發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及與白介素-25(il-25)特異性結(jié)合的抗體及其抗原結(jié)合片段，包含這些抗體的藥物組合物及其使用方法。
背景技術(shù)：
：白介素-25(il-25)是一種在結(jié)構(gòu)上與白介素-17(il-17)相關(guān)的細(xì)胞因子并且有時(shí)將其稱為il-17e。其是一種與異二聚體il-17rb/il-17ra受體相互作用并通過其傳遞信號(hào)的分泌的、同型二聚體糖蛋白(iwakura等，(2010),immunity,34:149)。il-25由th2細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞產(chǎn)生(rouvier,e.等，(1993),j.immunol.150:5445-5456；pan,g.等，(2001),j.immunol.167:6559-6567；kim,m.等，(2002),blood100:2330-2340)。通過il-25傳遞的信號(hào)與嗜酸性粒細(xì)胞的募集、th2和th9應(yīng)答的引發(fā)以及th1和th17細(xì)胞應(yīng)答的抑制相關(guān)。il-25在多種組織中誘導(dǎo)包括il-4、il-5和il-13在內(nèi)的其他細(xì)胞因子的產(chǎn)生(fort,mm等，(2001),immunity15:985-995)。il-25參與與胃腸道相關(guān)的慢性炎癥并且在與腸道的自身免疫性疾病(如炎性腸病(ibd))相關(guān)的染色體區(qū)域中鑒定了il-25基因(büning,c.等，(2003),eur.j.immunogenet.oct；30(5):329-333)。il-25在來自哮喘患者的樣品中也已顯示出了上調(diào)(sherkat,r.等，(2014),asiapac.allergyoct；4(4):212-221)。因此，il-25信號(hào)的阻斷對(duì)治療多種與il-25的活性或表達(dá)相關(guān)的病癥可能是有用的。在例如美國專利號(hào)8,785,605、8,658,169和8,206,717以及pct公開wo2011/123507、wo2010/038155和wo2008/129263中提及了抗-il-25抗體。盡管如此，在本領(lǐng)域中對(duì)用于治療與il-25的表達(dá)和/或信號(hào)傳遞相關(guān)的疾病或病癥、或者用于治療與il-25的表達(dá)和/或信號(hào)傳遞相關(guān)的其他病況的新型il-25拮抗劑(如本發(fā)明的抗-il-25抗體)仍存在需求。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了與人白介素-25(il-25)特異性結(jié)合的分離的抗體及其抗原結(jié)合片段。在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段與人白介素-25(il-25)特異性結(jié)合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段顯示出兩個(gè)或多個(gè)下述特征：(a)是全人源單克隆抗體；(b)根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定在25℃時(shí)以小于約120pm的kd與人il-25結(jié)合；(c)根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定在25℃時(shí)以大于約105分鐘的解離半衰期(t1/2)與人il-25結(jié)合；(d)以小于約2.0nm的ic50阻斷在工程化以表達(dá)il-25受體(il-17ra/il-17rb)的細(xì)胞中的人il-25信號(hào)傳導(dǎo)；(e)以小于約16nm的ic50阻斷在人外周血單核細(xì)胞(pbmc)中的人il-25信號(hào)傳導(dǎo)；(f)在過表達(dá)il-25的哺乳動(dòng)物中降低循環(huán)和/或肺ige水平；(g)在過表達(dá)il-25的哺乳動(dòng)物中減少杯狀細(xì)胞化生；(h)包含三個(gè)重鏈互補(bǔ)性決定區(qū)(hcdr)，所述重鏈互補(bǔ)性決定區(qū)包含在含有表1中所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)(hcvr)中；或者(i)包含三個(gè)輕鏈互補(bǔ)性決定區(qū)(lcdr)，所述輕鏈互補(bǔ)性決定區(qū)包含在含有表1中所示的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)(lcvr)中。本發(fā)明的分離的抗體和抗原結(jié)合片段是有用的，尤其是用于治療與白介素-25(il-25)的活性或表達(dá)相關(guān)的疾病和病癥。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定在25℃或37℃時(shí)以小于約100pm的kd與人il-25特異性結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定在25℃或37℃時(shí)所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以小于約60pm的kd與人il-25特異性結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定在25℃或37℃時(shí)所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以小于約40pm的kd與人il-25特異性結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定在25℃或37℃時(shí)所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以小于約20pm的kd與人il-25特異性結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定在25℃時(shí)所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以大于約150分鐘的t1/2與人il-25特異性結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定在25℃時(shí)所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以大于約200分鐘的t1/2與人il-25特異性結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定在25℃時(shí)所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以大于約250分鐘的t1/2與人il-25特異性結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定在25℃時(shí)所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以大于約400分鐘的t1/2與人il-25特異性結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段與人il-25特異性結(jié)合并且以小于約720pm的ic50阻斷工程化以表達(dá)il-25受體(il-17ra/il-17rb)的細(xì)胞中的人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段與人il-25特異性結(jié)合并且以小于約500pm的ic50阻斷工程化以表達(dá)il-25受體(il-17ra/il-17rb)的細(xì)胞中的人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段與人il-25特異性結(jié)合并且以小于約100pm的ic50阻斷工程化以表達(dá)il-25受體(il-17ra/il-17rb)的細(xì)胞中的人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段與人il-25特異性結(jié)合并且以小于約2.0nm的ic50阻斷人pbmc中的人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段與人il-25特異性結(jié)合并且以小于約700pm的ic50阻斷人pbmc中的人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段與人il-25特異性結(jié)合并且以范圍從約30pm至約150pm的ic50阻斷人pbmc中的人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)。本發(fā)明的抗體可以是全長(zhǎng)的(例如igg1或igg4抗體)或者可以僅包含抗原結(jié)合部分(例如fab、f(ab’)2或scfv片段)，以及可以對(duì)其進(jìn)行修飾以影響功能，例如以消除殘余的效應(yīng)物功能(reddy等，2000,j.immunol.164:1925-1933)。本發(fā)明的示例性抗-il-25抗體列于本文的表1和表2中。表1列出了示例性抗-il-25抗體的重鏈可變區(qū)(hcvr)、輕鏈可變區(qū)(lcvr)、重鏈互補(bǔ)性決定區(qū)(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和輕鏈互補(bǔ)性決定區(qū)(lcdr1、lcdr2和lcdr3)的氨基酸序列標(biāo)識(shí)。表2列出了示例性抗-il-25抗體的hcvr、lcvr、hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3的核酸序列標(biāo)識(shí)。本發(fā)明提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含hcvr，所述hcvr含有：選自表1中所列的任意hcvr氨基酸序列的氨基酸序列，或與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含lcvr，所述lcvr含有：選自表1中所列的任意lcvr氨基酸序列的氨基酸序列，或所述基本上與其相似的序列與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含hcvr和lcvr氨基酸序列對(duì)(hcvr/lcvr)，所述氨基酸序列對(duì)包含表1中所列的任意lcvr氨基酸序列與表1中所列的任意hcvr氨基酸序列的配對(duì)。根據(jù)某些實(shí)施方式，本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段含有包含在表1中所列的任意示例性抗-il-25抗體中的hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)。一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段與人白介素-25(il-25)結(jié)合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含：(a)重鏈可變區(qū)(hcvr)的互補(bǔ)性決定區(qū)(cdr)，所述重鏈可變區(qū)包含表1中所示的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)(lcvr)的cdr，所述輕鏈可變區(qū)具有表1中所示的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方式中，與il-25特異性結(jié)合的所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含：(a)hcvr的cdr，所述hcvr具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242和258；以及(b)lcvr的cdr，所述lcvr具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和266。在一個(gè)實(shí)施方式中，與il-25特異性結(jié)合的所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含：(a)hcvr的cdr，所述hcvr具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：98、114、130和178；以及(b)lcvr的cdr，所述lcvr具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：106、122、138和186。在一個(gè)實(shí)施方式中，與il-25特異性結(jié)合的所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的hcvr氨基酸序列：seqidno：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242和258。在一個(gè)實(shí)施方式中，與il-25特異性結(jié)合的所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的lcvr氨基酸序列：seqidno：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和266。在一個(gè)實(shí)施方式中，與il-25特異性結(jié)合的所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的hcvr氨基酸序列：seqidno：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242和258；以及選自下組的lcvr氨基酸序列：seqidno：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和266。在一個(gè)實(shí)施方式中，與il-25特異性結(jié)合的所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)的cdr，所述hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)選自下組：seqidno：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。在一個(gè)實(shí)施方式中，與il-25特異性結(jié)合的所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)的cdr，所述hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)選自下組：seqidno：98/106、114/122、130/138和178/186。在一個(gè)實(shí)施方式中，與il-25特異性結(jié)合的所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)：seqidno：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。在一個(gè)實(shí)施方式中，與il-25特異性結(jié)合的所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)：seqidno：98/106、114/122、130/138和178/186。本發(fā)明還提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈cdr1(hcdr1)，所述hcdr1含有選自表1中所列的任意hcdr1氨基酸序列的氨基酸序列，或與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈cdr2(hcdr2)，所述hcdr2含有選自表1中所列的任意hcdr2氨基酸序列的氨基酸序列，或與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈cdr3(hcdr3)，所述hcdr3含有選自表1中所列的任意hcdr3氨基酸序列的氨基酸序列，或與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈cdr1(lcdr1)，所述lcdr1含有選自表1中所列的任意lcdr1氨基酸序列的氨基酸序列，或序列與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈cdr2(lcdr2)，所述lcdr2含有選自表1中所列的任意lcdr2氨基酸序列的氨基酸序列，或序列與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈cdr3(lcdr3)，所述lcdr3含有選自表1中所列的任意lcdr3氨基酸序列的氨基酸序列，或序列與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含hcdr3和lcdr3氨基酸序列對(duì)(hcdr3/lcdr3)，所述氨基酸序列對(duì)包含表1中所列的任意lcdr3氨基酸序列與表1中所列的任意hcdr3氨基酸序列的配對(duì)。根據(jù)某些實(shí)施方式，本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段含有包含在表1中所列的任意示例性抗-il-25抗體中的hcdr3/lcdr3氨基酸序列對(duì)。在某些實(shí)施方式中，所述hcdr3/lcdr3氨基酸序列對(duì)包含seqidno：104/112、120/128、136/144和184/192。本發(fā)明還提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段含有包含在表1中所列的任意示例性抗-il-25抗體中的一組6個(gè)cdr(即hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2、lcdr3)。在某些實(shí)施方式中，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2、lcdr3氨基酸序列組選自下組：(a)seqidno：100、102、104、108、110、112；(b)seqidno：116、118、120、124、126、128；(c)seqidno：132、134、136、140、142、144；以及(d)seqidno：180、182、184、188、190、192。在相關(guān)的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段含有包含在表1中列出的任意示例性抗-il-25抗體所定義的hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)中的一組6個(gè)cdr(即hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2、lcdr3)。例如，本發(fā)明包括與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段含有包含在hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)中的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2、lcdr3氨基酸序列組，所述hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)選自下組：98/106、114/122、130/138和178/186。用于標(biāo)識(shí)hcvr和lcvr氨基酸序列中的cdr的方法和技術(shù)是本領(lǐng)域公知的，并且其能夠用于識(shí)別本申請(qǐng)中公開的特定hcvr和/或lcvr氨基酸序列中的cdr。能夠用于識(shí)別cdr邊界的示例性的常規(guī)方法包括例如kabat定義、chothia定義和abm定義。一般而言，kabat定義基于序列的可變性，chothia定義基于結(jié)構(gòu)環(huán)區(qū)域的位置，而abm定義是介于kabat和chothia方法之間的折中方法。參見例如kabat,“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest”，nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1991)；al-lazikani等，j.mol.biol.273:927-948(1997)和martin等，proc.natl.acad.sci.usa86:9268-9272(1989)。