本發(fā)明涉及兩種對映亞谷氨酸類正電子發(fā)射斷層(PET)顯像劑(N-2-¹⁸F-氟丙酰基)-L-α-谷氨酸(¹⁸F-NFPGlu)和(N-2-¹⁸F-氟丙?；?-D-α-谷氨酸(¹⁸F-DFPGlu)的放射合成方法。本發(fā)明還涉及(N-2-¹⁸F-氟丙酰基)-β-谷氨酸(¹⁸F-NFPBGlu)的放射合成方法。

本發(fā)明還涉及¹⁸F-NFPGlu前體、¹⁸F-DFPGlu前體和¹⁸F-NFPBGlu前體的合成方法。

背景技術(shù)：

PET利用正電子發(fā)射體的核素標(biāo)記如一些生理需要的化合物或代謝底物如葡萄糖、脂肪酸、氨基酸、受體的配體及水等，引入體內(nèi)后，應(yīng)用正電子發(fā)射斷層(PET)掃描機而獲得的體內(nèi)生物化學(xué)影像。它以其能顯示臟器或組織的代謝特性及受體的功能與分布而受到臨床廣泛的重視，也稱之為“活體生化顯像”。¹⁸F-氟代脫氧葡萄糖(¹⁸F-FDG)是目前最常用的一種糖代謝型PET顯像劑，己廣泛地應(yīng)用于臨床常規(guī)檢查，如腫瘤的良惡性鑒別、評價腫瘤的惡性程度以及腫瘤治療效果監(jiān)測等。但¹⁸F-FDG存在特異性差、某些腫瘤細(xì)胞對它不攝取以及炎癥細(xì)胞也有攝取等問題，從而造成對腫瘤的鑒別診斷會出現(xiàn)一定假陽性或假陰性結(jié)果(聶大紅,唐剛?cè)A.腫瘤氨基酸代謝PET顯像研究進(jìn)展.同位素,2015,28(4):15-24)。

腫瘤細(xì)胞的生長除了需要大量攝取葡萄糖，還需要大量氨基酸，尤其是必需天然氨基酸。腫瘤惡性化通常會增加氨基酸轉(zhuǎn)運，對于腫瘤分子顯像，氨基酸轉(zhuǎn)運可能比氨基酸參入蛋白質(zhì)合成更為重要(聶大紅,唐剛?cè)A.腫瘤氨基酸代謝PET顯像研究進(jìn)展.同位素,2015,28(4):15-24)。靶向氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白(轉(zhuǎn)運體)的氨基酸可增加腫瘤細(xì)胞攝取，炎癥組織積聚氨基酸較低或不攝取，因而可提高腫瘤特異性攝取能力。這樣，一系列反映氨基酸轉(zhuǎn)運的PET顯像劑得到迅速發(fā)展。其中，靶向氨基酸轉(zhuǎn)運體的亞氨基酸類PET顯像劑顯示較好應(yīng)用前景(Hu KZ,Wang H,Huang T,Tang G*,Liang X,He S,Tang X.Synthesis and biological evaluation of N-(2-[¹⁸F]Fluoropropionyl)-L-methionine for tumor imaging.Nucl Med Biol,2013；40(7):926-932)。

