優(yōu)先權(quán)聲明

本申請要求2014年10月29日提交的美國臨時申請系列號62/072094的優(yōu)先權(quán)，其通過引用納入本文。

本公開涉及用于培養(yǎng)細胞的設(shè)備、系統(tǒng)和方法。

技術(shù)背景

三維培養(yǎng)的細胞(例如球狀體)可展現(xiàn)出相比于在作為單層的二維培養(yǎng)中更類似活體內(nèi)的功能性。在二維細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中，細胞可附著于培養(yǎng)細胞的基材。然而，當(dāng)細胞在三維方向上生長(例如球狀體)時，細胞會彼此相互作用，而不是附著于基材。因此，將細胞培養(yǎng)成懸浮且可移動的球狀體的培養(yǎng)系統(tǒng)的細胞培養(yǎng)介質(zhì)交換可存在挑戰(zhàn)。

發(fā)明概述

根據(jù)本公開的各種實施方式，描述了配置成允許在含有球狀體的孔中進行培養(yǎng)介質(zhì)的交換而不會吸出或損傷球狀體的細胞培養(yǎng)插入件。細胞培養(yǎng)插入件可包含具有第一開口端部、第二開口端部和至少一個在第一開口端部與第二開口端部之間延伸的支承件的框體。插入件還包含與框體偶聯(lián)且橫跨所述第二端部的開口的流體可穿透的篩網(wǎng)。篩網(wǎng)確定平均孔徑在10微米～200微米、例如10、20、50、100或200微米(包括任意上述數(shù)值之間的范圍)范圍內(nèi)的孔。在一些實施方式中，對篩孔的尺寸進行調(diào)整以允許單個細胞橫穿或穿過篩網(wǎng)，但防止球狀體細胞簇通過。

在一些實施方式中，提供了細胞培養(yǎng)孔插入件，其包含：具有第一開口端部、確定開口的第二端部、和至少一個在第一開口端部和第二端部之間延伸的支承件的框體，其中，第二端部的開口具有9mm～0.25mm(例如9……5……3……2……0.75……0.25mm)的直徑；以及與框體偶聯(lián)且橫跨第二端部的開口設(shè)置的流體可穿透的篩網(wǎng)，所述篩網(wǎng)確定平均孔徑在10微米～200微米(例如10……35……75……200微米)范圍內(nèi)的篩孔。在一些實施方式中，框體配置成至少部分插入細胞培養(yǎng)制品的孔中，以使：i)篩網(wǎng)被安置在孔中與孔的最低點一定距離處；ii)當(dāng)存在于所述孔中時，球狀體在孔中被捕獲。

在一些實施方式中，提供了一些裝置，所述裝置包含：孔插入件，所述孔插入件具有第一開口端部、具有開口的第二端部，其中，所述第一開口端部和所述第二端部確定位于它們之間的空腔，且第二端部的開口具有9mm～0.25mm的直徑；和流體可穿透的篩網(wǎng)，所述篩網(wǎng)橫跨第二端部的開口設(shè)置，且確定平均孔徑在10微米～200微米范圍內(nèi)的篩孔，其中，所述孔插入件配置成至少部分插入細胞培養(yǎng)制品的孔中，以使：i)篩網(wǎng)被安置在孔中與孔的最低點一定距離處；ii)當(dāng)存在于所述孔中時，球狀體在孔中被捕獲。在某些實施方式中，孔插入件是整體成型的裝置。

在一些具體的實施方式中，框體包含多個從第一端部向第二端部延伸的支承件。在另一些實施方式中，篩網(wǎng)從框體的第一開口端部向第二端部延伸并在框體內(nèi)確定空腔。在另一些實施方式中，框體的至少一個支承件包含從第一開口端部向第二端部延伸且確定框體內(nèi)部的封閉側(cè)壁。在一些實施方式中，框體的至少一個支承件包含從第一開口端部向第二端部延伸且確定框體內(nèi)部的側(cè)壁。在另一些實施方式中，框體還包含一個或多個從第一開口端徑向延伸凸緣。在一些附加的實施方式中，框體配置成至少部分插入細胞培養(yǎng)制品的孔中，以使篩網(wǎng)被安置在孔中與孔的最低點一定距離處。

在一些具體的實施方式中，提供了一些方法，所述方法包括：在孔中培養(yǎng)細胞，所述孔包含如本文所述的細胞培養(yǎng)插入件。在一些具體的實施方式中，細胞在球狀體中以及/或者細胞形成球狀體。在另一些實施方式中，在插入件上方存在介質(zhì)，且所述方法還包括從孔中插入件的上方除去介質(zhì)。

在某些實施方式中，提供了一些細胞培養(yǎng)組件，所述細胞培養(yǎng)組件包含：確定內(nèi)表面的孔，所述內(nèi)表面確定最低點；和如本文所述的插入件，其中，插入件配置成至少部分插入孔中，以使流體可穿透的篩網(wǎng)被安置在孔中與最低點一定距離處。在一些實施方式中，孔不粘附細胞。在另一些實施方式中，對孔進行配置，以使在孔中培養(yǎng)的細胞形成球狀體。在一些附加的實施方式中，篩網(wǎng)的篩孔尺寸允許單個細胞穿過篩網(wǎng)，并且防止由細胞形成的球狀體穿過篩網(wǎng)。

在某些實施方式中，提供了一些細胞培養(yǎng)組件，所述細胞培養(yǎng)組件包含：a)孔，所述孔確定內(nèi)表面且配置成使在其中培養(yǎng)的細胞形成球狀體，其中，內(nèi)表面確定最低點；和b)插入件，所述插入件包含：i)確定篩孔的流體可穿透的篩網(wǎng)，其中，篩孔確定10微米～200微米范圍內(nèi)的平均孔徑，且所述篩網(wǎng)配置成被安置在孔的至少一部分中與最低點一定距離處；和ii)與所述篩網(wǎng)偶聯(lián)且配置成延伸遠離所述最低點的框體。

在某些實施方式中，篩網(wǎng)的孔配置成防止球狀體穿過篩網(wǎng)。在另一些實施方式中，框體配置成將篩網(wǎng)安置在與最低點一定距離處。在一些附加的實施方式中，孔還確定上邊緣，且框體與上邊緣接觸以將篩網(wǎng)安置在與最低點一定距離處。在另一些實施方式中，組件還包含支承件，且框體與支承件接觸以將篩網(wǎng)安置在與最低點一定距離處。在一些附加的實施方式中，篩網(wǎng)確定篩孔，其中，所述篩孔確定小于或等于40微米(例如40……35……25……15、……或10)的平均孔徑。在某些實施方式中，孔還確定與最低點相對的開孔，其中，孔的內(nèi)表面確定從開孔至最低點的圓錐形狀。在一些實施方式中，篩網(wǎng)確定圓形形狀或方形形狀。