也可以利用公共數(shù)據(jù)庫來識(shí)別抗體中的cdr序列。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種與il-25特異性結(jié)合的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含：(a)hcdr1結(jié)構(gòu)域，所述hcdr1結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244和260；(b)hcdr2結(jié)構(gòu)域，所述hcdr2結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246和262；(c)hcdr3結(jié)構(gòu)域，所述hcdr3結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248和264；(d)lcdr1結(jié)構(gòu)域，所述lcdr1結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252和268；(e)lcdr2結(jié)構(gòu)域，所述lcdr2結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254和270；以及(f)lcdr3結(jié)構(gòu)域，所述lcdr3結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256和272。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種與il-25特異性結(jié)合的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含：(a)hcdr1結(jié)構(gòu)域，所述hcdr1結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：100、116、132和180；(b)hcdr2結(jié)構(gòu)域，所述hcdr2結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：102、118、134和182；(c)hcdr3結(jié)構(gòu)域，所述hcdr3結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：104、120、136和184；(d)lcdr1結(jié)構(gòu)域，所述lcdr1結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：108、124、140和188；(e)lcdr2結(jié)構(gòu)域，所述lcdr2結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：110、126、142和190；以及(f)lcdr3結(jié)構(gòu)域，所述lcdr3結(jié)構(gòu)域具有選自下組的氨基酸序列：seqidno：112、128、144和192。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的一組6個(gè)cdr：(a)seqidno：100、102、104、108、110、112；(b)seqidno：116、118、120、124、126、128；(c)seqidno：132、134、136、140、142、144；以及(d)seqidno：180、182、184、188、190、192。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段與人白介素-25(il-25)結(jié)合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段與參照抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合人il-25，所述參照抗體包含表1中所示的重鏈可變區(qū)/輕鏈可變區(qū)(hcvr/lcvr)氨基酸序列對(duì)。所述參照抗體包含選自下組的hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)：seqidno：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段與人白介素-25(il-25)結(jié)合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段與參照抗體結(jié)合至人il-25上的相同表位，所述參照抗體包含表1中所示的重鏈可變區(qū)/輕鏈可變區(qū)(hcvr/lcvr)氨基酸序列對(duì)。所述參照抗體包含選自下組的hcvr/lcvr氨基酸序列對(duì)：seqidno：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了編碼抗-il-25抗體或其部分的核酸分子。例如，本發(fā)明提供了編碼表1中列出的任意hcvr氨基酸序列的核酸分子；在某些實(shí)施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列選自表2中列出的任意hcvr核酸序列，或與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了編碼表1中列出的任意lcvr氨基酸序列的核酸分子。在某些實(shí)施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列選自表2中列出的任意lcvr核酸序列，或與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了編碼表1中列出的任意hcdr1氨基酸序列的核酸分子。在某些實(shí)施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列選自表2中列出的任意hcdr1核酸序列，或與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了編碼表1中列出的任意hcdr2氨基酸序列的核酸分子。在某些實(shí)施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列選自表2中列出的任意hcdr2核酸序列，或所述基本上與其相似的序列與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了編碼表1中列出的任意hcdr3氨基酸序列的核酸分子。在某些實(shí)施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列選自表2中列出的任意hcdr3核酸序列，或所述基本上與其相似的序列與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了編碼表1中列出的任意lcdr1氨基酸序列的核酸分子。在某些實(shí)施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列選自表2中列出的任意lcdr1核酸序列，或所述基本上與其相似的序列與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了編碼表1中列出的任意lcdr2氨基酸序列的核酸分子。在某些實(shí)施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列選自表2中列出的任意lcdr2核酸序列，或所述基本上與其相似的序列與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了編碼表1中列出的任意lcdr3氨基酸序列的核酸分子。在某些實(shí)施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列選自表2中列出的任意lcdr3核酸序列，或所述基本上與其相似的序列與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列。本發(fā)明還提供了編碼hcvr的核酸分子，其中所述hcvr包含一組3個(gè)cdr(即hcdr1、hcdr2、hcdr3)，其中所述hcdr1、hcdr2、hcdr3氨基酸序列組由表1中列出的任意示例性抗-il-25抗體所定義。本發(fā)明還提供了編碼lcvr的核酸分子，其中所述lcvr包含一組3個(gè)cdr(即lcdr1、lcdr2、lcdr3)，其中所述lcdr1、lcdr2、lcdr3氨基酸序列組由表1中列出的任意示例性抗-il-25抗體所定義。本發(fā)明還提供了編碼hcvr和lcvr兩者的核酸分子，其中所述hcvr包含表1中列出的任意hcvr氨基酸序列的氨基酸序列，以及其中所述lcvr包含表1中列出的任意lcvr氨基酸序列的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，所述核酸分子包含選自表2中列出的任意hcvr核酸序列或與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列的多核苷酸序列，以及選自表2中列出的任意lcvr核酸序列或與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上與其相似的序列的多核苷酸序列。在根據(jù)本發(fā)明這一方面的某些實(shí)施方式中，所述核酸分子編碼hcvr和lcvr，其中所述hcvr和lcvr兩者均來源于表1中列出的同一抗-il-25抗體。在第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了重組表達(dá)載體，所述重組表達(dá)載體能夠表達(dá)包含抗-il-25抗體的重鏈或輕鏈可變區(qū)的多肽。例如，本發(fā)明包括重組表達(dá)載體，所述重組表達(dá)載體包含上文所述的任意核酸分子，即編碼如表1中所示的任意hcvr、lcvr和/或cdr序列的核酸分子。在本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括引入了此類載體的宿主細(xì)胞，以及通過在允許生產(chǎn)所述抗體或抗體片段的條件下培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞以生產(chǎn)所述抗體或其部分并且回收所生產(chǎn)的抗體和抗體片段的方法。本發(fā)明包括具有經(jīng)修飾的糖基化模式的抗-il-25抗體。在一些實(shí)施方式中，通過修飾去除不需要的糖基化位點(diǎn)可能是有用的，或者例如抗體在寡糖鏈上缺乏巖藻糖部分以增加抗體依賴性細(xì)胞毒性(adcc)功能(參見shield等，(2002)jbc277:26733)。在其他應(yīng)用中，可以進(jìn)行半乳糖基化修飾以改善補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdc)。在第四個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含至少一種與il-25特異性結(jié)合的本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段以及藥學(xué)上可接受的載體。在相關(guān)的方面，本發(fā)明涉及一種組合物，其是抗-il-25抗體與第二治療劑的組合。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述第二治療劑是與抗-il-25抗體組合有利的任意藥劑。所述第二治療劑可以用于減輕炎性疾病或病癥或者減輕炎性疾病或病癥的至少一種癥狀。在某些實(shí)施方式中，所述第二治療劑可以選自下組：非甾體抗炎藥(nsaid)、類固醇、皮質(zhì)類固醇(吸入或局部)、免疫抑制劑(例如環(huán)磷酰胺)、抗膽堿能藥(例如噻托銨)、毒蕈堿劑(例如格隆銨)、磷酸二酯酶抑制劑(例如茶堿、羅氟司特、西洛司特)、β阻斷劑、環(huán)孢菌素、他克莫司、吡美莫司、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、色甘酸鈉、蛋白酶抑制劑、支氣管擴(kuò)張劑、β-2-激動(dòng)劑、抗組胺劑、腎上腺素、減充血?jiǎng)?、白三烯抑制劑、肥大?xì)胞抑制劑、胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(tslp)拮抗劑、tnf拮抗劑、ige拮抗劑、il-1拮抗劑、il-4或il-4r拮抗劑、il-13或il-13r拮抗劑、il-4/il-13雙重拮抗劑、il-5拮抗劑、il-6或il-6r拮抗劑、il-8拮抗劑、il-9拮抗劑、il-12/23拮抗劑、il-22拮抗劑、il-17拮抗劑、il-31拮抗劑、il-33拮抗劑、胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素蛋白(tslp)拮抗劑、口服pde4抑制劑以及il-25的不同抗體。在第五個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種使用本發(fā)明的抗-il-25抗體或抗體的抗原結(jié)合部分治療與il-25的活化或表達(dá)相關(guān)的疾病或病癥或者與所述疾病或病癥相關(guān)的至少一種癥狀的治療方法。根據(jù)本發(fā)明這一方面的治療方法包括向需要其的對(duì)象施用治療有效量的包含本發(fā)明的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段的藥物組合物。所治療的病癥是通過靶向il-25和/或通過抑制il-25介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)來改善、減輕、抑制或阻止的任何疾病或病狀。在某些實(shí)施方式中，擬使用本發(fā)明的抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合部分治療的疾病或病癥可以選自下組：哮喘、過敏、過敏性鼻炎、過敏性氣道炎癥、慢性阻塞性肺疾病(copd)、嗜酸性粒細(xì)胞性肺炎、嗜酸性粒細(xì)胞性食道炎、嗜酸性粒細(xì)胞增多綜合征、移植物抗宿主病、特應(yīng)性皮炎(ad)、蕁麻疹(包括慢性特發(fā)性蕁麻疹)、銀屑病、炎性腸病(ibd)、關(guān)節(jié)炎、葡萄膜炎、心血管疾病、疼痛、多發(fā)性硬化、狼瘡、血管炎以及嗜酸性肉芽腫性多血管炎((egpa)，也稱為churg-strauss綜合征)。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以通過本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段治療的哮喘可以選自下組：過敏性哮喘、非過敏性哮喘、嚴(yán)重頑固性哮喘、哮喘惡化、病毒誘導(dǎo)的哮喘或病毒誘導(dǎo)的哮喘惡化、類固醇抵抗性哮喘、類固醇敏感性哮喘、嗜酸性粒細(xì)胞性哮喘或非嗜酸性粒細(xì)胞性哮喘以及以氣道炎癥或氣道高反應(yīng)性(ahr)為特征的其他相關(guān)病癥。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以通過本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段治療的copd部分地是與香煙煙霧、空氣污染、職業(yè)性化學(xué)品、過敏或氣道高反應(yīng)性相關(guān)的或由香煙煙霧、空氣污染、職業(yè)性化學(xué)品、過敏或氣道高反應(yīng)性引起的。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以通過本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段治療的ad部分地是與表皮屏障功能障礙、過敏或輻射暴露相關(guān)的或由表皮屏障功能障礙、過敏或輻射暴露引起的?？梢酝ㄟ^本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段治療的過敏是對(duì)食物、花粉、霉菌、塵螨、動(dòng)物或動(dòng)物皮屑過敏。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以通過本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段治療的ibd可以選自下組：潰瘍性結(jié)腸炎、克隆氏病、膠原性結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、轉(zhuǎn)流性結(jié)腸炎、白塞氏綜合征、感染性結(jié)腸炎、未定型結(jié)腸炎以及以大腸或結(jié)腸的粘膜層炎癥為特征的其他病癥。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以通過本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段治療的關(guān)節(jié)炎可以選自下組：骨關(guān)節(jié)炎(oa)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和銀屑病性關(guān)節(jié)炎。通過對(duì)下文中詳細(xì)的描述的回顧，其他實(shí)施方式將是顯而易見的。附圖說明圖1：針對(duì)人il-25的抗-il-25抗體之間的交叉競(jìng)爭(zhēng)。具體實(shí)施方式在對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述前，應(yīng)理解本發(fā)明不限于所描述的特定方法和實(shí)驗(yàn)條件，因?yàn)檫@些方法和條件是可以改變的。還應(yīng)理解本申請(qǐng)中所使用的術(shù)語僅旨在用于描述特定實(shí)施方式，并且不旨在限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將僅由所附的權(quán)利要求限制。除非另有定義，本申請(qǐng)中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語均與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員的通常理解具有相同的含義。在本申請(qǐng)中所使用的術(shù)語“約”當(dāng)用于指特定列舉的數(shù)值時(shí)，意味著該值可以從所列舉的值變化不超過1％。例如，如在本申請(qǐng)中所使用的，表述“約100”包括99和101以及其間的所有值(例如99.1、99.2、99.3、99.4等)。盡管與本申請(qǐng)中所描述的那些類似或等效的任意方法和材料均能夠用于實(shí)施或測(cè)試本發(fā)明，但是現(xiàn)在描述的是優(yōu)選的方法和材料。在本說明書中提及的所有專利、申請(qǐng)和非專利出版物均通過引用整體并入本申請(qǐng)。定義表述“白介素-25”、“il-25”等、又稱為“il-17e”是指包含登記號(hào)np_073626.1的氨基酸殘基33至177中所示的氨基酸序列的人細(xì)胞因子(除表明是來自于另一物種)。含有myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽的人il-25如seqidno:273所示(其中氨基酸殘基1-145是不含信號(hào)序列的人il-25且氨基酸殘基146-173是myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽)。本申請(qǐng)還描述了其他il-25蛋白，包括猴il-25(登記號(hào)xp_001107906.2的氨基酸33-176)，含有myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽的猴il-25如seqidno:274所示(其中氨基酸殘基1-144是食蟹猴il-25且氨基酸殘基145-172是myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽)；小鼠il-25(登記號(hào)np_542767.1的氨基酸17-169)，含有myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽的小鼠il-25如seqidno:275所示(其中氨基酸殘基1-153是小鼠il-25且氨基酸殘基154-181是myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽)；以及大鼠il-25(登記號(hào)np_001178936.1的氨基酸殘基17-169)，含有myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽的大鼠il-25如seqidno:276所示(其中氨基酸殘基1-153是大鼠il-25且氨基酸殘基154-181是myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽的氨基酸殘基154-181)。