我們以前報道了用2-¹⁸F-氟代丙酰基對硝基苯酯(¹⁸F-NFP)標(biāo)記L-α-谷氨酸得到(N-2-¹⁸F-氟丙?；?-L-α-谷氨酸(¹⁸F-NFPGlu)，它是一種靶向腫瘤氨基酸轉(zhuǎn)運體N-取代正電子核素標(biāo)記亞谷氨酸PET顯像劑，在多種腫瘤顯像方面優(yōu)于¹⁸F-FDG(Hu K,Du K,Tang G*,Yao S,Wang H,Liang X,Yao B,Huang T,Zang L.Radiosynthesis and biological evaluation of N-[¹⁸F]labeled glutamic acid as a tumor metabolic imaging tracer.Plos One,2014,9(3):e93262(1-9).doi:10.1371/journal.pone.0093262)。但是，現(xiàn)有的¹⁸F-NFPGlu的放射合成涉及以2-丙氨酸乙酯為前體，通過“一鍋三步法”制備標(biāo)記輔基¹⁸F-NFP，¹⁸F-NFP與L-α-谷氨酸二乙酯的NH₂偶聯(lián)反應(yīng)生成¹⁸F標(biāo)記中間體，然后在氫氧化鈉水溶液中水解獲得¹⁸F-NFPGlu。該放射合成時間長(130min)，放化產(chǎn)率不理想。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是為解決亞谷氨酸類PET顯像劑(N-2-¹⁸F-氟丙?；?-L-α-谷氨酸(¹⁸F-NFPGlu)現(xiàn)有放射合成用時長、放化產(chǎn)率較低和不利于自動化合成的難題，設(shè)計合成了新型前體且通過簡單的“兩步在柱水解法”，快速、高效合成了¹⁸F-NFPGlu。該法也已用于其對映體(N-2-¹⁸F-氟丙酰基)-D-α-谷氨酸(¹⁸F-DFPGlu)和β-型亞谷氨酸類似物(N-2-¹⁸F-氟丙?；?-β-谷氨酸(¹⁸F-NFPBGlu)的制備。

本發(fā)明使用¹⁸F-FDG自動化合成儀，采用簡單、快速和高效的“兩步在柱水解法”，實現(xiàn)了¹⁸F-NFPGlu的自動化合成。該法的應(yīng)用也解決了¹⁸F-DFPGlu和¹⁸F-NFPBGlu的自動化生產(chǎn)難題。

本發(fā)明還涉及¹⁸F-NFPGlu前體、¹⁸F-DFPGlu前體和¹⁸F-NFPBGlu前體的合成與應(yīng)用，即前體(N-2-溴-丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯、(N-2-溴-丙酰基)-D-α-谷氨酸二乙酯和(N-溴-丙?；?-β-谷氨酸二乙酯的多步合成，并用于其標(biāo)準(zhǔn)品的制備。其相應(yīng)前體也可是(N-2-對甲苯磺酸-丙酰基)-L-α-谷氨酸二乙酯、(N-2-對甲苯磺酸-丙?；?-D-α-谷氨酸二乙酯和(N-對甲苯磺酸-丙?；?-β-谷氨酸二乙酯。但以對甲苯磺酸基(OTs)代替溴為離去基團(tuán)，放化合成收率低，應(yīng)優(yōu)先選用N-溴-丙?；绑w。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的。

本發(fā)明涉及的亞谷氨酸類PET顯像劑(N-2-¹⁸F-氟丙酰基)-L-α-谷氨酸(¹⁸F-NFPGlu)的制備，以(N-2-溴-丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯為前體，經(jīng)親核氟化和在柱水解兩步反應(yīng)，完成其放射合成。以該前體為原料，經(jīng)氟化反應(yīng)生成中間體(N-2-¹⁸F-氟丙酰基)-L-α-谷氨酸二乙酯。加水釋稀后，通過一個Sep-Pak Al₂O₃ N Plus柱和兩個Sep-Pak plus C18串聯(lián)小柱，放射性中間體捕獲在Sep-Pak plus C18小柱中。加氫氧化鈉溶液至小柱中，中間體在Sep-Pak plus C18小柱中發(fā)生水解反應(yīng)。用水淋洗該C18小柱，淋洗液進(jìn)一步通過Sep-Pak SCX小柱分離純化和中和后，過無菌濾膜得¹⁸F-NFPGlu注射液。其合成路線如反應(yīng)式1所示。¹⁸F-DFPGlu和¹⁸F-NFPBGlu可用類似方法完成其放射合成，其合成路線如下列反應(yīng)式(式2、式3)所示。

本發(fā)明還涉及¹⁸F-NFPGlu前體、¹⁸F-DFPGlu前體和¹⁸F-NFPBGlu前體的合成與應(yīng)用。

L-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽、D-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽或β-谷氨酸二乙酯分別與2-溴丙酰溴在無水二氯甲烷和N,N-二異丙基乙胺(或三乙胺)溶液中反應(yīng)，經(jīng)一步法合成溴代前體(N-2-溴-丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯、(N-2-溴-丙酰基)-D-α-谷氨酸二乙酯或(N-溴-丙?；?-β-谷氨酸二乙酯。其溴代前體分別經(jīng)氟化和水解兩步反應(yīng)可用于制備其標(biāo)準(zhǔn)品。

