本發(fā)明涉及一種海產(chǎn)品中小分子多肽的提取方法，具體是一種小分子深海魚多肽的提取方法。

背景技術(shù)：

膠原蛋白作為一種重要的生物體組織結(jié)構(gòu)蛋白多肽，越來越引起人們的關(guān)注和興趣，市場潛力巨大，經(jīng)濟價值較高。與大分子蛋白質(zhì)相比，膠原蛋白小分子活性多肽不僅具有易于被人體吸收、利用率高、毒性和免疫原性低等特點，還具有高效的抗氧化、抗菌和抗癌等藥理作用，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、美容保健和食品行業(yè)。

從不同原料中提取多肽的傳統(tǒng)工藝主要可分為五類，即酸法、堿法、酶法、鹽法以及熱水浸提法，其基本原理都是根據(jù)多肽的特性，改變蛋白質(zhì)的外界環(huán)境，把多肽從其他蛋白質(zhì)中分離出來。酸法和堿法是分別將多肽在酸性和堿性環(huán)境下提取出來的方法，酸法在多肽的提取工藝中應(yīng)用比較廣泛，而堿法報道很少；鹽法是將原料在一定濃度的鹽溶液中提取出來，主要使用的鹽有氯化鈉、氯化鉀和乙酸鈉。以上三種方法雖然工藝簡單，成本也較低，但是由于提取過程中需要使用大量的淡水和酸堿鹽，屬于高能耗的提取方法，排放的酸堿鹽會對周圍生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生不利影響，不符合綠色經(jīng)濟和可持續(xù)性發(fā)展理念。而熱水浸提法需要使用大量的淡水和能源，不符合國家及世界經(jīng)濟發(fā)展的主流。生物酶法是利用酶反應(yīng)的溫和高效性在一定的環(huán)境條件下將多肽從不同的原料中提起出來的方法，可克服上述其他工藝的不足，是一種升級的工藝。

深海魚富含優(yōu)質(zhì)的高活性膠原蛋白，市場需求量巨大。而目前業(yè)內(nèi)尚未開發(fā)出針對小分子深海魚多肽提取的行之有效的方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：提供一種小分子深海魚多肽的提取方法，該提取方法將生物酶解技術(shù)和膜技術(shù)進行科學(xué)合理的整合，可最大限度利用原料和復(fù)合酶價值，降低小分子深海魚多肽的生產(chǎn)成本，有效提高小分子深海魚多肽的提取率和純度，且提取后產(chǎn)生的水資源可循環(huán)利用，降低生產(chǎn)能耗。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種小分子深海魚多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)以去內(nèi)臟并洗凈的深海魚為原料，將原料經(jīng)工業(yè)級粉碎機粉碎至粒徑0.1～20mm的小塊后放入生物酶解罐中，再向生物酶解罐中加入原料體積1～6倍的水，通過復(fù)合酶對原料進行復(fù)合酶解處理，其中，復(fù)合酶為胰蛋白酶和膠原蛋白酶，胰蛋白酶的添加量為原料重量的0.1～1.8％，膠原蛋白酶的添加量為原料重量的0.2～2.2％，復(fù)合酶解處理的處理條件為：反應(yīng)溫度為37～65℃，pH值為6.0～9.0，反應(yīng)時間為4～20小時，復(fù)合酶解處理后得到酶解產(chǎn)物；

(2)將酶解產(chǎn)物倒入超濾設(shè)備中，首先通過截留分子量為5000～80000道爾頓的超濾膜進行過濾，再通過截留分子量為40～100道爾頓的納濾膜進行脫鹽濃縮，得到含有小分子多肽的漿液，最后對該漿液進行噴粉干燥，即得到高純度的小分子深海魚多肽成品。