除非明確地表明是來自非人物種，否則本申請(qǐng)中所有提及的蛋白、多肽和蛋白片段旨在指各蛋白、多肽或蛋白片段的人源版本。因此，表述“il-25”指人il-25，除非特別表明是來自非人物種，例如“猴il-25”、“小鼠il-25”、“大鼠il-25”等。如在本申請(qǐng)中所使用的，表達(dá)“抗-il-25抗體”包括具有單特異性的單價(jià)抗體，以及雙特異性抗體，所述雙特異性抗體包含結(jié)合il-25的第一臂和結(jié)合第二(靶)抗原的第二臂，其中所述抗-il-25臂包含本申請(qǐng)的表1中所示的任意hcvr/lcvr或cdr序列。表述“抗-il-25抗體”還包括抗體藥物綴合物(adc)，所述抗體藥物綴合物包含與藥物或毒素(即細(xì)胞毒劑)綴合的抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合部分。表述“抗-il-25抗體”還包括抗體放射性核素綴合物(arc)，所述抗體放射性核素綴合物包含與放射性核素綴合的抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合部分。在本申請(qǐng)中使用的術(shù)語“抗-il-25抗體”指包含至少一個(gè)特異性結(jié)合至或與il-25或il-25的部分相互作用的互補(bǔ)性決定區(qū)(cdr)的任意抗原結(jié)合分子或分子復(fù)合物。術(shù)語“抗體”包括免疫球蛋白分子，所述免疫球蛋白分子含有四條多肽鏈(兩條重鏈(h)和兩條輕鏈(l)互相之間通過二硫鍵連接)，以及其多聚體(例如igm)。各條重鏈包含重鏈可變區(qū)(本申請(qǐng)中縮寫為hcvr或vh)和重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含三個(gè)結(jié)構(gòu)域ch1、ch2和ch3。各條輕鏈包含輕鏈可變區(qū)(本申請(qǐng)中縮寫為lcvr或vl)和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包含一個(gè)結(jié)構(gòu)域(cl1)?？梢詫h和vl區(qū)進(jìn)一步細(xì)分為高變區(qū)，稱為互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)，其散布在更為保守的稱為框架區(qū)(fr)的區(qū)域中。各個(gè)vh和vl由三個(gè)cdr和四個(gè)fr組成，其從氨基末端到羧基末端以下述順序排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。在本發(fā)明不同的實(shí)施方式中，抗-il-25抗體(或其抗原結(jié)合部分)的fr可以與人種系序列是相同的，或者可以是天然或人工修飾的?？梢曰趯?duì)兩個(gè)或多個(gè)cdr的并行分析(side-by-sideanalysis)定義氨基酸的共有序列。在本申請(qǐng)中使用的術(shù)語“抗體”還包括全抗體分子的抗原結(jié)合片段。在本申請(qǐng)中使用的術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”、抗體的“抗原結(jié)合片段”等包括任意酶促可獲得的、合成的或基因工程改造的特異性地與抗原結(jié)合以形成復(fù)合物的多肽或糖蛋白?？梢酝ㄟ^使用任意適宜的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(如蛋白水解消化或?qū)ι婕熬幋a抗體可變和任選地恒定結(jié)構(gòu)域的dna的操縱和表達(dá)的重組基因工程技術(shù))從例如全抗體分子中獲得抗體的抗原結(jié)合片段，。此類dna是已知的和/或易于從例如商業(yè)來源、dna文庫(包括例如噬菌體-抗體文庫)獲得的，或者能夠被合成的?？梢曰瘜W(xué)地或使用分子生物學(xué)技術(shù)(例如將一個(gè)或多個(gè)可變和/或恒定結(jié)構(gòu)域排布成適宜的構(gòu)型，或者引入密碼子、形成半胱氨酸殘基、修飾、加入或缺失氨基酸等)對(duì)dna進(jìn)行測(cè)序和調(diào)控?？乖Y(jié)合片段的非限制性實(shí)例包括：(i)fab片段；(ii)f(ab')2片段；(iii)fd片段；(iv)fv片段；(v)單鏈fv(scfv)分子；(vi)dab片段；以及(vii)由模擬抗體高變區(qū)的氨基酸殘基組成的最小識(shí)別單元(例如分離的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)如cdr3肽)或受限制的fr3-cdr3-fr4肽。其他工程化的分子，如結(jié)構(gòu)域特異性抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、結(jié)構(gòu)域缺失的抗體、嵌合抗體、cdr移植抗體、雙體、三體、四體、微型抗體、納米抗體(例如單價(jià)納米抗體、二價(jià)納米抗體等)、小型模塊化免疫藥物(smip)和鯊魚可變ignar結(jié)構(gòu)域也包括在如本申請(qǐng)所使用的表述“抗原結(jié)合片段”中?？贵w的抗原結(jié)合片段將通常包括至少一個(gè)可變結(jié)構(gòu)域?？勺兘Y(jié)構(gòu)域可以是任意尺寸或氨基酸組合并且將通常包括至少一個(gè)cdr，其鄰近一個(gè)或多個(gè)框架序列或在一個(gè)或多個(gè)框架序列的框架中。在具有與vl結(jié)構(gòu)域結(jié)合的vh結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合片段中，所述vh和vl結(jié)構(gòu)域可以位于相對(duì)于彼此適宜的任意排布下。例如，所述可變區(qū)可以是二聚的并且含有vh-vh、vh-vl或vl-vl二聚體。或者，所述抗體的抗原結(jié)合片段可以含有單體的vh或vl結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方式中，抗體的抗原結(jié)合片段可以含有與至少一個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域共價(jià)連接的至少一個(gè)可變結(jié)構(gòu)域?？梢砸娪诒景l(fā)明抗體的抗原結(jié)合片段中的非限制性的、示例性的可變和恒定結(jié)構(gòu)域配置包括：(i)vh-ch1；(ii)vh-ch2；(iii)vh-ch3；(iv)vh-ch1-ch2；(v)vh-ch1-ch2-ch3；(vi)vh-ch2-ch3；(vii)vh-cl；(viii)vl-ch1；(ix)vl-ch2；(x)vl-ch3；(xi)vl-ch1-ch2；(xii)vl-ch1-ch2-ch3；(xiii)vl-ch2-ch3；以及(xiv)vl-cl。在任意可變和恒定結(jié)構(gòu)域的配置(包括任意上文列出的示例性配置)中，所述可變和恒定結(jié)構(gòu)域彼此間可以直接連接或者通過全長(zhǎng)或部分鉸鏈或接頭區(qū)連接。鉸鏈區(qū)可以由至少2個(gè)(例如5、10、15、20、40、60個(gè)或更多個(gè))氨基酸組成，其在單一多肽分子中的相鄰可變和/或恒定結(jié)構(gòu)域之間形成柔性或半柔性的連接。而且，本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合片段可以包括上文列出的任意可變和恒定結(jié)構(gòu)域配置彼此之間和/或與一個(gè)或多個(gè)單體vh或vl結(jié)構(gòu)域非共價(jià)結(jié)合(例如通過二硫鍵)的同源二聚體或異源二聚體(或其他多聚體)。與全抗體分子一樣，抗原結(jié)合片段可以是單特異性的或多特異性的(例如雙特異性的)。抗體的多特異性抗原結(jié)合片段通常包括至少兩個(gè)不同的可變結(jié)構(gòu)域，其中各可變結(jié)構(gòu)域能夠特異性與不同的抗原或同一抗原上不同的表位結(jié)合。使用本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)可以獲得的任意多特異性抗體形式(包括本申請(qǐng)公開的示例性雙特異性抗體形式)可以適用于本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合片段的背景中。本發(fā)明的抗體可以通過阻斷或以其他方式干擾il-25與一個(gè)或多個(gè)其受體組件之間的相互作用發(fā)揮功能?；蛘?，本發(fā)明的抗體可以通過不涉及阻斷il-25與其受體之間相互作用的機(jī)制抑制il-25介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)。在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體可以通過補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdc)或抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc)發(fā)揮功能?！把a(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdc)”指在存在補(bǔ)體的條件下通過本發(fā)明的抗體將表達(dá)抗原的細(xì)胞裂解。“抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc)”指細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，其中表達(dá)fc受體(fcr)的非特異性細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如自然殺傷(nk)細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)識(shí)別結(jié)合在靶細(xì)胞上的抗體并且從而導(dǎo)致靶細(xì)胞裂解。能夠使用本領(lǐng)域熟知和能夠獲得的檢測(cè)方法檢測(cè)cdc和adcc。(參見例如美國專利號(hào)5,500,362和5,821,337以及clynes等，(1998)proc.natl.acad.sci.(usa)95:652-656)?？贵w的恒定區(qū)在抗體固定補(bǔ)體和介導(dǎo)細(xì)胞依賴性細(xì)胞毒性的能力中是重要的。因而，可以基于抗體是否需要介導(dǎo)細(xì)胞毒性來選擇抗體的同種型。在本申請(qǐng)中使用的術(shù)語“人源抗體”旨在包括非天然存在的人源抗體。該術(shù)語包括在非人哺乳動(dòng)物或在非人哺乳動(dòng)物的細(xì)胞中重組生產(chǎn)的抗體。該術(shù)語并非旨在包括從人源對(duì)象中分離或產(chǎn)生的抗體。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體可以是重組的和/或非天然存在的人源抗體。在本申請(qǐng)中使用的術(shù)語“重組人源抗體”旨在包括利用重組方法制備、表達(dá)、形成或分離的所有人源抗體，如使用轉(zhuǎn)染進(jìn)入宿主細(xì)胞的重組表達(dá)載體(在下文中進(jìn)一步描述)表達(dá)的抗體，從重組的、組合人源抗體庫(在下文中進(jìn)一步描述)中分離的抗體，從針對(duì)人源免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如小鼠)分離的抗體(參見例如taylor等(1992)nucl.acidsres.20:6287-6295)或者由涉及將人源免疫球蛋白基因序列與其他dna序列剪接的任意其他方法制備、表達(dá)、形成或分離的抗體。在某些實(shí)施方式中，對(duì)此類重組的人源抗體進(jìn)行體外誘變(或者當(dāng)使用針對(duì)人ig序列的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)進(jìn)行體細(xì)胞誘變)，這樣重組抗體vh和vl區(qū)的氨基酸序列盡管是與人源種系vh和vl序列相關(guān)的序列，但是其可能不是體內(nèi)人源抗體種系庫中天然存在的。人源抗體可以以兩種形式存在，這與鉸鏈的異質(zhì)性有關(guān)。在一種形式中，免疫球蛋白分子包含約150-160kda的穩(wěn)定的四鏈構(gòu)建體，其中二聚體之間通過鏈間重鏈二硫鍵保持在一起。在第二種形式中，二聚體不通過鏈間二硫鍵連接并且形成由共價(jià)偶聯(lián)的輕鏈和重鏈(半抗體)組成的約75-80kda的分子。即使在進(jìn)行親和純化后，這些形式也非常難以分離。第二種形式在不同的完整igg同種型中的出現(xiàn)頻率由抗體鉸鏈區(qū)的同種型相關(guān)的結(jié)構(gòu)差異所導(dǎo)致，但不僅限于此。在人igg4鉸鏈的鉸鏈區(qū)中的單個(gè)氨基酸取代能夠?qū)⒌诙N形式(angal等，(1993)molecularimmunology30:105)的出現(xiàn)顯著降至使用人igg1鉸鏈通常觀察到的水平。本發(fā)明包含在鉸鏈、ch2或ch3區(qū)域具有一個(gè)或多個(gè)突變的抗體，其可能是想要的，例如在生產(chǎn)中為提高所需抗體形式的得率。術(shù)語“特異性結(jié)合”或“特異性結(jié)合至”等類似術(shù)語指抗體或其抗原結(jié)合片段與抗原形成在生理?xiàng)l件下相對(duì)穩(wěn)定的復(fù)合物。特異性的結(jié)合可以以至少約1x10-6m或更低(例如kd越小表明結(jié)合越緊密)的平衡解離常數(shù)來表征。確定兩個(gè)分子是否特異性結(jié)合的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，并且包括例如平衡透析法、表面等離子體共振等。如本申請(qǐng)所述的，已通過表面等離子體共振(例如biacoretm)鑒定出了特異性結(jié)合至il-25的抗體。而且，如在本申請(qǐng)中所使用的，將與il-25蛋白以及一種或多種其他抗原結(jié)合的多特異性抗體或者與il-25的兩個(gè)不同區(qū)域結(jié)合的雙特異性抗體也認(rèn)為是“特異性結(jié)合”的抗體。本發(fā)明的抗體可以是分離的抗體。在本申請(qǐng)中使用的術(shù)語“分離的抗體”指已從其天然環(huán)境的至少一個(gè)組分中鑒定和分離和/或回收的抗體。例如，從生物體的至少一個(gè)組分或者從抗體天然存在或天然產(chǎn)生的組織或細(xì)胞中分離或除去的抗體是用于本發(fā)明目的的“分離的抗體”。分離的抗體還包括重組細(xì)胞中的原位抗體。分離的抗體是已進(jìn)行了至少一個(gè)純化或分離步驟的抗體。根據(jù)某些實(shí)施方式，分離的抗體可以是基本上不含其他細(xì)胞物質(zhì)和/或化學(xué)物質(zhì)的。本申請(qǐng)公開的抗-il-25抗體可以在重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的框架和/或cdr區(qū)中包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代、插入和/或缺失。通過將本申請(qǐng)所公開的氨基酸序列與從例如公共抗體序列數(shù)據(jù)庫中獲得的序列進(jìn)行比較能夠容易地確定此類突變。一旦獲得，能夠針對(duì)一個(gè)或多個(gè)所需的性質(zhì)，如改善的結(jié)合特異性、增加的結(jié)合親和性、改善的或增加的拮抗或激動(dòng)的生物學(xué)性質(zhì)(視情況而定)、降低的免疫原性等，容易地對(duì)含有一個(gè)或多個(gè)突變的抗體和抗原結(jié)合片段進(jìn)行檢測(cè)。采用這種一般方法獲得的抗體和抗原結(jié)合片段包含在本發(fā)明中。本發(fā)明還包括抗-il-25抗體，所述抗-il-25抗體包含本申請(qǐng)所公開的任意hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列的具有一個(gè)或多個(gè)保守的取代的變體。例如，本發(fā)明包括抗-il-25抗體，所述抗-il-25抗體含有相對(duì)于本申請(qǐng)表1中所示的任意hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列具有帶有例如10個(gè)或更少的、8個(gè)或更少的、6個(gè)或更少的、4個(gè)或更少的等保守的氨基酸取代的hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列。術(shù)語“表位”指與抗體分子的可變區(qū)中的被稱為抗體結(jié)合簇(paratope)的特異性抗原結(jié)合位置相互作用的抗原決定簇。一個(gè)抗原可以具有一個(gè)以上的表位。因此，不同抗體可以與抗原上的不同區(qū)域結(jié)合并且可以具有不同的生物效應(yīng)。表位可以是具有構(gòu)象的或線形的。具有構(gòu)象的表位是由線形多肽鏈的不同區(qū)段的空間上并置的氨基酸產(chǎn)生的。線形表位是由多肽鏈中相鄰的氨基酸殘基產(chǎn)生的。在某些情況下，表位可以包括抗原上的糖、磷酰基或磺?；糠?。術(shù)語“基本上的一致性”或“基本上一致的”當(dāng)涉及核酸或其片段時(shí)表示當(dāng)將其與其他核酸(或其互補(bǔ)鏈)進(jìn)行包含適當(dāng)?shù)暮塑账岵迦牖蛉笔У淖罴驯葘?duì)時(shí)，通過如下文所討論的任意本領(lǐng)域熟知的序列一致性算法如fasta、blast或gap的測(cè)定，在至少約95％，且更優(yōu)選地至少約96％、97％、98％或99％的核苷酸堿基中具有核苷酸序列一致性。在某些例子中，與對(duì)照核酸分子具有基本上的一致性的核酸分子可以編碼與由所述對(duì)照核酸分子編碼的多肽具有相同或基本上相似的氨基酸序列的多肽。在用于多肽時(shí)，術(shù)語“基本上的相似性”或“基本上相似的”指兩條多肽序列當(dāng)(例如通過使用缺省缺口權(quán)重的gap或bestfit程序)進(jìn)行最佳比對(duì)時(shí)，具有至少95％的序列一致性，甚至更優(yōu)選地至少98％或99％的序列一致性。優(yōu)選地，不相同的殘基位置的差別為保守性氨基酸取代。“保守性氨基酸取代”是氨基酸殘基被帶有具有相似化學(xué)性質(zhì)(例如電荷或疏水性)的側(cè)鏈(r基)的另一個(gè)氨基酸取代。在通常情況下，保守性氨基酸取代將不會(huì)實(shí)質(zhì)性地改變蛋白的功能性性質(zhì)。在兩個(gè)多個(gè)氨基酸序列彼此之間的差別為保守性取代的情況下，可以對(duì)序列一致性的百分比或相似性的百分比進(jìn)行上調(diào)以校正所述取代的保守性性質(zhì)。用于進(jìn)行這種調(diào)整的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。參見例如pearson(1994)methodsmol.biol.24:307-331，其通過引用并入本申請(qǐng)。含有具有相似化學(xué)性質(zhì)的側(cè)鏈的氨基酸組的示例包括(1)脂肪族側(cè)鏈：甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；(2)脂肪族-羥基側(cè)鏈：絲氨酸和蘇氨酸；(3)含有酰胺的側(cè)鏈：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳香側(cè)鏈：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；(5)堿性側(cè)鏈：賴氨酸、精氨酸和組氨酸；(6)酸性側(cè)鏈：天冬氨酸和谷氨酸；和(7)含硫側(cè)鏈：半胱氨酸和甲硫氨酸。優(yōu)選的保守性氨基酸取代組是：纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺?；蛘?，保守性替換是在gonnet等((1992)science256:144345)所公開的pam250對(duì)數(shù)-似然性矩陣中具有正值的任意改變?！斑m度保守性的”替換是在pam250對(duì)數(shù)-似然性矩陣中具有非負(fù)值的任意改變。多肽的序列相似性(也將其稱為序列一致性)通常使用序列分析軟件測(cè)定。蛋白分析軟件通過使用分配給不同取代、缺失和其他修飾(包括保守性氨基酸取代)的相似性度量值來匹配相似序列。