也可用簡單方法合成其對甲苯磺酸基(OTs)前體：(N-2-對甲苯磺酸-丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯、(N-2-對甲苯磺酸-丙酰基)-D-α-谷氨酸二乙酯或(N-對甲苯磺酸-丙?；?-β-谷氨酸二乙酯。但以對甲苯磺酸基(OTs)代替前體中溴離去基團(tuán)，其放化產(chǎn)率較低。

¹⁸F-NFPGlu溴代前體、¹⁸F-DFPGlu溴代前體和¹⁸F-NFPBGlu溴代前體的合成路線分別如式4、式6、式8所示，其標(biāo)準(zhǔn)品的合成路線分別如式5、式7、式9所示。

亞谷氨酸類化合物¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu或¹⁸F-NFPBGlu用類似方法完成其自動化生產(chǎn)。分別以(N-2-溴-丙酰基)-L-α-谷氨酸二乙酯、(N-2-溴-丙酰基)-D-α-谷氨酸二乙酯或(N-溴-丙?；?-β-谷氨酸二乙酯為前體，在氨基聚醚Kryptofix2.2.2(K_2.2.2)的催化下，與¹⁸F^-發(fā)生親核氟化反應(yīng)，¹⁸F標(biāo)記放射性中間體經(jīng)固相萃取柱捕獲后，進(jìn)一步加氫氧化鈉水溶液至固相萃取柱，在固相柱上發(fā)生水解反應(yīng)，用¹⁸F-FDG自動化合成儀實現(xiàn)其全自動化生產(chǎn)。¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu和¹⁸F-NFPBGlu注射液呈無色或淡黃色澄清溶液，pH值在6.0-7.0之間。以¹⁸F^-為起始原料，¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu和¹⁸F-NFPBGlu未衰減校正放化產(chǎn)率為15±5％，總放化合成時間為40min(n＝10)，比活度不小于3.7×10¹⁰Bq/mmol。經(jīng)放射性HPLC檢測，¹⁸F^-保留時間(Rt)約為2.5min，¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu和¹⁸F-NFPBGlu的保留時間(Rt)為3.5-4.0min，與其標(biāo)準(zhǔn)品¹⁹F-NFPGlu、¹⁹F-DFPGlu和¹⁹F-NFPBGlu保留時間一致。經(jīng)放射性HPLC測定，¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu和¹⁸F-NFPBGlu的放射化學(xué)純度均大于95％。¹⁸F-NFPGlu和¹⁸F-DFPGlu對映純度大于90％。

本發(fā)明涉及¹⁸F-NFPGlu前體、¹⁸F-DFPGlu前體的有機合成以及以相應(yīng)前體為起始原料經(jīng)過簡單的“兩步在柱水解法”，實現(xiàn)了短時間、高產(chǎn)率、自動化放射合成¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu。這些方法也可用于¹⁸F-NFPBGlu前體的制備以及¹⁸F標(biāo)記β-谷氨酸-NH2基的亞氨基酸類化合物(N-2-¹⁸F-氟丙?；?-β-谷氨酸(¹⁸F-NFPBGlu)的自動化合成。

【圖面說明】

圖1為(N-2-溴丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯在CDCl₃中的¹H-NMR譜圖；

圖2為(N-2-氟丙酰基)-L-α-谷氨酸在MeOD中的¹H-NMR譜圖；

圖3為(N-溴丙酰基)-β-谷氨酸二乙酯在CDCl₃中的¹H-NMR譜圖；

圖4為(N-氟丙?；?-β-谷氨酸在MeOD中的¹H-NMR譜圖；

圖5為¹⁸F-NFPGlu自動化合成工藝圖；

圖6為¹⁸F-NFPGlu放射HPLC圖譜，紫外為210nm；

圖7為¹⁸F-NFPBGlu放射HPLC圖譜，紫外為210nm；

圖8為荷SPC-A-1裸鼠模型¹⁸F-FDG(A、C和E)、¹⁸F-NFPGlu(圖B)、¹⁸F-NFPBGlu(圖D)和¹⁸F-DFPGlu(圖F)PET顯像圖。

