本發(fā)明屬于軟鏡技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及接枝聚合物及基于表面接枝的抗菌軟鏡的制備方法。
背景技術(shù):
軟鏡,即隱形眼鏡,也叫角膜接觸鏡,是根據(jù)人眼角膜形態(tài)以透明或染色材料制成的鏡片,直接附著在角膜的淚液層表面,并能與人眼生理相容,最終達到矯正視力、美容或治療的目的。但是,隱形眼鏡在佩戴過程中,因其表面吸附淚液中的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、膠原等,從而容易滋生病菌,進而發(fā)生角膜水腫、角膜新生血管反應(yīng)和過敏反應(yīng)等副作用。醫(yī)學(xué)證明,隱形眼鏡中的金黃色葡萄球菌、曲霉菌可引起角膜炎、結(jié)膜炎等眼病??諝庵衅渌【绱竽c桿菌、革蘭氏陽性菌等以及各種微生物代謝產(chǎn)物也會對眼鏡造成傷害。因此,如何在佩戴軟鏡中避免上述問題將對軟鏡的進一步推廣有著重要意義。為了解決上述現(xiàn)象,常見的護理手段就是佩戴結(jié)束后將軟鏡浸泡在鏡片護理液中,利用后者中含有的少量抗菌劑如季銨鹽類表面活性劑等,對鏡片表面進行消毒、清洗。由此可以看出,如能制備出具有抗菌功能的鏡片,直接抑制細(xì)菌在其表面生長,將可以從根本上克服軟鏡表面易繁殖細(xì)菌或其他微生物現(xiàn)象。
目前,抗菌隱形眼鏡的制備方法主要是有兩種,其中美國專利5,213,801提到的是在里面摻雜銀的陶瓷材料,其過程繁瑣,且影響眼鏡的色澤,不具有發(fā)展前景。而另一種是以季銨鹽為主體的抗菌隱形眼鏡,如EP2067797A1、JP11502949、JP06337378與JP6330820等專利。在該方案中,需要事先將抗菌單體添加到軟鏡單體中,然后聚合而成,因此就需要改變角膜接觸鏡現(xiàn)有的工藝路線。在本發(fā)明中,克服了以上的缺點,提出了一種表面接枝路線,通過將抗菌聚合物和軟鏡表面的羥基進行化學(xué)鍵合,從而將抗菌材料直接修飾到軟鏡表面。其中,未鍵合的聚合物通過水化等過程除去;與現(xiàn)有的抗菌軟鏡制備工藝相比,該技術(shù)不改變現(xiàn)有的軟鏡生產(chǎn)路線,簡單便捷,適合大批量的生產(chǎn)。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
發(fā)明目的:本發(fā)明的目的在于提供接枝聚合物,本發(fā)明的另一目的在于提供基于表面接枝的抗菌軟鏡的制備方法,針對目前制備抗菌軟鏡制備路線中的缺點,該方法路線簡單,不需對現(xiàn)有的軟鏡制備工藝進行修改,只需將成型后的軟鏡浸入含有接枝聚合物的水溶液中,隨后,取出軟鏡于100℃烘干,即可將抗菌成分修飾到鏡片表面。
技術(shù)方案:為實現(xiàn)上述發(fā)明目的,本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
接枝聚合物,其結(jié)構(gòu)通式如下:
其中:m,n,p為1~1000;
其中,A為以下基團中的一種:R1是其中w為1~17;B為以下基團中的一種:其中q為1~250;C為以下基團中的一種:其中D是Cl、Br或I。
其中,A提供季銨鹽基團,季銨鹽基團起到抗菌作用,C提供硅烷偶聯(lián)基團,硅烷偶聯(lián)基團便于與軟鏡表面羥基基團連接,而B中包含聚乙二醇官能團,聚乙二醇基團則可以改善軟鏡表面親水性及防止蛋白分子在鏡片表面吸附。
所述的接枝聚合物聚合物的分子量為300~10萬道爾頓;其中,季銨鹽基團A的含量占比不超過70%,硅烷偶聯(lián)C的含量占比不超過40%,聚乙二醇基團B的含量占比不超過在40%。
采用接枝聚合物的基于表面接枝的抗菌軟鏡的制備方法,包括如下步驟:超聲震蕩接枝聚合物后,將接枝聚合物溶于水中得到反應(yīng)液,然后將成型后的軟鏡,浸泡于上述反應(yīng)液中,然后取出晾干、烘干。
