本發(fā)明涉及一類新型抗植物病毒病菌劑及其制備和應(yīng)用，具體涉及polycarpine衍生物作為抗植物病毒病菌劑，屬農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

植物殺菌劑是用于防治由各種病原微生物引起的植物病害的一類農(nóng)藥。全世界對(duì)植物有害的病原微生物(真菌、強(qiáng)菌、立克次氏體、支原體、病毒、藻類等)有8萬種以上。植物病害對(duì)農(nóng)業(yè)造成巨大損失，全世界的農(nóng)作物由此平均每年減少產(chǎn)量約500,000噸(殺菌劑，百度百科，http：//baike.baidu.com/view/37680.htm)。

殺菌劑經(jīng)過幾十年的發(fā)展，取得了豐碩的成果。商品化的品種已達(dá)數(shù)百個(gè)，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛使用。按針對(duì)的病原體分類，殺菌劑可分為殺細(xì)菌劑、殺病毒劑、殺藻劑等亞類。按結(jié)構(gòu)分類，殺菌劑可以分為無機(jī)殺菌劑、有機(jī)殺菌劑和天然生物殺菌劑，其中有機(jī)殺菌劑在殺菌劑品種中占主導(dǎo)地位，廣泛地應(yīng)用在生產(chǎn)當(dāng)中。有機(jī)殺菌劑的優(yōu)點(diǎn)是殺菌能力強(qiáng)，見效快，種類多，缺點(diǎn)是毒副性大，耐熱性較差，易使微生物產(chǎn)生抗藥性。目前有機(jī)殺菌劑的種類多達(dá)500多種，但是按照它們的作用方式不同，殺菌劑大致可以分為下列三類：一是作用于細(xì)胞膜和細(xì)胞壁系統(tǒng)；二是作用于生物合成途徑中反應(yīng)酶或者其他活性物質(zhì)；三是作用于細(xì)胞的遺傳物質(zhì)包括線粒體，核糖體等。殺菌劑的廣泛使用，確實(shí)給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)減少了很多損失。但由于不斷的使用，真菌等病源微生物易于產(chǎn)生抗藥性。因此，不斷地尋找和發(fā)現(xiàn)新的活性化合物，發(fā)現(xiàn)新的作用機(jī)制，研制新的殺菌劑，是農(nóng)業(yè)可持續(xù)性發(fā)展的重要方向。

海洋是人類物質(zhì)資源的天然寶庫(kù)，已知海洋生物的物種總數(shù)占地球生物的80％以上(jantibiot(tokyo)，1994，47，1425-1433)，目前從海綿、海兔、海鞘、海藻、鯊魚、珊瑚等海洋生物中分離獲得7000余種海洋天然產(chǎn)物，新發(fā)現(xiàn)的化合物還在以加速度遞增。在已發(fā)現(xiàn)的化合物中包括萜類、多肽、甾體類、聚醚類、生物堿、大環(huán)內(nèi)酯類、多糖等化合物，約50％具有各種生物活性，超過0.1％的化合物結(jié)構(gòu)新穎，活性顯著，極有可能開發(fā)成藥(中國(guó)新藥雜質(zhì)，2005，14，278-282)。因此，從海洋天然產(chǎn)物中尋找新型活性藥物先導(dǎo)已成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)。

多果海鞘品(polycarpine)是從金黃多果海鞘(polycarpaaurata)分離的含硫氨基咪唑環(huán)化合物。

1996美國(guó)俄克拉荷馬州大學(xué)schmitz教授研究組首次從楚克島環(huán)礁海鞘polycarpaaurata中分離得到polycarpine，并通過單晶確定結(jié)構(gòu)。生物活性結(jié)果表明，polycarpine具有很強(qiáng)的次黃嘌呤核苷酸脫氫酶(impdh)抑制活性，ic50為0.03μm，但是當(dāng)加入過量的二硫蘇糖醇(dtt)后抑制活性消失，說明polycarpine易與巰基反應(yīng)(j.org.chem.1996，61，2709-2712)。

結(jié)構(gòu)式一

同年，美國(guó)加州大學(xué)的fenical教授小組也從印度洋海鞘polycarpaclavata中分離得到polycarpine及其雙鹽酸鹽polycarpinedihydrochloride，研究發(fā)現(xiàn)polycarpine成鹽后穩(wěn)定性提高，并證實(shí)生物堿在海鞘體內(nèi)的的真正存在形式是其雙鹽酸鹽polycarpinedihydrochloride，而polycarpine則是在柱層析過程中產(chǎn)生。生物活性研究表明，polycarpinedihydrochloride能夠在0.9μg/ml濃度下抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞hct-116增殖(tetrahedronlett.1996，37，2369-2372)。