【具體實施方式】

實施例1前體和標(biāo)準(zhǔn)品的制備

1.1前體(N-2-溴丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯和標(biāo)準(zhǔn)品(N-2-¹⁹F-氟丙?；?-L-α-谷氨酸(¹⁹F-NFPGlu)的制備。其合成路線分別如反應(yīng)式4和5所示。

在0℃和氮氣保護(hù)下，2-溴丙酰溴(3.24g,15.00mmol)被加入到L-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽(3.17g,15.00mmol)與N,N-二異丙基乙胺(4.07g,31.50mmol)的無水二氯甲烷(50mL)溶液中，于室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后用水稀釋(100mL),用二氯甲烷萃取三次，每次50ml(3*50mL),合并有機相，10％檸檬酸水溶液(100mL)、水(100mL)和飽和氯化鈉水溶液(100mL)各洗一次，后用無水Na₂SO₄干燥，過濾，濃縮除去有機溶劑得到白色固體(N-2-溴丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯(3.81g,82％)。¹H-NMR鑒定結(jié)果見圖1。(N-2-對甲苯磺?；?-L-α-谷氨酸二乙酯的制備方法與(N-2-溴丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯類似。

在氮氣保護(hù)下，1M四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液4mL被加入到(2S)-2-(2-溴丙?；?戊二酸二乙酯(0.62g,2.00mmol)的乙腈溶液(10mL)中，加熱回流10h，除去溶劑后粗產(chǎn)品柱層析得白色固體(N-2-氟丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯(0.19g,39％)。

向(N-2-氟丙酰基)-L-α-谷氨酸二乙酯的四氫呋喃(190mg,0.68mmol)、甲醇與水各10mL的混合溶液中加入氫氧化鋰一水合物(142mg,3.4mmol)。于室溫反應(yīng)12h后濃縮反應(yīng)液。加水稀釋，乙醚萃取兩次(2*20mL)，棄去有機相，水相使用1N鹽酸溶液調(diào)pH至4，乙酸乙酯(3*30mL)萃取三次，合并有機相，分別使用水、飽和食鹽水40mL各洗一次，無水硫酸鈉干燥，除去溶劑得淡黃色油狀物標(biāo)準(zhǔn)品¹⁹F-NFPGlu(110mg,81％)。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ4.98(ddd,J＝13.5,6.7,2.2Hz,1H),4.92–4.73(m,1H),4.38(qd,J＝7.7,4.1Hz,1H),2.31(dd,J＝9.4,5.4Hz,2H),2.22–2.06(m,1H),2.00–1.81(m,1H),1.43(ddd,J＝24.3,6.8,2.3Hz,3H).MS(ESI):m/z計算C₈H₁₂FNO₅[M+Na]:221.1,測得:221.0(見圖2)。

1.2前體(N-2-溴丙?；?-D-α-谷氨酸二乙酯和標(biāo)準(zhǔn)品(N-2-¹⁹F-氟丙?；?-D-α-谷氨酸(¹⁹F-DFPGlu)的制備。其合成步驟可參照上述前體(N-2-溴丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯和標(biāo)準(zhǔn)品(N-2-¹⁹F-氟丙?；?-L-α-谷氨酸(¹⁹F-NFPGlu)的制備方法，其合成路線分別如反應(yīng)式6和7所示。

在0℃和氮氣保護(hù)下，2-溴丙酰溴(3.24g,15.00mmol)被加入到D-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽(3.17g,15.00mmol)與N,N-二異丙基乙胺(4.07g,31.50mmol)的無水二氯甲烷(50mL)溶液中，于室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后用水稀釋(100mL),用二氯甲烷萃取三次(3*50mL),合并有機相，10％檸檬酸水溶液(100mL)、水(100mL)和飽和氯化鈉水溶液(100mL)各洗一次，后用無水Na₂SO₄干燥，過濾，濃縮除去有機溶劑得到白色固體(N-2-溴丙?；?-D-α-谷氨酸二乙酯(3.81g,82％)。(N-2-對甲苯磺?；?-D-α-谷氨酸二乙酯的制備方法與(N-2-溴丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯類似。