在另一些實施方式中，組件還包含多個孔，且插入件還包含多個流體可穿透的篩網(wǎng)，其中，所述流體可穿透的篩網(wǎng)和多個流體可穿透的篩網(wǎng)中的每一個配置成被安置在多個孔和不同的孔的至少一部分中。在另一些實施方式中，孔的內(nèi)表面涂覆有超低粘合材料。在另一些實施方式中，篩網(wǎng)確定篩網(wǎng)邊緣，框體沿著篩網(wǎng)邊緣包圍篩網(wǎng)并且延伸遠離最低點。在另一些實施方式中，框體包含至少一個與流體可穿透的篩網(wǎng)偶聯(lián)的支承絲。在一些實施方式中，孔包含至少一個沿著內(nèi)表面的亞孔(sub-well)。

在一些具體的實施方式中，提供了用于從細胞培養(yǎng)設(shè)備的孔中除去培養(yǎng)介質(zhì)的方法，所述孔確定具有最低點的內(nèi)表面，所述方法包括：a)將插入件的一端插入孔中，插入件的插入端確定與插入件的空腔流體連通的開口，插入件具有橫跨所述開口設(shè)置的流體可穿透的篩網(wǎng)，其中，將插入件的插入端設(shè)置在孔中，以使篩網(wǎng)被安置在與最低點一定距離處；b)將流體除去裝置的尖端插入插入件的空腔中，以使所述尖端與最低點的距離至少與篩網(wǎng)至最低點之間的距離一樣遠；以及c)通過流體除去裝置回收流體來將流體從孔中除去。

在某些實施方式中，提供了細胞培養(yǎng)組件，所述細胞培養(yǎng)組件包含：第一孔，所述第一孔確定內(nèi)表面，且所述內(nèi)表面確定最低點；流體可穿透的篩網(wǎng)，所述流體可穿透的篩網(wǎng)確定篩孔，且所述篩孔確定范圍在10微米～200微米范圍內(nèi)的平均孔徑；框體，所述框體與篩網(wǎng)偶聯(lián)，且配置成將篩網(wǎng)保持在位于第一孔的至少一部分的上方的位置處。

在一些實施方式中，篩網(wǎng)確定篩孔，且篩孔確定在20微米～200微米范圍內(nèi)的平均孔徑。在另一些實施方式中，流體可穿透的篩網(wǎng)具有9mm～0.25mm(例如9……7……4……2……1……0.25mm)的直徑。在另一些實施方式中，篩網(wǎng)確定篩孔，且篩孔確定小于或等于40微米的平均孔徑。在一些附加的實施方式中，篩網(wǎng)配置成被安置在孔的至少一部分內(nèi)與最低點一定距離處。在另一些實施方式中，框體配置成延伸遠離最低點。在另一些實施方式中，第一孔確定上邊緣，且篩網(wǎng)配置成被設(shè)置在孔的上邊緣的上方。在另一些實施方式中，組件包含第二孔，且篩網(wǎng)配置成被安置在第二孔的上方。在一些具體的實施方式中，篩網(wǎng)確定篩網(wǎng)周界，且框體沿著篩網(wǎng)周界包圍篩網(wǎng)。

在一些實施方式中，孔(例如微孔)具有接近正弦波的截面形狀。在這些實施方式中，孔的底部是圓形的(例如半球狀圓形)，側(cè)壁的半徑從孔的底部向頂部增大，且孔之間的邊界是圓形的。因此，孔的頂部不以直角終止。在一些實施方式中，孔在底部與頂部的中點具有直徑d(也稱為d半高)、在孔的頂部具有直徑d頂部，且從孔的底部至頂部的高度為h。在這些實施方式中，d頂部大于d。附加的實施方式示于圖7，其中，孔的寬度大于連續(xù)孔之間的屏障寬度。這種實施方式允許在培養(yǎng)表面的給定區(qū)域內(nèi)存在大量的孔。

在以下的詳細描述中提出了本

技術(shù)實現(xiàn)要素：
的附加特征和優(yōu)點，其中的部分特征和優(yōu)點對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言根據(jù)所作描述即容易理解，或者通過實施包括以下詳細描述、權(quán)利要求書以及附圖在內(nèi)的本文所述的本發(fā)明內(nèi)容而被認識。

應(yīng)理解，前面的一般性描述和以下的詳細描述給出了本發(fā)明內(nèi)容的實施方式，用來提供理解要求保護的本發(fā)明內(nèi)容的性質(zhì)和特性的總體評述或框架。包括的附圖提供了對本發(fā)明的主題的進一步理解，附圖并入本說明書中并構(gòu)成說明書的一部分。附圖例示了本發(fā)明的主題的各種實施方式，并與說明書一起對本發(fā)明的主題的原理和操作進行闡述。此外，附圖和說明書僅僅是示例性的，并不試圖以任意方式限制權(quán)利要求的范圍。

附圖的簡要說明

當(dāng)結(jié)合以下附圖閱讀時，能對本發(fā)明下文的具體實施方式的詳細描述有最好的理解，附圖中相同的結(jié)構(gòu)用相同的附圖標(biāo)記表示，其中：

圖1a是具有孔的細胞培養(yǎng)設(shè)備的一種實施方式的透視圖。

圖1b是圖1a中所示的設(shè)備的一種實施方式的橫截面圖。

圖1c是在結(jié)構(gòu)化表面的一種實施方式的孔中生長成球狀體的細胞的示意性俯視圖；

圖2a是球體陷阱或孔插入件的一個實施方式的透視圖；

圖2b和2c是圖2a的孔插入件的實施方式的俯視圖，其圖示了兩種不同形狀的篩網(wǎng)；

圖3是多個孔和多個孔插入件的一種實施方式的示意性的橫截面圖；

圖4是孔插入件和包含多個亞孔的孔的一種實施方式的示意性橫截面圖；

圖5是具有多個孔和孔插入件的細胞培養(yǎng)設(shè)備的一種實施方式的透視圖；以及

圖6是具有正弦曲線或拋物線形狀的孔陣列的圖。

圖7是一種實施方式中含有球狀體的孔陣列的側(cè)視圖。

圖8是顯示一種本文所述設(shè)備的示范性使用方法的示意圖。

發(fā)明詳述

下面將對本發(fā)明的主題的各種實施方式進行更詳細的描述，其中的一些實施方式例示于附圖中。附圖中所使用的相同的編號表示相同的組件、步驟等。然而，應(yīng)當(dāng)理解的是，使用數(shù)字表示給定附圖中的組件并非旨在對另一幅附圖中標(biāo)有相同數(shù)字的組件進行限制。另外，使用不同數(shù)字表示組件并非旨在表示標(biāo)有不同數(shù)字的組件不能與其它編號的組件相同或相似。

