本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及一種植物淀粉合成相關(guān)蛋白OsNPPR及其編碼基因與應用。
背景技術(shù)：
：在植物中，淀粉是主要的儲能物質(zhì)，其合成途徑中的許多合成酶和調(diào)控因子都已經(jīng)被很好地鑒定和研究。淀粉是稻米籽粒最主要的組成成分，其含量和特性直接影響稻米的各項品質(zhì)指標及最終適口性，同時淀粉的積累水平還可能影響水稻的產(chǎn)量，因此，深入研究水稻這一單子葉模式植物淀粉合成途徑中的關(guān)鍵因子及調(diào)控網(wǎng)絡具有重要的理論意義與應用價值。葉片光合作用產(chǎn)物首先以蔗糖的形式運輸?shù)降矸酆铣善鞴俚呐呷榧毎?，轉(zhuǎn)化為1-磷酸-葡萄糖(G-1-P)后進入造粉體體內(nèi)，分別在ADP-葡萄糖焦磷酸化酶、淀粉合成酶、淀粉分支酶、淀粉脫支酶的作用下形成直鏈淀粉和支鏈淀粉。由于淀粉的生物合成是一個復雜且精細的過程，人類至今還無法在體外系統(tǒng)中合成淀粉，淀粉合成過程中還有許多環(huán)節(jié)是未知的。因此挖掘新的參與淀粉合成的因子并進行深入研究尤為重要。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種淀粉合成相關(guān)蛋白及其編碼基因與應用。本發(fā)明提供的淀粉合成相關(guān)蛋白(OsNPPR)，來源于稻屬水稻(OryzasativaIndicaN22)，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)：(a)由序列表中SEQIDNO.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與淀粉合成相關(guān)的由SEQIDNO.2衍生的蛋白質(zhì)。序列表中的SEQIDNO.1由804個氨基酸殘基組成，自氨基末端第183至743位為PPR重復結(jié)構(gòu)域。為了使(a)中的OsNPPR便于純化，可在由序列表中SEQIDNO.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標簽。表1標簽的序列標簽殘基序列Poly-Arg5-6(通常為5個)RRRRRPoly-His2-10(通常為6個)HHHHHHFLAG8DYKDDDDKStrep-tagII8WSHPQFEKc-myc10EQKLISEEDL上述(b)中的OsNPPR可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進行生物表達得到。上述(b)中的OsNPPR的編碼基因可通過將序列表中SEQIDNO.2所示的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5′端和/或3′端連上表1所示的標簽的編碼序列得到。編碼上述淀粉合成相關(guān)蛋白的基因(OsNPPR)也屬于本發(fā)明的保護范圍。所述基因OsNPPR可為如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：1)序列表中SEQIDNO.2所示的DNA分子；2)序列表中SEQIDNO.3所示的DNA分子；3)在嚴格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交且編碼所述蛋白的DNA分子；4)與1)或2)或3)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且編碼淀粉合成相關(guān)蛋白的DNA分子。序列表中的SEQIDNO.2由4185個核苷酸組成。所述嚴格條件可為在0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃下雜交并洗膜。含有以上任一所述基因的重組表達載體也屬于本發(fā)明的保護范圍?？捎矛F(xiàn)有的植物表達載體構(gòu)建含有所述基因的重組表達載體。所述植物表達載體包括雙元農(nóng)桿菌載體和可用于植物微彈轟擊的載體等。所述植物表達載體還可包含外源基因的3’端非翻譯區(qū)域，即包含聚腺苷酸信號和任何其它參與mRNA加工或基因表達的DNA片段。所述聚腺苷酸信號可引導聚腺苷酸加入到mRNA前體的3’端，如農(nóng)桿菌冠癭瘤誘導(Ti)質(zhì)粒基因(如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因(如大豆貯存蛋白基因)3’端轉(zhuǎn)錄的非翻譯區(qū)均具有類似功能。