例如，gcg軟件中包含如gap和bestfit的程序，可以使用其并用缺省參數(shù)來確定密切相關(guān)的多肽之間，如來自不同種類的生物體的同源性多肽或者野生型蛋白與其突變蛋白之間的序列同源性或序列一致性。參見例如gcg6.1版。也可以使用采用缺省或推薦參數(shù)的在gcg6.1版中的程序fasta對(duì)多肽序列進(jìn)行比較。fasta(例如fasta2和fasta3)提供了查詢序列和檢索序列之間的比對(duì)和最佳重疊區(qū)域的序列一致性百分率(pearson(2000)，如上所述)。當(dāng)將本發(fā)明的序列與包含來自不同生物體的大量序列的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較時(shí)，另一種優(yōu)選的算法是計(jì)算機(jī)程序blast，特別是使用缺省參數(shù)的blastp或tblastn。參見例如altschul等，(1990)j.mol.biol.215:403410和altschul等，(1997)nucleicacidsres.25:3389402，其均通過引用并入本申請(qǐng)。ph-依賴性結(jié)合本發(fā)明包括具有ph依賴性結(jié)合特性的抗-il-25抗體。例如，本發(fā)明的抗-il-25抗體在酸性ph下與在中性ph下相比可以顯示出與il-25減少的結(jié)合?；蛘?，本發(fā)明的抗-il-25抗體在酸性ph下與在中性ph下相比可以顯示出與il-25增加的結(jié)合。表述“酸性ph”包括小于約6.2的ph值，例如約6.0、5.95、5.9、5.85、5.8、5.75、5.7、5.65、5.6、5.55、5.5、5.45、5.4、5.35、5.3、5.25、5.2、5.15、5.1、5.05、5.0或更低。在本申請(qǐng)中使用的表述“中性ph”指約7.0至約7.4的ph。表述“中性ph”包括約7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35和7.4的ph值。在某些情況下，“在酸性ph下與在中性ph下相比與il-25的結(jié)合減少”以在酸性ph下抗體與il-25結(jié)合的kd值與在中性ph下抗體與il-25結(jié)合的kd值的比值表示(或者反之亦然)。例如，如果抗體或其抗原結(jié)合片段顯示出的酸性/中性kd的比值為約3.0或更高，則可以認(rèn)為抗體或其抗原結(jié)合片段顯示出針對(duì)本發(fā)明目的的“在酸性ph下與在中性ph下相比與il-25的結(jié)合減少”。在某些示例性的實(shí)施方式中，針對(duì)本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段的酸性/中性kd的比值可以是約3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、20.0、25.0、30.0、40.0、50.0、60.0、70.0、100.0或更高。可以例如通過在一群抗體中篩選在酸性ph下與在中性ph下相比與特定抗原的結(jié)合的減少(或增加)獲得具有ph依賴性結(jié)合特性的抗體。此外，在氨基酸水平上對(duì)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的修飾可以產(chǎn)生具有ph依賴性特性的抗體。例如，通過使用組氨酸殘基取代抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如在cdr中)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸，可以獲得在酸性ph下與在中性ph下相比抗原結(jié)合減少的抗體。包含fc變體的抗-il-25抗體根據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方式，提供了包含fc結(jié)構(gòu)域的抗-il-25抗體，所述fc結(jié)構(gòu)域含有增加或減少抗體與fcrn受體結(jié)合(例如在酸性ph下與在中性ph下相比)的一個(gè)或多個(gè)突變。例如，本發(fā)明包括在fc結(jié)構(gòu)域的ch2或ch3區(qū)中包含突變的抗-il-25抗體，其中所述突變?cè)黾觙c結(jié)構(gòu)域與fcrn在酸性環(huán)境中的親和性(例如，在ph范圍從約5.5至約6.0的內(nèi)涵體中)。當(dāng)向動(dòng)物施用時(shí)，此類突變可以導(dǎo)致抗體的血清半衰期的增加。此類fc修飾的非限制性示例包括例如在以下位置的修飾：250(例如e或q)；250和428(例如l或f)；252(例如l/y/f/w或t)、254(例如s或t)和256(例如s/r/q/e/d或t)；或者在以下位置的修飾：428和/或433(例如h/l/r/s/p/q或k)和/或434(例如h/f或y)；或者在位置250和/或428的修飾；或者在位置307或308的修飾(例如308f、v308f)和在位置434的修飾。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述修飾包括428l(例如m428l)和434s(例如n434s)的修飾；428l、259i(例如v259i)和308f(例如v309f)的修飾；433k(例如h433k)和434(例如434y)的修飾；252、254和256(例如252y、254t和256e)的修飾；250q和428l修飾(例如t250q和m428l)；以及307和/或308修飾(例如308f或308p)。例如，本發(fā)明包括包含fc結(jié)構(gòu)域的抗-il-25抗體，所述fc結(jié)構(gòu)域含有一對(duì)或多對(duì)或者一組或多組選自下組的突變：250q和248l(例如t250q和m248l)；252y、254t和256e(例如m252y、s254t和t256e)；428l和434s(例如m428l和n434s)；以及433k和434f(例如h433k和n434f)。前述fc結(jié)構(gòu)域突變的所有可能的組合以及本申請(qǐng)所公開的抗體可變結(jié)構(gòu)域中的其他突變均包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。抗體的生物學(xué)特性本發(fā)明包括根據(jù)表面等離子體共振在25℃時(shí)的測(cè)定以小于約120pm的kd與人il-25結(jié)合的抗-il-25抗體。根據(jù)某些實(shí)施方式，本發(fā)明包括以小于約100pm、小于約90pm、小于約80pm、小于約70pm、小于約60pm、小于約50pm、小于約40pm、小于約30pm、小于約20pm、小于約18pm、小于約16pm、小于約14pm或小于約12pm的kd與人il-25結(jié)合的抗-il-25抗體。本發(fā)明包括根據(jù)表面等離子體共振在25℃時(shí)的測(cè)定以大于約105分鐘的解離半衰期(t1/2)與人il-25結(jié)合的抗-il-25抗體。根據(jù)某些實(shí)施方式，本發(fā)明包括以大于約105分鐘、大于約150分鐘、大于約175分鐘、大于約200分鐘、大于約250分鐘、大于約300分鐘、大于約350分鐘、大于約400分鐘、大于約450分鐘、大于約500分鐘、大于約550分鐘、大于約600分鐘、大于約700分鐘、大于約800分鐘、大于約900分鐘、大于約1000分鐘、大于約1100分鐘或大于約1200分鐘的t1/2與人il-25結(jié)合的抗-il-25抗體。本發(fā)明包括可以結(jié)合或不結(jié)合猴il-25或者小鼠或大鼠il-25的抗-il-25抗體。如在本申請(qǐng)中所使用的，抗體“不結(jié)合”特定抗原(例如猴、小鼠或大鼠il-25)指如果當(dāng)在抗原結(jié)合檢測(cè)如表面等離子體共振中測(cè)試抗體時(shí)，其顯示出大于約1000nm的kd或者在此類檢測(cè)中不顯示出任何抗原結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明的這一方面，能夠用于確定抗體結(jié)合或不結(jié)合特定抗原的另一種檢測(cè)形式是elisa。本發(fā)明包括在經(jīng)工程化改造以表達(dá)il-25受體(il-17ra/il-17rb)的細(xì)胞中以小于約2.0nm的ic50阻斷人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)的抗-il-25抗體。例如，如在本申請(qǐng)的實(shí)施例6中所示的，將hek293細(xì)胞工程化改造以穩(wěn)定表達(dá)人il-17ra(登記號(hào)np_055154.3的氨基酸1至866)和il-17rb(登記號(hào)np_061195.2的氨基酸1至502)。該細(xì)胞系還可以包括能夠檢測(cè)il-25介導(dǎo)的通過il-17ra/il-17rb受體的信號(hào)傳導(dǎo)的報(bào)告元件(例如由il-25結(jié)合至其受體誘導(dǎo)的熒光素酶報(bào)告子或其他可檢測(cè)報(bào)告子)。使用實(shí)施例6中所描述的檢測(cè)形式或基本上類似的檢測(cè)形式，可以根據(jù)使il-25介導(dǎo)的信號(hào)降至當(dāng)不存在抗體時(shí)觀察到的最大信號(hào)的50％時(shí)所需的抗體濃度計(jì)算ic50值。因而，根據(jù)某些實(shí)施方式，本發(fā)明包括根據(jù)使用本申請(qǐng)實(shí)施例6中所描述的檢測(cè)形式或基本上類似的檢測(cè)形式測(cè)定的在經(jīng)工程化改造以表達(dá)il-25受體(il-17ra/il-17rb)的細(xì)胞中以小于約720pm、小于約500pm、小于約400pm、小于約300pm、小于約200pm、小于約100pm、小于約90pm、小于約80pm、小于約70pm、小于約60pm、小于約50pm、小于約40pm、小于約30pm、小于約20pm、小于約10pm或小于約5pm的ic50阻斷人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)的抗-il-25抗體。本發(fā)明包括在人外周血單核細(xì)胞(pbmc)中以小于約16nm的ic50阻斷人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)的抗-il-25抗體。例如，如在本申請(qǐng)的實(shí)施例7中所示的，分離的pbmc和il-25以及不同量的抗-il-25抗體共孵育，并且檢測(cè)由細(xì)胞產(chǎn)生的il-5的水平以顯示il-25介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)的程度。使用實(shí)施例7中所描述的檢測(cè)形式或基本上類似的檢測(cè)形式，可以根據(jù)使il-25介導(dǎo)的信號(hào)降至當(dāng)不存在抗體時(shí)觀察到的最大信號(hào)的50％時(shí)所需的抗體濃度計(jì)算ic50值。因而，根據(jù)某些實(shí)施方式，本發(fā)明包括根據(jù)使用本申請(qǐng)實(shí)施例7中所描述的檢測(cè)形式或基本上類似的檢測(cè)形式測(cè)定的在pbmc中以小于約5nm、小于約4nm、小于約3nm、小于約1nm、小于約900pm、小于約800pm、小于約700pm、小于約600pm、小于約500pm、小于約400pm、小于約300pm、小于約200pm、小于約100pm、小于約90pm、小于約80pm、小于約70pm、小于約60pm、小于約50pm、小于約40pm、小于約30pm或小于約20pm的ic50阻斷人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)的抗-il-25抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗-il-25抗體以范圍從約30pm至約150pm的ic50在人pbmc中阻斷人il-25的信號(hào)傳導(dǎo)。本發(fā)明抗體的結(jié)合特征(例如上文所述的任意結(jié)合特征)當(dāng)以術(shù)語“通過表面等離子體共振檢測(cè)”公開時(shí)指涉及抗體與抗原之間相互作用的相關(guān)結(jié)合特征是使用表面等離子體共振儀(例如儀，gehealthcare)采用如本申請(qǐng)的實(shí)施例2中所描述的標(biāo)準(zhǔn)biacore檢測(cè)條件或采用基本上類似的檢測(cè)形式測(cè)得的。在某些實(shí)施方式中，結(jié)合參數(shù)在25℃下檢測(cè)，而在其他實(shí)施方式中，結(jié)合參數(shù)在37℃下檢測(cè)。本發(fā)明包括降低過表達(dá)il-25的哺乳動(dòng)物的循環(huán)ige水平和/或在其肺中所見的ige水平的抗-il-25抗體，如在實(shí)施例8所描述的模型中所示的。本申請(qǐng)的實(shí)施例8中還描述了在過表達(dá)il-25的哺乳動(dòng)物中減少杯狀細(xì)胞化生的抗-il-25抗體。本發(fā)明包括與il-25特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含含有選自表1中列出的任意hcvr和/或lcvr氨基酸序列的氨基酸序列的hcvr和/或lcvr。本發(fā)明的抗體可以具有一個(gè)或多個(gè)上述的生物學(xué)特征或其任意組合。上述列舉的本發(fā)明抗體的生物學(xué)特征并不是窮舉的。在閱讀了包括本申請(qǐng)工作實(shí)施例在內(nèi)的本公開后，本發(fā)明抗體的其他生物學(xué)特征對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見的。表位定位和相關(guān)技術(shù)本發(fā)明的抗體結(jié)合的表位可以由il-25蛋白的具有3個(gè)或多個(gè)(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個(gè)或更多個(gè))氨基酸的單一連續(xù)序列組成?；蛘?，表位可以由il-25的多個(gè)非連續(xù)的氨基酸(或氨基酸序列)組成。在一些實(shí)施方式中，表位位于或接近于il-25與il-25受體相互作用的表面。在其他實(shí)施方式中，表位位于或接近于il-25不與il-25受體相互作用的表面，例如在il-25表面上的某一位置，當(dāng)抗體與這樣的表位在此處結(jié)合時(shí)不干擾il-25與其受體之間的相互作用。可以采用本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員公知的多種技術(shù)確定抗體是否與多肽或蛋白中的“一個(gè)或多個(gè)氨基酸相互作用”。示例性的技術(shù)包括例如可以采用常規(guī)的交叉阻斷檢測(cè)如antibodies,harlow和lane(coldspringharborpress,coldspringharb.,ny)中所描述的，丙氨酸掃描突變分析、肽印跡分析(reineke,2004,methodsmolbiol248:443-463)和肽裂解分析。此外，可以使用如抗原的表位刪除、表位提取和化學(xué)修飾(tomer,2000,proteinscience9:487-496)的方法。另一種能夠用于鑒定與抗體相互作用的多肽中的氨基酸的方法是通過質(zhì)譜檢測(cè)的氫/氘交換。一般而言，所述氫/氘交換的方法涉及用氘標(biāo)記感興趣的蛋白、隨后將抗體與氘標(biāo)記的蛋白結(jié)合。接下來，將該蛋白/抗體復(fù)合物轉(zhuǎn)移至水中以使得在除了受抗體保護(hù)的殘基(其仍為氘標(biāo)記)以外的所有殘基發(fā)生氫-氘交換。在抗體解離后，對(duì)靶蛋白進(jìn)行蛋白酶裂解和質(zhì)譜分析，從而揭示對(duì)應(yīng)于和抗體相互作用的特定氨基酸的氘標(biāo)記殘基。參見例如ehring(1999)analyticalbiochemistry267(2):252-259；engen和smith(2001)anal.chem.73:256a-265a。本發(fā)明還包括與本申請(qǐng)所述的任意特異性的示例性抗體(例如包含本申請(qǐng)的表1中所示的任意氨基酸序列的抗體)結(jié)合相同表位的抗-il-25抗體。同樣地，本發(fā)明還包括與本申請(qǐng)所述的任意特異性的示例性抗體(例如包含本申請(qǐng)的表1中所示的任意氨基酸序列的抗體)競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合il-25的抗-il-25抗體。通過使用本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法和本申請(qǐng)中的示例能夠容易地確定抗體是否與對(duì)照抗-il-25抗體結(jié)合至相同表位或與對(duì)照抗-il-25抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。例如，為確定是否待測(cè)抗體與本發(fā)明的對(duì)照抗-il-25抗體結(jié)合至相同表位，允許對(duì)照抗體與il-25蛋白結(jié)合。接下來，評(píng)估待測(cè)抗體與il-25分子結(jié)合的能力。在使用對(duì)照抗-il-25抗體飽和結(jié)合后，如果待測(cè)抗體能夠與il-25結(jié)合，則能夠得出結(jié)論待測(cè)抗體與對(duì)照抗-il-25抗體結(jié)合至不同的表位。另一方面，在使用對(duì)照抗-il-25抗體飽和結(jié)合后，如果待測(cè)抗體不能與il-25分子結(jié)合，則待測(cè)抗體可能結(jié)合至與本發(fā)明的對(duì)照抗-il-25抗體結(jié)合的表位相同的表位。然后可以進(jìn)行附加的常規(guī)實(shí)驗(yàn)(例如肽突變和結(jié)合分析)以確證是否所觀察到的待測(cè)抗體結(jié)合的缺乏事實(shí)上是由于其與對(duì)照抗體結(jié)合相同的表位導(dǎo)致的抑或是否是空間位阻(或另外的現(xiàn)象)導(dǎo)致了所觀察到的結(jié)合的缺乏?？梢允褂胑lisa、ria、表面等離子體共振、流式細(xì)胞術(shù)或本領(lǐng)域中任意其他定量或定性的抗體結(jié)合檢測(cè)進(jìn)行這種類型的實(shí)驗(yàn)。根據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方式，如果例如根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定的結(jié)果(參見例如junghans等，cancerres.1990:50:1495-1502)1、5、10、20或100倍過量的一個(gè)抗體對(duì)另一個(gè)抗體的結(jié)合的抑制為至少50％但優(yōu)選地75％、90％或甚至99％時(shí)，則兩個(gè)抗體結(jié)合至相同的(或重疊的)表位?；蛘撸绻乖薪档突蛳粋€(gè)抗體結(jié)合的基本上所有氨基酸的突變降低或消除另一個(gè)抗體的結(jié)合，則認(rèn)為兩個(gè)抗體結(jié)合相同的表位。如果降低或消除一個(gè)抗體結(jié)合的氨基酸的突變中僅一個(gè)子集降低或消除另一個(gè)抗體的結(jié)合，則認(rèn)為兩個(gè)抗體具有“重疊的表位”。為確定是否抗體與對(duì)照抗-il-25抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合(或交叉競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合)，在兩個(gè)方向上進(jìn)行上文所述的結(jié)合方法：在第一個(gè)方向上，在飽和條件下將對(duì)照抗體與il-25蛋白結(jié)合，隨后評(píng)估待測(cè)抗體與il-25分子的結(jié)合。在第二個(gè)方向上，在飽和條件下將待測(cè)抗體與il-25分子結(jié)合，隨后評(píng)估對(duì)照抗體與il-25分子的結(jié)合。如果在這兩個(gè)方向上僅第一(飽和的)抗體能夠與il-25分子結(jié)合，則得出結(jié)論待測(cè)抗體和對(duì)照抗體競(jìng)爭(zhēng)與il-25的結(jié)合(參見例如，在本申請(qǐng)實(shí)施例4中所描述的檢測(cè)形式，在其中將il-25蛋白捕獲于傳感器尖端上并使用對(duì)照抗體[mab-1]和待測(cè)抗-il-25抗體[mab-2]以兩種結(jié)合順序依次處理涂覆了il-25的傳感器尖端)。根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的理解，與對(duì)照抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的抗體并不一定與對(duì)照抗體結(jié)合至相同表位，但可能通過與重疊或鄰近表位的結(jié)合在空間上阻斷對(duì)照抗體的結(jié)合。