本公開除了其它方面以外還描述了具有一個或多個孔的基材的細胞培養(yǎng)設(shè)備以及可被安置在一個或多個孔的至少一個中的細胞培養(yǎng)孔插入件。

在一些實施方式中，可對孔進行配置，以使在孔中培養(yǎng)的細胞形成球狀體。例如，孔可不粘附細胞，以使孔中細胞彼此相聯(lián)而形成球狀體簇。球狀體可膨脹至受到孔的幾何構(gòu)造限制的尺寸。在一些實施方式中，孔可涂覆有超低粘合性材料以使孔不粘附細胞。因為細胞不粘附孔的表面，在不吸出或干擾球狀體的條件下進行細胞培養(yǎng)介質(zhì)的交換可能是困難的。

經(jīng)過三維培養(yǎng)的細胞(例如球狀體)可展現(xiàn)出相比于在作為單層的二維培養(yǎng)中更類似活體內(nèi)的功能性。在二維細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中，細胞可附著于培養(yǎng)細胞的基材。然而，當(dāng)細胞在三維方向上生長(例如球狀體)時，細胞會彼此相互作用，而不是附著于基材。在三維方向上培養(yǎng)的細胞在細胞通信和胞外基質(zhì)的形成方面與活體組織更加接近。因此，球狀體能夠提供細胞遷移、分化、存活和生長的優(yōu)異模型，且因此能夠提供更好的用于研究、診斷和藥物療效、藥理學(xué)和毒性測試的系統(tǒng)。

在一些實施方式中，對裝置進行配置，以使在裝置中培養(yǎng)的細胞形成球狀體。例如，供細胞生長的孔可不粘附細胞，以使孔中細胞彼此相聯(lián)而形成球狀體。球狀體膨脹至受到孔的幾何構(gòu)造限制的尺寸。在一些實施方式中，孔可涂覆有超低粘合性材料以使孔不粘附細胞。

非粘附性材料的例子包括全氟化聚合物、烯烴或類似的聚合物或其混合物。其它例子包括瓊脂糖、諸如聚丙烯酰胺的非離子型水凝膠、諸如聚環(huán)氧乙烷的聚醚、以及諸如聚乙烯醇的多元醇或類似的材料或它們的混合物。例如非粘附性孔、孔的幾何構(gòu)造(例如尺寸和形狀)和/或重力的組合誘導(dǎo)孔中培養(yǎng)的細胞自發(fā)組成球狀體。相對于單層中生長的細胞，一些球狀體能夠維持分化細胞功能，顯示更好的類似活體內(nèi)的反應(yīng)。另一些細胞類型，例如間充質(zhì)干細胞，在作為球狀體培養(yǎng)時保持其多能性。

在一些實施方式中，本文所述的系統(tǒng)、裝置和方法包含一種或多種細胞。在一些實施方式中，細胞是冷凍保存的。在一些實施方式中，細胞在三維培養(yǎng)物中。在一些這樣的實施方式中，系統(tǒng)、裝置和方法包含一種或多種球狀體。在一些實施方式中，一種或多種細胞在活躍分裂。在一些實施方式中，系統(tǒng)、裝置和方法包含培養(yǎng)介質(zhì)(例如包含營養(yǎng)物(例如蛋白質(zhì)、肽、氨基酸)、能量(例如碳水化合物)、必需金屬和礦物質(zhì)(例如鈣、鎂、鐵、磷酸鹽、硫酸鹽)、緩沖劑(例如磷酸鹽、醋酸鹽)、ph變化指示劑(例如酚紅、溴甲酚紫)、選擇劑(例如化學(xué)試劑、抗微生物劑)等)。在一些實施方式中，系統(tǒng)、裝置和方法中包含一種或多種測試化合物(例如藥物)。

可對多種細胞種類進行培養(yǎng)。在一些實施方式中，球狀體含有單一的細胞種類。在一些實施方式中，球狀體含有多于一種細胞種類。在一些實施方式中，在培養(yǎng)多于一個球狀體的情況下，各球狀體由相同種類的細胞形成，而在另一些實施方式中，培養(yǎng)兩種或更多種不同種類的球狀體。生長成球狀體的細胞可以是天然細胞或者經(jīng)過改變的細胞(例如，包含一種或多種非天然基因改變的細胞)。在一些實施方式中，細胞是體細胞。在一些實施方式中，細胞是處于任何所需的分化狀態(tài)下(例如多能性、多功能性、決定命運的(fatedetermined)、不死化等)的干細胞或祖細胞(例如，胚胎干細胞、誘導(dǎo)的多能干細胞)。在一些實施方式中，細胞是疾病細胞或疾病模型細胞。例如，在一些實施方式中，球狀體包含一種或多種癌細胞或可被誘導(dǎo)進入過度增殖狀態(tài)的細胞(例如轉(zhuǎn)化細胞)。細胞可來自或衍生自任何所需的組織或器官類型，包括但不限于腎上腺、膀胱、血管、骨、骨髓、腦、軟骨、子宮頸、角膜、子宮內(nèi)膜、食管、胃腸道、免疫系統(tǒng)(例如t淋巴細胞、b淋巴細胞、白細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞)、肝、肺、淋巴、肌肉(例如心肌)、神經(jīng)、卵巢、胰腺(例如胰島細胞)、垂體、前列腺、腎、唾液、皮膚、肌腱、睪丸和甲狀腺。在一些實施方式中，細胞是哺乳動物細胞(例如人、小鼠、大鼠、兔、狗、貓、牛、豬、雞、山羊、馬等)。

經(jīng)過培養(yǎng)的細胞可用于多種研究、診斷、藥物篩選以及測試、治療和工業(yè)應(yīng)用中。

在一些實施方式中，細胞被用于生產(chǎn)蛋白質(zhì)或病毒。用于同時培養(yǎng)大量球狀體的系統(tǒng)、裝置和方法在蛋白質(zhì)生產(chǎn)上特別有效。三維培養(yǎng)實現(xiàn)了每平方厘米細胞生長表面積上提高了的細胞密度和更高的蛋白質(zhì)產(chǎn)率。用于生產(chǎn)疫苗所需的任何蛋白質(zhì)或病毒都可在細胞中生長并為了所需的用途而分離或純化。在一些實施方式中，蛋白質(zhì)是細胞的天然蛋白質(zhì)。在一些實施方式中，蛋白質(zhì)是非天然的。在一些實施方式中，蛋白質(zhì)被重組表達。優(yōu)選地，使用非天然的啟動子過表達蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)可被表達為融合蛋白。在一些實施方式中，純化或檢測標(biāo)記被表達為感興趣的蛋白質(zhì)的融合伙伴(fusionpartner)，以幫助其進行純化和/或檢測。在一些實施方式中，融合物與可切割的接頭一起表達，以允許在純化后對融合伙伴進行分離。