使用所述基因構(gòu)建重組植物表達載體時，在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前可加上任何一種增強型啟動子或組成型啟動子，如花椰菜花葉病毒(CAMV)35S啟動子、玉米的泛素啟動子(Ubiquitin)，它們可單獨使用或與其它的植物啟動子結(jié)合使用；此外，使用本發(fā)明的基因構(gòu)建植物表達載體時，還可使用增強子，包括翻譯增強子或轉(zhuǎn)錄增強子，這些增強子區(qū)域可以是ATG起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號和起始密碼子的來源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻譯起始區(qū)域可以來自轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域或結(jié)構(gòu)基因。為了便于對轉(zhuǎn)基因植物細胞或植物進行鑒定及篩選，可對所用植物表達載體進行加工，如加入可在植物中表達的編碼可產(chǎn)生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因(GUS基因、螢光素酶基因等)、具有抗性的抗生素標記物(慶大霉素標記物、卡那霉素標記物等)或是抗化學試劑標記基因(如抗除莠劑基因)等。從轉(zhuǎn)基因植物的安全性考慮，可不加任何選擇性標記基因，直接以逆境篩選轉(zhuǎn)化植株。所述重組表達載體可為在1300-221-3*Flag載體的多克隆位點XbaI和SalI之間重組插入所述基因(OsNPPR)得到的重組質(zhì)粒。所述重組質(zhì)粒具體可為1300-221-3*Flag-OsNPPR；所述1300-221-3*Flag-OsNPPR是將由OsNPPR基因組編碼序列通過重組技術(shù)插入到1300-221-3*Flag多克隆位點XbaI和SalI之間得到的(Clontech公司，Infusion重組試劑盒)。將含有OsNPPR的1300-221-3*Flag命名為1300-221-3*Flag-OsNPPR。含有以上任一所述基因(OsNPPR)的表達盒及重組菌均屬于本發(fā)明的保護范圍。擴增所述基因(OsNPPR)全長或任一片段的引物對也屬于本發(fā)明的保護范圍。本發(fā)明的另一個目的是提供一種培育淀粉合成正常的轉(zhuǎn)基因植物的方法。本發(fā)明提供的培育淀粉合成正常的轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將所述基因?qū)氲矸酆铣僧惓５闹参镏?，得到淀粉合成正常的轉(zhuǎn)基因植物；所述淀粉合成異常植物為胚乳表現(xiàn)為粉質(zhì)表型的植物；所述淀粉合成正常的轉(zhuǎn)基因植物為胚乳表現(xiàn)透明非粉質(zhì)的轉(zhuǎn)基因植物。具體來說，所述基因通過所述重組表達載體導入淀粉合成異常植物中；所述淀粉合成異常植物可為N112。所述蛋白、所述基因、所述重組表達載體、表達盒或重組菌或所述方法均可應用于水稻育種。利用任何一種可以引導外源基因在植物中表達的載體，將編碼所述蛋白的基因?qū)胫参锛毎?，可獲轉(zhuǎn)基因細胞系及轉(zhuǎn)基因植株。攜帶有所述基因的表達載體可通過使用Ti質(zhì)粒、Ri質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、顯微注射、電導、農(nóng)桿菌介導等常規(guī)生物學方法轉(zhuǎn)化植物細胞或組織，并將轉(zhuǎn)化的植物組織培育成植株。被轉(zhuǎn)化的植物宿主既可以是單子葉植物，也可以是雙子葉植物，如：煙草、百脈根、擬南芥、水稻、小麥、玉米、黃瓜、番茄、楊樹、草坪草、苜宿等。本發(fā)明的淀粉合成相關(guān)蛋白影響水稻胚乳中谷淀粉合成的過程。將所述蛋白的編碼基因?qū)氲矸酆铣僧惓５姆圪|(zhì)胚乳植物中，可以得到胚乳透明非粉質(zhì)的轉(zhuǎn)基因植物。所述蛋白及其編碼基因可以應用于植物遺傳改良。附圖說明圖1為突變基因在第8染色體上的精細定位。圖2為野生型N22和突變體N112的籽粒表型。圖3為野生型N22和突變體N112的籽粒掃描電鏡觀察。圖4為野生型N22和突變體N112胚乳發(fā)育9天半薄切片觀察。