人源抗體的制備本發(fā)明的抗-il-25抗體可以是全人源但是非天然存在的抗體。用于產(chǎn)生單克隆抗體包括全人源單克隆抗體的方法是本領(lǐng)域公知的?？梢詫⑷我獯祟惞姆椒ㄓ糜诒景l(fā)明的背景下以制備特異性與人il-25結(jié)合的人源抗體。通過使用技術(shù)(參見例如us6,596,541，瑞恩澤制藥公司，)或任意其他公知的用于生成單克隆抗體的方法，首先分離具有人源可變區(qū)和小鼠恒定區(qū)的對(duì)過敏原具有高親和性的嵌合抗體。技術(shù)涉及生成轉(zhuǎn)基因小鼠，所述小鼠具有含有與內(nèi)源性小鼠恒定區(qū)基因座可操作地連接的人源重鏈和輕鏈可變區(qū)的基因組，以使得所述小鼠在抗原的刺激下產(chǎn)生包含人源可變區(qū)和小鼠恒定區(qū)的抗體。編碼所述抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)的dna被分離并且與編碼人源重鏈和輕鏈恒定區(qū)的dna可操作地連接。然后在能夠表達(dá)全人源抗體的細(xì)胞中表達(dá)所述dna。在通常情況下，使用目標(biāo)抗原攻擊小鼠，并且從表達(dá)抗體的小鼠中回收淋巴細(xì)胞(如b細(xì)胞)?？梢詫⑺隽馨图?xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞系融合以制備永生化的雜交瘤細(xì)胞系，并且對(duì)此類雜交瘤細(xì)胞系進(jìn)行篩選和選擇以鑒定產(chǎn)生對(duì)目標(biāo)抗原具有特異性的抗體的雜交瘤細(xì)胞系?？梢苑蛛x編碼所述重鏈和輕鏈可變區(qū)的dna并且將其與所需的同種型的重鏈和輕鏈恒定區(qū)連接。可以在細(xì)胞如cho細(xì)胞中生產(chǎn)此類抗體蛋白?；蛘?，可以直接從抗原特異性淋巴細(xì)胞中分離編碼抗原特異性嵌合抗體或輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的dna。如在下面的實(shí)驗(yàn)章節(jié)中所述的，對(duì)分離的具有人源可變區(qū)和小鼠恒定區(qū)的高親和性嵌合抗體進(jìn)行表征并對(duì)所需的特征包括親和性、選擇性、表位等進(jìn)行選擇。然后，使用所需的人源恒定區(qū)取代所述小鼠的恒定區(qū)以生成本發(fā)明的全人源抗體，例如野生型或經(jīng)修飾的igg1或igg4。雖然可以根據(jù)特定用途改變所選擇的恒定區(qū)，高親和性抗原結(jié)合和靶點(diǎn)特異性特征均保留在可變區(qū)中。在通常情況下，當(dāng)通過與固定在固相上或在溶液相中的抗原的結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，本發(fā)明的抗體具有非常高的親和性，通常具有的kd從約10-12至約10-9m。生物等價(jià)物本發(fā)明的抗-il-25抗體和抗體片段包含具有與本申請(qǐng)所述抗體的氨基酸序列不同的氨基酸序列，但是仍保持了結(jié)合人源il-25的能力的蛋白。此類變體抗體和抗體片段當(dāng)與母體序列進(jìn)行比較時(shí)包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸插入、缺失或取代，但是顯示出基本上與所描述的抗體等價(jià)的生物活性。同樣地，本發(fā)明的編碼抗-il-25抗體的dna序列與所公開的序列相比包含一個(gè)或多個(gè)核苷酸插入、缺失或取代，但是其編碼的抗-il-25抗體或抗體片段基本上是本發(fā)明的抗-il-25抗體或抗體片段的生物等價(jià)物。此類變體氨基酸和dna序列的示例如上文所討論的。如果例如兩種抗原結(jié)合蛋白或抗體是藥學(xué)等價(jià)物或藥學(xué)替代物，即在類似的實(shí)驗(yàn)條件下單劑量或多劑量給予相同摩爾劑量時(shí)其吸收速率和吸收程度未顯示出顯著差異，則認(rèn)為這兩者是生物等價(jià)物。如果一些抗體在其吸收程度上是等價(jià)的但在吸收速率上不是等價(jià)的，仍可以將其認(rèn)為是等價(jià)物或藥學(xué)替代物，并且仍可以認(rèn)為其是生物等價(jià)物，由于這種在吸收速率上的差異是有意的并且已經(jīng)反映在標(biāo)簽中，其對(duì)例如長(zhǎng)期使用時(shí)達(dá)到有效的機(jī)體藥物濃度不是必要的，并且就所研究的特定藥品而言被認(rèn)為是在醫(yī)學(xué)上無足輕重的。在一個(gè)實(shí)施方式中，如果兩種抗原結(jié)合蛋白在安全性、純度和效能方面不存在具有臨床意義的差異，則認(rèn)為其是生物等價(jià)物。在一個(gè)實(shí)施方式中，如果患者能夠在對(duì)照產(chǎn)品和生物產(chǎn)品之間進(jìn)行一次或多次的轉(zhuǎn)換而沒有升高的產(chǎn)生不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)期，則認(rèn)為這兩種抗原結(jié)合蛋白是生物等價(jià)物，所述升高的產(chǎn)生不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)包括與無這種轉(zhuǎn)換的連續(xù)療法相比免疫原性出現(xiàn)具有臨床意義的改變或有效性降低。在一個(gè)實(shí)施方式中，如果兩種抗原結(jié)合蛋白針對(duì)使用的一種或多種病況通過共同的一種或多種作用機(jī)制發(fā)揮作用(在此類作用機(jī)制公知的范圍內(nèi))，則認(rèn)為其是生物等價(jià)物。生物等效性可以通過體內(nèi)和/或體外方法證明。生物等效性的測(cè)定包括，例如(a)在人或其他哺乳動(dòng)物中的體內(nèi)檢測(cè)，其中在血液、血漿、血清或其他生物液體中測(cè)定抗體或其代謝產(chǎn)物的濃度對(duì)時(shí)間的函數(shù)；(b)與在人體內(nèi)的生物利用度數(shù)據(jù)具有相關(guān)性并可對(duì)在人體內(nèi)的生物利用度數(shù)據(jù)進(jìn)行合理預(yù)測(cè)的體外檢測(cè)；(c)在人或其他哺乳動(dòng)物中進(jìn)行的體內(nèi)檢測(cè)，其中測(cè)定抗體(或其靶點(diǎn))適當(dāng)?shù)募毙运幚韺W(xué)作用對(duì)時(shí)間的函數(shù)；和(d)確定抗體的安全性、有效性或者生物利用度或生物等效性的對(duì)照良好的臨床試驗(yàn)?？梢酝ㄟ^例如對(duì)殘基或序列進(jìn)行各種取代或者對(duì)對(duì)于生物活性來說并非必需的末端或中間的殘基和序列進(jìn)行缺失來構(gòu)建本發(fā)明的抗-il-25抗體的生物等價(jià)物變體。例如，非生物活性所必需的半胱氨酸殘基可被缺失或使用其他氨基酸將其取代以防止在還原過程中形成不必要的或不正確的分子內(nèi)二硫鍵橋。在其他情況下，生物等價(jià)物抗體可以包括包含改變了抗體的糖基化特征的氨基酸改變(例如消除或除去糖基化的突變)的抗-il-25抗體變體。物種選擇性和物種交叉反應(yīng)根據(jù)某些實(shí)施方式，本發(fā)明提供了與人il-25結(jié)合但不與來自其他物種的il-25結(jié)合的抗-il-25抗體。本發(fā)明還包括與人il-25及與來自一個(gè)或多個(gè)非人物種的il-25結(jié)合的抗-il-25抗體。例如，本發(fā)明的抗il-25抗體可以結(jié)合至人il-25，并且可以結(jié)合或不結(jié)合(視情況而定)小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、沙鼠、豬、貓、狗、兔、山羊、綿羊、奶牛、馬、駱駝、食蟹猴、絨猴、恒河猴或黑猩猩il-25中的一種或多種。根據(jù)本發(fā)明的某些示例性的實(shí)施方式，提供了與人il-25和食蟹猴(例如macacafascicularis)il-25特異性結(jié)合的抗-il-25抗體。本發(fā)明的其他抗-il-25抗體與人il-25結(jié)合但不與食蟹猴il-25結(jié)合或與食蟹猴il-25僅具有較弱的結(jié)合。多特異性抗體本發(fā)明的抗體可以是單特異性的或多特異性的(例如雙特異性)。多特異性抗體可以對(duì)一個(gè)靶多肽的不同表位是特異性的或者可以含有對(duì)一個(gè)以上的靶多肽具有特異性的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。參見例如tutt等，1991,j.immunol.147:60-69；kufer等，2004,trendsbiotechnol.22:238-244。本發(fā)明的抗-il-25抗體可以連接至或與另一種功能性分子例如另一種肽或蛋白共表達(dá)。例如，抗體或其片段可以功能性地連接(例如通過化學(xué)偶聯(lián)、基因融合、非共價(jià)結(jié)合或其他方式)至一個(gè)或多個(gè)其他的分子部分(如另一個(gè)抗體或抗體片段)，以產(chǎn)生具有第二結(jié)合特異性的雙特異性或多特異性抗體。本發(fā)明包括雙特異性抗體，其中免疫球蛋白的一個(gè)臂與人il-25結(jié)合，并且免疫球蛋白的另一個(gè)臂對(duì)第二抗原具有特異性。與il-25結(jié)合的臂可以包含本申請(qǐng)的表1中所示的任意hcvr/lcvr或cdr氨基酸序列。能夠用于本發(fā)明背景下的示例性雙特異性抗體形式包括使用第一免疫球蛋白(ig)ch3結(jié)構(gòu)域和第二igch3結(jié)構(gòu)域，其中所述第一和第二igch3結(jié)構(gòu)域彼此間存在至少一個(gè)氨基酸的差異，并且與缺乏氨基酸差異的雙特異性抗體相比其中至少一個(gè)氨基酸的差異降低了雙特異性抗體與蛋白a的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述第一igch3結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白a并且所述第二igch3結(jié)構(gòu)域含有減少或消除與蛋白a的結(jié)合的突變?nèi)鏷95r修飾(根據(jù)imgt外顯子編號(hào)；根據(jù)eu編號(hào)為h435r)。所述第二ch3還可以包括y96f修飾(根據(jù)imgt；根據(jù)eu為y436f)?？梢源嬖谟诘诙h3中的其他修飾包括：在igg1抗體的情況下d16e、l18m、n44s、k52n、v57m和v82i(根據(jù)imgt；根據(jù)eu為d356e、l358m、n384s、k392n、v397m和v422i)；在igg2抗體的情況下n44s、k52n和v82i(imgt；根據(jù)eu為n384s、k392n和v422i)；以及在igg4抗體的情況下q15r、n44s、k52n、v57m、r69k、e79q和v82i(根據(jù)imgt；根據(jù)eu為q355r、n384s、k392n、v397m、r409k、e419q和v422i)。上文所述的雙特異性抗體形式的變體包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。能夠用于本發(fā)明背景下的其他示例性的雙特異性形式包括，但不限于，例如基于scfv的或雙體雙特異性形式、igg-scfv融合、雙可變結(jié)構(gòu)域(dvd)-ig、四價(jià)體雜交瘤、knob-into-hole型抗體、共有輕鏈(例如具有knob-into-hole結(jié)構(gòu)的共有輕鏈等)、crossmab、crossfab(seed)體、亮氨酸拉鏈、duobody、igg1/igg2、雙作用fab(daf)-igg和mab2雙特異性形式(參見例如klein等，2012,mabs4:6,1-11，并且作為本申請(qǐng)中引用的參考文獻(xiàn)，其對(duì)前述的形式進(jìn)行了綜述)。也可以使用肽/核酸綴合構(gòu)建雙特異性抗體，例如其中將具有正交化學(xué)反應(yīng)性的非天然氨基酸用于生成位點(diǎn)特異性抗體-寡核苷酸綴合物，其隨后自組裝成具有所定義的組分、價(jià)態(tài)和幾何形狀的多聚體復(fù)合物(參見例如kazane等，j.am.chem.soc.[epub:dec.4,2012])。治療性制劑和施用本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段的藥物組合物。使用提供改善的轉(zhuǎn)移、遞送、耐受等的適宜的載體、賦形劑和其他試劑配置本發(fā)明的藥物組合物。多種適宜的制劑能夠在藥物化學(xué)家公知的處方集remington'spharmaceuticalsciences,mackpublishingcompany,easton,pa中找到。這些制劑包括例如粉劑、糊劑、軟膏、凝膠、蠟、油、脂質(zhì)、含有脂質(zhì)(陽離子或陰離子)的囊泡(如lipofectintm，lifetechnologies,卡爾斯巴德,加利福尼亞州)、dna綴合物、無水吸收糊劑、水包油和油包水乳劑、乳狀碳蠟(各種分子量的聚乙二醇)、半固體凝膠和含有半固體混合物的碳蠟。亦參見powell等，"compendiumofexcipientsforparenteralformulations"pda(1998)jpharmscitechnol52:238-311。可以根據(jù)患者的年齡和身材、靶疾病、病狀、施用途徑等改變向患者施用的抗體的劑量。通常根據(jù)體重或體表面積計(jì)算優(yōu)選劑量。在成人患者中，通常以約0.01至約20mg/kg體重、更優(yōu)選地約0.02至約7、約0.03至約5或者約0.05至約3mg/kg體重的單一劑量靜脈內(nèi)施用本發(fā)明的抗體可能是有利的。可以根據(jù)病況的嚴(yán)重程度調(diào)整治療的頻率和持續(xù)時(shí)間?？梢愿鶕?jù)經(jīng)驗(yàn)確定施用抗-il-25抗體的有效劑量和方案；例如可以通過周期性評(píng)估監(jiān)測(cè)患者的進(jìn)展并相應(yīng)地對(duì)劑量進(jìn)行調(diào)整。而且，可以使用本領(lǐng)域公知的方法確定物種間的劑量比例(例如mordenti等，1991,pharmaceut.res.8:1351)。各種遞送系統(tǒng)是公知的并且可以用于施用本發(fā)明的藥物組合物，例如包封在脂質(zhì)體中、微粒、微囊、能夠表達(dá)突變型病毒的重組細(xì)胞、受體介導(dǎo)的胞吞作用(參見例如wu等，1987，j.biol.chem.262:4429-4432)。引入的方法包括但不限于皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、硬膜外和口服途徑。所述組合物可以通過任意常規(guī)的途徑施用，例如通過輸注或推注、通過經(jīng)上皮或粘膜層(例如口腔粘膜、直腸和小腸粘膜等)的吸收并且可以與其他生物活性劑一起施用。施用可以是全身性的或局部的。可以使用標(biāo)準(zhǔn)針頭和注射器皮下或靜脈內(nèi)遞送本發(fā)明的藥物組合物。此外，對(duì)于皮下遞送，筆遞送裝置能夠容易地用于遞送本發(fā)明的藥物組合物。此類筆遞送裝置可以是可重復(fù)使用的或一次性的?？芍貜?fù)使用的筆遞送裝置通常使用含有藥物組合物的可替換的藥筒。一旦藥筒中的所有藥物組合物已經(jīng)施用并且所述藥筒是空的時(shí)，空的藥筒能夠容易地被棄去并且被含有所述藥物組合物的新藥筒替換。然后可以重新使用所述藥物遞送裝置。在一次性的筆遞送裝置中，無可替換的藥筒。相反地，所述一次性筆遞送裝置在所述裝置中的儲(chǔ)液槽中預(yù)充了所述藥物組合物。一旦所述藥物組合物的儲(chǔ)液槽變空，則將整個(gè)裝置棄去。多種可重復(fù)使用的筆和自動(dòng)注射器遞送裝置可應(yīng)用于本發(fā)明藥物組合物的皮下遞送。例如包括但不一定限于autopentm(owenmumford,inc.,伍德斯托克,英國)、disetronictm筆(disetronicmedicalsystems,波道夫(bergdorf),瑞士)、humalogmix75/25tm筆、humalogtm筆、humalin70/30tm筆(elilillyandco.,印第安納波利斯,美國印第安納州)、novopentmi、ii和iii(novonordisk,哥本哈根,丹麥)、novopenjuniortm(novonordisk,哥本哈根,丹麥)、bdtm筆(bectondickinson,富蘭克林湖,美國新澤西州)、optipentm、optipenprotm、optipenstarlettm和opticliktm(sanofi-aventis,法蘭克福,德國)僅列舉了其中的幾個(gè)。可應(yīng)用于本發(fā)明的藥物組合物皮下遞送的一次性筆遞送裝置的例子包括但不一定限于solostartm筆(sanofi-aventis)、flexpentm(novonordisk)和kwikpentm(elililly)、sureclicktm自動(dòng)注射器(amgen,千橡市,美國加利福利亞州)、penlettm(haselmeier,斯圖加特,德國)、epipen(dey,l.p.)和humiratm筆(abbottlabs,雅培公園，美國伊利諾斯州)僅列舉了其中的幾個(gè)。在某些情況下，所述藥物組合物可以在控釋系統(tǒng)中遞送。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以使用泵(參見langer，如上所述；sefton,1987,crccrit.ref.biomed.eng.14:201)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，可以使用多聚體材料，參見medicalapplicationsofcontrolledrelease,langerandwise(eds.),1974,crcpres.,bocaraton,florida。在又一個(gè)實(shí)施方式中，可以將控釋系統(tǒng)置于所述組合物的靶點(diǎn)附近，以使得僅需要全身劑量的一部分。(參見例如goodson,1984,inmedicalapplicationsofcontrolledrelease,supra,vol.2,pp.115-138)。在langer，1990,science249:1527-1533的綜述中對(duì)其他控釋系統(tǒng)進(jìn)行了討論。可注射的制劑可以包括用于靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)和肌內(nèi)注射，點(diǎn)滴輸注等的劑型?？梢圆捎霉姆椒ㄖ苽溥@些可注射劑型。例如，可以通過例如將上文所述的抗體或其鹽溶解、混懸或乳化于常規(guī)用于注射的無菌水性介質(zhì)或油性介質(zhì)中制備可注射制劑。作為用于注射的水性介質(zhì)，例如有生理鹽水、含有葡萄糖和其他助劑等的等滲溶液，可以將其與適宜的增溶劑如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子表面活性劑[例如聚山梨醇酯80、hco-50(氫化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等聯(lián)用。作為油性介質(zhì)，使用例如芝麻油、豆油等，其可以與增溶劑如苯甲酸芐酯、芐醇等聯(lián)用。因此，優(yōu)選將所制備的注射劑填充入適宜的安瓿中。有利地，將上文所述的用于口服或胃腸外的藥物組合物制成符合匹配的活性成分劑量的單位劑量劑型。這種單位劑量的劑型包括例如片劑、丸劑、膠囊、注射劑(安瓿)、栓劑等。所含的上述抗體的量通常為單位劑量約5至約500mg每劑；特別是在注射劑形式中，優(yōu)選地包含約5至約100mg的上述抗體，而對(duì)于其他劑型來說優(yōu)選地包含約10至約250mg的上述抗體。抗體的治療用途本發(fā)明包含包括向需要其的對(duì)象施用包含抗-il-25抗體的治療組合物的方法。治療組合物可以包含本申請(qǐng)公開的任意抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。本發(fā)明的抗體是有用的，尤其是用于治療、預(yù)防和/或減輕與il-25的表達(dá)或活性相關(guān)的或由其介導(dǎo)的，或者可以通過阻斷il-25與il-25受體之間的相互作用或以其他方式抑制il-25的活性和/或信號(hào)傳導(dǎo)治療的任何疾病或病癥。本發(fā)明包括通過向需要此類治療的患者施用如本申請(qǐng)其他部分所公開的抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以治療或預(yù)防哮喘的方法。如在本申請(qǐng)中所使用的，術(shù)語“哮喘”包括但不限于過敏性哮喘、非過敏性哮喘、嚴(yán)重頑固性哮喘、哮喘惡化、病毒誘導(dǎo)的哮喘或病毒誘導(dǎo)的哮喘惡化、類固醇抵抗性哮喘、類固醇敏感性哮喘、嗜酸性粒細(xì)胞性哮喘或非嗜酸性粒細(xì)胞性哮喘等以及以氣道炎癥或氣道高反應(yīng)性(ahr)為特征的其他相關(guān)病癥。