烘干后,將所得軟鏡浸漬在生理鹽水中,洗去軟鏡中殘余未反應(yīng)的接枝聚合物。
所述的超聲震蕩時間為5~10min min。
所述的反應(yīng)液中,接枝聚合物的質(zhì)量濃度為0.01%~15%。
所述的烘干溫度為120℃,烘干時間為5~15分鐘。
所述的浸漬溫度為60-100℃,浸漬過程中,浸漬液更換2~-3次。
發(fā)明原理:基于表面接枝的抗菌軟鏡的制備方法,是將抗菌聚合物溶于水中,然后,將成型后的軟鏡浸入其中,接著,取出軟鏡于80~120℃烘干。在烘干過程中,通過硅烷偶聯(lián)基團水解后產(chǎn)生的新鮮硅羥基(Si-OH)與軟鏡表面的羥基(-OH)進行化學(xué)鍵合,從而將抗菌成分修飾到鏡片表面,未鍵合的聚合物通過水化等過程除去。其中,接枝聚合物在水溶液中的質(zhì)量濃度為0.01~15%,其值可以隨透鏡組成的不同而變化,最高值是不損害所得軟鏡的物理性能,如鏡片透光率、透氧系數(shù)、焦度清晰度、吸脂性和生物相容性等,最低濃度是指所得鏡片基本達到抑菌性能,整個聚合物的分子量在300~10萬道爾頓之間。其中,季銨鹽基團的含量在0~70%間,硅烷偶聯(lián)基團的含量在0~40%間、聚乙二醇基團的含量在0~40%間。
有益效果:與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的接枝聚合物,既含有硅烷偶聯(lián)基團又含有季銨鹽基團,其中季銨鹽官能團,能有效地抑制鏡片表面的細(xì)菌的生長:而硅烷偶聯(lián)基團水解后產(chǎn)生的新鮮硅羥基(Si-OH)與軟鏡表面的羥基(-OH)進行化學(xué)鍵合,從而將抗菌成分修飾到鏡片表面,未鍵合的聚合物通過水化等過程除去,無需改變現(xiàn)有的軟鏡的制備工藝路線,而目前的專利都是將抗菌單體,添加到硅烷化單體中聚合而成,需改變角膜接觸鏡現(xiàn)有的工藝路線;本發(fā)明的基于表面接枝的抗菌軟鏡的制備方法,整個過程不涉及對現(xiàn)有的軟鏡制備工藝進行改動,只需在以成型的軟鏡表面接枝一層高分子膜,即可達到抗菌效果。
附圖說明
圖1是抗菌眼鏡的合成示意圖;
圖2是金黃色葡萄球菌分別在抗菌軟鏡表面與空白軟鏡表面上孵育不同小時圖。
具體實施方式
本發(fā)明中的接枝聚合物結(jié)構(gòu)如下:
其中:m,n,p為1~1000。
A為以下基團中的一種:D是Cl、Br或I,R1是其中w為1~17.
B為以下基團中的一種:其中q為1~250.
C為以下基團中的一種:其中D是Cl、Br或I。
其中,A提供季銨鹽基團,季銨鹽基團起到抗菌作用,C提供硅烷偶聯(lián)基團,硅烷偶聯(lián)基團便于與軟鏡表面羥基基團連接,而B中包含聚乙二醇官能團,聚乙二醇基團則可以改善軟鏡表面親水性及防止蛋白分子在鏡片表面吸附。整個制備過程如下:使用超聲震蕩5min,然后將上述結(jié)構(gòu)的接枝聚合物溶于100mL的水中,使其濃度為0.2mol/L;接著,將聚合成型后的軟鏡,浸泡于上述溶液中,然后取出晾干,并在120℃烘干5~15分鐘。最后,將所得軟鏡放在生理鹽水中洗去軟鏡中殘余未反應(yīng)的接枝聚合物。
術(shù)語“抗菌”是指軟鏡表現(xiàn)出一種或多種以下性能:抑制細(xì)菌或其它微生物在透鏡上生長,殺死在透鏡表面上或在透鏡半徑延伸處的細(xì)菌或其它微生物(細(xì)菌或其它微生物在透鏡上生長以及細(xì)菌或其它微生物在透鏡表面上存在統(tǒng)稱為“微生物的產(chǎn)生”)。本發(fā)明的透鏡抑制10%至99%的細(xì)菌或真菌產(chǎn)生。這種細(xì)菌或其它微生物包括但是不局限于在眼睛中存在的那些生物:特別是銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌。
實施例1-3是A的合成路線
實施例1