在氮氣保護(hù)下，1M四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液4mL被加入到(2R)-2-(2-溴丙?；?戊二酸二乙酯(0.62g,2.00mmol)的乙腈溶液(10mL)中，加熱回流10h，除去溶劑后粗產(chǎn)品柱層析，得白色固體(N-2-氟丙?；?-D-α-谷氨酸二乙酯(0.19g,39％)。

在(N-2-氟丙?；?-D-α-谷氨酸二乙酯的四氫呋喃(190mg,0.68mmol)以及甲醇和水各10mL的混合溶液中，加入氫氧化鋰一水合物(142mg,3.4mmol)。于室溫反應(yīng)12h后濃縮反應(yīng)液。加水稀釋，乙醚萃取兩次(2*20mL)，棄去有機相。水相使用1N鹽酸溶液調(diào)pH至4，乙酸乙酯(3*30mL)萃取三次，合并有機相。分別使用水、飽和食鹽水40mL各洗一次，無水硫酸鈉干燥。除去溶劑得淡黃色油狀物標(biāo)準(zhǔn)品¹⁹F-DFPGlu(110mg,81％)。

1.3前體(N-溴丙酰基)-β-谷氨酸二乙酯和標(biāo)準(zhǔn)品(N-2-氟丙?；?-β-谷氨酸(¹⁹F-NFPBGlu)的制備。其合成路線分別如反應(yīng)式8和9所示。

在0℃和氮氣保護(hù)下，2-溴丙酰溴(2.69g,12.45mmol)被滴入到β-谷氨酸二乙酯(2.53g,12.45mmol)與三乙胺(1.39g,13.70mmol)的無水二氯甲烷溶液(60mL)中。自然升至室溫反應(yīng)8h，反應(yīng)結(jié)束后用水稀釋(100mL),用二氯甲烷萃取三次(3*50mL),合并有機相，10％檸檬酸水溶液(100mL)、水(100mL)和飽和氯化鈉水溶液(100mL)各洗一次，后用無水Na₂SO₄干燥，過濾，濃縮除去有機溶劑得到白色固體(N-溴丙?；?-β-谷氨酸二乙酯(3.53g,84％)。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.58(dp,J＝9.0,5.9Hz,1H),4.37(q,J＝7.0Hz,1H),4.16(q,J＝7.1Hz,4H),2.77–2.61(m,4H),1.85(d,J＝7.0Hz,3H),1.30–1.24(m,6H).MS(ESI):m/z計算C₁₂H₂₀BrNO₅[M+Na]:337.0,測得:337.1(見圖3)。(N-2-對甲苯磺?；?-β-谷氨酸二乙酯的制備方法與(N-溴丙酰基)-β-谷氨酸二乙酯類似。

在氮氣保護(hù)下，1M四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液6mL被加入到3-(2-溴丙?；?戊二酸二乙酯(0.93g,3.00mmol)的無水乙腈(15mL)中，加熱回流10h，除去溶劑后粗產(chǎn)品柱層析得白色固體(N-氟丙酰基)-β-谷氨酸二乙酯(0.31g,40％)。向3-(2-溴丙?；?戊二酸二乙酯(200mg,0.72mmol)的四氫呋喃、甲醇與水各10mL的混合溶液中加入氫氧化鋰一水合物(149mg,3.57mmol)。于室溫反應(yīng)12h后濃縮反應(yīng)液。加水稀釋，乙醚萃取兩次(2*20mL)，棄去有機相，水相使用1N鹽酸溶液調(diào)pH至4，乙酸乙酯(3*30mL)萃取三次，合并有機相，分別使用水、飽和食鹽水40mL各洗一次，無水硫酸鈉干燥，除去溶劑得淡黃色油狀物標(biāo)準(zhǔn)品¹⁹F-NFPBGlu(142mg,90％)。¹H-NMR NMR(400MHz,CD₃OD)δ5.00(q,J＝6.8Hz,1H),4.86(d,J＝6.7Hz,1H),4.60(p,J＝6.6Hz,1H),2.64(dd,J＝6.6,1.3Hz,4H),1.54–1.44(m,3H).MS(ESI):m/z計算C₈H₁₂FNO₅[M-H]:221.0,測得:220.9(見圖4)。