方程式一

1997年俄羅斯的novikov教授小組完成了polycarpinedihydrochloride的合成。如方程式一所示，以α-溴代對(duì)甲氧基苯乙酮為原料，經(jīng)胺化、合環(huán)和偶聯(lián)三步以57％的總收率完成polycarpinedihydrochloride的合成。但缺點(diǎn)是該文獻(xiàn)中沒有給出各步反應(yīng)的具體步驟，給文獻(xiàn)的重復(fù)帶來極大的困難。抗癌活性研究表明，polycarpinedihydrochloride對(duì)多種癌細(xì)胞都表現(xiàn)出很好的抑制活性(表1)(tetrahedronlett.1997，38，3581-3584)。

表1：polycarpinedihydrochloride抗癌活性結(jié)果

2007年日本namikoshi教授小組從印度尼西亞海鞘polycarpaaurata中分離得到已知生物堿polycarpinebis(2，2，2-trifluoroacetate)，同時(shí)還首次分離得到天然生物堿polycarpaurinesa，，b和c。生物活性研究表明，該類化合物表現(xiàn)出不錯(cuò)的抑制中國(guó)倉(cāng)鼠v79細(xì)胞系增殖活性：polycarpinebis(2，2，2-trifluoroacetate)，polycarpaurinesa，b和c的ec50分別為3.8μm，6.8μm，＞10μm和8.6μm(tetrahedron2007，63，409-412)。

2010年中國(guó)西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院的梁宗鎖教授小組(chinesepharm.j.2010，45，332-334)從巴布亞新幾內(nèi)亞的海鞘polycarpaaurata中分離得到生物堿polycarpine，并首次發(fā)現(xiàn)該類具有很好的抗真菌活性(表2)。

表2：polycarpine抗菌活性結(jié)果

目前為止，生物堿polycarpine衍生物在防治植物病毒和病菌方面的研究還屬于空白。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一類新型、高效、低毒的抗植物病毒病菌劑及其制備方法和抗植物病毒病菌應(yīng)用。

本發(fā)明polycarpine衍生物的結(jié)構(gòu)通式為i所示結(jié)構(gòu)的2-氨基咪唑類化合物：

式中，x代表ia和ib兩種情況，r代表烷基、2-10碳烷?；?、6-10碳芳?；?、2-10碳烷磺?；?-10碳芳磺?；?。

本發(fā)明所述的polycarpine衍生物是如下結(jié)構(gòu)式二中所示結(jié)構(gòu)ia-1-ia-10和ib-1-ib-10為代表的化合物。

結(jié)構(gòu)式二

本發(fā)明通式i的化合物可以通過方程式二的方法制備。首先，溴代苯乙酮1在低溫條件下與甲胺醇溶液反應(yīng)得甲胺鹽2，該過程中溫度要求低溫，且鹽酸乙酸乙酯溶液為較好的酸化溶劑，可以析出白色固體，條件操作不當(dāng)根本拿不到純品。甲胺鹽2與硫乙基硫脲關(guān)環(huán)得關(guān)鍵中間體4，該步中加料順序決定反應(yīng)的成敗，化合物4與相應(yīng)的酰氯反應(yīng)得雙?；虚g體5，經(jīng)tbaf或者稀鹽酸處理后可以得到ia，再經(jīng)二氯化二硫偶聯(lián)得ib，這一步中ia與二氯化二硫的比例是成敗的關(guān)鍵，當(dāng)ia與二氯化二硫的比例大于2時(shí)有單硫化合物生成，由于二者極性非常相近，導(dǎo)致反應(yīng)無法提純而失敗。

方程式二

本發(fā)明通式i的化合物也可以通過方程式三的方法制備。咪唑胺4與相應(yīng)的醛縮合得中間體6，不經(jīng)提純直接還原得ia，再經(jīng)二氯化二硫偶聯(lián)得ib。

方程式三

本發(fā)明通式i的化合物具有優(yōu)異的抗植物病毒活性，能很好地抑制煙草花葉病毒、辣椒病毒、番茄病毒、甘薯病毒、馬鈴薯病毒和瓜類病毒及玉米矮花葉病毒等，可有效防治煙草、辣椒、番茄、瓜菜、糧食、蔬菜、豆類等多種作物的病毒病，尤其適合于防治煙草花葉病。