取3.98g(0.03mol)反應(yīng)物a,150ml無水乙腈,置于250ml三口瓶中常溫下混合均勻后,緩慢向混合物中滴加2.025g(0.02mol)反應(yīng)物b,混合均勻后,70℃,回流反應(yīng)15h,靜置直到溶液分層,取下層液旋蒸,直到產(chǎn)生少量白色固體,然后用無水乙醚沖洗,得到白色固體,反復(fù)沖洗4-6次,過濾得白色固體產(chǎn)物。
實施例2
取7.631g(0.03mol)反應(yīng)物a,150ml無水乙腈,置于250ml三口瓶中常溫下混合均勻后,緩慢向混合物中滴加2.585g(0.02mol)反應(yīng)物b,混合均勻后,70℃,回流反應(yīng)15h,靜置直到溶液分層,取下層液旋蒸,直到產(chǎn)生少量白色固體,然后用無水乙醚沖洗,得到白色固體,反復(fù)沖洗4~6次,過濾得白色固體產(chǎn)物。
實施例3
取3.66g(0.015mol)反應(yīng)物a,150ml無水乙腈,置于250ml三口瓶中常溫下混合均勻后,緩慢向混合物中滴加2.14g(0.01mol)反應(yīng)物b,混合均勻后,70℃,回流反應(yīng)15h,靜置直到溶液分層,取下層液旋蒸,直到產(chǎn)生少量白色固體,然后用無水乙醚沖洗,得到白色固體,反復(fù)沖洗4~6次,過濾得白色固體產(chǎn)物。
實施例4-6是B的合成路線
實施例4
反應(yīng)物b,其中一端用甲基封端的聚乙二醇(PEG),分子量選取3000。取7.631g(0.05mol)反應(yīng)物a,溶于150ml無水四氫呋喃溶液中,混合均勻后,向溶液中加入20g反應(yīng)物b,攪拌均勻,加入0.3g氫化鈉,室溫,回流反應(yīng)6h。過濾除去氫化鈉,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),得液態(tài)產(chǎn)物。
實施例5
反應(yīng)物b,其中一端用甲基封端的聚乙二醇(PEG),分子量選取6000。取4.3045g(0.05mol)反應(yīng)物a,溶于150ml無水四氫呋喃溶液中,混合均勻后,向溶液中加入22g反應(yīng)物b,攪拌均勻,加入2ml濃硫酸,50℃,回流反應(yīng)6h。加入200ml去離子水,置于分液漏斗中,去下層液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),得液體產(chǎn)物。
實施例6
反應(yīng)物b,其中一端用甲基封端的聚乙二醇(PEG),分子量選取8000。取3.606g(0.05mol)反應(yīng)物a,溶于150ml無水四氫呋喃溶液中,混合均勻后,向溶液中加入22g反應(yīng)物b,攪拌均勻,加入2ml濃硫酸,50℃,回流反應(yīng)6h。加入200ml去離子水,置于分液漏斗中,去下層液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),得液體產(chǎn)物。
實施例7-15是C的合成路線
實施例7
取3.0524g(0.02mol)反應(yīng)物a,溶于150ml無水四氫呋喃溶液中,置于三口燒瓶中,混合均勻,向混合物中緩慢滴加3.8664g(0.02mol)反應(yīng)物b,混合均勻后,氮氣保護,50℃,回流反應(yīng)6h。旋蒸直到產(chǎn)生少許固體后,使用無水乙醚沖洗5-6次,得固體產(chǎn)物。
實施例8
取3.9416g(0.02mol)反應(yīng)物a,溶于150ml無水四氫呋喃溶液中,置于三口燒瓶中,混合均勻,向混合物中緩慢滴加4.708g(0.02mol)反應(yīng)物b,混合均勻后,氮氣保護,50℃,回流反應(yīng)6h。旋蒸直到產(chǎn)生少許固體后,使用無水乙醚沖洗5-6次,得固體產(chǎn)物。
實施例9
取2.025g(0.015mol)反應(yīng)物a,150ml無水乙腈,置于250ml三口瓶中常溫下混合均勻后,緩慢向混合物中滴加1.9332g(0.01mol)反應(yīng)物b,混合均勻后,氮氣保護,70℃,回流反應(yīng)15h,靜置直到溶液分層,取下層液旋蒸,直到產(chǎn)生少量白色固體,然后用無水乙醚沖洗,得到白色固體,反復(fù)沖洗4~6次,過濾得白色固體產(chǎn)物。