該術(shù)語還旨在包括病毒誘導(dǎo)的哮喘惡化。本發(fā)明包括通過向需要此類治療的患者施用如本申請(qǐng)其他部分所公開的抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以治療或預(yù)防慢性阻塞性肺病(copd)的方法。如在本申請(qǐng)中所使用的，術(shù)語“copd”包括但不限于以在幾個(gè)月內(nèi)未發(fā)生顯著變化的肺呼氣流量減少和強(qiáng)制排空緩慢為特征的疾病和病癥。根據(jù)本發(fā)明這一方面的方法可以用于治療例如與香煙煙霧(例如長(zhǎng)期吸煙)、空氣污染(例如二氧化硫、二手煙等)、職業(yè)性化學(xué)品(例如鎘)、過敏或ahr相關(guān)或由上述原因引起的copd。本發(fā)明還包括通過向需要此類治療的患者施用如本申請(qǐng)其他部分所公開的抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段治療或預(yù)防炎性腸病(ibd)的方法。如在本申請(qǐng)中所使用的，術(shù)語“ibd”包括但不限于潰瘍性結(jié)腸炎、克隆氏病、膠原性結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、轉(zhuǎn)流性結(jié)腸炎、白塞氏綜合征、感染性結(jié)腸炎、未定型結(jié)腸炎以及以大腸或結(jié)腸的粘膜層炎癥為特征的其他相關(guān)病癥。本發(fā)明還包括通過向需要此類治療的患者施用如本申請(qǐng)其他部分所公開的抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以治療或預(yù)防特應(yīng)性皮炎(ad)的方法。如在本申請(qǐng)中所使用的，術(shù)語“ad”包括但不限于以強(qiáng)烈瘙癢(例如嚴(yán)重瘙癢)且以鱗狀和干性濕疹損傷為特征的炎性皮膚病。術(shù)語“ad”包括由表皮屏障功能障礙、過敏(例如對(duì)某些食物、花粉、霉菌、塵螨、動(dòng)物等過敏)、輻射暴露和/或哮喘引起的或與之相關(guān)的ad。根據(jù)本發(fā)明這一方面的方法可以用于治療例如輕度、中度、中度至重度和重度形式的ad。本發(fā)明還包括通過向需要此類治療的患者施用如本申請(qǐng)其他部分所公開的抗-il-25抗體或其抗原結(jié)合片段以治療或預(yù)防疾病和病癥如嗜酸性肉芽腫性血管炎或egpa(也稱為churg-strauss綜合征)、過敏、過敏性鼻炎、過敏性氣道炎癥、食物過敏、蕁麻疹(包括慢性特發(fā)性蕁麻疹)、嗜酸性粒細(xì)胞性肺炎、嗜酸性粒細(xì)胞性食道炎、嗜酸性粒細(xì)胞增多綜合征、特發(fā)性肺纖維化、過敏性肺炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、血管炎、葡萄膜炎、癌癥和移植物抗宿主病的方法。本發(fā)明還提供了用于治療其他炎性病癥、心血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、疼痛、關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎等)、巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎、血管炎、一般血管疾病、過敏性紫癜、多發(fā)性硬化癥、狼瘡和干燥綜合征的方法。在本申請(qǐng)所述治療方法的背景下，抗-il-25抗體可以作為單一療法(即作為唯一治療劑)或者與一種或多種其他治療劑(在本申請(qǐng)的其他部分描述了其實(shí)例)聯(lián)合施用。聯(lián)用療法和制劑本發(fā)明包括組合物和治療制劑以及治療方法，所述組合物和治療處方包含與一種或多種附加治療活性組分聯(lián)用的本申請(qǐng)所述的任意抗-il-25抗體，所述治療方法包括向需要其的對(duì)象施用此類聯(lián)用。本發(fā)明的抗-il-25抗體可以與一種或多種選自下組的附加治療活性組分共同制劑和/或聯(lián)合施用，例如il-4或il-4r拮抗劑(例如抗-il-4或抗-il-4r抗體)、il-13拮抗劑(例如抗-il-13或抗-il-13r抗體)、il-6或il-6r拮抗劑(例如抗-il-6或抗-il-6r抗體，參見例如us7,582,298)、抗-il-1拮抗劑(例如利洛納塞)、tnf拮抗劑(例如依那西普(恩利tm))、ige拮抗劑以及il-5、il-8、il-9、il-17、il-17ra、il-22、tslp和il-33拮抗劑。在治療哮喘和相關(guān)病況的背景下，附加治療活性組分可以選自下組：長(zhǎng)效β2-激動(dòng)劑(laba，例如沙美特羅或福莫特羅)、吸入性皮質(zhì)類固醇(ics，例如氟替卡松或布地奈德)、laba與ics的組合(例如氟替卡松+沙美特羅[例如(葛蘭素史克)]；或布地奈德+福莫特羅[例如(阿斯利康)])、全身性皮質(zhì)類固醇(例如口服或靜脈內(nèi))、甲基黃嘌呤、奈多羅米鈉、色甘酸鈉、以及針對(duì)下述細(xì)胞因子和/或其受體任意一種或多種的拮抗劑(例如抗體)：il-4、il-5、il-8、il-9、il-13、il-17、il-33、tslp及其組合。在治療特應(yīng)性皮炎和相關(guān)狀況的背景下，附加治療活性組分可以選自下組：局部皮質(zhì)類固醇(tcs，例如氫化可的松、倍他米松戊酸酯、倍他米松二丙酸酯、雙氟米松戊酸酯、氫化可的松-17-丁酸酯、糠酸莫米松、醋丙氫可的松、丙酸氯倍他索、哈西奈德、丁酸氯倍他松和曲安奈德)、他克莫司、吡美莫司、環(huán)孢霉素、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、色甘酸鈉、蛋白酶抑制劑、針對(duì)下述細(xì)胞因子和/或其受體的任意一種或多種的拮抗劑(例如抗體)：il-4、il-5、il-13、il-17、il-33、tslp及其組合。根據(jù)本發(fā)明這一方面的某些實(shí)施方式，將向?qū)ο笫┯每?il-25抗體與非藥物療法如紫外線(uv)光療結(jié)合。在治療慢性阻塞性肺病(copd)的背景下，附加治療活性組分可以選自下組：β2激動(dòng)劑、抗膽堿能藥、il-5抗體(例如美泊利單抗)或il-13抗體(例如lebrukuzimab)。例如，可以用于與本發(fā)明的抗體聯(lián)用以治療copd的藥劑可以包括下述中的任意一種或多種：茚達(dá)特羅(β2激動(dòng)劑)、格隆銨(毒蕈堿劑)、噻托銨(抗膽堿能藥)、阿地銨(抗毒蕈堿劑)、蕪地溴銨(抗膽堿能劑)或維蘭特羅(長(zhǎng)效β2激動(dòng)劑)?？梢杂糜谂c本發(fā)明的抗體聯(lián)用以治療copd的其他藥劑包括磷酸二酯酶抑制劑(例如茶堿、羅氟司特、西洛司特)、內(nèi)源性阿片或β-腎上腺素拮抗劑(β阻斷劑)。在治療血管炎特別是churg-strauss綜合征(css)的背景下，附加治療活性組分可以選自類固醇、皮質(zhì)類固醇和免疫抑制劑(例如環(huán)磷酰胺)。在治療過敏的背景下，本發(fā)明的抗-il-25抗體可以與用于治療過敏反應(yīng)的任意姑息療法聯(lián)用，或者可以與標(biāo)準(zhǔn)免疫療法(sit)一起用于治療過敏狀況，或者可以用于減輕與過敏反應(yīng)相關(guān)的至少一種癥狀。例如，附加治療活性組分可以選自抗組胺劑、類固醇、皮質(zhì)類固醇、減充血?jiǎng)?、白三烯抑制劑和肥大?xì)胞抑制劑?？梢杂糜谂c本發(fā)明的抗-il-25抗體聯(lián)用以治療過敏的其他藥劑可以是任意一種或多種下述細(xì)胞因子和/或其受體的拮抗劑：il-1、il-4、il-5、il-8、il-9、il-13、il-17、tslp、il-33或tnf拮抗劑。本發(fā)明的抗-il-25抗體還可以與抗病毒劑、抗生素、鎮(zhèn)痛劑、氧、抗氧化劑、cox抑制劑、心臟保護(hù)劑、金屬螯合劑、ifn-γ和/或nsaid聯(lián)合施用和/或共同制劑?？梢栽谑┯帽景l(fā)明的抗-il-25抗體之前不久、同時(shí)或之后不久施用附加治療活性組分(例如上文所列的任意藥劑或其衍生物)(針對(duì)本公開的目的，將此類施用方案認(rèn)為是抗-il-25抗體與附加治療活性組分的“聯(lián)合”施用)。本發(fā)明包括其中本發(fā)明的抗-il-25抗體與本申請(qǐng)其他部分所述的一種或多種附加治療活性組分共同制劑的藥物組合物。施用方案根據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方式，可以在一個(gè)規(guī)定的時(shí)間范圍內(nèi)向?qū)ο笫┯枚鄤┝康目?il-25抗體(或包含抗-il-25抗體與本申請(qǐng)?zhí)峒暗娜我飧郊又委熜曰钚詣┑慕M合的藥物組合物)。根據(jù)本發(fā)明這一方面的方法包括順序地向?qū)ο笫┯枚鄤┝康谋景l(fā)明的抗-il-25抗體。如本申請(qǐng)所使用的，“順序地施用”指在不同的時(shí)間點(diǎn)向?qū)ο笫┯酶鲃┝康目?il-25抗體，例如在由預(yù)定的間隔(例如小時(shí)、天、周或月)分隔的不同天。本發(fā)明包括包含順序地向患者施用單一初始劑量的抗-il-25抗體，隨后一個(gè)或多個(gè)第二劑量的抗-il-25抗體，以及任選地隨后一個(gè)或多個(gè)第三劑量的抗-il-25抗體的方法。術(shù)語“初始劑量”、“第二劑量”和“第三劑量”指施用抗-il-25抗體的時(shí)間順序。因此，所述“初始劑量”是在治療方案開始時(shí)施用的劑量(也稱為“基線劑量”)；所述“第二劑量”是在初始劑量之后施用的劑量；以及所述“第三劑量”是在第二劑量之后施用的劑量。所述初始、第二和第三劑量可以均包含相同量的抗-il-25抗體，但是通常在施用頻率方面其彼此之間可以是不同的。然而，在某些實(shí)施方式中，在治療過程中，在初始、第二和/或第三劑量中所含的抗-il-25抗體的量彼此之間是改變的(例如適當(dāng)?shù)厣险{(diào)或下調(diào))。在某些實(shí)施方式中，在治療方案開始時(shí)施用兩個(gè)或多個(gè)(例如2、3、4或5)劑量作為“負(fù)荷劑量”，隨后在降低頻率的基礎(chǔ)上施用后續(xù)劑量(例如“維持劑量”)。在本發(fā)明的某些示例性實(shí)施方式中，各第二和/或第三劑量均在立即在前劑量1至26(例如1、11/2、2、21/2、3、31/2、4、41/2、5、51/2、6、61/2、7、71/2、8、81/2、9、91/2、10、101/2、11、111/2、12、121/2、13、131/2、14、141/2、15、151/2、16、161/2、17、171/2、18、181/2、19、191/2、20、201/2、21、211/2、22、221/2、23、231/2、24、241/2、25、251/2、26、261/2或更多)周后施用。如本申請(qǐng)所使用的，短語“立即在前劑量”指在多次施用的順序中在下一個(gè)劑量施用前向患者施用的抗-il-25抗體的劑量，在所述順序中無插入劑量。根據(jù)本發(fā)明這一方面的方法可以包括向患者施用任意數(shù)量的第二和/或第三劑量的抗-il-25抗體。例如，在某些實(shí)施方式中，僅向患者施用單一的第二劑量。在其他實(shí)施方式中，向患者施用兩個(gè)或多個(gè)(例如2、3、4、5、6、7、8或更多)第二劑量。同樣地，在某些實(shí)施方式中，僅向患者施用單一的第三劑量。在其他實(shí)施方式中，向患者施用兩個(gè)或多個(gè)(例如2、3、4、5、6、7、8或更多)第三劑量。施用方案可以在特定對(duì)象生存期間無限制地使用，或者直至此類治療不再有治療性的需求或益處。在涉及多個(gè)第二劑量的實(shí)施方式中，可以以與其他第二劑量相同的頻率施用各第二劑量。例如，可以在立即在前劑量1-2周或者1-2個(gè)月后向患者施用各第二劑量。類似地，在涉及多個(gè)第三劑量的實(shí)施方式中，可以以與其他第三劑量相同的頻率施用各第三劑量。例如，可以在立即在前劑量2-12周后向患者施用各第三劑量。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，在治療方案的過程中向患者施用的第二和/或第三劑量的頻率可以改變。在治療過程中還可以由醫(yī)師根據(jù)臨床檢查后各患者的需要調(diào)整施用頻率。本發(fā)明包括其中以第一頻率(例如每周一次、每?jī)芍芤淮?、每三周一次、每月一次、每?jī)蓚€(gè)月一次等)向患者施用2至6個(gè)負(fù)荷劑量，隨后在更低頻率的基礎(chǔ)上向患者施用兩個(gè)或多個(gè)維持劑量的施用方案。例如，根據(jù)本發(fā)明的這一方面，如果以每月一次的頻率施用負(fù)荷劑量，則可以每6周一次、每?jī)蓚€(gè)月一次、每三個(gè)月一次等向患者施用維持劑量?？贵w的診斷用途本發(fā)明的抗-il-25抗體還可以用于檢測(cè)和/或測(cè)定樣品中的il-25或表達(dá)il-25的細(xì)胞，例如用于診斷目的。例如，抗-il-25抗體或其片段可以用于診斷特征為il-25的異常表達(dá)(例如過表達(dá)、低表達(dá)、缺乏表達(dá)等)的狀況或疾病。針對(duì)il-25的示例性診斷檢測(cè)可以包括例如將來自患者的樣品與本發(fā)明的抗-il-25抗體接觸，其中所述抗-il-25抗體使用可檢測(cè)的標(biāo)簽或報(bào)告分子標(biāo)記?；蛘?，在診斷應(yīng)用中可以將未標(biāo)記的抗-il-25抗體與其自身具有可檢測(cè)標(biāo)簽的第二種抗體聯(lián)用。可檢測(cè)標(biāo)記或報(bào)告分子可以是放射性同位素如3h、14c、32p、35s或125i；熒光或化學(xué)發(fā)光部分如熒光素異硫氰酸酯或羅丹明；或酶如堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根過氧化物酶或熒光素酶。能夠用于檢測(cè)或測(cè)定樣品中的il-25的特異性的示例性檢測(cè)包括酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)(elisa)、放射性免疫檢測(cè)(ria)和熒光活化細(xì)胞分選(facs)。能夠用于根據(jù)本發(fā)明的il-25診斷檢測(cè)的樣品包括來自患者的任意組織或液體樣品，在正常或病理狀況下其含有可檢測(cè)量的il-25蛋白或其片段。在通常情況下，將測(cè)定來自健康患者(例如未患有與異常的il-25水平或活性相關(guān)的疾病或狀況的患者)的特定樣品中的il-25的水平以建立初始的基線或標(biāo)準(zhǔn)il-25水平。然后將il-25的該基線水平與在來自疑似患有il-25相關(guān)疾病或病況的個(gè)體的樣品中測(cè)得的il-25的水平進(jìn)行比較。實(shí)施例闡述下述實(shí)施例以便向本領(lǐng)域普通技術(shù)人員提供如何制備和使用本發(fā)明的方法和組合物的完整公開和描述，并且其并非旨在限制發(fā)明人所認(rèn)為的其發(fā)明的范圍。已作出努力以確保關(guān)于所使用數(shù)字的準(zhǔn)確性(例如數(shù)量、溫度等)，但是應(yīng)對(duì)一些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差予以考慮。除非另外指出，份數(shù)以重量份計(jì)、分子量是平均分子量、溫度是攝氏度和壓力是處于或接近大氣壓。實(shí)施例1：抗-il-25抗體的產(chǎn)生通過使用重組人il-25(r&dsystems，目錄號(hào)：1258)免疫小鼠(即包含編碼人免疫球蛋白重鏈可變區(qū)和κ輕鏈可變區(qū)的經(jīng)基因工程改造的小鼠)以獲得抗-il-25抗體。通過il-25特異性免疫檢測(cè)監(jiān)測(cè)抗體的免疫應(yīng)答。當(dāng)產(chǎn)生了所需要的免疫應(yīng)答時(shí)，收集脾細(xì)胞并與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合以保持其活力并形成雜交瘤細(xì)胞系。對(duì)雜交瘤細(xì)胞系進(jìn)行篩選和選擇以鑒定生產(chǎn)il-25特異性抗體的細(xì)胞系。使用這項(xiàng)技術(shù)獲得了若干抗-il-25嵌合抗體(即具有人源可變結(jié)構(gòu)域和小鼠恒定結(jié)構(gòu)域的抗體)。此外，如us2007/0280945a1中所描述的，直接從抗原陽性b細(xì)胞分離了若干全人抗-il-25抗體，無需與骨髓瘤細(xì)胞融合。在下述的實(shí)施例中詳細(xì)描述了根據(jù)該實(shí)施例的方法產(chǎn)生的示例性抗-il-25抗體的某些生物學(xué)性質(zhì)。實(shí)施例2：重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸和核酸序列表1中列出了所選的本發(fā)明的抗-il-25抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)以及cdr的氨基酸序列標(biāo)識(shí)。相應(yīng)的核酸序列標(biāo)識(shí)如表2中所示。表1：氨基酸序列標(biāo)識(shí)表2：核酸序列標(biāo)識(shí)在本申請(qǐng)中的抗體通常根據(jù)下述命名法：fc前綴(例如“h1h”、“h1m”、“h4h”等)，隨后為數(shù)字標(biāo)識(shí)(例如“11009”、“10690”、“10861”等)，隨后為“p”或“n”后綴，如表1和表2中所示。因此，根據(jù)這種命名法，可以將本申請(qǐng)中的抗體稱為例如“h1m11009n”、“h2m10690n”、“h4h10861p”等。在本申請(qǐng)中使用的抗體命名中的h1m、h2m、h4h前綴表示特定的抗體fc區(qū)同種型。例如，“h1m”抗體具有小鼠igg1fc、“h2m”抗體具有小鼠igg2fc和“h4h”抗體具有人源igg4fc(由抗體名稱中的第一個(gè)“h”表示所有可變區(qū)是全人源的)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將理解，可以將具有特定fc同種型的抗體轉(zhuǎn)換為具有不同fc同種型的抗體(例如可以將具有小鼠igg1fc的抗體轉(zhuǎn)換為具有人源igg4的抗體等等)，但是如論如何，以表1和2中顯示的數(shù)字標(biāo)識(shí)表示的可變結(jié)構(gòu)域(包括cdr)將是保持不變的，并且無論fc結(jié)構(gòu)域的性質(zhì)如何，預(yù)計(jì)其結(jié)合性質(zhì)將是相同的或基本上相似的。在下述實(shí)施例中使用的比較抗體在下述實(shí)驗(yàn)中包括了抗-il25的比較抗體以用于比較目的。特別地，“比較i”是帶有具有如us8,658,169中所示的“rh2.5_r71v”的相應(yīng)結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗-il-25抗體。實(shí)施例3：來源于表面等離子體共振的人單克隆抗-il-25抗體的結(jié)合親和性和動(dòng)力學(xué)常數(shù)在biacore4000儀器(ge醫(yī)療)上使用實(shí)時(shí)表面等離子體共振生物傳感器檢測(cè)確定il-25結(jié)合至純化的抗-il-25抗體的平衡解離常數(shù)(kd值)。通過胺與多克隆家兔抗-小鼠抗體(ge醫(yī)療,#br-1008-38)或與單克隆小鼠抗-人fc抗體(ge醫(yī)療,#br-1008-39)偶聯(lián)將biacore傳感器表面衍生化以捕獲表達(dá)不同恒定區(qū)的抗-il-25抗體。所有biacore結(jié)合研究均在hbst運(yùn)行緩沖液(0.01mhepesph7.4，0.15mnacl，3mmedta，0.05％v/v表面活性劑p20)中進(jìn)行。所有il-25試劑均表達(dá)c-末端myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽(在本申請(qǐng)中稱為“il-25-mmh”)。以30μl/min的流速將在hbst運(yùn)行緩沖液中制備的不同濃度(范圍從100nm至3.7nm，3倍稀釋)的人il-25-mmh(seqidno:273)、猴il-25-mmh(seqidno:274)、小鼠il-25-mmh(seqidno:275)和大鼠il-25-mmh(seqidno:276)注射至已捕獲了抗-il-25抗體的表面上。監(jiān)測(cè)4分鐘所有il-25-mmh試劑與各已捕獲的單克隆抗體的結(jié)合并且監(jiān)測(cè)10分鐘其在hbst運(yùn)行緩沖液中的解離。如下表中所示的所有結(jié)合動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)均在25℃或37℃下進(jìn)行。通過使用scrubber2.0c曲線擬合軟件將實(shí)時(shí)傳感圖擬合為1:1結(jié)合模型來確定動(dòng)力學(xué)結(jié)合(ka)和解離(kd)速率常數(shù)。