圖5為野生型N22和突變體N112灌漿速率及千粒重對比。圖6為野生型N22和突變體N112理化性質(zhì)比較。圖7為轉(zhuǎn)1300-221-3*Flag-OsNPPR的T0代植株的T1籽粒提蛋白western檢測結(jié)果。圖8為轉(zhuǎn)1300-221-3*Flag-OsNPPR的T0代植株的T1籽粒表型。具體實施方式以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。實施例1、植物淀粉合成相關(guān)蛋白及其編碼基因的發(fā)現(xiàn)一、水稻淀粉合成突變體N112表型分析及其遺傳分析在N22的MNU誘變突變體庫中篩選出籽粒粉質(zhì)的株系N112。圖2上圖為N22成熟種子整體和橫斷面的掃描圖，表現(xiàn)為胚乳完全透明的表型，下圖為N112成熟種子整體和橫斷面的掃描圖，表現(xiàn)為胚乳完全粉質(zhì)的表型。圖3為N22和N112掃描電鏡分析圖。N22的成熟種子掃描電鏡表現(xiàn)為淀粉顆粒排列緊密，大小均一，而N112中淀粉顆粒排列松散，使得顆粒之間存在間隙。因此在光線通過時會發(fā)生散射，導致N112籽粒外觀呈現(xiàn)不透明表型。利用半薄切片后的I2-KI染色來觀察N22和N112復合淀粉顆粒的形態(tài)(圖4)。在開花后9天的野生型N22胚乳里層細胞中，每個造粉體內(nèi)部產(chǎn)生多個獨立存在的淀粉顆粒，這是水稻典型的復合淀粉顆粒結(jié)構(gòu)，淀粉顆粒排列緊密(圖4)。進一步觀察突變體N112，發(fā)現(xiàn)其胚乳里層細胞的胞質(zhì)中，存在許多小的、零散分布的單粒淀粉顆粒，而且淀粉顆粒之間排列不緊密，表明突變體中淀粉發(fā)育的滯后性(圖4)。在整個種子發(fā)育過程中，N112突變體的灌漿速率明顯低于野生型(圖5)。從開花后12天開始，突變體的干物質(zhì)積累開始顯著低于野生型，并且這個差異一直維持到灌漿結(jié)束。與灌漿速率明顯降低相對應的結(jié)果是，成熟的N112突變體種子千粒重明顯低于N22(圖5)。N112突變體的種子具有較高含量的脂肪，同時淀粉含量較野生型顯著降低(圖6)。相應地，直鏈淀粉含量顯著降低(圖6)。二、突變基因定位1、突變基因初步定位用突變體N112與Nip雜交，在N112/Nip的F2分離群體中隨機選取籽粒粉質(zhì)的種子，發(fā)芽后，分別將各株的葉片等量混合后提取DNA。首先，用覆蓋水稻全基因組的565對SSR引物在N22和Nip之間進行多態(tài)性分析，之后每間隔10cM挑選一對在兩個親本間有多態(tài)的引物。兩個親本DNA連同群體DNA共計三個DNA樣本，利用挑選好的覆蓋12條染色體的且具有多態(tài)的引物進行分析，最后將淀粉合成關(guān)鍵基因OsNPPR定位在第8染色體SSR標記I8-5和N8-25之間。上述SSR標記分析的方法如下所述：(1)提取上述選取單株的總DNA作為模板，具體方法如下：①取0.2克左右的水稻幼嫩葉片，置于Eppendorf管中，管中放置一粒鋼珠，把裝好樣品的Eppendorf管在液氮中冷凍5min，置于2000型GENO/GRINDER儀器上粉碎樣品1min。②加入660μL提取液(含100mMTris-HCl(pH8.0)，20mMEDTA(pH8.0)，1.4MNaCl,0.2g/mLCTAB的溶液)，漩渦器上劇烈渦旋混勻，冰浴30min。③加入40μL20％SDS，65℃溫浴10min，每隔兩分鐘輕輕上下顛倒混勻。④加入100μL5MNaCl，溫和混勻。⑤加入100μL10×CTAB，65℃溫浴10min，間斷輕輕上下顛倒混勻。⑥加入900μL氯仿，充分混勻，12000rpm離心3min。⑦轉(zhuǎn)移上清液至1.5mLEppendorf管中，加入600μL異丙醇，混勻，12000rpm離心5min。⑧棄上清液，沉淀用70％(V/V)乙醇漂洗一次，室溫晾干。⑨加入100μL1×TE(121gTris-base溶于1L水中，用鹽酸調(diào)pH值至8.0得到的溶液)溶解DNA。⑩取2μL電泳檢測DNA質(zhì)量，并用DU800分光光度儀測定濃度(BeckmanInstrumentInc.U.S.A)。(2)將上述提取的DNA稀釋成約20ng/μL，作為模板進行PCR擴增；PCR反應體系(10μL)：DNA(20ng/μL)1μL，上游引物(2pmol/μL)1μL，下游引物(2pmol/μL)1μL，10×Buffer(MgCl2free)1μL，dNTP(10mM)0.2μL，MgCl2(25mM)0.6μL，rTaq(5U/μL)0.1μL，ddH2O5.1μL，共10μL。