本發(fā)明通式i的化合物作為植物病毒抑制劑可以直接使用，也可以加上農(nóng)業(yè)上接受的載體使用，也可以和其他抗植物病毒劑如苯并噻二唑(bth)、噻酰菌胺(tdl)、4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-甲酸(tdla)、dl-β-氨基丁酸(baba)、病毒唑、寧南霉素、菲并吲哚里西啶生物堿安托芬、聯(lián)三唑類化合物xy-13和xy-30、病毒a、水楊酸、多羥基雙萘醛、氨基寡糖素形成互作組合物使用，這些組合物有的表現(xiàn)增效作用，有的表現(xiàn)相加作用。

本發(fā)明通式i的化合物同時(shí)表現(xiàn)出很好的抑制植物病原菌活性，對(duì)黃瓜枯萎，花生褐斑，蘋果輪紋，小麥紋枯，玉米小斑，西瓜炭疽，水稻惡苗，番茄早疫，小麥赤霉，馬鈴薯晚疫，辣椒疫霉，油菜菌核，黃瓜灰霉，水稻紋枯14種植物病菌都表現(xiàn)出抑制作用。

具體實(shí)施方式

以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。

實(shí)施例1：ia-1～ia-7和ib-1～ib-7的合成：

1-(4-甲氧基苯基)-2-(甲氨基)乙酮鹽酸鹽(2)的合成

于1000ml的反應(yīng)瓶中，加入乙腈(200ml)，-30℃加入30％的甲胺醇溶液(104ml，0.68mol)，溴乙酮1(31.00g，0.14mol)溶于乙腈(150ml)，加入二氯甲烷(50ml)助溶，以恒壓滴液漏斗緩緩滴下，滴畢，反應(yīng)10min，tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全。加入二氯甲烷(350ml)，依次以冷的飽和碳酸氫鈉、冷水、冷飽和食鹽水洗，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液加入1.125mol/l的鹽酸乙酸乙酯溶液(239ml，0.27mol)，攪拌5min，脫溶，以適量丙酮洗滌，抽濾，得白色固體17.14g，收率59％。熔點(diǎn)196-199℃，¹hnmr(400mhz，cd3od)δ8.01(d，j＝9.0hz，2h，ar-h)，7.08(d，j＝9.0hz，2h，ar-h)，4.69(s，2h，ch2co)，3.90(s，3h，o-ch3)，2.83(s，3h，ch3nh).

4-(4-甲氧基苯基)-1-甲基-咪唑-2-胺(4)的合成

于1000ml的單口瓶中，加入2(25.28g，0.12mol)，3(40.60g粗品，約0.18mol)，水(350ml)，攪拌溶解。氫氧化鈉(16.40g，0.41mol)，溶于水(150ml)中，加入反應(yīng)瓶中，室溫?cái)嚢?4h。抽濾，晾干得淡黃色固體18.17g，收率76％。熔點(diǎn)143-145℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.57(d，j＝8.8hz，2h，ar-h)，6.88(d，j＝8.8hz，2h，ar-h)，6.71(s，1h，ch)，4.01(s，2h，nh2)，3.81(s，3h，o-ch3)，3.45(s，3h，n-ch3).

單乙?；溥虬穒a-1的合成

于250ml的單口瓶中，加入4(1.00g，4.92mmol)，二氯甲烷(125ml)和三乙胺(1.65ml，11.81mmol)。乙酰氯(0.84ml，11.81mmol)加入到10ml二氯甲烷中，用恒壓滴液漏斗緩緩滴下。滴畢室溫?cái)嚢?0min，tlc檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)液依次以飽和碳酸氫鈉、飽和食鹽水洗滌，有機(jī)相以無水硫酸鈉干燥，脫溶，溶于thf(100ml)，加入少量吡啶和tbaf(3.60g，13.90mmol)或者是加入2m稀鹽酸20ml，室溫?cái)嚢?.5h。脫溶，加入適量二氯甲烷，飽和食鹽水洗滌，有機(jī)相以無水硫酸鈉干燥，脫溶，加入少量丙酮重結(jié)晶，得白色固體0.41g，收率58％。熔點(diǎn)200-203℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.53(d，j＝6.7hz，2h，ar-h)，6.94(s，1h，ch)，6.90(d，j＝7.8hz，2h，ar-h)，3.82(s，3h，o-ch3)，3.57(s，3h，n-ch3)，2.14(s，3h，ch3co).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ171.9，158.7，141.0，137.4，126.4，125.8，114.4，114.1，55.3，33.3，23.1.hrms(esi)calcdforc13h16n3o2⁺[m+h]⁺246.1237，found246.1242.