實施例2亞谷氨酸類PET顯像劑的合成

2.1亞谷氨酸類PET顯像劑的合成方法。其合成路線分別見反應(yīng)式1、2、3。

本發(fā)明涉及的(N-2-¹⁸F-氟丙?；?-L-α-谷氨酸(¹⁸F-NFPGlu)，以(N-2-溴-丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯為前體原料，經(jīng)親核氟化和“在柱水解”兩步反應(yīng)，可實現(xiàn)其放射合成。1)氟化反應(yīng)，(N-2-溴-丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯，在氨基聚醚Kryptofix2.2.2(K_2.2.2)的催化下與[K/K2.2.2]⁺¹⁸F^-發(fā)生親核取代反應(yīng)，生成¹⁸F標(biāo)記的中間體(N-2-¹⁸F-氟丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯。加水稀釋后，混合溶液通過一個Sep-Pak Al₂O₃N Plus柱和兩個Sep-Pak plus C18小柱的串聯(lián)柱，放射性中間體捕獲在Sep-Pak plus C18小柱上。2)水解反應(yīng)，加2N氫氧化鈉溶液至小柱中，Sep-Pak plus C18小柱的中間體在堿性條件下發(fā)生水解反應(yīng)。用水淋洗該C18小柱，淋洗液進(jìn)一步通過Sep-Pak SCX小柱分離純化后，過無菌濾膜得¹⁸F-NFPGlu注射液。

(N-2-¹⁸F-氟丙?；?-D-α-谷氨酸(¹⁸F-DFPGlu)的放射合成，以(N-2-溴-丙?；?-D-α-谷氨酸二乙酯前體原料，按上述相類似方法，經(jīng)氟化和在柱堿水解法，實現(xiàn)其放射合成。

(N-2-¹⁸F-氟丙?；?-β-谷氨酸(¹⁸F-NFPBGlu)的放射合成，以(N-溴-丙?；?-β-谷氨酸二乙酯為前體原料，按上述相類似方法，經(jīng)氟化和6N NaOH在柱水解法，實現(xiàn)其放射合成。

也可分別以(N-2-對甲苯磺酸-丙?；?-L-α-谷氨酸二乙酯、(N-2-對甲苯磺酸-丙酰基)-D-α-谷氨酸二乙酯或(N-對甲苯磺酸-丙?；?-β-谷氨酸二乙酯為前體，分別實現(xiàn)¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu或¹⁸F-NFPBGlu的放射合成。但以對甲苯磺酸基(OTs)代替溴為離去基團(tuán)，其放化產(chǎn)率較低。

2.2自動化合成

采用“在柱水解法”制備¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu或¹⁸F-NFPBGlu，其自動化合成流程示于圖5。用¹⁸F-FDG自動化合成儀(北京善為正子醫(yī)藥技術(shù)有限公司生產(chǎn))在計算機控制下，完成¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu或¹⁸F-NFPBGlu的自動化生產(chǎn)。主要包括：(1)¹⁸F^-離子捕集。由回旋加速器通過¹⁸O(p,n)¹⁸F核反應(yīng)生產(chǎn)的¹⁸F^-離子，在N₂氣載帶下，經(jīng)過置于放射性活度計中的Sep-Pak light QMA陰離子交換小柱，¹⁸F^-離子被捕獲在小柱中，¹⁸O-水被收集在回收瓶中。(2)減壓蒸發(fā)溶劑。在N₂加壓作用下，1號瓶中含K₂CO₃和K_2.2.2的乙腈水溶液(1.0-1.5mL)被傳輸經(jīng)過Sep-Pak light QMA陰離子交換小柱，將¹⁸F^-離子洗脫入密閉反應(yīng)瓶中形成[K/K_2.2.2]⁺¹⁸F^-絡(luò)合物混合溶液，加熱混合溶液至95℃，減壓蒸干，得到干燥的[K/K_2.2.2]⁺¹⁸F^-，有機廢氣由置于液氮中的冷阱吸收。(3)放射氟化反應(yīng)。在N₂加壓作用下，3號瓶中的前體(N-2-溴-丙酰基)-谷氨酸二乙酯(5-15mg)【如前述實施例2.1的空間構(gòu)象】的無水乙腈溶液(1mL)被傳入反應(yīng)瓶中，110-115℃加熱反應(yīng)15min。氟化反應(yīng)完成后，冷卻反應(yīng)瓶。(4)固相柱純化捕獲。在N₂氣流作用下，2號瓶中H₂O混合液(4.0-8.0mL)被傳送至反應(yīng)瓶中，氮氣鼓泡混合后，含有¹⁸F標(biāo)記氟化中間體的混合水溶液被傳輸經(jīng)過一個Sep-Pak Al₂O₃N Plus柱和兩個Sep-Pak plus C18串聯(lián)小柱，中間體被Sep-Pak Plus C18小柱捕獲，乙腈與水混合的廢液收集在廢物瓶中。用4號瓶中H₂O(2.0-8.0mL)洗滌小柱，除去Sep-Pak Plus C18中殘留的少量乙腈溶劑，并用N₂吹干。(5)在柱堿水解。5號瓶中氫氧化鈉溶液(1.0mL)被壓入反應(yīng)瓶中，并加載到兩個Sep Pak plus C18小柱中。室溫下，水解反應(yīng)時間約為5-10min。(6)中和與分離純化。在N₂加壓作用下，6號瓶中的水(2.0-10.0mL)洗脫C18小柱中產(chǎn)品。堿性洗脫液經(jīng)Sep-Pak SCX小柱中和以及無菌濾膜處理后，收集在無菌產(chǎn)品瓶中，得¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu或¹⁸F-NFPBGlu注射液。