PCR反應程序：94.0℃變性5min；94.0℃變性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min，共循環(huán)35次；72℃延伸7min；10℃保存。PCR反應在Biometro熱循環(huán)儀中進行。(3)SSR標記的PCR產(chǎn)物檢測擴增產(chǎn)物用8％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析。以50bp的DNALadder為對照比較擴增產(chǎn)物的分子量大小，銀染顯色。2、突變基因精細定位根據(jù)初步定位的結(jié)果，在突變位點所在區(qū)域間隔一定區(qū)段自行開發(fā)SSR標記，以便在該染色體的相關(guān)區(qū)段篩選更多標記進一步定位突變體位點。從N22/NiP雜交組合獲得的F2分離群體中挑出確認為突變表型的F2種子，用于突變位點的精細定位。利用公共圖譜上的分子標記和基于水稻基因組序列數(shù)據(jù)自行開發(fā)的SSR、Indel分子標記對突變位點進行了精細定位，并根據(jù)定位結(jié)果初步確定突變位點，具體方法如下：(1)SSR標記開發(fā)將公共圖譜的SSR標記與水稻基因組序列進行整合，下載突變位點附近的BAC/PAC克隆序列。用SSRHunter(李強等，遺傳，2005，27(5):808-810)或SSRIT軟件搜索克隆中潛在的SSR序列(重復次數(shù)≥6)；將這些SSR及其鄰近400～500bp的序列在NCBI通過BLAST程序在線與相應的秈稻序列進行比較，如果兩者的SSR重復次數(shù)有差異，初步推斷該SSR引物的PCR產(chǎn)物在秈、粳間存在多態(tài)性；再利用PrimerPremier5.0軟件設計SSR引物,并由上海英俊生物技術(shù)有限公司合成。將自行設計的SSR成對引物等比例混合，檢測其在N22和Nip之間的多態(tài)性，表現(xiàn)多態(tài)者用作精細定位OsNPPR基因的分子標記。用于精細定位的分子標記見表2。表2用于精細定位的分子標記標記正向引物反向引物遺傳距離類型HY8-245'ATTAAGATGATATGGGAAGT3'5'ACATTGACCTGGTAGAAAC3'57.8cMInDelHY8-195'TTTGTTGCTTTTCTGATTC3'5'ATGATAAAGCGATAAACCA3'54.4cMInDelHY8-255'TATTCCCAACCATCATTC3'5'TTCTACCTGCTTGTTCTACT3'54.3cMInDelHY8-325'ACAAAATGGGTCCCTATGC3'5'TTGCTTGCTACTACTGTCTAATG3'53.7CMSSRHY8-345'AGCACATCACAAACCTACCC3'5'AAGGCAATCCGAACAACC3'54.1cMSSRHY8-615'TACCAACACCCGGTCTACG3'5'GGAAACGGAATCCACAACA3'53.9cMInDelHY8-395'TGGACCAACCTAAGCAGT3'5'ACAACTCCAAGGCGATT3'53.8cMSSR根據(jù)F2群體中胚乳粉質(zhì)單株的分子數(shù)據(jù)和表型數(shù)據(jù)，按照Zhang等報道的“隱性極端個體基因作圖”方法，最終把OsNPPR基因精細定位在HY8-61和HY8-34之間，物理距離約為293kb(圖1)。候選區(qū)段基因組測序顯示，在N112中，基因Os08g0290000中存在一個堿基的突變，由T突變?yōu)镃,編碼一個新的氨基酸，使原來的異亮氨酸變?yōu)樘K氨酸。(3)突變基因的獲得根據(jù)定位的位點設計引物，序列如下所述：primer1：5'-CGAACCTCCGCCATGAGA-3'(SEQIDNO.4)primer2：5'-CAGGCTGTCTAGTCACCAGGTAC-3'(SEQIDNO.5)以primer1和primer2為引物，以N22的cDNA為模板，進行PCR擴增獲得目的基因。該對引物位于序列2上游12bp和下游577bp，擴增產(chǎn)物為3033bp的目的基因的5’UTR區(qū)，CDS區(qū)(ATG到TGA，ATG紅色字體標出，TGA藍色字體標出)和3’UTR區(qū)。擴增反應在PTC-200(MJResearchInc.)PCR儀上進行：94℃3min；94℃30sec，60℃45sec，72℃2min，35個循環(huán)；72℃5min。