重復(fù)上面的操作可以完成ia-2～ia-7的合成：

單甲磺酰化咪唑胺ia-2

淺灰色固體，收率：50％。熔點(diǎn)110-113℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ10.00(s，1h)，7.28(d，j＝8.8hz，2h，ar-h)，6.91(d，j＝8.8hz，2h，ar-h)，6.53(s，1h，ch)，3.82(s，3h，o-ch3)，3.40(s，3h，n-ch3)，3.02(s，3h，ch3so2).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ159.7，147.3，125.6，125.0，120.0，114.6，109.6，55.4，42.4，31.6.hrms(esi)calcdforc12h16n3o3s⁺[m+h]⁺282.0907，found282.0907.

單特務(wù)酰化咪唑胺ia-3

白色固體，兩步一鍋收率：53％。熔點(diǎn)225-226℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ9.71(s，1h，nh)，7.50(d，j＝8.7hz，2h，ar-h)，6.89(s，1h，ch)，6.88(d，j＝8.7hz，2h，ar-h)，3.81(s，3h，o-ch3)，3.51(s，3h，n-ch3)，1.31(s，9h，c-ch3).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ158.7，125.8，114.0，55.3，39.6，32.8，27.7.hrms(esi)calcdforc16h22n3o2⁺[m+h]⁺288.1707，found288.1705.

單苯甲?；溥虬穒a-4

暗白色固體，兩步一鍋收率：47％。熔點(diǎn)125-127℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ8.29(d，j＝6.4hz，2h，ar-h)，7.48-7.41(m，5h，ar-h)，6.95(d，j＝8.7hz，2h，ar-h)，6.71(s，1h，ch)，3.85(s，3h，o-ch3)，3.68(s，3h，n-ch3).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ159.6，137.8，130.9，128.7，128.0，125.6，114.5，110.0，55.4，31.8.hrms(esi)calcdforc18h18n3o2⁺[m+h]⁺308.1394，found308.1399.

單苯磺?；溥虬穒a-5

灰白色固體，收率：8％。熔點(diǎn)188-192℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ10.13(s，1h，nh)，7.96(d，j＝7.7hz，2h，ar-h)，7.52-7.41(m，3h，ar-h)，7.30(d，j＝7.9hz，2h，ar-h)，6.94(d，j＝7.9hz，2h，ar-h)，6.52(s，1h，ch)，3.84(s，3h，o-ch3)，3.42(s，3h，n-ch3).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ159.9，147.2，144.3，131.3，128.6，125.8，125.6，125.1，120.0，114.7，109.6，55.4，31.8.hrms(esi)calcdforc17h18n3o3s⁺[m+h]⁺344.1063，found344.1068.

單己?；溥虬穒a-6

白色固體，兩步一鍋收率：47％。熔點(diǎn)134-135℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.52(d，j＝8.6hz，2h，ar-h)，6.93(s，1h，ch)，6.89(d，j＝8.6hz，2h，ar-h)，3.82(s，3h，o-ch3)，3.58(s，3h，n-ch3)，2.39(t，j＝7.6hz，2h，ch2co)，1.71-1.59(m，2h，coch2ch2)，1.31-1.23(m，4h，ch2ch2ch3)，0.86(t，j＝6.8hz，3h，ch2ch3).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ175.2，158.8，141.2，136.8，126.1，125.9，114.1，114.1，55.3，36.4，33.4，31.4，25.3，22.4，13.9.hrms(esi)calcdforc17h24n3o2⁺[m+h]⁺302.1863，found302.1871.

單乙酯草?；溥虬穒a-7

得淺黃色固體，收率47％。熔點(diǎn)111-113℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.38(d，j＝8.8hz，2h，ar-h)，6.96(d，j＝8.8hz，2h，ar-h)，6.76(s，1h，ch)，4.36(q，j＝7.1hz，2h，ch2ch3)，3.84(s，3h，o-ch3)，3.67(s，3h，n-ch3)，1.40(t，j＝7.1hz，3h，ch2ch3).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ166.0，163.8，160.0，149.9，126.4，125.7，120.1，114.7，110.4，61.9，55.4，32.2，14.2.hrms(esi)calcdforc15h18n3o4⁺[m+h]⁺304.1292，found304.1297.