作為優(yōu)選，上述小分子深海魚多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)以去內(nèi)臟并洗凈的深海魚為原料，將原料經(jīng)工業(yè)級粉碎機粉碎至粒徑0.1～10mm的小塊后放入生物酶解罐中，再向生物酶解罐中加入原料體積1～4倍的水，通過復(fù)合酶對原料進行復(fù)合酶解處理，其中，復(fù)合酶為胰蛋白酶和膠原蛋白酶，胰蛋白酶的添加量為原料重量的0.1～1.0％，膠原蛋白酶的添加量為原料重量的0.2～1.2％，復(fù)合酶解處理的處理條件為：反應(yīng)溫度為37～65℃，pH值為6.5～8.0，反應(yīng)時間為4～12小時，復(fù)合酶解處理后得到酶解產(chǎn)物；

(2)將酶解產(chǎn)物倒入超濾設(shè)備中，首先通過截留分子量為5000～30000道爾頓的超濾膜進行過濾，再通過截留分子量為50～100道爾頓的納濾膜進行脫鹽濃縮，得到含有小分子多肽的漿液，最后對該漿液進行噴粉干燥，即得到高純度的小分子深海魚多肽成品。

或者，作為優(yōu)選，上述小分子深海魚多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)以去內(nèi)臟并洗凈的深海魚為原料，將原料經(jīng)工業(yè)級粉碎機粉碎至粒徑1～15mm的小塊后放入生物酶解罐中，再向生物酶解罐中加入原料體積2～6倍的水，通過復(fù)合酶對原料進行復(fù)合酶解處理，其中，復(fù)合酶為胰蛋白酶和膠原蛋白酶，胰蛋白酶的添加量為原料重量的0.2～1.5％，膠原蛋白酶的添加量為原料重量的0.3～2.0％，復(fù)合酶解處理的處理條件為：反應(yīng)溫度為45～60℃，pH值為6.0～8.0，反應(yīng)時間為6～18小時，復(fù)合酶解處理后得到酶解產(chǎn)物；

(2)將酶解產(chǎn)物倒入超濾設(shè)備中，首先通過截留分子量為10000～80000道爾頓的超濾膜進行過濾，再通過截留分子量為40～90道爾頓的納濾膜進行脫鹽濃縮，得到含有小分子多肽的漿液，最后對該漿液進行噴粉干燥，即得到高純度的小分子深海魚多肽成品。

作為優(yōu)選，對于復(fù)合酶解處理得到的酶解產(chǎn)物，經(jīng)過高速離心機去除雜質(zhì)后，再倒入超濾設(shè)備中。高速離心機可分離酶解產(chǎn)物中的雜質(zhì)，純化酶解產(chǎn)物，進一步提高小分子深海魚多肽成品的純度。

作為優(yōu)選，所述的深海魚為金槍魚、三文魚和鱈魚中的一種或幾種。金槍魚、三文魚和鱈魚是常見的優(yōu)質(zhì)海洋經(jīng)濟深海魚類，來源廣泛、易得，是首選的提取小分子多肽的原料。在實際應(yīng)用中，也可以選用其他深海魚作為原料。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：本發(fā)明提供的一種小分子深海魚多肽的提取方法，針對深海魚的原料特點，將生物酶解技術(shù)和膜技術(shù)進行科學(xué)合理的整合，該提取方法采用工業(yè)級粉碎機對原料進行前期粉碎處理，再經(jīng)過特定的復(fù)合酶進行生物酶解，水解為活性小分子多肽，先后經(jīng)過特定截留分子量的超濾膜和納濾膜分離濃縮提純后，得到含有一定濃度的活性小分子多肽的漿液，最后對漿液進行噴粉干燥，即得到高純度的小分子深海魚多肽成品。本發(fā)明提取方法可最大限度利用原料和復(fù)合酶價值，降低小分子深海魚多肽的生產(chǎn)成本，有效提高小分子深海魚多肽的提取率和純度，提取后產(chǎn)生的水資源可循環(huán)利用，降低生產(chǎn)能耗。