實施例10
取1.358g(0.015mol)反應(yīng)物a,150ml無水乙腈,置于250ml三口瓶中常溫下混合均勻后,緩慢向混合物中滴加2.354g(0.01mol)反應(yīng)物b,混合均勻后,氮氣保護,70℃,回流反應(yīng)15h,靜置直到溶液分層,取下層液旋蒸,直到產(chǎn)生少量白色固體,然后用無水乙醚沖洗,得到白色固體,反復(fù)沖洗4~6次,過濾得白色固體產(chǎn)物。
實施例11
取2.5197g(0.015mol)反應(yīng)物a,150ml無水乙腈,置于250ml三口瓶中常溫下混合均勻后,緩慢向混合物中滴加1.9332g(0.01mol)反應(yīng)物b,混合均勻后,氮氣保護,70℃,回流反應(yīng)15h,靜置直到溶液分層,取下層液旋蒸,直到產(chǎn)生少量白色固體,然后用無水乙醚沖洗,得到白色固體,反復(fù)沖洗4~6次,過濾得白色固體產(chǎn)物。
實施例12
取1.1478g(0.015mol)反應(yīng)物a,150ml無水乙腈,置于250ml三口瓶中常溫下混合均勻后,緩慢向混合物中滴加2.354g(0.01mol)反應(yīng)物b,混合均勻后,氮氣保護,70℃,回流反應(yīng)15h,靜置直到溶液分層,取下層液旋蒸,直到產(chǎn)生少量白色固體,然后用無水乙醚沖洗,得到白色固體,反復(fù)沖洗4~6次,過濾得白色固體產(chǎn)物。
實施例13
20g(0.13mol)對氯甲基苯乙烯溶于150ml無水乙醚中得溶液A,8g(0.2mol)鎂屑置于50ml無水乙醚中攪拌均勻得混合物B,在氮氣保護下將A緩慢滴加到B中,滴加時間控制在1h,繼續(xù)反應(yīng)1h后得格式試劑C,ClSi(OEt)3(52g,0.26mol)溶于50ml無水乙醚中得溶液D。在-5~0℃,氮氣保護下,將C緩慢滴加到D中,回流反應(yīng)14h后,將100ml正己烷加入到反應(yīng)液中,將沉淀出的鎂鹽過濾除去,將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得產(chǎn)物無色液體。
實施例14
20g(0.13mol)對氯甲基苯乙烯溶于150ml無水乙醚中得溶液A,8g(0.2mol)鎂屑置于50ml無水乙醚中攪拌均勻得混合物B,在氮氣保護下將A緩慢滴加到B中,滴加時間控制在1h,繼續(xù)反應(yīng)1h后得格式試劑C,ClSi(OMe)3(41.08g,0.26mol)溶于50ml無水乙醚中得溶液D。在-5~0℃,氮氣保護下,將C緩慢滴加到D中,回流反應(yīng)14h后,將100ml正己烷加入到反應(yīng)液中,將沉淀出的鎂鹽過濾除去,將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得產(chǎn)物無色液體。
實施例15-23接枝聚合物(15-23)
實施例15
取實施例1合成的產(chǎn)物A1,2.3513g(0.01ml),實施例4合成的產(chǎn)物B2,3.6682g(0.001mol),實施例7合成的產(chǎn)物C1,3.4594g(0.01mol),150ml無水乙腈,置于250ml三口燒瓶中,攪拌均勻,加入0.2g偶氮異丁腈(AINB),在氮氣保護下,80℃,回流反應(yīng)15h后,溶液呈乳白色,離心得白色粉末固體產(chǎn)品。
實施例16
取實施例1合成的產(chǎn)物A1,2.3513g(0.01ml),實施例5合成的產(chǎn)物B2,6.682g(0.001mol),實施例7合成的產(chǎn)物C2,4.3594g(0.01mol),150ml無水乙腈,置于250ml三口燒瓶中,攪拌均勻,加入0.2g偶氮異丁腈(AINB),在氮氣保護下,80℃,回流反應(yīng)15h后,溶液呈乳白色,離心得白色粉末固體產(chǎn)品。