單乙?；痯olycarpinedihydrochlorideib-1

于500ml反應(yīng)瓶中，加入ia-1(19.68mmol)，冰醋酸(200ml)，二氯化二硫(11.81mmol)，室溫?cái)嚢?h。tlc監(jiān)測(cè)，反應(yīng)完全。脫溶，加入適量飽和碳酸氫鈉溶液，以dcm萃取，有機(jī)相以飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，抽濾，加入足量鹽酸乙酸乙酯溶液，充分成鹽后，濃縮至留少量溶劑，抽濾，以適量丙酮洗滌，得黃色固體，收率：54.7％。熔點(diǎn)139-142℃，¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.26(s，2h，hcl)，7.40(s，4h，ar-h)，6.95(d，j＝8.8hz，4h，ar-h)，3.81(s，6h，o-ch3)，3.41(s，6h，n-ch3)，2.20(s，6h，ch3co).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ170.0，160.4，141.5，129.2，114.3，55.8，31.8，23.4.hrms(esi)calcdforc26h29n6o4s2⁺[m+h-2hcl]⁺553.1686，found553.1697.

重復(fù)上面的操作可以完成ib-2～ib-7的合成：

單甲磺?；痯olycarpinedihydrochlorideib-2

黃色固體，收率：20％。熔點(diǎn)218-220℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.28(d，j＝8.4hz，4h，ar-h)，6.97(d，j＝8.7hz，4h，ar-h)，3.92(s，6h，o-ch3)，3.22(s，6h，n-ch3)，2.93(s，6h).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ161.2，146.5，135.5，127.3，117.5，114.8，55.6，42.6，28.9.hrms(esi)calcdforc24h29n6o6s4⁺[m+h-2hcl]⁺625.1026，found625.1014.

單特戊?；痯olycarpinedihydrochlorideib-3

黃色固體，收率：52％。熔點(diǎn)150-152℃，¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ10.38(s，2h，hcl)，7.64(d，j＝8.6hz，4h，ar-h)，6.97(d，j＝8.7hz，4h，ar-h)，6.53(s，2h，nh)，3.78(s，6h，o-ch3)，3.28(s，6h，n-ch3)，1.28(s，18h，c(ch3)3).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ178.0，159.6，141.7，128.5，122.4，115.3，114.0，55.1，39.2，30.9，26.8.hrms(esi)calcdforc32h41n6o4s2⁺[m+h-2hcl]⁺637.2625，found637.2634.

單苯甲?；痯olycarpinedihydrochlorideib-4

淺黃色固體，收率：22％。熔點(diǎn)186-189℃，¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.50(s，2h，hcl)，8.09(d，j＝7.4hz，4h，ar-h)，7.71-7.57(m，12h，ar-handnh)，7.01(d，j＝8.6hz，4h)，3.76(s，6h，o-ch3)，3.44(s，6h，n-ch3).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ166.5，159.7，132.9，132.2，128.6，128.4，122.3，114.0，55.1，31.1.hrms(esi)calcdforc36h33n6o4s2⁺[m+h-2hcl]⁺677.1999，found677.2003.

單苯磺?；痯olycarpinedihydrochlorideib-5

黃色固體，收率：26％。熔點(diǎn)220-224℃，¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.89(s，2h，hcl)，7.90(d，j＝6.8hz，4h，ar-h)，7.53-7.46(m，6h，ar-h)，7.16(d，j＝8.1hz，4h，ar-h)，6.92(d，j＝8.6hz，4h，ar-h)，3.84(s，6h，o-ch3)，2.89(s，6h，n-ch3).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ160.6，146.5，145.0，131.7，130.1，129.1，126.1，118.6，114.4，114.1，55.7，28.9.hrms(esi)calcdforc34h33n6o6s4⁺[m+h-2hcl]⁺749.1339，found749.1333.

單己?；痯olycarpinedihydrochlorideib-6

橘黃色固體，收率：41％。熔點(diǎn)123-126℃，¹hnmr(400mhz，cd3od)δ7.39(d，j＝7.7hz，4h，ar-h)，6.93(d，j＝7.7hz，4h，ar-h)，3.79(s，6h，o-ch3)，3.48(s，6h，n-ch3)，2.51(t，j＝6.8hz，4h，ch2co)，1.69(brs，4h，coch2ch2)，1.34(brs，8h，ch2ch2ch3)，0.87(brs，6h，ch2ch3).¹³cnmr(100mhz，cd3od)δ173.8，162.8，141.7，139.1，130.5，118.2，115.5，56.3，36.9，32.4，31.7，25.2，23.5，14.3.hrms(esi)calcdforc34h45n6o4s2⁺[m+h-2hcl]⁺665.2938，found665.2952.