在一些實施方式中，蛋白質(zhì)是治療性蛋白質(zhì)。這種蛋白質(zhì)包括但不限于具有以下作用的蛋白質(zhì)和肽：替代有缺陷或異常的蛋白質(zhì)(例如胰島素)；增強現(xiàn)存通道(例如抑制物或激動劑)；提供新穎的功能或活性；干擾分子或有機體；或者傳遞其它化合物或蛋白質(zhì)(例如放射性核素，細胞毒性藥物，效應(yīng)蛋白等)。在一些實施方式中，蛋白質(zhì)是任意種類(例如人源化，雙特異性，多特異性等)的的免疫球蛋白，例如抗體(例如單克隆抗體)。治療性蛋白質(zhì)的分類包括但不限于：基于抗體的藥物、fc融合蛋白、抗凝血劑、抗原、血液因子、骨形態(tài)發(fā)生蛋白、工程化的蛋白質(zhì)支架、酶、生長因子、激素、干擾素、白細胞介素和血栓溶解劑。治療性蛋白質(zhì)可用于預(yù)防或治療癌癥、免疫失調(diào)，代謝紊亂，先天性基因失調(diào)，感染以及其它疾病和病況。

在一些實施方式中，蛋白質(zhì)是診斷性蛋白質(zhì)。診斷性蛋白質(zhì)包括但不限于抗體、親和力結(jié)合伴侶(例如與受體結(jié)合的配體)、抑制劑、拮抗劑等。在一些實施方式中，診斷性蛋白質(zhì)可與可檢測基團一起表達或者就是可檢測基團(例如，熒光基團、發(fā)光基團(例如熒光素酶)、發(fā)色基團等)。

在一些實施方式中，蛋白質(zhì)是工業(yè)蛋白質(zhì)。工業(yè)蛋白質(zhì)包括但不限于食品成分、工業(yè)酶、農(nóng)業(yè)蛋白質(zhì)、分析酶等。

在一些實施方式中，細胞被用于藥物研發(fā)、表征、功效測試和毒性測試。這種測試包括但不限于：藥理作用評估，致癌性評估，醫(yī)學(xué)成像劑特性評估，半衰期評估，輻射安全性評估，遺傳毒性試驗，免疫毒性試驗，生殖和發(fā)育測試，藥物相互作用評估，劑量評估，吸收評估，沉積評估，代謝評估，清除研究等。特定的細胞種類可用于特定的測試(例如肝細胞用于肝毒性測試，腎近曲小管上皮細胞用于腎毒性測試，血管內(nèi)皮細胞用于血管毒性測試，神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞用于神經(jīng)毒性測試，心肌細胞用于心臟毒性測試，骨骼肌細胞用于橫紋肌溶解測試)?？蓪?jīng)過處理的細胞的任意數(shù)量的參數(shù)進行評估，包括但不限于：膜的完整性，細胞代謝物含量，線粒體功能，溶酶體功能，凋亡，遺傳改變，基因表達差異等。

在一些實施方式中，細胞培養(yǎng)裝置是更大的系統(tǒng)中的一個組件。在一些實施方式中，系統(tǒng)包含多個(例如2、3、4、5、……、10、……、20、……、50、……、100、……、1000等)這樣的細胞培養(yǎng)裝置。在一些實施方式中，系統(tǒng)包含用于將培養(yǎng)裝置保持在最佳培養(yǎng)條件(例如溫度、氣氛、濕度等)下的培養(yǎng)箱。在一些實施方式中，系統(tǒng)包含用于繪制細胞圖像或分析細胞的檢測器。所述檢測器包括但不限于：熒光計，光度計，相機，顯微鏡，讀板機(例如珀金埃爾默公司(perkinelmer)的envision讀板機；珀金埃爾默公司的viewlux讀板機)、細胞分析儀(例如通用電氣公司(ge)的incell分析儀2000和2200；thermo/cellomicscellnsight高含量篩選平臺(highcontentscreeningplatform)和共焦成像系統(tǒng)(例如珀金埃爾默公司的operaphenix高通量成分篩選系統(tǒng)(highthrougputcontentscreeningsystem)；通用電器公司的incell6000細胞成像系統(tǒng)(cellimagingsystem))。在一些實施方式中，系統(tǒng)包含灌注系統(tǒng)或其它用于向經(jīng)過培養(yǎng)的細胞供給、再次供給和循環(huán)培養(yǎng)介質(zhì)或其它組分的組件。在一些實施方式中，系統(tǒng)包含機器人組件(例如移液器、機械臂、板材移動器等)以實現(xiàn)培養(yǎng)裝置的操作、使用和/分析的自動化。

在一些實施方式中，可使用的具有本文所述的插入件的細胞培養(yǎng)設(shè)備是一種多孔圓底培養(yǎng)板，例如96孔圓底培養(yǎng)板。

細胞培養(yǎng)容器100的一種實施方式示于圖1a和1b。圖1a所顯示的實施方式是具有多個孔115的96孔板。通常，“孔”(well)表示大孔，例如圖1a中所示的那些。然而，可提供任意類型的細胞培養(yǎng)容器。例如，可提供皿、6孔板、12孔板、24孔板、96孔板、384孔板或1536孔板。“微孔”通常表示小孔，其被構(gòu)建成含有單一球狀體?？墒苟鄠€孔115具有多種不同的排布。例如，多個孔115可確定堆疊、六邊形緊密排布等的圖案。在一些實施方式中，孔115形成于主表面112中?？?15可包含如圖1a中所示的有序的孔結(jié)構(gòu)的陣列。多孔細胞培養(yǎng)容器的一種實施方式的側(cè)面橫截視圖示于圖1b，其顯示了形成于基材110中的圓底孔。在這種實施方式中，多個孔115中的每一個下陷至細胞培養(yǎng)設(shè)備100的主表面112以下，且具有提供位置以形成如本文所述的球狀體的圓形底面。