實施例17
取實施例2合成的產(chǎn)物A2,2.6513g(0.01ml),實施例4合成的產(chǎn)物B1,7.282g(0.002mol),實施例8合成的產(chǎn)物C2,4.3594g(0.01mol),置于250ml三口燒瓶中,攪拌均勻,加入0.2g偶氮異丁腈(AINB),本體聚合,在氮氣保護下,80℃回流反應(yīng)15h后,得固體產(chǎn)物,可溶于無水四氫呋喃,二氯甲烷,DMF,DMSO。
實施例18
取實施例2合成的產(chǎn)物A2,2.6513g(0.01ml),實施例4合成的產(chǎn)物B1,7.282g(0.002mol),實施例9合成的產(chǎn)物C3,3.2594g(0.01mol),置于250ml三口燒瓶中,攪拌均勻,加入0.2g偶氮異丁腈(AINB),本體聚合,在氮氣保護下,80℃,回流反應(yīng)15h后,得固體產(chǎn)物,可溶于無水四氫呋喃,二氯甲烷,DMF,DMSO。
實施例19
取實施例3合成的產(chǎn)物A3,3。1513g(0.01ml),實施例6合成的產(chǎn)物B3,8.6682g(0.001mol),實施例7合成的產(chǎn)物C4,3.2832g(0.01mol),150ml無水乙腈,置于250ml三口燒瓶中,攪拌均勻,加入0.2g偶氮異丁腈(AINB),在氮氣保護下,80℃,回流反應(yīng)20h后,溶液呈乳白色,離心得白色粉末固體產(chǎn)品。
實施例20
取實施例2合成的產(chǎn)物A2,2.6513g(0.01ml),實施例4合成的產(chǎn)物B1,7.282g(0.002mol),實施例11合成的產(chǎn)物C3,3.6594g(0.01mol),置于250ml三口燒瓶中,攪拌均勻,加入0.2g偶氮異丁腈(AINB),本體聚合,在氮氣保護下,70℃,回流反應(yīng)15h后,得固體產(chǎn)物,可溶于無水四氫呋喃,二氯甲烷。
實施例21
取實施例3合成的產(chǎn)物A3,3.1513g(0.01ml),實施例4合成的產(chǎn)物B1,7.282g(0.002mol),實施例12合成的產(chǎn)物C6,3.1154g(0.01mol),置于250ml三口燒瓶中,攪拌均勻,加入0.2g偶氮異丁腈(AINB),本體聚合,在氮氣保護下,70℃,回流反應(yīng)15h后,得固體產(chǎn)物,可溶于無水四氫呋喃,二氯甲烷。
取實施例1合成的產(chǎn)物A1,2.3513g(0.01ml),實施例5合成的產(chǎn)物B2,6.682g(0.001mol),實施例13合成的產(chǎn)物C7,2.8044g(0.01mol),150ml無水乙腈,置于250ml三口燒瓶中,攪拌均勻,加入0.2g偶氮異丁腈(AINB),在氮氣保護下,80℃,回流反應(yīng)15h后,溶液呈乳白色,離心得白色粉末固體產(chǎn)品。
實施例23
取實施例2合成的產(chǎn)物A2,2.6719g(0.01ml),實施例4合成的產(chǎn)物B1,7.282g(0.002mol),實施例14合成的產(chǎn)物C8,2.3854g(0.01mol),置于250ml三口燒瓶中,攪拌均勻,加入0.2g偶氮異丁腈(AINB),本體聚合,在氮氣保護下,70℃,回流反應(yīng)15h后,得固體產(chǎn)物,可溶于無水四氫呋喃,二氯甲烷。
實施例24
在加熱與超聲震蕩的條件下,將實施例15-23中合成的抗菌劑溶于二氯甲烷,接著,將聚合后的干軟鏡,短時間浸泡于溶液中(9-10秒),然后取出晾干得到抗菌鏡片。
實施例25
在加熱與超聲震蕩的條件下,將實施例15-23中合成的抗菌劑溶于四氫呋喃中,接著,將聚合后的干軟鏡,短時間浸泡于溶液中(9-10秒),然后取出晾干得到抗菌鏡片。
實施例26
在加熱與超聲震蕩的條件下,將實施例15-23中合成的抗菌劑溶于氯仿中,接著,將聚合后的干軟鏡,短時間浸泡于氯仿溶液中(9-10秒),然后取出晾干得到抗菌鏡片。
實施例27