單乙酯草?；痯olycarpinedihydrochlorideib-7

黃色固體，收率：55％。熔點(diǎn)200-204℃，¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ11.35(s，2h，hcl)，7.61(brs，4h，ar-h)，6.91(d，j＝8.3hz，4h，ar-h)，4.32(q，j＝6.6hz，4h，ch2ch3)，3.77(s，6h，o-ch3)，3.33(s，6h，n-ch3)，1.33(t，j＝6.6hz，6h，ch2ch3).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ159.7，128.6，114.2，62.9，55.5，30.8，14.3.hrms(esi)calcdforc30h33n6o8s2⁺[m+h-2hcl]⁺669.1796，found669.1795.

實(shí)施例2：ia-8～ia-10和ib-8～ib-10的合成：

化合物ia-8

于250ml圓底燒瓶中，加入咪唑胺(0.50g，2.46mmol)，無水乙醇(60ml)，無水甲苯(20ml)，碳酸鉀(0.34g，2.46mmol)，苯甲醛(1.00ml，9.84mmol)，加熱回流8h，脫溶，加入dcm，水洗，飽和食鹽水洗，有機(jī)相以無水硫酸鈉干燥，抽濾，脫溶，以少量ea洗滌，抽濾，得黃色濾餅，加入到50ml圓底燒瓶中，加入無水乙醇(30ml)，加入硼氫化鈉(0.11g，2.95mmol)，65℃反應(yīng)2h，tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全。加入少量水淬滅反應(yīng)，脫溶，加入適量dcm，以水，飽和食鹽水洗滌，有機(jī)相以無水硫酸鈉干燥，抽濾，柱層析(dcm直接上樣，以dcm沖一段時(shí)間，再以ea沖柱)。得黃白色固體0.45g，收率63％。熔點(diǎn)125-128℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.64(d，j＝8.8hz，2h，ar-h)，7.46(d，j＝7.2hz，2h，ar-h)，7.39-7.28(m，3h，ar-h)，6.89(d，j＝8.8hz，2h，ar-h)，6.69(s，1h，ch)，4.63(d，j＝5.8hz，2h，ch2)，4.23(brs，1h，nh)，3.81(s，3h，o-ch3)，3.39(s，3h，n-ch3).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ158.1，149.6，139.5，136.9，128.6，128.3，127.8，127.5，125.6，113.9，111.1，55.3，48.7，31.1.hrms(esi)calcdforc18h20n3o⁺[m+h]⁺294.1601，found294.1607.

化合物ia-9

白色固體，收率：49％。熔點(diǎn)144-147℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.64(d，j＝7.4hz，2h，ar-h)，7.37(d，j＝7.4hz，2h，ar-h)，6.89(d，j＝8.2hz，4h，ar-h)，6.72(s，1h，ch)，4.51(d，j＝5.1hz，2h，ch2)，3.81(s，6h，o-ch3)，3.59(s，1h，nh)，3.36(s，3h，n-ch3).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ159.0，158.1，149.6，136.8，131.6，129.6，127.8，125.6，114.0，113.9，111.1，55.32，55.29，48.2，31.1.hrms(esi)calcdforc19h22n3o2⁺[m+h]⁺324.1707，found324.1709.

化合物ia-10

淺黃色固體，收率：50％。熔點(diǎn)113-116℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.67-7.53(m，6h，ar-h)，6.88(d，j＝8.8hz，2h，ar-h)，6.74(s，1h，ch)，4.66(d，j＝6.0hz，2h，ch2)，3.81(s，3h，o-ch3)，3.79(s，1h，nh)，3.40(s，3h，n-ch3).¹³cnmr(100mhz，cdcl3)δ158.2，149.2，143.7，136.8，129.4，128.3，126.4(q，j＝210hz)，125.6，125.4(q，j＝3.8hz)，122.8，113.9，111.3，55.3，48.0，31.1.hrms(esi)calcdforc19h19f3n3o⁺[m+h]⁺362.1475，found362.1482.