將PCR產(chǎn)物回收純化后克隆到載體pEASY(北京全式金公司)，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞(北京Tiangen公司CB101)，挑選陽性克隆后，進行測序。序列測定結(jié)果表明，PCR反應獲得的片段具有序列表中SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，編碼804個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)(從ATG到TGA)(見序列表的SEQIDNO.1)。將SEQIDNO.1所示的蛋白命名為OsNPPR(即為基因定位中所述的OsNPPR基因)，將SEQIDNO.1所示的蛋白的編碼基因命名為OsNPPR。實施例2、轉(zhuǎn)基因植物的獲得和鑒定一、重組表達載體構(gòu)建以N22的cDNA為模板，進行PCR擴增獲得OsNPPR基因的編碼序列，PCR引物序列如下：primer3(下劃線所示的序列為XbaI酶切位點)：5'GAGAACACGGGGGACTCTAGAATGAGACCACCACCACCCC3'(SEQIDNO.6)primer4(下劃線所示的序列為SalI酶切位點)：5'GTCCTTGTAGTCCATGTCGACTTCAACACTGGAAGCAGCT3'(SEQIDNO.7)上述引物位于SEQIDNO.2所示基因的ATG開始到TGA前結(jié)束，不包括TGA，擴增產(chǎn)物包含了該基因的全部編碼區(qū)部分，將PCR產(chǎn)物回收純化。采用Infusion重組試劑盒(Clontech)將PCR產(chǎn)物克隆到載體1300-221-3*Flag中，構(gòu)建成1300-221-3*Flag-OsNPPR。重組反應體系(10.0μL)：PCR產(chǎn)物5.4μL(50-100ng)，1300-221-3*Flag載體1.6μL(30-50ng)，5×Infusionbuffer2.0μL，Infusionenzymemix1μL。短暫離心后將混合體系37℃水浴0.5h以上，取2.5μL反應體系用熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞(北京Tiangen公司；CB101)。將全部轉(zhuǎn)化細胞均勻涂布在含50mg/L卡那霉素的LB固體培養(yǎng)基上。37℃培養(yǎng)16h后，挑取克隆陽性克隆，進行測序。測序結(jié)果表明，得到了含有SEQIDNO.3所示基因的重組表達載體，將含有OsNPPR的1300-221-3*Flag命名為1300-221-3*Flag-OsNPPR,OsNPPR基因插入在多克隆位點XbaI和SalI之間。二、重組農(nóng)桿菌的獲得用電擊法將1300-221-3*Flag-OsNPPR轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105菌株(購自美國英俊公司)，得到重組菌株，提取質(zhì)粒進行PCR及酶切鑒定。將PCR及酶切鑒定正確的重組菌株命名為EH-1300-221-3*Flag-OsNPPR。三、轉(zhuǎn)基因植物的獲得分別將1300-221-3*Flag-OsNPPR轉(zhuǎn)化突變體N112具體方法為：(1)28℃培養(yǎng)EH-1300-221-3*Flag-OsNPPR培養(yǎng)16小時，收集菌體，并稀釋到含有100μmol/L乙酰丁香酮的N6液體培養(yǎng)基(Sigma公司，C1416)中至濃度為OD600≈0.5，獲得菌液；(2)將培養(yǎng)至一個月的N112水稻成熟胚胚性愈傷組織與步驟(1)的菌液混合侵染30min，濾紙吸干菌液后轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)培養(yǎng)基(N6固體共培養(yǎng)培養(yǎng)基，Sigma公司)中，24℃共培養(yǎng)3天；(3)將步驟(2)的愈傷接種在含有100mg/L巴龍霉素(PhytoTechnologyLaboratories公司)的N6固體篩選培養(yǎng)基上第一次篩選(16天)；(4)挑取健康愈傷轉(zhuǎn)入含有100mg/L巴龍霉素的N6固體篩選培養(yǎng)基上第二次篩選，每15天繼代一次；(5)挑取健康愈傷轉(zhuǎn)入含有50mg/L巴龍霉素的N6固體篩選培養(yǎng)基上第三次篩選，每15天繼代一次；(6)挑取抗性愈傷轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上分化；得到分化成苗的T0代陽性植株。