在加熱與超聲震蕩的條件下,將實施例15-23中合成的抗菌劑溶于二甲基亞砜中,接著,將聚合后的干軟鏡,短時間浸泡于二甲基亞砜溶液中(9-10秒),然后取出晾干得到抗菌鏡片。
表1是添加了不同含量的實施例15-23的產(chǎn)物到軟鏡中相對應(yīng)的抗菌效果。
表1部分抗菌高分子、添加量及對應(yīng)抗菌效果
實施例28-30軟鏡的抗菌性能評價
實施例28金黃色葡萄球菌
對以上實施例1-9中所得軟鏡進行抗菌性能評價,基本過程參照《QB/T2591-2003抗菌塑料的抗菌性能試驗方法試驗》進行。通過定量接種細(xì)菌于待測軟鏡上,用貼膜的方法使細(xì)菌均勻接觸樣品,經(jīng)過一定時間的培養(yǎng)后,測定樣品中的或菌數(shù),并計算出樣品的抗細(xì)菌率。
具體過程如下:(1)材料準(zhǔn)備,覆蓋膜為聚乙烯薄膜,尺寸為(40±2)mm X(40±2)mm、厚度為(0.05∽0.1)mm。使用前用70%乙醇溶液浸泡1分鐘,再用無菌水沖洗,自然干燥。樣品分為空白對照軟鏡A與抗菌軟鏡B,前者指未添加抗菌成分的軟鏡,測試尺寸為(50±2)mmX(50±2)mm。所有樣品在試驗前經(jīng)高溫滅菌,然后用無菌水沖洗,自然干燥。測試過程中所用洗脫液指含0.8%NaCl的生理鹽水(含少量的吐溫80),培養(yǎng)液指營養(yǎng)肉湯/生理鹽水溶液(1:500);(2)金黃色葡萄球菌ATCC 6538,利用接種環(huán)從金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基上取少量(刮1∽2環(huán))新鮮菌,加入到培養(yǎng)液中,并依次做10倍遞增稀釋液,選擇菌液濃度為(5.0-10.0)*105cfu/mL的稀釋液作為試驗用菌液。(3)樣品試驗,分別取0.2mL試驗用菌液滴加在空白對照軟鏡和抗菌軟鏡上,然后用滅菌鑷子夾起滅菌覆蓋膜分別覆蓋在其表面,使菌均勻接觸樣品,置于滅菌平皿中,在37℃、相對濕度RH≥90%條件下培養(yǎng)24小時。結(jié)束后,取出樣品,分別加入20mL洗脫液,反復(fù)洗樣品與覆蓋膜,充分搖勻后,取一定量接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中,在37℃培養(yǎng)24后活菌計數(shù)。(4)檢驗結(jié)果計算,抗菌率(%)=(A-B)/A*100。
實施例29大腸桿菌
對于大腸桿菌的抗菌測試,過程如實施例10,將大腸桿菌取代金黃色葡萄球菌。此外,培養(yǎng)液指營養(yǎng)肉湯/生理鹽水溶液(1:100)。
實施例30軟鏡的細(xì)胞毒性的評價
對以上實施例1-9所得的軟鏡進行體外細(xì)胞毒性實驗,基本過程參照《GB/T16886.5-2003醫(yī)療器械生物學(xué)評價》進行。通過定量接種細(xì)胞于待測軟鏡及其浸提液中,經(jīng)過一定時間的培養(yǎng),對細(xì)胞的形態(tài)進行觀察。
具體過程如下:(1)材料準(zhǔn)備:24孔板,鑷子,空白對照軟鏡A、抗菌軟鏡B(實施例1)和抗菌軟鏡C(添加實施例1-9的樣品),實驗前將所有材料在121℃下高壓滅菌25min,滅菌水反復(fù)清洗,自然干燥。實驗過程中的完全培養(yǎng)基指的是89%DMEM、10%胎牛血清和1%的青霉素和鏈霉素。將軟鏡A、B和C用鑷子取出放入24孔板中,加入1mL完全培養(yǎng)基,37℃±2℃浸提24h,將浸提液取出新的孔中,將L929細(xì)胞用胰蛋白酶消化下來,并用完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為5×105個/mL,在含浸提液和鏡片的孔中加入細(xì)胞懸液和完全培養(yǎng)基,置于37℃培養(yǎng)箱下培養(yǎng)24h,觀察細(xì)胞形態(tài)并拍攝照片。從圖2可以看出,隨著時間的增加,抗菌軟鏡表面的金黃色葡萄球菌基本凋亡,而空白鏡片表面一直含有大量葡萄球菌。