根據(jù)動(dòng)力學(xué)速率常數(shù)計(jì)算結(jié)合解離平衡常數(shù)(kd)和解離半衰期(t1/2)：kd(m)＝kd/ka和t1/2(min)＝(ln2/(60*kd)。在25℃或37℃下人、猴、小鼠和大鼠il-25-mmh結(jié)合至抗-il-25抗體的結(jié)合動(dòng)力學(xué)參數(shù)如表3至10所示。(“nb”表示在所測(cè)試的實(shí)驗(yàn)條件下未觀察到結(jié)合；“ic”表示由于非特異性背景與抗-mfc表面的結(jié)合導(dǎo)致的不確定的結(jié)合)。表3：在25℃時(shí)抗-il-25單克隆抗體與人il-25結(jié)合的結(jié)合動(dòng)力學(xué)參數(shù)表4：在37℃時(shí)抗-il-25單克隆抗體與人il-25結(jié)合的結(jié)合動(dòng)力學(xué)參數(shù)表5：在25℃時(shí)抗-il-25單克隆抗體與猴il-25結(jié)合的結(jié)合動(dòng)力學(xué)參數(shù)*ic＝表示由于非特異性背景與抗-mfc表面的結(jié)合導(dǎo)致的不確定的結(jié)合表6：在37℃時(shí)抗-il-25單克隆抗體與猴il-25結(jié)合的結(jié)合動(dòng)力學(xué)參數(shù)*ic＝表示由于非特異性背景與抗-mfc表面的結(jié)合導(dǎo)致的不確定的結(jié)合表7：在25℃時(shí)抗-il-25單克隆抗體與小鼠il-25結(jié)合的結(jié)合動(dòng)力學(xué)參數(shù)*nb＝表示在所測(cè)試的實(shí)驗(yàn)條件下未觀察到結(jié)合表8：在37℃時(shí)抗-il-25單克隆抗體與小鼠il-25結(jié)合的結(jié)合動(dòng)力學(xué)參數(shù)*nb＝表示在所測(cè)試的實(shí)驗(yàn)條件下未觀察到結(jié)合表9：在25℃時(shí)抗-il-25單克隆抗體與大鼠il-25結(jié)合的結(jié)合動(dòng)力學(xué)參數(shù)*nb＝表示在所測(cè)試的實(shí)驗(yàn)條件下未觀察到結(jié)合表10：在37℃時(shí)抗-il-25單克隆抗體與大鼠il-25結(jié)合的結(jié)合動(dòng)力學(xué)參數(shù)*nb＝表示在所測(cè)試的實(shí)驗(yàn)條件下未觀察到結(jié)合在25℃時(shí)，本發(fā)明的抗-il-25抗體以范圍從11.6pm至36.2nm的kd值與人il-25結(jié)合，而比較1以120pm的kd值與人il-25結(jié)合(表3)。在37℃時(shí)，本發(fā)明的抗-il-25抗體以范圍從26.8pm至61.4nm的kd值與人il-25結(jié)合，而比較1以134pm的kd值與人il-25結(jié)合(表4)。在25℃時(shí)，17個(gè)本發(fā)明的抗-il-25抗體中有14個(gè)以范圍從4.02pm至218pm的kd值與猴il-25結(jié)合，而比較1以88.0pm的kd值與猴il-25結(jié)合(表5)。在37℃時(shí)，17個(gè)本發(fā)明的抗-il-25抗體中有14個(gè)以范圍從23.6pm至189pm的kd值與猴il-25結(jié)合，而比較1以47.3pm的kd值與猴il-25結(jié)合(表6)。三個(gè)本發(fā)明的抗體在25℃或37℃時(shí)未顯示出與猴il-25的確定的結(jié)合。在25℃時(shí)，17個(gè)本發(fā)明的抗-il-25抗體中有7個(gè)以范圍從570pm至82.3nm的kd值與小鼠il-25結(jié)合，而比較1以205pm的kd值與小鼠il-25結(jié)合(表7)。在37℃時(shí)，17個(gè)本發(fā)明的抗-il-25抗體中有7個(gè)以范圍從243pm至137nm的kd值與小鼠il-25結(jié)合，而比較1以80.8pm的kd值與小鼠il-25-mmh結(jié)合(表8)。10個(gè)本發(fā)明的抗體在25℃或37℃時(shí)均未顯示出與小鼠il-25的結(jié)合。在25℃時(shí)，17個(gè)本發(fā)明的抗-il-25抗體中有7個(gè)以范圍從132pm至103nm的kd值與大鼠il-25結(jié)合，而比較1以103pm的kd值與大鼠il-25結(jié)合(表9)。在37℃時(shí)，17個(gè)本發(fā)明的抗-il-25抗體中有7個(gè)以范圍從60.2pm至115nm的kd值與大鼠il-25結(jié)合，而比較1以64.2pm的kd值與大鼠il-25結(jié)合(表10)。10個(gè)本發(fā)明的抗體在25℃或37℃時(shí)未顯示出與大鼠il-25的結(jié)合。實(shí)施例4：抗-il-25抗體的交叉競(jìng)爭(zhēng)在octetqk384生物傳感器(pallfortebiocorp.)上使用實(shí)時(shí)、無標(biāo)記的生物層干涉量度檢測(cè)確定抗-il-25單克隆抗體之間的結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)在25℃下在hbst動(dòng)力學(xué)緩沖液(0.01mhepesph7.4，0.15mnacl，3mmedta，0.05％v/v表面活性劑p20，0.1mg/mlbsa)中進(jìn)行，以1000rpm的速度振蕩搖板。為了評(píng)估兩個(gè)抗體是否能夠彼此之間競(jìng)爭(zhēng)與表達(dá)c-末端myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽的重組人il-25(hil-25-mmh；seqidno:273)上其各自的表位的結(jié)合，首先通過將生物傳感器浸沒入含有4μg/mlhil-25-mmh溶液的孔中5分鐘，將約～0.5至0.7nmhil-25-mmh捕獲于包被了抗-五-his抗體的octet生物傳感器(fortebioinc,#18-5079)上。然后通過浸入含有50μg/mlmab-1溶液的孔中5分鐘，使用第一抗-il-25單克隆抗體(在本申請(qǐng)中稱為mab-1)飽和捕獲了抗原的生物傳感器。隨后，再將生物傳感器浸入含有50μg/ml第二抗-il-25單克隆抗體(在本申請(qǐng)中稱為mab-2)溶液的孔中。在實(shí)驗(yàn)的每步之間在hbst動(dòng)力學(xué)緩沖液中洗滌生物傳感器。在實(shí)驗(yàn)過程中監(jiān)測(cè)實(shí)時(shí)結(jié)合應(yīng)答并記錄每步結(jié)束時(shí)的結(jié)合應(yīng)答。對(duì)mab-2結(jié)合至預(yù)先復(fù)合了mab-1的hil-25-mmh的應(yīng)答進(jìn)行比較并確定不同抗-il-25單克隆抗體的競(jìng)爭(zhēng)性/非競(jìng)爭(zhēng)性行為。在一些情況下，抗-il-25抗體不能完全飽和己捕獲了hil-25-mmh的表面，導(dǎo)致在自競(jìng)爭(zhēng)期間會(huì)觀察到一定量的結(jié)合信號(hào)。因此，通過從特異性mab-2結(jié)合中減去自競(jìng)爭(zhēng)信號(hào)產(chǎn)生交叉競(jìng)爭(zhēng)矩陣并且將小于0nm的任何結(jié)合信號(hào)均記錄為0nm。結(jié)果匯總于圖1中。mab標(biāo)識(shí)及其對(duì)應(yīng)的抗體以及針對(duì)hil-25-mmh結(jié)合至抗-五-his傳感器和針對(duì)mab-1結(jié)合至已捕獲的hil-25-mmh所觀察到的結(jié)合應(yīng)答的要點(diǎn)如表11中所示。表11：與圖1中所示的交叉競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定中所測(cè)試的抗體相對(duì)應(yīng)的抗體標(biāo)識(shí)在圖1中，具有黑色字體的淺灰色方框表示自競(jìng)爭(zhēng)。在兩個(gè)方向上不依賴于結(jié)合順序的抗體競(jìng)爭(zhēng)以具有白色字體的黑色方框表示?？贵w之間無競(jìng)爭(zhēng)(提示具有不同結(jié)合表位)以具有黑色字體的白色方框表示。具有白色字體的深灰色方框表示同種型對(duì)照抗體和僅為緩沖劑的結(jié)合應(yīng)答。該實(shí)施例表明本發(fā)明的若干抗體與本發(fā)明的一種或多種其他抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)與il-25的結(jié)合；而本發(fā)明的某些抗體(例如h1m11009n[12])顯示出與所測(cè)試的其他抗體具有較少的交叉競(jìng)爭(zhēng)或無交叉競(jìng)爭(zhēng)。實(shí)施例5：抗-il-25抗體阻斷il-25與il-17rb的結(jié)合在競(jìng)爭(zhēng)夾心elisa中對(duì)抗-il-25抗體阻斷人il-25與其天然受體之一人il-17rb的結(jié)合的能力進(jìn)行了檢測(cè)。使用在pbs緩沖液中的2μg/ml的表達(dá)c-末端人fc標(biāo)簽的人il-17rb蛋白胞外域(hil17rb-hfc；r&dsystems，#1207-br)在4℃下將96孔酶標(biāo)板包被過夜。隨后使用0.5％(w/v)bsa的pbs溶液阻斷非特異性結(jié)合位點(diǎn)。將恒定濃度為2nm的表達(dá)c-末端myc-myc-六組氨酸標(biāo)簽的人il-25(hil-25-mmh；seqidno:273)加入抗體的系列稀釋物中，以使得抗體的終濃度范圍從0至200nm。將抗體/hil-25-mmh混合物在室溫下(rt)孵育1小時(shí)，隨后將其轉(zhuǎn)移至包被了hil-17rb-hfc的酶標(biāo)板中。在rt下孵育1小時(shí)后，洗滌孔，并使用與辣根過氧化物酶綴合的抗-myc多克隆抗體(novusbiologicals，#nb600-341)檢測(cè)與板結(jié)合的hil-25-mmh。使用tmb溶液將樣品顯色以產(chǎn)生比色反應(yīng)，然后使用1m硫酸淬滅，隨后在victorx5酶標(biāo)儀上測(cè)定405nm處的吸光度。使用prismtm軟件(graphpad)中的s型(sigmoidal)劑量-效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。使用計(jì)算得到的ic50值作為阻斷效能的指示，其定義為使hil-25-mmh與hil-17rb-hfc的結(jié)合阻斷50％所需的抗體濃度。將僅恒定濃度的hil-25-mmh的測(cè)定吸光度定義為0％阻斷并且將未加入hil-25-mmh測(cè)定的吸光度定義為100％阻斷。根據(jù)從上文定義的100％阻斷中減去在存在抗體時(shí)觀察到的信號(hào)降低情況相對(duì)于單獨(dú)hil-25-mmh的信號(hào)與背景(單獨(dú)的與hrp綴合的二抗的信號(hào))之差的比值計(jì)算阻斷百分率。使用含有最高濃度各抗體的孔的吸光度值確定最大阻斷百分率。所測(cè)試各抗體的ic50值和最大阻斷百分率如表12中所示。表12：抗體阻斷il-25與il-17rb的結(jié)合(*)–對(duì)于該測(cè)定而言，經(jīng)計(jì)算測(cè)定的理論下限為1.0nm，其中將溶液中二聚體hil-25mmh固定為2nm的濃度。將不影響恒量hil-25-mmh的信號(hào)或顯示出使結(jié)合信號(hào)降低25％或以下的抗體定義為非阻斷劑。理論測(cè)定下限為0.5nm，這表示更低的ic50計(jì)算值可能不能代表定量的蛋白-抗體位點(diǎn)結(jié)合。出于這個(gè)原因，在表12中將ic50計(jì)算值低于0.5nm的抗體報(bào)告為5.0e-10m。如表12中所示，在所測(cè)試的17個(gè)抗-il-25抗體中有16個(gè)以范圍從小于0.5nm至31nm的ic50值和范圍從70％至98％的最大阻斷百分率阻斷2nmhil-25-mmh與hil-17rb-hfc的結(jié)合。比較1以小于0.5nm的ic50值阻斷90％的2nmhil-25-mmh與hil-17rb-hfc的結(jié)合。將一個(gè)抗體h1m11009n鑒定為在這些測(cè)定條件下的非阻斷劑。實(shí)施例6：抗-il-25抗體在經(jīng)工程改造以表達(dá)il-17ra和il-17rb的細(xì)胞系中阻斷il-25介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)開發(fā)一項(xiàng)生物檢測(cè)以在體外檢測(cè)il-25介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和測(cè)量本發(fā)明的抗-il-25抗體阻斷il-25信號(hào)傳導(dǎo)的程度。針對(duì)這項(xiàng)檢測(cè)，建立穩(wěn)定表達(dá)人il-17ra(登記號(hào)np_055154.3的氨基酸1至886)、il-17rb(登記號(hào)np_061195.2的氨基酸1至502)和act1(登記號(hào)np_001157753.1的氨基酸1至564)以及熒光素酶報(bào)告蛋白[nfκb應(yīng)答元件(5x)-熒光素酶-ires-gfp]的hek293細(xì)胞系。將所得到的穩(wěn)定細(xì)胞系(稱為hek293/nfκb-luc/hil17ra/hil17rb/hact1)分離并維持在含有10％fbs、neaa、青霉素/鏈霉素、500μg/mlg418、100μg/ml潮霉素b和1μg/ml嘌呤霉素的10％dmem中。以10,000個(gè)細(xì)胞/孔的密度將細(xì)胞接種于96孔測(cè)定板中，各孔中含有補(bǔ)充了0.1％fbs的optimem，然后在37℃5％co2條件下孵育過夜。次日，為了確定il-25的劑量效應(yīng)，將表達(dá)c-末端myc-myc六組氨酸標(biāo)簽的人il-25(hil-25-mmh；seqidno:273)、表達(dá)c-末端myc-myc六組氨酸標(biāo)簽的食蟹猴il-25(mfil-25-mmh；seqidno:274)或表達(dá)c-末端myc-myc六組氨酸標(biāo)簽的小鼠il-25(mil-25-mmh；seqidno:275)以1:3的比例系列稀釋(從3nm至0.0001nm)并加入細(xì)胞。將含有稀釋緩沖液但不含il-25的對(duì)照也加入一個(gè)細(xì)胞樣品中。為了測(cè)量抑制情況，將抗體系列稀釋并加入細(xì)胞，隨后加入恒定濃度的il-25(對(duì)于兩個(gè)hil-25-mmh均為5pm、對(duì)于mfil-25-mmh為12pm和對(duì)于mil-25-mmh為10pm)。在加入細(xì)胞前，抗體的系列稀釋比例為1:3，其從100nm起始至降至0.002nm的范圍，外加一個(gè)僅含緩沖液不含抗體的對(duì)照樣品。在37℃5％co2條件下中孵育5.5小時(shí)后，加入試劑(promega，#e6051)，使用victorx(perkinelmer)酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光素酶活性。使用prism5軟件(graphpad)通過非線性回歸(4-參數(shù)logistics分析)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析以獲得ec50和ic50值。結(jié)果如表13中所示。表13：il-25介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制nb＝非阻斷劑如在表13中所示的，hil-25-mmh在兩個(gè)獨(dú)立的檢測(cè)日中以2.9pm和16pm的ec50值活化；mfil-25-mmh以19pm的ec50值活化；以及mil-25-mmh以8.4pm的ec50值活化。對(duì)于阻斷而言，本發(fā)明的17個(gè)抗體中有15個(gè)以范圍從27pm至1.8nm的ic50值完全阻斷5pmhil-25-mmh對(duì)hek293/nfκb-luc/hil17ra/hil17rb/hact1細(xì)胞的刺激，而比較1在兩個(gè)獨(dú)立的測(cè)定日中以720pm和220pm的ic50值完全阻斷。所測(cè)試的兩個(gè)抗體h2am10690n和h1m11009n在高抗體濃度下部分抑制5pmhil-25-mmh。所測(cè)試的全部14個(gè)本發(fā)明的抗體以范圍從22pm至400pm的ic50值完全阻斷12pmmfil-25-mmh對(duì)hek293/nfκb-luc/hil17ra/hil17rb/hact1細(xì)胞的刺激，而比較1以380pm的ic50值完全阻斷。所測(cè)試的6個(gè)本發(fā)明的抗體中有5個(gè)以范圍從670pm至15nm的ic50值完全阻斷10pmmil-25-mmh對(duì)hek293/nfκb-luc/hil17ra/hil17rb/hact1細(xì)胞的刺激，而比較1以610pm的ic50值完全阻斷。還對(duì)同種型對(duì)照抗體進(jìn)行了測(cè)試并且其在任何檢測(cè)中均未顯示出抑制。實(shí)施例7：抗-il-25抗體在基于原代細(xì)胞的檢測(cè)中阻斷il-25介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)使用采用外周血單核細(xì)胞(pbmc)的基于原代細(xì)胞的檢測(cè)(參見rickel等，thejournalofimmunology,2008,vol.181(6)pp.4299-4310)對(duì)本發(fā)明抗-il-25抗體的阻斷能力進(jìn)行進(jìn)一步評(píng)估。利用密度梯度離心從來自兩名不同供體的新鮮全血中純化pbmc。簡(jiǎn)言之，將k2edta全血在rpmi1640中稀釋兩倍，在ficoll-paque(gehealthcare，#17-1440-03)上小心分層并離心20分鐘。吸取含有pbmc界面層，轉(zhuǎn)移至新試管中并使用pbs洗滌兩次。以2x106個(gè)細(xì)胞/ml的終濃度在補(bǔ)充了10％fbs、2mml-谷氨酰胺、100u/ml青霉素和100ng/ml重組胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(tslp；r&dsystems，#1398-ts/cf)的rpmi1640中將分離的pbmc接種于75cm2培養(yǎng)瓶中。24小時(shí)后，收集細(xì)胞，在rpmi1640中洗滌，并以3x105個(gè)細(xì)胞/ml的終濃度在補(bǔ)充了10％fbs、2mml-谷氨酰胺、100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的rpmi1640中接種于圓底96孔板中。然后將細(xì)胞與50ng/mltslp、10ng/ml人il-2(il-2；r&dsystems，#202-il/cf)、1nm表達(dá)c-末端myc-myc六組氨酸標(biāo)簽的人il-25(hil-25-mmh；seqid:273)以及從200nm至48.8pm的抗體的系列稀釋物一起孵育，每孔的終體積為200μl。各樣品一式三份進(jìn)行測(cè)試。當(dāng)存在抗體時(shí)，將其加入使用il-25預(yù)孵育30分鐘后的細(xì)胞。然后在37℃下在含5％co2的濕潤培養(yǎng)箱中孵育細(xì)胞72小時(shí)。隨后使用市售elisa(r&dsystems，#dy205)檢測(cè)培養(yǎng)物上清液中的il-5水平。對(duì)于elisa而言，根據(jù)生產(chǎn)廠商的說明書使用捕獲抗體包被96孔平底板。洗滌和封閉后，將100μl未經(jīng)稀釋的培養(yǎng)物上清液加入板中并孵育2小時(shí)。隨后按照生產(chǎn)廠商的說明書洗滌和檢測(cè)。結(jié)果匯總于表14和15中。表14：hil-25-mmh誘導(dǎo)人pbmc釋放il-5表15：抗-il-25抗體阻斷hil-25-mmh誘導(dǎo)的人pbmc中il-5的釋放如表14中所示，1nm人il-25-mmh，在存在tslp和il-2時(shí)，誘導(dǎo)由供體#727058-059中獲得的人總pbmc釋放0.071ng/mlil-5和誘導(dǎo)由供體#727060中獲得的人總pbmc釋放0.599ng/mlil-5。如表15中所示，所檢測(cè)的全部4個(gè)本發(fā)明的抗-il-25抗體阻斷由1nmhil-25-mmh誘導(dǎo)的il-5從人pbmc中的釋放，對(duì)于供體#727058-059其ic50值范圍從39.2pm至1.149nm，以及對(duì)于供體#727060其ic50值范圍從129.6pm至677.1pm。比較1對(duì)于供體#727058-059以5.685nm的ic50值阻斷il-5的釋放，對(duì)于供體#727060以15.9nm的ic50值阻斷il-5的釋放。