附圖說明

圖1為實施例1的小分子深海魚多肽的色譜圖。

具體實施方式

以下結(jié)合附圖實施例對本發(fā)明作進一步詳細(xì)描述。

實施例1的小分子深海魚多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)以去內(nèi)臟并洗凈的金槍魚、三文魚和鱈魚為原料，將原料經(jīng)工業(yè)級粉碎機粉碎至粒徑0.1～10mm的小塊后放入生物酶解罐中，再向生物酶解罐中加入原料體積2倍的水，通過復(fù)合酶對原料進行復(fù)合酶解處理，其中，復(fù)合酶為胰蛋白酶和膠原蛋白酶，胰蛋白酶的添加量為原料重量的0.5％，膠原蛋白酶的添加量為原料重量的0.5％，復(fù)合酶解處理的處理條件為：反應(yīng)溫度為45℃，pH值為7.0，反應(yīng)時間為10小時，復(fù)合酶解處理后得到酶解產(chǎn)物；

(2)對于復(fù)合酶解處理得到的酶解產(chǎn)物，經(jīng)過高速離心機去除雜質(zhì)后，再倒入超濾設(shè)備中，首先通過截留分子量為5000～30000道爾頓的超濾膜進行過濾，再通過截留分子量為50～100道爾頓的納濾膜進行脫鹽濃縮，得到含有小分子多肽的漿液，最后對該漿液進行噴粉干燥，即得到實施例1的高純度的小分子深海魚多肽成品。

實施例2的小分子深海魚多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)以去內(nèi)臟并洗凈的金槍魚為原料，將原料經(jīng)工業(yè)級粉碎機粉碎至粒徑0.1～10mm的小塊后放入生物酶解罐中，再向生物酶解罐中加入原料體積1倍的水，通過復(fù)合酶對原料進行復(fù)合酶解處理，其中，復(fù)合酶為胰蛋白酶和膠原蛋白酶，胰蛋白酶的添加量為原料重量的0.3％，膠原蛋白酶的添加量為原料重量的0.8％，復(fù)合酶解處理的處理條件為：反應(yīng)溫度為55℃，pH值為6.5，反應(yīng)時間為5小時，復(fù)合酶解處理后得到酶解產(chǎn)物；

(2)對于復(fù)合酶解處理得到的酶解產(chǎn)物，經(jīng)過高速離心機去除雜質(zhì)后，再倒入超濾設(shè)備中，首先通過截留分子量為5000～30000道爾頓的超濾膜進行過濾，再通過截留分子量為50～100道爾頓的納濾膜進行脫鹽濃縮，得到含有小分子多肽的漿液，最后對該漿液進行噴粉干燥，即得到實施例2的高純度的小分子深海魚多肽成品。

實施例3的小分子深海魚多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)以去內(nèi)臟并洗凈的三文魚為原料，將原料經(jīng)工業(yè)級粉碎機粉碎至粒徑0.1～10mm的小塊后放入生物酶解罐中，再向生物酶解罐中加入原料體積4倍的水，通過復(fù)合酶對原料進行復(fù)合酶解處理，其中，復(fù)合酶為胰蛋白酶和膠原蛋白酶，胰蛋白酶的添加量為原料重量的1.0％，膠原蛋白酶的添加量為原料重量的0.7％，復(fù)合酶解處理的處理條件為：反應(yīng)溫度為60℃，pH值為9.0，反應(yīng)時間為20小時，復(fù)合酶解處理后得到酶解產(chǎn)物；

(2)將酶解產(chǎn)物倒入超濾設(shè)備中，首先通過截留分子量為5000～30000道爾頓的超濾膜進行過濾，再通過截留分子量為50～100道爾頓的納濾膜進行脫鹽濃縮，得到含有小分子多肽的漿液，最后對該漿液進行噴粉干燥，即得到實施例3的高純度的小分子深海魚多肽成品。