化合物ib-8

于250ml的圓底燒瓶中，加入化合物ia-8(2.47g，8.44mmol)，加入120ml冰醋酸，二氯化二硫(0.34ml，4.22mmol)，室溫?cái)嚢?h。反應(yīng)液脫溶，以適量dcm溶解，依次以飽和碳酸氫鈉溶液、飽和食鹽水洗滌，有機(jī)相以無水硫酸鈉干燥，抽濾，加入適量鹽酸乙酸乙酯溶液，脫溶。抽濾，以適量丙酮洗滌，干燥，得磚紅色固體1.79g，收率58％。熔點(diǎn)152-154℃，¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ13.20(s，2h，hcl)，8.69(s，2h，nh)，7.62(d，j＝8.6hz，4h，ar-h)，7.44-7.33(m，8h，ar-h)，7.30(t，j＝6.7hz，2h，ar-h)，7.04(d，j＝8.6hz，4h，ar-h)，4.96(d，j＝15.0hz，2h，ch2)，4.34(d，j＝15.0hz，2h，ch2)，3.89(s，6h，o-ch3)，3.26(s，6h，n-ch3).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ160.4，146.8，137.2，129.0，128.3，127.4，127.4，117.2，113.6，110.2，55.5，45.8，29.5.hrms(esi)calcdforc36h37n6o2s2⁺[m+h-2hcl]⁺649.2414，found649.2428.

化合物ib-9

黃色固體，收率：34％。熔點(diǎn)152-154℃，¹hnmr(400mhz，cd3od)δ7.61(d，j＝8.8hz，4h，ar-h)，7.34(d，j＝8.6hz，4h，ar-h)，7.15(d，j＝8.8hz，4h，ar-h)，6.98(d，j＝8.6hz，4h，ar-h)，4.54(d，j＝13.6hz，2h，ch2)，4.33(d，j＝14.3hz，2h，ch2)，3.95(s，6h，o-ch3)，3.82(s，6h，o-ch3)，3.35(s，6h，n-ch3).¹³cnmr(100mhz，cd3od)δ161.3，159.8，146.9，136.9，128.9，128.7，127.4，117.4，113.9，54.9，54.4，46.4，28.5.hrms(esi)calcdforc38h41n6o4s2⁺[m+h-2hcl]⁺709.2625，found709.2613.

化合物ib-10

灰白色固體，收率：27％。熔點(diǎn)153-155℃，¹hnmr(400mhz，dmso-d6)δ10.27(s，2h，hcl)，8.28(s，2h，nh)，7.56(d，j＝7.1hz，4h，ar-h)，7.42(d，j＝6.3hz，4h，ar-h)，7.33(d，j＝7.3hz，4h，ar-h)，6.82(d，j＝7.6hz，4h，ar-h)，4.84(d，j＝17.2hz，2h，ch2)，4.66(d，j＝17.3hz，2h，ch2)，3.71(s，6h，o-ch3)，3.27(s，6h，n-ch3).¹³cnmr(100mhz，dmso-d6)δ171.2，160.0，157.1，139.9，128.3，128.0，127.8，125.8，124.6(q，j＝3.6hz)，113.7，88.4，55.1，43.4，27.0.hrms(esi)calcdforc38h33f6n6o2s2⁺[m-h-2hcl]⁺783.2005，found783.2000.

實(shí)施例3：生物活性以抗煙草花葉病毒(tobaccomosaicvirus，tmv)活性為例，

芳甲胺類化合物ia-1-ia-10和ib-1-ib-10抗煙草花葉病毒活性的測(cè)定程序如下：

1、病毒提純及濃度測(cè)定：

病毒提純及濃度測(cè)定參照南開大學(xué)元素所生測(cè)室編制煙草花葉病毒sop規(guī)范執(zhí)行。病毒粗提液經(jīng)2次聚乙二醇離心處理后，測(cè)定濃度，4℃冷藏備用。

2、化合物溶液配制：

稱量后，原藥加入dmf溶解，制得1×10⁵μg/ml母液，后用含1‰吐溫80水溶液稀釋至所需濃度；病毒唑制劑直接兌水稀釋。

3、離體作用：

摩擦接種珊西煙適齡葉片，用流水沖洗，病毒濃度10μg/ml。收干后剪下，沿葉中脈對(duì)剖，左右半葉分別浸于1‰吐溫水及藥劑中，30min后取出，于適宜光照溫度下保濕培養(yǎng)，每3片葉為1次重復(fù)，重復(fù)3次。3d后記錄病斑數(shù)，計(jì)算防效。

4、活體保護(hù)作用：

選長(zhǎng)勢(shì)均勻一致的3-5葉期珊西煙，全株噴霧施藥，每處理3次重復(fù)，并設(shè)1‰吐溫80水溶液對(duì)照。24h后，葉面撒布金剛砂(500目)，用毛筆蘸取病毒液，在全葉面沿支脈方向輕擦2次，葉片下方用手掌支撐，病毒濃度10μg/ml，接種后用流水沖洗。3d后記錄病斑數(shù)，計(jì)算防效。