本實(shí)施例證實(shí)了本發(fā)明的抗-il-25抗體能夠以比抗-il-25的比較抗體更高的程度高效阻斷il-25在細(xì)胞中的信號(hào)傳導(dǎo)。實(shí)施例8：il-25流體力學(xué)遞送dna(hdd)誘導(dǎo)的肺嗜酸性粒細(xì)胞增多、杯狀細(xì)胞化生和提高血清ige以研究候選mab的體內(nèi)效能通過流體力學(xué)遞送dna(hdd)在野生型(wt)小鼠中過表達(dá)人il-25。對(duì)于hdd實(shí)驗(yàn)而言，注射給予wt小鼠25μg表達(dá)全長(zhǎng)人il-25(參見nm_022789.3；hil-25以及亦參見seqidno:277(dna)和seqidno:278(蛋白))的質(zhì)?；?5μg無編碼序列的相同質(zhì)粒(空載體)。在hdd注射前三天、hdd注射當(dāng)天以及然后在hdd注射后第2天和第4天，皮下注射給予注射hil-25質(zhì)粒的小鼠亞組il-25抗體或相同劑量的同種型對(duì)照抗體。在hdd注射后7天處死小鼠，并收集血液和肺。通過elisa對(duì)血清ige水平定量；通過使用膠原酶處理后分離肺浸潤細(xì)胞和流式細(xì)胞術(shù)對(duì)肺嗜酸性粒細(xì)胞增多進(jìn)行評(píng)估；以及通過對(duì)肺切片進(jìn)行高碘酸希夫氏染色(pas)定量評(píng)估杯狀細(xì)胞化生。各組小鼠的實(shí)驗(yàn)劑量和給藥方案如表16a和16b中所示。表16a：研究1表16b：研究2循環(huán)ige水平的測(cè)量經(jīng)由使用27g1/21mltb注射器(bd,#309306)的末端心臟穿刺從各只小鼠收集血液樣品并將收集得到的血液置于bd血清分離管(bd,#365956)中。離心后，收集血清并隨后轉(zhuǎn)移至新管中。為確定血清樣品中的總ige濃度，根據(jù)生產(chǎn)廠商的說明書使用夾心elisaopteia試劑盒(bd,#555248)以及b組bdopteia試劑(bd,#550534)。簡(jiǎn)言之，在試劑稀釋劑中稀釋血清樣品并置于使用抗-ige捕獲抗體包被的96孔板中。使用生產(chǎn)廠商提供的經(jīng)純化的小鼠ige作為對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品。洗滌后，使用生物素化的抗-小鼠ige抗體檢測(cè)與板結(jié)合的總ige，隨后加入抗生物素蛋白鏈菌素-辣根過氧化物酶綴合物。之后加入顯色物質(zhì)3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺以產(chǎn)生比色反應(yīng)，然后使用1m硫酸中和，隨后在moleculardevicesspectramaxm5酶標(biāo)儀上于450nm處檢測(cè)吸光度。使用prismtm軟件(graphpad)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。各實(shí)驗(yàn)組循環(huán)ige的平均量以ng/ml±標(biāo)準(zhǔn)偏差(sd)表示，如表18和19中所示。收集用于肺細(xì)胞浸潤分析的肺放血處死后，從各只小鼠中取出右肺尾葉，切成尺寸約2至3mm的小塊，并將其置于在hank平衡鹽溶液(hbss)(gibco,#14025)中稀釋的含20μg/mldnase(roche,#10104159001)和0.7u/mlliberaseth(roche,#05401151001)的溶液中，將其在37℃水浴中孵育20分鐘并且每5分鐘渦旋一次。通過加入終濃度10mm的乙二胺四乙酸(gibco,#15575)終止反應(yīng)。隨后使用溫和macs(miltenyibiotec,#130-095-937)解離每個(gè)肺并且之后過濾通過70μm濾器并離心。將所得到的肺球團(tuán)在1ml1x紅細(xì)胞裂解緩沖液(sigma,#r7757)中重懸以除去紅細(xì)胞。在室溫下孵育3分鐘后，加入3ml1xdmem使紅細(xì)胞裂解緩沖液失活。然后將細(xì)胞混懸液離心，并且將所得到的細(xì)胞球團(tuán)在5mlmacs緩沖液(自動(dòng)macs運(yùn)行緩沖液；miltenyibiotec,#130-091-221)中重懸。將重懸的樣品過濾通過70μm濾器并以1x106個(gè)細(xì)胞每孔的密度接種于96孔v-底板中。然后將細(xì)胞離心并使用1xpbs洗滌球團(tuán)。在第二次離心后，將細(xì)胞球團(tuán)重懸于使用1xpbs以1:1000的比例稀釋的100μl可固定水溶性死細(xì)胞染料(lifetechnologies,#l34957)中以確定細(xì)胞活力并且在室溫下避光孵育20分鐘。在1xpbs中洗滌1次后，在4℃下將細(xì)胞在含10μg/ml純化的大鼠抗-小鼠cd16/cd32fc封閉物(克隆：2.4g2；bdbiosciences,#553142)的macs緩沖溶液中孵育10分鐘。將細(xì)胞洗滌1次并且然后在經(jīng)macs緩沖液稀釋的適宜抗體混合物(表17中所述的)中于4℃下避光孵育30分鐘?？贵w孵育后，將細(xì)胞在macs緩沖液中洗滌2次，在bdcytofix(bdbiosciences,#554655)中重懸，并且然后在4℃下避光孵育15分鐘。隨后洗滌細(xì)胞，在macs緩沖液中重懸，并且然后轉(zhuǎn)移至bdfacs管(bdbiosciences,#352235)中，用于通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行分析。將嗜酸性粒細(xì)胞定義為活的cd45+、gr1-、cd11clo、siglecfhi。數(shù)據(jù)以在免疫細(xì)胞群中嗜酸性粒細(xì)胞的頻率表示(cd45+細(xì)胞％±sd)，如表20和21所示。表17：流式細(xì)胞術(shù)分析使用的抗體抗體熒光染料生產(chǎn)廠商目錄號(hào)最終稀釋cd11capcbdbiosciences5502611/100cd45percpcy5.5ebiosciences45-0454-821/800f4/80太平洋藍(lán)ebiosciences48-4801-821/200siglec-fpebdbiosciences5521261/100ly6g(gr-1)apc-efluor780ebiosciences47-5931-821/200收集用于杯狀細(xì)胞化生分析的肺放血處死后，從各只小鼠中取出左肺并將其置于含有5ml在1x磷酸鹽緩沖液中的4％(w/v)多聚甲醛(bostonbioproducts,#bm-155)溶液的管中并在室溫下放置至少24小時(shí)。然后將肺樣品吸干并轉(zhuǎn)移至含70％乙醇的管中。將樣品送至histoserv,inc(germantown,md)進(jìn)行石蠟包埋、切片和高碘酸希夫氏(pas)染色。使用zeissaxio成像a2顯微鏡(40x物鏡)獲取pas染色肺切片的照片。將pas染色陽性的細(xì)胞鑒定為杯狀細(xì)胞并在主支氣管上皮1至2mm的縱切面內(nèi)對(duì)其進(jìn)行計(jì)數(shù)。以相對(duì)于所分析的上皮切片中的細(xì)胞總數(shù)表示杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)。數(shù)據(jù)以杯狀細(xì)胞頻率±sd表示，如表22中所示。表18：來自研究1的小鼠總ige的循環(huán)水平表19：來自研究2的小鼠總ige的循環(huán)水平顯示了通過kruskal-wallis檢驗(yàn)結(jié)合dunn多重比較后檢驗(yàn)確定的與空載體組相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(**p<0.001)。表20：來自研究1的肺嗜酸性粒細(xì)胞頻率顯示了通過kruskal-wallis檢驗(yàn)結(jié)合dunn多重比較后檢驗(yàn)確定的與同種型對(duì)照相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(**p<0.001)。表21：來自研究2的肺嗜酸性粒細(xì)胞頻率顯示了通過kruskal-wallis檢驗(yàn)結(jié)合dunn多重比較后檢驗(yàn)確定的與hil-25相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(*p<0.01)。表22：來自研究2的杯狀細(xì)胞化生與通過hdd獲得空載體的野生型小鼠的循環(huán)ige水平(對(duì)于研究1為311±200ng/ml和對(duì)于研究2為1186±1370ng/ml)相比，通過hdd過表達(dá)人il-25的野生型小鼠顯示出升高的循環(huán)ige水平(對(duì)于研究1為3417±1627ng/ml和對(duì)于研究2為1186±1370ng/ml)。當(dāng)給予通過hdd過表達(dá)人il-25的小鼠il-25抗體時(shí)，在各研究中循環(huán)ige的水平均降低，如表18和19中所示。與通過hdd獲得空載體的野生型小鼠中的肺嗜酸性粒細(xì)胞頻率(對(duì)于研究1為1.47±0.16％和對(duì)于研究2為6.35±1.46％)相比，通過hdd過表達(dá)人il-25的野生型小鼠顯示出肺嗜酸性粒細(xì)胞頻率增加的趨勢(shì)(對(duì)于研究1為17.20±2.39％和對(duì)于研究2為32.29±18.35％)。當(dāng)給予通過hdd過表達(dá)人il-25的小鼠il-25抗體時(shí)，在各研究中肺嗜酸性粒細(xì)胞頻率降低，如表20和21中所示。與通過hdd獲得空載體的野生型小鼠中的杯狀細(xì)胞化生(對(duì)于研究2為1.15±1.67)相比，通過hdd過表達(dá)人il-25的野生型小鼠顯示出杯狀細(xì)胞化生增加的趨勢(shì)(對(duì)于研究2為59.63±39.74)。當(dāng)給予通過hdd過表達(dá)人il-25的小鼠il-25抗體時(shí)，杯狀細(xì)胞化生頻率降低，如表22中所示。實(shí)施例9：在wt和il-25ko小鼠中的慢性房屋塵螨過敏原(hdm)誘導(dǎo)的肺部炎癥為了確定il-25在相關(guān)體內(nèi)模型中的作用，在野生型小鼠(wt)和小鼠il-25缺失純合子小鼠(il-25ko小鼠)中進(jìn)行了慢性房屋塵螨過敏原(hdm)誘導(dǎo)的肺部炎癥研究。連續(xù)12周，每周5天向il-25ko小鼠和wt小鼠鼻內(nèi)施用在20μl1x磷酸鹽緩沖液(pbs)中稀釋的50μg房屋塵螨提取物(hdm；greer,#xpb70d3a2.5)或20μl1xpbs。在研究第13周的第1天處死所有小鼠并收集其肺臟。各組小鼠的實(shí)驗(yàn)劑量和給藥方案如表23中所示。表23：各組小鼠的實(shí)驗(yàn)劑量和給藥方案收集用于肺細(xì)胞浸潤分析的肺放血處死后，從各只小鼠中取出右肺尾葉，切成尺寸約2至3mm的小塊，并將其置于在hank平衡鹽溶液(hbss)(gibco,#14025)中稀釋的含20μg/mldnase(roche,#10104159001)和0.7u/mlliberaseth(roche,#05401151001)的溶液中，將其在37℃水浴中孵育20分鐘并且每5分鐘倒轉(zhuǎn)一次。通過加入終濃度10mm的乙二胺四乙酸(gibco,#15575)終止反應(yīng)。隨后使用溫和macs(miltenyibiotec,#130-095-937)解離每個(gè)肺并且之后過濾通過70μm濾器并離心。將所得到的肺球團(tuán)在1ml1x紅細(xì)胞裂解緩沖液(sigma,#r7757)中重懸以除去紅細(xì)胞。在室溫下孵育3分鐘后，加入3mlmacs緩沖液(自動(dòng)macs運(yùn)行緩沖液；miltenyibiotec,#130-091-221)使紅細(xì)胞裂解緩沖液失活。然后將細(xì)胞混懸液離心，并且將所得到的細(xì)胞球團(tuán)在5mlmacs緩沖液中重懸。將重懸的樣品過濾通過70μm濾器并以1x106個(gè)細(xì)胞每孔的密度接種于96孔v-底板中。然后將細(xì)胞離心并使用1xpbs洗滌球團(tuán)。在第二次離心后，將細(xì)胞球團(tuán)重懸于使用1xpbs以1:1000的比例稀釋的100μl可固定水溶性死細(xì)胞染料(lifetechnologies,#l34957)中以確定細(xì)胞活力并且在室溫下避光孵育20分鐘。在1xpbs中洗滌1次后，在4℃下將細(xì)胞在含10μg/ml純化的大鼠抗-小鼠cd16/cd32fc封閉物(克?。?.4g2；bdbiosciences,#553142)的macs緩沖溶液中孵育10分鐘。將細(xì)胞洗滌1次并且然后在經(jīng)macs緩沖液稀釋的適宜抗體混合物(表24中所述的)中于4℃下避光孵育30分鐘?？贵w孵育后，將細(xì)胞在macs緩沖液中洗滌2次，在bdcytofix(bdbiosciences,#554655)中重懸，并且然后在4℃下避光孵育15分鐘。隨后洗滌細(xì)胞，在macs緩沖液中重懸，并且然后轉(zhuǎn)移至bdfacs管(bdbiosciences,#352235)中，用于通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞進(jìn)行分析。將中性粒細(xì)胞定義為活的cd45+、f4/80-、ly6g+、ly6cint。中性粒細(xì)胞的數(shù)據(jù)以所分析的活細(xì)胞頻率表示(活細(xì)胞頻率，±sd)，如表25中所示。將cd4和cd8t細(xì)胞分別定義為活的ssclo、fsclo、cd45+、cd19-、cd3+、cd8-、cd4+和活的ssclo、fsclo、cd45+、cd19-、cd3+、cd8+、cd4-。cd4和cd8t細(xì)胞的數(shù)據(jù)以cd4t細(xì)胞頻率相對(duì)于cd8t細(xì)胞頻率表示(cd4/cd8比值，±sd)，如表25中所示。將活化的cd4t細(xì)胞定義為活的cd45+、ssclo、fsclo、cd3+、cd19-、cd4+、cd8-和cd69+細(xì)胞。將活化的cd8t細(xì)胞定義為活的cd45+、ssclo、fsclo、cd3+、cd19-、cd4+、cd8-和cd69+。活化細(xì)胞的數(shù)據(jù)以在母體群中活化細(xì)胞(cd69+)的頻率表示(cd4或cd8t細(xì)胞的頻率，±sd)，如表25中所示。表24：流式細(xì)胞術(shù)分析使用的抗體抗體熒光染料生產(chǎn)廠商目錄號(hào)最終稀釋cd11capcbdbiosciences5502611/100cd45percpcy5.5ebiosciences45-0454-821/800f4/80太平洋藍(lán)ebiosciences48-4801-821/200siglec-fpebdbiosciences5521261/100ly6g(gr-1)apc-efluor780ebiosciences47-5931-821/200cd3pe-cy7bdbiosciences5527741/200cd19efluor450ebiosciences48-0193-821/200cd4apc-h7bdbiosciences5601811/200cd8apcebiosciences17-0081-821/200cd69peebiosciences12-0691-821/200收集用于細(xì)胞因子分析的肺：放血處死后，從各只小鼠中取出右肺的顱葉和中葉并將其置于含有添加了1xhalt蛋白酶抑制劑混合物(pierce,#78430)的組織蛋白提取劑(1xt-per試劑；pierce,#78510)溶液的管中。所有隨后的步驟在冰上進(jìn)行。調(diào)整各樣品中t-per試劑(含有蛋白酶抑制劑混合物)的體積以符合組織與t-per的比例為1:7.5(w/v)。使用一次性研磨杵(argostechnologies，目錄號(hào)p9950-901)在管中對(duì)肺樣品手工勻漿。將所得到的裂解物離心為球團(tuán)碎片。將含有可溶性蛋白提取物的上清液轉(zhuǎn)移至新管中并在4℃下保存直至進(jìn)行進(jìn)一步分析。使用bradford測(cè)定測(cè)量肺蛋白提取物中的總蛋白含量。對(duì)于該測(cè)定而言，將10μl經(jīng)稀釋的提取物樣品置于96孔板中，設(shè)置為雙復(fù)孔，并且與200μl1x染料試劑(biorad,#500-0006)混合。使用在1xt-per試劑中初始為700μg/ml的牛血清白蛋白(sigma,#a7979)系列稀釋物作為標(biāo)準(zhǔn)品以確定提取物的提取蛋白濃度。在室溫下孵育5分鐘后，在moleculardevicesspectramaxm5酶標(biāo)儀上測(cè)定595nm處的吸光度。使用graphpadprismtm軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析以確定總蛋白含量。根據(jù)生產(chǎn)廠商的說明書，使用促炎性嵌板1(小鼠)多重免疫測(cè)定試劑盒(mesoscalediscovery,#k15048d)檢測(cè)肺蛋白提取物中的細(xì)胞因子濃度。簡(jiǎn)言之，以50μl/孔將校準(zhǔn)品和樣品(使用稀釋劑41稀釋)加入預(yù)先包被捕獲抗體的板中并且在室溫下孵育2小時(shí)，同時(shí)以700rpm振搖。然后使用含有0.05％(w/v)吐溫-20的1xpbs洗板3次，隨后加入25μl使用稀釋劑45稀釋的檢測(cè)抗體溶液。再在室溫下孵育2小時(shí)同時(shí)進(jìn)行振搖后，洗板3次，并將150μl2x讀數(shù)緩沖液加入各孔中。立即在msd儀上讀取電化學(xué)發(fā)光結(jié)果。使用graphpadprismtm軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。將所檢測(cè)的在肺總蛋白提取物中每種細(xì)胞因子的濃度均歸一化至通過bradford測(cè)定檢測(cè)的提取物的總蛋白含量，并且以pg細(xì)胞因子每mg總肺蛋白(pg/mg肺蛋白，±sd)表示，如表26中所示。表25：通過流式細(xì)胞術(shù)確定的肺細(xì)胞浸潤頻率顯示了通過雙因素anova檢驗(yàn)結(jié)合tukey多重比較后檢驗(yàn)確定的與wthdm組相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(**p<0.001；***p<0.0001)。表26：在肺蛋白提取物中的細(xì)胞因子濃度顯示了通過雙因素anova檢驗(yàn)結(jié)合tukey多重比較后檢驗(yàn)確定的與wthdm組相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(**p<0.001；***p<0.0001)。如表25中所示，與僅暴露于pbs的wt小鼠相比，在wt小鼠中長(zhǎng)期或慢性暴露于hdm誘導(dǎo)肺中性粒細(xì)胞的顯著增加。在wt小鼠中的慢性hdm攻擊還誘導(dǎo)在肺中cd4與cd8t細(xì)胞平衡的偏移，以及增加了活化的cd4和cd8t細(xì)胞的頻率。與wt小鼠相比，在il-25ko小鼠中由慢性hdm攻擊誘導(dǎo)的肺中性粒細(xì)胞和肺細(xì)胞炎癥的這些其他特征的增加均顯著降低。與僅暴露于pbs的wt小鼠相比，長(zhǎng)期暴露于hdm誘導(dǎo)的wt小鼠肺中促炎性細(xì)胞因子如il-1β和tnfα的水平顯著增加。而相反的是，如表26中所示，il-25ko小鼠長(zhǎng)期暴露于hdm未顯著增加肺中這兩種細(xì)胞因子的水平?？傊L(zhǎng)期暴露于hdm在wt小鼠中誘導(dǎo)肺炎癥特征，這在受到相同攻擊的il-25ko小鼠的肺中不存在。本發(fā)明并不旨在通過本申請(qǐng)所述的特定實(shí)施方式限制范圍。事實(shí)上，除了本申請(qǐng)所描述的那些外，對(duì)本發(fā)明的不同修訂將是本領(lǐng)域技術(shù)人員從前述說明書和附圖中顯而易見的。此類修訂旨在落入所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。序列表<110>瑞澤恩制藥公司<120>抗il-25抗體及其使用方法<130>a0034wo01<150>62/054,167<151>2014-09-23<160>278<170>用于windows4.0版的fastseq<210>1<211>363<212>dna<213>人工序列<220><223>合成的<400>1gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtagagcctggggggtcccttagactc60tcctgtgtagcctctggattcactttcagtaacgcctggatgaactgggtccgccaggct120ccagggaaggggctggagtgggttggccatattgaaaggaaaactgatggtgggacaaca180gacttcgctgcacccgtgaaaggcagattcaccatctc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