在一些實施方式中，細胞培養(yǎng)容器100可具有如圖1a和圖1b所示的適合含有如本文所述的插入件的大孔。這些大孔可以是相對較小的，例如，1536孔板中的孔(其通常深5.01mm且頂部直徑為1.69mm)，但其仍然比微孔(其可以通常深500μm且寬約500μm)大得多。另外，在一些實施方式中，大孔可具有含有微孔125(參見圖4中的125)的細胞培養(yǎng)表面(圖4中的126)。這些微孔被構(gòu)建成適應(yīng)各微孔中的單一球狀體。如本文所述，微孔的尺寸和形狀可引發(fā)球狀體的形成。圖1c是顯示在結(jié)構(gòu)化表面113的一種實施方式的微孔125(如圖4中的125所示)中生長的細胞200的示意圖，所述結(jié)構(gòu)化表面113包含六邊形緊密排布的微孔陣列。在一些實施方式中，各孔125中的細胞200形成單一球狀體，如圖1c所示。微孔可采用任何形式或形狀或幾何構(gòu)造，包括圖1c中顯示的那些。

圖2a～c顯示了細胞培養(yǎng)插入件的實施方式，在一些實施方式中，所述細胞培養(yǎng)插入件可被插入細胞培養(yǎng)容器100的孔115中。這些是大孔插入件。

多個孔115中的每一個都可包含球狀體捕獲插入件、或孔插入件、或插入件150，如圖2a所示?？撞迦爰?50可配置成被安置在孔115的至少一部分中?？撞迦爰?50或其部分可由任意合適的材料制成。優(yōu)選地，打算與細胞或培養(yǎng)介質(zhì)接觸的材料與細胞和介質(zhì)兼容。通常，細胞培養(yǎng)組件由聚合物材料制成。合適的聚合物材料的例子包括：聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚砜、聚苯乙烯共聚物、含氟聚合物、聚酯、聚酰胺、聚苯乙烯丁二烯共聚物、完全氫化的苯乙烯聚合物、聚碳酸酯pdms共聚物、以及聚烯烴，例如聚乙烯、聚丙烯、聚甲基戊烯、聚丙烯共聚物和環(huán)烯烴共聚物等。

如圖2a所示，孔插入件150可包含框體160?？蝮w160可具有第一端部161、第二端部162和至少一個在第一端部161與第二端部162之間延伸的支承件163。如圖所示，第一端部161可確定開孔或開口164。第一端部161的開孔164可與孔的頂部開孔對齊，并且允許孔內(nèi)部的至少一部分能夠被利用。在一些實施方式中，第一端部161可位于孔的外側(cè)，并且遠離孔的頂部開孔(參見圖4)。框體160的第一端部161可由各種形狀確定，例如圓形、正方形、矩形、菱形、六邊形等。在一些實施方式中，第一端部161的形狀可與孔的頂部開孔的形狀匹配。

如圖2a所示，可對框體160的第一端部161進行配置，以使框體160被安置在孔的至少一部分中。例如，框體160可從孔的頂部開孔向下延伸進入孔內(nèi)。在一些實施方式中，第一端部161的形狀可幫助將框體160固定在緊鄰孔的頂部開孔的位置處。如圖2a所示，框體160可包含一個或多個從框體160的第一端部161延伸的凸緣168。一個或多個凸緣168可幫助將框體160安置在孔的至少一部分中。例如，一個或多個凸緣168可與緊鄰孔的部分接觸，以將框體160安置在孔的至少一部分中。在一些實施方式中，一個或多個凸緣168可與細胞培養(yǎng)設(shè)備的其它一些部分接觸，以將框體160安置在孔的至少一部分中。

支承件163可以是側(cè)壁?？撞迦爰?50的框體160的支承件163可在孔插入件150的第一和第二端部161、162之間延伸且與第一和第二端部161、162偶聯(lián)，如圖2a～2c所示。如圖2b和2c所示，框體160包含四個支承件166?？蝮w160可包含少于四個支承件(例如一個支承件、兩個支承件、三個支承件等)、四個支承件、或多于四個支承件(例如五個支承件、六個支承件、八個支承件、十個支承件等)。一個或多個支承件163可包括例如絲、條、棒等。在第一和第二端部161、162之間延伸的一個或多個支承件163可確定基本上開放的框體。換言之，第一和第二端部161、162之間的空間通常是開放的。在一些實施方式中，一個或多個支承件163可包含從第一和第二端部161、162延伸且與第一和第二端部161、162偶聯(lián)的側(cè)壁。在一些實施方式中，側(cè)壁可完全包圍第二端部162的邊緣或外周。換言之，側(cè)壁可圍住第一和第二端部161、162之間的區(qū)域，從而確定框體160的封閉管狀結(jié)構(gòu)。側(cè)壁支承件可由各種不同的特性來確定，例如實心的、多孔的、流體可穿透的。

框體160的第二端部162可確定開口165。當(dāng)框體160被安置在孔的至少一部分中時，第二端部162的開口165可比第一端部161更接近孔的底部。

孔插入件150還包含與框體160偶聯(lián)且橫跨第二端部162的開口165的流體可穿透的篩網(wǎng)170。篩網(wǎng)170可確定篩孔171。篩孔171可確定以下平均孔徑，例如，大于或等于約5微米、大于或等于約10微米、大于或等于20微米、大于或等于35微米、大于或等于50微米等，或者小于或等于約200微米、小于或等于約90微米、小于或等于75微米、小于或等于60微米、小于或等于45微米等。在一些實施方式中，篩孔可確定約40微米的平均孔徑。篩孔171可被確定為具有防止球狀體穿過篩網(wǎng)170的尺寸。或者，篩孔171可被確定為具有允許單個細胞穿過篩網(wǎng)170的尺寸。篩網(wǎng)可由各種不同的材料制成，包括但不限于徑跡蝕刻膜或者織造或無紡多孔材料。多孔膜的材料可經(jīng)過處理或涂覆以使其粘附性更強、更可被潤濕、或者更加不粘附細胞。所述處理可通過任意數(shù)量的本領(lǐng)域已知的方法來完成，包括等離子體放電、電暈放電、氣體等離子體放電、離子轟擊、電離輻射以及高強度紫外線?？赏ㄟ^任意合適的本領(lǐng)域已知的方法來引入涂層，包括印刷、噴霧、凝結(jié)、輻射能、電離技術(shù)或浸漬。在某些實施方式中，涂層可隨后提供共價或非共價的附著位點。這些位點可被用于附著諸如細胞培養(yǎng)組分這樣的部分(例如促進生長或粘附的蛋白質(zhì))。另外，涂層還可用于增強細胞(例如聚賴氨酸)的附著?；蛘?，可使用如本文所述的不粘附細胞的涂層來防止或抑制細胞粘合。在一些實施方式中，篩網(wǎng)包含尼龍或聚酯篩網(wǎng)。

