè)序片段，若同一個(gè)所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的所述有效的高通量測(cè)序片段的條數(shù)≥α1，則成功開發(fā)一個(gè)所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)，其中，α1為第一判定閾值且α1≥(高通測(cè)序深度×有效的高通量測(cè)序片段的比例/基因組上能檢測(cè)到的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)數(shù))×概率保證。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的開發(fā)方法，其特征在于，α1≥20。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的開發(fā)方法，其特征在于，所述有效的高通量測(cè)序片段中的所述微衛(wèi)星標(biāo)記的兩側(cè)序列的堿基數(shù)均≥1個(gè)，且所述有效的高通量測(cè)序片段中的所述微衛(wèi)星標(biāo)記中至少有一側(cè)的序列的堿基數(shù)≥10個(gè)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的開發(fā)方法，其特征在于，選擇所述n個(gè)具有多態(tài)性的玉米樣本的方法包括：選擇外部形態(tài)不同的玉米樣本、生物分類不同的玉米樣本、標(biāo)記互不相同的玉米樣本或不同生態(tài)區(qū)域的野生資源的玉米樣本。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的開發(fā)方法，其特征在于，所述探針的數(shù)量為12個(gè)，每個(gè)所述探針的簡(jiǎn)單重復(fù)序列中的重復(fù)單元為CT、GA、TG、AC、TA、TGT、CCA、ATC、CCT、AGA、ATG或CAA，每個(gè)所述探針的簡(jiǎn)單重復(fù)序列的重復(fù)次數(shù)為6～20；優(yōu)選地，每個(gè)所述探針的簡(jiǎn)單重復(fù)序列的重復(fù)次數(shù)為6～15。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的開發(fā)方法，其特征在于，所述探針的序列如序列表中SEQ IN NO:1-SEQ IN NO:12所示。

7.一種權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)內(nèi)的微衛(wèi)星標(biāo)記的長(zhǎng)度檢測(cè)方法，其特征在于，所述檢測(cè)方法包括：

從成功開發(fā)的所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)中，選擇待檢測(cè)的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)；

利用多重?cái)U(kuò)增引物擴(kuò)增所述待檢測(cè)的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)內(nèi)的微衛(wèi)星標(biāo)記，得到擴(kuò)增產(chǎn)物，將所述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行高通量測(cè)序，得到第二高通量測(cè)序片段，通過(guò)分析所述第二高通量測(cè)序片段，獲得所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)內(nèi)的微衛(wèi)星標(biāo)記的長(zhǎng)度。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述從成功開發(fā)的所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)中，選擇待檢測(cè)的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的方法包括：

選擇所述待檢測(cè)的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)為H值最大的所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)，其中，H值為所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的多態(tài)性指數(shù)，其中，i為按所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的所述有效的高通量測(cè)序片段中的微衛(wèi)星標(biāo)記的長(zhǎng)度進(jìn)行分類時(shí)，第i個(gè)類別，i為自然數(shù)；ai為第i個(gè)類別的有效的所述高通量測(cè)序片段的數(shù)目占總的有效的所述高通量測(cè)序片段的數(shù)目的比例。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，獲得所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)內(nèi)的所述微衛(wèi)星標(biāo)記的長(zhǎng)度的方法為：去除所述第二高通量測(cè)序片段中的所述微衛(wèi)星標(biāo)記后，獲得所述第二高通量測(cè)序片段的左邊界序列和所述第二高通量測(cè)序片段的右邊界序列；利用所述左邊界序列和所述右邊界序列將所述第二高通量測(cè)序片段中的每個(gè)片段比對(duì)到所述待檢測(cè)的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)上；截取每一個(gè)所述待檢測(cè)的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的所述第二高通量測(cè)序片段中的所述微衛(wèi)星標(biāo)記；將獲得的所述微衛(wèi)星標(biāo)記按長(zhǎng)度進(jìn)行分類，并計(jì)算第i個(gè)類別的真實(shí)度R_i＝N_i/N_max，其中，i為按所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的所述有效的高通量測(cè)序片段中的微衛(wèi)星標(biāo)記的長(zhǎng)度進(jìn)行分類時(shí)，第i個(gè)類別，N_i為所述第i個(gè)類別的所述第二高通量測(cè)序片段的數(shù)量，N_max為所有類別的所述第二高通量測(cè)序片段的數(shù)量的最大值；若所述真實(shí)度R_i≥α4，則所述第i個(gè)類別的所述微衛(wèi)星標(biāo)記的長(zhǎng)度為所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)內(nèi)的所述微衛(wèi)星標(biāo)記的長(zhǎng)度，若所述真實(shí)度R_i<α4，則所述第i個(gè)類別的微衛(wèi)星標(biāo)記的長(zhǎng)度不為所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)內(nèi)的所述微衛(wèi)星標(biāo)記的長(zhǎng)度，其中，α4為第四判定閾值且α4＝0.3。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，制備所述多重?cái)U(kuò)增引物的方法包括：

從選擇的所述待檢測(cè)的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的所有所述有效的高通量測(cè)序片段中，提取所述微衛(wèi)星標(biāo)記并挑選出最長(zhǎng)的所述微衛(wèi)星標(biāo)記作為多重?cái)U(kuò)增引物的模版序列的微衛(wèi)星標(biāo)記；

從選擇的所述待檢測(cè)的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的所有所述有效的高通量測(cè)序片段中，提取所述微衛(wèi)星標(biāo)記的左側(cè)序列并挑出長(zhǎng)度大于α2個(gè)堿基的所有序列，從挑選出的所述所有序列中，挑選出頻率最高的序列，以所述頻率最高的序列作為參考序列，將所述參考序列與所有的所述微衛(wèi)星標(biāo)記的左側(cè)序列進(jìn)行比對(duì)，在所述頻率最高的序列中獲得每一個(gè)堿基的覆蓋倍數(shù)和變異頻率；在所述頻率最高的序列中，將所述覆蓋倍數(shù)≤1/α3或所述變異頻率≥α3的堿基變?yōu)镹后作為所述多重?cái)U(kuò)增引物的模板序列的左側(cè)序列，其中，N為A、T、C和G四種堿基中任意一種及以上的堿基；α2為第二判定閾值，α2＝(所述第一高通量測(cè)序片段的平均長(zhǎng)度-所述多重?cái)U(kuò)增引物的微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的長(zhǎng)度)÷2；α3為第三判定閾值，α3≥5×(1-所述第一高通量測(cè)序片段的準(zhǔn)確度)；

按照與所述多重?cái)U(kuò)增引物的模板序列的左側(cè)序列相同的方法，獲得多重?cái)U(kuò)增引物序列的模板序列的右側(cè)序列；

將所述多重?cái)U(kuò)增引物的模板序列的左側(cè)序列、所述多重?cái)U(kuò)增引物的模板序列的微衛(wèi)星標(biāo)記和所述多重?cái)U(kuò)增引物的模板序列的右側(cè)序列依次連接，得到所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的多重?cái)U(kuò)增引物的模板序列，利用所述微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)的多重?cái)U(kuò)增引物的模板序列，獲得所述多重?cái)U(kuò)增引物。