實施例3 產(chǎn)品純度的測定。

用放射性高效液相色譜(HPLC)測定¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu或¹⁸F-NFPBGlu注射液的放射化學(xué)純度。用確定結(jié)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)品¹⁹F-NFPGlu、¹⁹F-DFPGlu或¹⁹F-NFPBGlu，分別與相應(yīng)的注射液¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu或¹⁸F-NFPBGlu注射液一同注射到HPLC中，以確定其保留時間是否一致，以證實制備的注射液的準(zhǔn)確性。經(jīng)測定其放射化學(xué)純度均大于90％，典型檢測結(jié)果見圖6和圖7。HPLC分析條件：分析柱為ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，流動相為0.1％TFA的乙腈溶液：0.1％TFA的水溶液，行梯度洗脫：0min時，含0.1％TFA的乙腈溶液/0.1％TFA的水溶液：2/98；逐漸升到8min時，0.1％TFA的乙腈溶液/0.1％TFA的水溶液：10/90；再升到20min時，0.1％TFA的乙腈溶液/0.1％TFA的水溶液：80/20。流速為1mL/min，紫外檢測波長210nm。¹⁸F-NFPGlu和¹⁸F-DFPGlu的對映純度用手性流動相法測定，其對映純度均大于90％。

實施例4荷瘤模型小動物PET顯像。

荷SPC-A-1瘤裸鼠模型，每組3只，由尾靜脈分別注射¹⁸F-NFPGlu、¹⁸F-DFPGlu或¹⁸F-NFPBGlu注射液(0.2mL，約3.7-5.5MBq)至裸鼠模型體內(nèi)。于顯像前10min經(jīng)腹腔注射5％水合氯醛(6mL/kg)麻醉裸鼠，放在固定板上膠帶固定，用加熱墊保持體溫。行CT掃描后，在注射顯像劑后不同時間點收集PET數(shù)據(jù)，用軟件(Inevon Research Workplace 4.1)行衰減校正后，迭代重建圖像。勾勒出腫瘤和腦、肌肉等組織的感興趣區(qū)域(ROIs)，測量感興趣區(qū)組織的放射性計數(shù)和體積，計算每克組織注射劑量百分比(％ID/g)，并計算腫瘤/腦、腫瘤/肌肉等放射性攝取相對比值。初步荷瘤模型小動物PET顯像結(jié)果示于圖8(箭頭指向腫瘤)。由圖8可知，給藥后60min時，¹⁸F-NFPGlu和¹⁸F-DFPGlu在腫瘤組織中表現(xiàn)出與¹⁸F-FDG具有相類似較高放射性攝取，而¹⁸F-NFPBGlu在腫瘤組織具有較低放射性攝取。說明¹⁸F-NFPGlu和¹⁸F-DFPGlu在腫瘤PET顯像方面優(yōu)于¹⁸F-NFPBGlu。