在一些實施方式中，篩網(wǎng)還可設(shè)置在第一與第二端部之間。在這些實施方式中，在篩網(wǎng)或側(cè)壁在第一與第二端部之間延伸的情況下，框體的內(nèi)部空間或空腔可由框體確定。換言之，框體的內(nèi)部空間或空腔將由橫跨第二開口設(shè)置的篩網(wǎng)和在第一與第二端部之間延伸的側(cè)壁(例如篩網(wǎng)、固體等)確定。

第二端部162的開口165、進而篩網(wǎng)170可確定為各種形狀，例如正方形、矩形、圓形、六邊形等。如圖2b所示，第二端部162的開口165可確定為一個圓。如圖2c所示，第二端部162的開口165可確定為一個正方形。第二端部162的形狀可描述成防止當(dāng)孔插入件150被安置在其中時球狀體離開孔。換言之，框體160的第二端部162的形狀可對應(yīng)于孔的形狀，以使框體160的第二端部162與孔的一側(cè)之間的任意間隙都不足以大到允許球狀體穿過。例如，第二端部162的形狀可被確定為與孔的一側(cè)所確定的形狀具有相同的尺寸，從而消除兩者之間的任何間隙。

在一些實施方式中，如圖3所示，細胞培養(yǎng)容器100可包含一個或多個孔115和一個或多個孔插入件150。如圖所示，各孔115包含對應(yīng)的孔插入件150?？撞迦爰?50配置成被安置在孔115的至少一部分內(nèi)。換言之，孔插入件150可插入孔115的至少一部分，且孔插入件150可從孔115的至少一部分中移除。在一些實施方式中，一個或多個孔插入件150可彼此偶聯(lián)，以使一個或多個孔插入件150可同時被安置進出一個或多個孔115。一個或多個孔115可通過使用框體160來偶聯(lián)。在另一些實施方式中，一個或多個孔150中的每一個可配置成單獨被安置進出相應(yīng)的孔115。換言之，在一些實施方式中，一個或多個孔插入件150中的任一個都不互相依附。在另一些實施方式中，基于應(yīng)用，一個或多個孔插入件可以各種組合彼此偶聯(lián)。例如，一個或多個孔插入件可以約384個、96個、48個、24個、12個、6個等的小組來偶聯(lián)。

在一些附加的實施方式中，如圖4所示，孔115可在孔的底部具有細胞培養(yǎng)表面126。在一些實施方式中，細胞培養(yǎng)表面至少部分具有結(jié)構(gòu)化表面113，所述結(jié)構(gòu)化表面113具有微孔125的陣列。

如本文所述的細胞培養(yǎng)設(shè)備100的結(jié)構(gòu)化表面113可確定任意合適數(shù)量的可具有任意合適尺寸或形狀的微孔125。微孔125基于它們的尺寸和形狀來確定體積。在許多實施方式中，一個或多個或所有孔125能夠圍繞著縱軸對稱地旋轉(zhuǎn)。在一些實施方式中，一個或多個或所有微孔125的縱軸彼此平行。微孔125可被均勻或不均勻地分隔開。優(yōu)選地，微孔125被均勻隔開。一個或多個或所有微孔125可具有相同的尺寸和形狀，或者具有不同的尺寸和形狀。

在某些實施方式中，孔115可由確定孔的底部且在主表面112下方延伸的基材110確定。一個或多個孔115中的每一個孔確定內(nèi)表面120、外表面114和上開孔118。在一些實施方式中，孔115可允許氣體穿透基材110。孔115的允許氣體穿透基材110至外表面114的穿透性將會部分取決于基材的材料以及基材沿著孔115的厚度。例如，孔的可透氣性可如共同受讓的美國臨時專利申請?zhí)?2/072088中所述，該臨時專利申請在此通過引用全文納入本文，其與本公開的內(nèi)容不沖突。

孔的內(nèi)表面確定最低點116或與上開孔118相對的低點。仍然參考圖3，孔115具有由最低點116至上開孔118的高度確定的深度d?？?15還具有橫跨由上開孔118確定的孔的直徑尺寸w，例如直徑、寬度等?？卓删哂泻线m的深度d和直徑尺寸w。在一些實施方式中，深度d、直徑尺寸w和孔的形狀、以及形成孔的材料都起到了確定可供細胞生長的體積的作用。

在一些實施方式中，本文所述的孔115具有在約200微米～約500微米范圍內(nèi)的直徑尺寸w。這些直徑尺寸能夠控制其中生長的球狀體130生長的尺寸，以使球狀體內(nèi)部的細胞保持健康狀態(tài)。在一些實施方式中，孔115具有在約100微米～約500微米范圍內(nèi)的深度d。當(dāng)然，也可采用其它合適的尺寸，例如不超過3000微米或更大。

在一些實施方式中，孔115的內(nèi)表面不粘附細胞?？?15可由非粘附性材料形成，或者可涂覆有非粘附性材料以形成非粘附的孔。在一些實施方式中，非粘附性材料可被描述為超低粘合性材料。非粘附性材料的例子包括全氟化的聚合物、烯烴或類似的聚合物或它們的混合物。其它例子包括瓊脂糖、諸如聚丙烯酰胺這樣的非離子型水凝膠、諸如聚環(huán)氧乙烷這樣的聚醚、以及諸如聚乙烯醇這樣的多元醇或類似的材料或它們的混合物。例如非粘附性孔、孔的幾何構(gòu)造以及重力的組合可引發(fā)細胞在孔中的培養(yǎng)，以自組成球狀體130。相對于單層中生長的細胞，一些球狀體130能夠保持表示更好的類似活體內(nèi)的反饋的分化細胞功能。

從圖4中可以看到，內(nèi)表面120可確定從上開孔118至最低點116之間的多種不同的形狀。例如，在一些實施方式中，一個或多個孔115可由拱形表面確定，例如半球形表面或凹陷、具有圓底的圓錐形表面、以及類似的表面幾何構(gòu)型或它們的組合?？?15的最低點116可最終在有助于球形的圓形或彎曲表面上終結(jié)、終止或形成底部，所述表面例如淺凹、深坑以及類似的截頭圓錐形浮凸表面或它們的組合。可透氣的球狀體凹陷孔的其它形狀和構(gòu)造在共同受讓的美國專利申請?zhí)?4/087906中有所描述，該申請通過引用全文納入本文，其與本公開的內(nèi)容不沖突。

在一些實施方式中，內(nèi)表面120可以是平坦的或向一點會聚。內(nèi)表面120可具有任意其它合適的形狀或尺寸。

在一些實施方式中，可對篩網(wǎng)170進行配置，以使當(dāng)細胞被播種入孔115中時單個細胞可穿過篩網(wǎng)170。例如，篩孔171可確定大于單個細胞的平均孔徑。然而，在細胞形成為球狀體130之后，球狀體130可能過于龐大而無法回穿過篩網(wǎng)170。一旦球狀體130被安置在內(nèi)表面120的最低點116和篩網(wǎng)170之間，篩網(wǎng)170的存在還可通過降低出錯的可能性來幫助提高使用者的效率。例如，篩網(wǎng)170的存在能夠防止移液器與球狀體130接觸。另外，篩網(wǎng)170可幫助引入的或者從孔115中回收的介質(zhì)流擴散。這種擴散可幫助防止漩渦擾亂球狀體130。