四、轉(zhuǎn)基因植株的鑒定1、WesternBlot鑒定對T0代植株所結(jié)的T1代種子提取總蛋白，種子蛋白提取液配方(5MUREA,4％SDS,0.125MTris-HClpH6.8，β-Me5％，少量溴酚藍)，每一粒種子加入350μL提取液，于50℃烘箱放置12-16個小時，上下顛倒混勻，12000rpm離心2分鐘，吸取10μL進行SDS-PAGE，轉(zhuǎn)到尼龍膜后，用Flag一抗和兔二抗分別進行孵育。T0代不同家系植株所結(jié)的T1代種子中，挑取變透明的個體在目標位置(88kDa)有條帶的，即為陽性互補家系。圖7前兩條泳道在目的位置有條帶，表明這兩個T1代種子所對應T0代植株為轉(zhuǎn)基因陽性植株，第三條泳道為對照，用N22和N112種子作為對照。2、表型鑒定分別將T0代轉(zhuǎn)1300-221-3*Flag–OsNPPR的陽性植株，N112和N22種植在南京農(nóng)業(yè)大學牌樓試驗基地。對T1代種子進行表型鑒定，發(fā)現(xiàn)在T1代顯示出(透明：粉質(zhì)＝3:1)的表型，透明籽粒的表型與N22相同，不透明籽粒的表型與N112相同(圖8)，說明導致N112突變體表型確實是OsNPPR基因控制的，即該OsNPPR基因為淀粉合成相關(guān)基因。<110>南京農(nóng)業(yè)大學<120>一種植物淀粉合成相關(guān)蛋白OsNPPR及其編碼基因與應用<160>8<210>1<211>804<212>PRT<213>稻屬水稻（OryzasativaIndicaN22）<220><223>淀粉合成相關(guān)蛋白OsNPPR氨基酸序列<400>1MetArgProProProProHisLeuLeuLeuProArgArgArgArgHis151015AlaSerSerSerAlaAlaAlaAlaAlaAlaAlaGlyGluLeuValGly202530AlaLeuSerAlaLeuProSerProAspSerAlaArgHisLeuAspAla354045LeuLeuArgArgIleGlyGlyGlyGlyLeuAlaAlaValLeuSerSer505560LeuProSerProLeuProAlaAlaSerAlaLeuArgLeuLeuLeuHis65707580LeuLeuSerArgThrSerSerThrSerSerArgSerGluAspAspLeu859095LeuThrProArgValSerAlaLeuLeuLeuProSerLeuIleAlaAsp100105110ArgThrAlaIleArgThrAlaArgArgLeuLeuSerArgLeuLeuHis115120125ValHisProLeuArgThrAlaAlaGluAlaValAlaAspAlaAlaSer130135140ThrProSerSerAspPheLeuIleHisThrPheIleThrSerProAla145150155160GlnGlySerLeuCysArgAlaAlaAspAlaPheArgValLeuSerSer165170175ArgGlyAlaProProSerAsnIleLysThrCysAsnPheLeuGluAla180185190LeuValArgAlaGlyGlnLeuAspAlaAlaArgGluValPheAspGlu195200205MetArgGluSerArgAsnValAlaLeuAsnGluTyrSerTyrThrAla210215220MetIlelysAlaLeuCysLysAlaGlyLysValAspAlaGlyPheGlu225230235240MetLeuAlaGluLeuTrpArgAlaGlyLeuGlnProThrValValThr245250255TyrAsnValLeuMetAspAlaLeuCyslysSerGlyArgValGluGlu260265270AlaPheArgLeuLysGlyArgMetGluGluGlyGlyMetThrProSer275280285ValValThrPheGlyIleLeuIleAsnGlyLeuAlaArgGlyGluArg290295300PheGlyGluValGlyIleValLeuGlnGluMetGluGlnLeuGlyVal305310315320SerProAsnGluValIleTyrAsnGluLeuIleGlyTrpHisCysArg325330335lysGlyHisCysSerGlnAlaLeuArgLeuPheAspGluMetValLeu340345350LysLysMetLysProThrAlaValThrTyrAsnLeuIleAlaLysAla355360365LeuCysLysGluGlyGluMetGluArgAlaGluArgIleLeuGluAsp370375380MetLeuSerIleGlyMetThrValHisCysGlyLeuPheAsnThrVal385390395400ValAlaTrpLeuLeuGlnArgThrArgArgLeuGluSerValValSer405410415IleThrAsnGluMetValThrArgGlyMetArgProAsnAspProLeu420425430MetThrAlaCysMetArgGluLeuCysLysGlyGlyLysHisGlnGlu435440445AlaValGlyIleTrpPheLysThrLeuAsnLysGlyLeuGlyValAsn450455460LeuAlaThrSerAsnAlaLeuIleHisGlyLeuCysGluGlyLysTyr465470475480MetLysGluAlaThrLysValIleGlnThrMetLeuAsnLysGlyIle485490495GluLeuAspSerIleThrTyrAsnIleMetIleArgGlyCysCysLys500505510AspSerLysMetGluGluAlaIleLysLeuHisGlyAspMetThrArg515520525ArgGlyPheLysProAspLeuPheThrPheAsnThrLeuLeuHisAla530535540545TyrCysAsnLeuGlyLysMetGluGluThrPheHisLeuLeuAspGln550555560MetLysThrGluGlyLeuGlnProAspIleValSerTyrGlyThrIle565570575IleAspGlyHisCysLysAlaLysAspIleArgLysAlaLysGluTyr580585590LeuThrGluLeuMetAspArgGlyLeuLysProAsnValPheIleTye595600605AsnAlaLeuIleGlyGlyTyrGlyArgAsnGlyAspIleSerGlyAla610615620625IleAspAlaValGluThrMetLysSerAsnGlyIleGlnProThrAsn630635640ValThrTyrGlySerLeuMetTyrTrpMetCysHisAlaGlyLeuVal645650655GluGluAlaLysThrIlePheSerGlnAlaArgGluAsnAsnValAsp660665670LeuGlyValIleGlyTyrThrIleMetIleGlnGlyTyrCysLysLeu675680685GlyLysMetValGluAlaValAlaTyrPheGluGluMetArgSerArg690695700705GlyIleSerProAsnLysLeuThrTyrThrThrLeuMetTyrAlaTyr710715720SerLysSerGlyAsnSerGluGluAlaSerLysLeuPheAspGluMet725730735ValGlySerGlyValIleProAspAsnIleThrTyrGlyThrLeuIle740745750AlaArgCysSerGluValAsnSerLeuAspLysAspIleGlyHisThr755760765AlaGluLeuSerSerGlyAlaLeuThrLysAspAspArgMetHisAsn770775780785IleLeuSerAsnGlyIleAsnAlaProTrpCysGlnLysGluAlaAla790795800SerSerValGlu804<210>2<211>4185<212>DNA<213>稻屬水稻（OryzasativaIndicaN22）<220><223>淀粉合成相關(guān)蛋白OsNPPR的CDS序列<400>2accacgccctcgacgcgtcgcccctctcgacctcccactcctcgatccaatcctcgccgt60ccatccttccctgcgtccaatccccaccctccattcgacctccttcttaactttcagcgc120cgcccaccgttccacatcgaacctccgccatgagaccaccaccaccccacctcctcctcc180tcctcccccgccgccgccgccacgcctcctcctcctccgccgccgccgccgccgccggag240agctcgtcggcgccctctccgccttgccctcccccgactcggcgcgacacctcgacgccc300tcctccgtcgcatcggcggcggtggcctcgccgccgtcctctcgtccctgccctcccctc360tccccgcggcctccgccctccgcctcctcctccacctcctctccaggacctcctccacct420cctcccgctccgaggatgacctcctcaccccgcgcgtctcggcgctcctcctgccctccc480tcatcgccgatcgcaccgccatccggacggcgcgccgcctcctctcacgactcctccacg540tccacccgctccgcaccgccgcggaggcggtcgccgacgccgcctccaccccctcctcgg600acttcctcatccacaccttcatcacctccccggcccaaggctccctctgcagggccgccg660acgcgttccgcgttctctcctcgcgcggcgcgccgccctccatcaagacctgcaatgcgt720tcctcgaagcccttgttcgtgcaggtcagctcgatgccgcccgcgaggtgttcgacgaaa780tgcgtgaaagcaggaacgtcgctctgaatgagtactcgtataccgccatgatcaaggcgc840tctgcaaggctggaaaggtggatgctggttttgagatgcttgcagagttatggcgggctg900ggcttcagccaacggttgtgacgtacaatgtgcttatggatgcactgtgtaagagtggga960gggtggaggaggcctttcgattgaaagggaggatggaacagggagggatgacaccaagcg1020tggtcacattcggtatattgatcaatggtcttgcaaggggcgagcggtttggggaggttg1080gcattgtattgcaggagatggaacagttaggggtttcccccaatgaggttatttacaatg1140agcttattggttggcattgtaggaagggccattgctcacaggcactcaggttgtttgatg1200aaatggttttaaagaagatgaagccaacagccgtgacttataacttgattgcaaaggcac1260tgtgcaaggaaggggagatggagcgggctgagaggatattggaggatatgttgtcaattg1320gaatgacagttcattgtggtttgttcaatacagtggttgcatggcttcttcaaagaacca1380gaagattggagtcagtggtaagcattacaaatgaaatggttacacgaggtatgcgcccaa1440atgatcctctgatgacagcttgtatgagggagctttgcaagggagggaaacatcaagaag1500cagttgggatttggttcaagacattgaacaaaggtttaggtgttaatcttgcaacttcca1560atgcgctaattcatggtctttgtgaaggtaagtacatgaaagaagctacaaaggttatac1640agaccatgttaaataagggaattgaattggatagcatcacatataacattatgattcgag1700gttgctgcaaagacagtaaaatggaggaagctattaaactccatggcgacatgaccagaa1760gagggtttaagcctgatcttttcacatttaatactttattgcatgcttattgcaatttgg1840gtaaaatggaggaaacctttcatctgttggatcagatgaaaactgagggccttcagcctg1900atatagtgtcatatggcactataatagatggtcattgtaaagcaaaggatattcgtaaag1960caaaagaatatttgactgaattgatggatcgtggacttaaacctaatgtgttcatttata2040atgcacttattggtggtta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