實施例4的小分子深海魚多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)以去內(nèi)臟并洗凈的金槍魚、三文魚和鱈魚為原料，將原料經(jīng)工業(yè)級粉碎機粉碎至粒徑1～15mm的小塊后放入生物酶解罐中，再向生物酶解罐中加入原料體積6倍的水，通過復(fù)合酶對原料進行復(fù)合酶解處理，其中，復(fù)合酶為胰蛋白酶和膠原蛋白酶，胰蛋白酶的添加量為原料重量的0.3％，膠原蛋白酶的添加量為原料重量的0.6％，復(fù)合酶解處理的處理條件為：反應(yīng)溫度為37℃，pH值為8.0，反應(yīng)時間為12小時，復(fù)合酶解處理后得到酶解產(chǎn)物；

(2)將酶解產(chǎn)物倒入超濾設(shè)備中，首先通過截留分子量為10000-80000道爾頓的超濾膜進行過濾，再通過截留分子量為40-90道爾頓的納濾膜進行脫鹽濃縮，得到含有小分子多肽的漿液，最后對該漿液進行噴粉干燥，即得到實施例4的高純度的小分子深海魚多肽成品。

實施例5的小分子深海魚多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)以去內(nèi)臟并洗凈的鱈魚為原料，將原料經(jīng)工業(yè)級粉碎機粉碎至粒徑1～15mm的小塊后放入生物酶解罐中，再向生物酶解罐中加入原料體積5倍的水，通過復(fù)合酶對原料進行復(fù)合酶解處理，其中，復(fù)合酶為胰蛋白酶和膠原蛋白酶，胰蛋白酶的添加量為原料重量的1.0％，膠原蛋白酶的添加量為原料重量的2.0％，復(fù)合酶解處理的處理條件為：反應(yīng)溫度為48℃，pH值為6.0，反應(yīng)時間為16小時，復(fù)合酶解處理后得到酶解產(chǎn)物；

(2)對于復(fù)合酶解處理得到的酶解產(chǎn)物，經(jīng)過高速離心機去除雜質(zhì)后，再倒入超濾設(shè)備中，首先通過截留分子量為10000～80000道爾頓的超濾膜進行過濾，再通過截留分子量為40～90道爾頓的納濾膜進行脫鹽濃縮，得到含有小分子多肽的漿液，最后對該漿液進行噴粉干燥，即得到實施例5的高純度的小分子深海魚多肽成品。

實施例6的小分子深海魚多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)以去內(nèi)臟并洗凈的金槍魚、三文魚和鱈魚為原料，將原料經(jīng)工業(yè)級粉碎機粉碎至粒徑1～15mm的小塊后放入生物酶解罐中，再向生物酶解罐中加入原料體積2倍的水，通過復(fù)合酶對原料進行復(fù)合酶解處理，其中，復(fù)合酶為胰蛋白酶和膠原蛋白酶，胰蛋白酶的添加量為原料重量的1.5％，膠原蛋白酶的添加量為原料重量的1.0％，復(fù)合酶解處理的處理條件為：反應(yīng)溫度為60℃，pH值為7.5，反應(yīng)時間為6小時，復(fù)合酶解處理后得到酶解產(chǎn)物；

(2)將酶解產(chǎn)物倒入超濾設(shè)備中，首先通過截留分子量為10000～80000道爾頓的超濾膜進行過濾，再通過截留分子量為40～90道爾頓的納濾膜進行脫鹽濃縮，得到含有小分子多肽的漿液，最后對該漿液進行噴粉干燥，即得到實施例6的高純度的小分子深海魚多肽成品。

目測實施例1～實施例6的小分子深海魚多肽成品均為白色粉末。對于實施例1的小分子深海魚多肽成品，通過高效液相色譜儀并依據(jù)GB/T 22729-2008《海洋魚低聚肽粉》檢測肽分子量分布，得到的色譜圖見圖1，分子量檢測結(jié)果見表1。

表1實施例1的小分子深海魚多肽成品的分子量檢測結(jié)果

從表1可見，實施例1的小分子深海魚多肽成品中，分子量小于2000道爾頓的多肽的重量比為97.89％。