在一些實施方式中，包圍孔的基材的厚度和形狀配置成對穿入內(nèi)表面和傳出外表面的光線折射進行糾正。例如，形狀和厚度可如共同受讓的美國臨時專利申請?zhí)?2/072019中所述，該臨時專利申請在此通過引用全文納入本文，其與本公開的內(nèi)容不沖突。

在一些實施方式中，孔插入件150可包含流體可穿透的篩網(wǎng)170和框體160。如圖3所示，孔插入件150配置成至少部分插入孔115，以使篩網(wǎng)170被安置在孔170中與最低點116相距一定距離119處。當(dāng)孔插入件150被安置在孔115中時，框體160可與篩網(wǎng)170偶聯(lián)并且延伸遠離最低點116?？蝮w160可用于幫助將孔插入件150安置入以及移出孔115。在一些實施方式中，框體160可配置成將篩網(wǎng)170安置在與最低點116相距一定距離119處。例如，框體160可與孔的上邊緣121接觸，以將篩網(wǎng)170安置在與最低點116相距一定距離119處。在另一個例子中，細胞培養(yǎng)組件100可包含支承件，其與框體160接觸以確保篩網(wǎng)170被安置在與最低點116相距所需距離119處。在另一些實施方式中，篩網(wǎng)170可與孔115的內(nèi)表面120接觸，從而對篩網(wǎng)170和最低點116之間的距離119進行控制。

如圖4所示，孔115在沿著孔115內(nèi)表面的細胞培養(yǎng)表面126上可包含至少一個微孔125。在一些實施方式中，多個微孔125沿著孔115的內(nèi)表面120安置。微孔125可具有與上述孔115相似的特征。或者，細胞培養(yǎng)設(shè)備可包含儲器，且所述儲器可包含多個如本文所述的孔。圖4中還顯示，孔115可含有位于其中的被安置在孔115的內(nèi)表面120與孔115的上開孔之間的孔插入件150，這與圖3相似。

在一些實施方式中，如圖5所示，細胞培養(yǎng)組件500可包含具有孔515、525的陣列的儲器521、流體可穿透的篩網(wǎng)570和與篩網(wǎng)570偶聯(lián)的框體560。框體560可配置成使篩網(wǎng)570保持在位于第一孔515的至少一部分的上方的位置處。在一些實施方式中，篩網(wǎng)570配置成被設(shè)置在第一孔515的上邊緣520的上方。在一些實施方式中，細胞培養(yǎng)組件500可包含第二孔525，且篩網(wǎng)570配置成被安置在第二孔525的上方。

可用本文所述的孔插入件幫助將球狀體容納在細胞培養(yǎng)容器孔115中，即，防止球狀體在進行諸如交換孔115中的細胞培養(yǎng)介質(zhì)這樣的處理過程中離開孔115。在一些實施方式中，當(dāng)孔插入件150(例如圖2a)被安置在孔115的至少一部分中時，可使細胞培養(yǎng)設(shè)備100傾斜以除去細胞培養(yǎng)介質(zhì)。在另一些實施方式中，當(dāng)孔插入件150被安置在孔115的至少一部分中時，可使用移液器除去細胞培養(yǎng)介質(zhì)。結(jié)合移液器使用孔插入件150可降低移液器影響球狀體的風(fēng)險，例如，移液器無法吸出球狀體。

圖6顯示微孔的陣列601可具有正弦曲線或拋物線形狀。這種正弦曲線或拋物線的孔形狀具有圓形頂部和圓形孔底部。如圖6所示，孔615具有頂部直徑為d頂部的頂部開口、從孔616底部至孔頂部的高度h、以及在孔頂部與孔底部616之間的中點613處的孔的直徑d半高。在一些實施方式中，細胞培養(yǎng)容器的孔的陣列可額外在孔的陣列中具有微孔陣列(所述微孔陣列具有如圖6和圖7所示的結(jié)構(gòu))以在細胞被捕獲于插入件與細胞培養(yǎng)孔的底表面和最低點之間后誘導(dǎo)球狀體的形成。

圖7是微孔陣列的示意圖。圖7顯示了以陣列方式排布于結(jié)構(gòu)化表面113中的多個微孔615。圖7中還顯示，多個球狀體500駐留在多個微孔615中。在一些實施方式中，細胞培養(yǎng)容器的最低點或細胞培養(yǎng)表面(例如96孔板的孔底)可以是具有能夠引發(fā)球狀體的形成的微孔陣列的基材。這可被稱為結(jié)構(gòu)化底表面。

一種用于從細胞培養(yǎng)設(shè)備的孔中除去培養(yǎng)介質(zhì)的方法800示于圖8?？状_定包括最低點的內(nèi)表面。將插入件的一端設(shè)置810入孔中，所述插入件的所述插入端確定與插入件的空腔流體連通的開口。插入件包含橫跨開口設(shè)置的流體可穿透的篩網(wǎng)，且插入件的插入端被設(shè)置在孔中，以使篩網(wǎng)被安置在與最低點一定距離處。將流體除去裝置的尖端插入820插入件的空腔中，以使所述尖端與最低點的距離至少與篩網(wǎng)至最低點之間的距離一樣遠。通過流體除去裝置回收流體來將流體從孔中除去630。圖8顯示本文所述設(shè)備的一種實施方式的示例性使用方法800。首先，在810中，該方法將插入件的一端設(shè)置入孔中，以使篩網(wǎng)被安置在與最低點一定距離處。第二，820，該方法將流體除去裝置的尖端插入插入件的空腔中，以使該尖端與最低點至少相距所述距離。第三，830，該方法通過利用流體除去裝置回收流體來將流體從孔中除去。

本文所述的結(jié)構(gòu)化底表面可形成于任意合適的物質(zhì)中。例如，可對基材進行模塑以形成結(jié)構(gòu)化表面，可對基材膜進行浮雕以形成結(jié)構(gòu)化表面等。

可以任何合適的方式將如上所述的結(jié)構(gòu)化底表面組裝入細胞培養(yǎng)設(shè)備中。例如，細胞培養(yǎng)設(shè)備的結(jié)構(gòu)化底表面和一個或多個其它組件可作為單一部件模塑。在一些實施方式中，結(jié)構(gòu)化底表面或其一部分可焊接(例如熱焊接、超生焊接等)、粘結(jié)或熱成形至細胞培養(yǎng)設(shè)備的一個或多個其它組件。