5、活體治療作用：

選長(zhǎng)勢(shì)均勻一致的3-5葉期珊西煙，用毛筆全葉接種病毒，病毒濃度為10μg/ml，接種后用流水沖洗。葉面收干后，全株噴霧施藥，每處理3次重復(fù)，并設(shè)1‰吐溫80水溶液對(duì)照。3d后記錄病斑數(shù)，計(jì)算防效。

6、活體鈍化作用：

選長(zhǎng)勢(shì)均勻一致的3-5葉期珊西煙，將藥劑與等體積的病毒汁液混合鈍化30min后，摩擦接種，病毒濃度20μg/ml，接種后即用流水沖洗，重復(fù)3次，設(shè)1‰吐溫80水溶液對(duì)照。3d后數(shù)病斑數(shù)，計(jì)算結(jié)果。

抑制率(％)＝[(對(duì)照枯斑數(shù)-處理枯斑數(shù))/對(duì)照枯斑數(shù)]×100％

表3為部分化合物的抗煙草花葉病毒(tobaccomosaicvirus，tmv)活性測(cè)試結(jié)果：

通過表3中數(shù)據(jù)可以看出，絕大部分化合物都表現(xiàn)出很好的抗煙草花葉病毒活體活性。部分化合物活性與商品化品種病毒唑相當(dāng)。化合物ia-2和ia-9活性優(yōu)于病毒唑，具備極大的開發(fā)價(jià)值。

實(shí)施例4：抗菌活性測(cè)試，測(cè)定程序如下：

a.離體殺菌測(cè)試，菌體生長(zhǎng)速率測(cè)定法(平皿法)：

將一定量藥劑溶解在適量丙酮內(nèi)，然后用含有200ug/ml乳化劑水溶液稀釋至所需濃度，然后各吸取1ml藥液注入培養(yǎng)皿內(nèi)，再分別加入9ml培養(yǎng)基，搖勻后制成50ug/ml的含藥平板，以添加1ml滅菌水的平板做空白對(duì)照。用直徑4mm的打孔器沿菌絲外緣切取菌盤，移至含藥平板上。每處理重復(fù)三次。將培養(yǎng)皿放在24±1℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48小時(shí)后調(diào)查各處理菌盤擴(kuò)展直徑，求平均值，與空白對(duì)照比較計(jì)算相對(duì)抑菌率。

表4部分polycarpine衍生物ia-1-ia-10和ib-1-ib-10的離體殺菌活性測(cè)試結(jié)果：

由表4中數(shù)據(jù)可以看出，polycarpine衍生物表現(xiàn)出很好的抗植物病菌活性，部分化合物抑菌活性優(yōu)于商品化品種多菌靈和百菌清，具備極大的開發(fā)價(jià)值。

b.活體殺菌測(cè)試，植株噴霧法：

稱量各化合物，定量dmso溶解后加入1‰吐溫80水溶液，配制成所需濃度待測(cè)液。

供試黃瓜、小麥幼苗培養(yǎng)于南開大學(xué)生測(cè)樓日光溫室。黃瓜第一片真葉完全展開后，噴霧處理，噴液量1ml/處理，噴霧壓力0.7kg/cm²，噴霧距離15cm。小麥一葉一心期處理，方法與黃瓜處理過程相同。

藥劑處理后24h，黃瓜灰霉與黃瓜霜霉均采用噴霧接種5×10⁵個(gè)/ml的孢子囊懸浮液于藥劑處理后的黃瓜真葉葉背，至葉片呈水浸狀止。暗環(huán)境保濕培養(yǎng)24h，后移至溫室環(huán)境下正常培養(yǎng)。48h后調(diào)查結(jié)果。小麥苗則采用沉降接種法，接菌后7d調(diào)查結(jié)果。結(jié)果調(diào)查采用分級(jí)方法，以“100”級(jí)代表無病，即抑制率100％；“0”級(jí)代表最嚴(yán)重的發(fā)病程度，抑制率為0，記錄。

表5部分polycarpine衍生物ia-1-ia-10和ib-1-ib-10的活體殺菌活性測(cè)試結(jié)果：

從表5中數(shù)據(jù)可以看出，polycarpine衍生物同樣表現(xiàn)出不錯(cuò)的活體殺菌活性。