本文所述的細胞培養(yǎng)孔插入件可與細胞培養(yǎng)設(shè)備一起使用，在所述細胞培養(yǎng)設(shè)備中，例如，介質(zhì)流過多個具有在球狀體頂部上的孔插入件的孔/腔室。在一些實施方式中，細胞培養(yǎng)插入件是整體式的，例如附著于細胞培養(yǎng)設(shè)備或形成細胞培養(yǎng)設(shè)備的一部分。在某些實施方式中，孔插入件能夠防止孔中的球狀體離開孔而進入移動通過細胞培養(yǎng)灌注設(shè)備的介質(zhì)流中。在一些具體的實施方式中，如圖5所示，采用單一的插入件來覆蓋多個孔。這種插入件可被插入細胞培養(yǎng)設(shè)備中，或者作為細胞培養(yǎng)設(shè)備的一個整體部件。細胞培養(yǎng)設(shè)備可采用或不采用氧合器。下面參考圖8和9對一種不需要氧合器(例如，孔是可透氣的，且在設(shè)備中提供了空氣通路)的示例性的細胞培養(yǎng)設(shè)備進行描述。

除非另外說明，否則本文所使用的所有科學(xué)和技術(shù)術(shù)語的含義具有本領(lǐng)域通用的含義。本文所提供的確定是用來幫助理解本文經(jīng)常用到的某些術(shù)語，不對本公開的范圍構(gòu)成限制。

除非上下文另外清楚地說明，否則，本文所用的單數(shù)形式“一個”、“一種”以及“該/所述”包括復(fù)數(shù)指代。因此，例如，所述“結(jié)構(gòu)化底表面”包括具有兩個或更多個此類“結(jié)構(gòu)化底表面”的例子，除非文中另行明確指明。

如本說明書和所附權(quán)利要求書所用，除非文中有明確的相反表示，否則“或”字通常在其包括“和/或”的含義上使用。術(shù)語“和/或”表示所列出的要素中的一個或全部或者所列出的要素中的任何兩個或多個元素的組合。

如本文所用，“具有”、“含有”、“擁有”、“包括”、“包含”、“含”、等在其開放含義上使用，通常表示“包括但不限于”。

“可選的”或“可選地”表示隨后描述的事件、情形或組分可能發(fā)生，也可能不發(fā)生，而且該描述包括事件、情形或組分發(fā)生的實例和所述事件或情形不發(fā)生的實例。

術(shù)語“優(yōu)選”和“優(yōu)選地”是指能夠在特定條件下產(chǎn)生某些益處的本公開的實施方式。然而，在相同或其他條件下，其它實施方式也可以是優(yōu)選的。此外，一個或多個優(yōu)選實施方式的描述并不意味著其他實施方式不是有用的，并且不旨在將其他實施方式排除在具有創(chuàng)造性的技術(shù)的范圍之外。

本文中，范圍可以表示為從“約”一個具體值開始和/或至“約”另一個具體值終止。當(dāng)表述這種范圍時，例子包括自某一具體值始和/或至另一具體值止。類似地，當(dāng)使用先行詞”約”表示數(shù)值為近似值時，應(yīng)理解，具體數(shù)值構(gòu)成另一方面?zhèn)€。還應(yīng)理解的是，每個范圍的端點值在與另一個端點值相結(jié)合以及獨立于另一個端點值的情況下都是有意義的。

另外，在本文中，利用端點所進行的數(shù)字范圍的描述包括將該范圍內(nèi)的所有數(shù)字包括在內(nèi)(例如1～5包括1、1.5、2、2.75、3、3.80、4、5等)。在數(shù)值范圍是“大于”一個特定值、“小于”一個特定值等的情況下，該數(shù)值包括在該范圍之內(nèi)。

本文所涉及的任意方向，例如“頂部”、“底部”、“左側(cè)”、“右側(cè)”、“上”、“下”、“上方”、“下方”以及其它方向和朝向在本文中都是為了參考附圖進行簡明描述所用，并非旨在限制實際裝置或系統(tǒng)或該裝置或系統(tǒng)的使用。本文所述的許多裝置、制品或系統(tǒng)可在多種方向和朝向上使用。本文所使用的涉及細胞培養(yǎng)設(shè)備的方向描述符號經(jīng)常是指當(dāng)為了在設(shè)備中培養(yǎng)細胞而調(diào)整設(shè)備朝向時的方向。

除非另有表述，否則都不旨在將本文所述的任意方法理解為需要使其步驟以具體順序進行。因此，當(dāng)方法權(quán)利要求實際上沒有陳述為其步驟遵循一定的順序或者其沒有在權(quán)利要求書或說明書中以任意其他方式具體表示步驟限于具體的順序，都不旨在暗示該任意特定順序。在任一項權(quán)利要求中所述的任何單個或多個特征或方面可以結(jié)合任一項或多項其它權(quán)利要求中所述的任何其它特征或方面或與任一項或多項其它權(quán)利要求中所述的任何其它特征或方面置換。

還要注意本文中涉及將部件“配置成”或“使其適于”的描述以特定的方式起作用。就這方面而言，使這樣一個組件“配置成”或“使其適于”是為了具體表現(xiàn)特定的性質(zhì)，或者以特定的方式起作用，這樣的描述是結(jié)構(gòu)性的描述，而不是對預(yù)期應(yīng)用的描述。更具體而言，本文所述的將組件“配置成”或使其“適于”的方式表示該組分現(xiàn)有的物理條件，因此可以將其看作該組件的結(jié)構(gòu)特征的限定性描述。

雖然會用過渡語“包含”來公開特定實施方式的各種特征、元素或步驟，但是應(yīng)理解的是，這暗示了包括可采用過渡語“由……構(gòu)成”或“基本上由……構(gòu)成”描述在內(nèi)的替代實施方式。因此，例如，插入件的隱含的替代性的實施方式包含框體，且篩網(wǎng)包括插入件由框體和篩網(wǎng)構(gòu)成的實施方式、和插入件主要由框體和插入件構(gòu)成的實施方式。

對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，可以在不偏離本文所述的具有創(chuàng)造性的技術(shù)的范圍和精神的情況下對本公開進行各種修改和變動。因為本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以想到所述實施方式的融合了本文所述的具有創(chuàng)造性的技術(shù)的精神和實質(zhì)的各種改良組合、子項組合和變化，應(yīng)認為本文所述的具有創(chuàng)造性的技術(shù)包括所附權(quán)利要求書范圍內(nèi)的全部內(nèi)容及其等同內(nèi)容。