一種從腸衣中提取肝素鈉的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從腸衣中提取肝素鈉的方法：技術方案是，先將豬小腸的腸衣洗凈，用攪碎機絞碎，混合均勻，投入反應鍋中，采用鹽解加酶解，以及二次酶解法，控制溶液的鹽度，PH，溫度等重要條件，從酶解液中運用新型樹脂吸附法，運用正向反相吸附法，只吸附溶液中分子量適用段的肝素鈉，采用分步洗脫法，洗脫樹脂，得到不同分子量分步的肝素鈉。得到符合藥用安全的原料藥，增加了肝素鈉來源的途徑，創(chuàng)造了巨大的社會經濟效益。
【專利說明】一種從腸衣中提取肝素鈉的方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術領域】，具體的說涉及從豬腸衣中在加工提取肝素鈉的新工
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【背景技術】
[0002]肝素鈉是一種抗凝血類原料藥，是一種高度硫酸化的黏多糖硫酸酯鈉鹽，最早是由Mclean等人在狗的肝臟組織里分離出的一種天然產物，經過活性研宄發(fā)現，此天然產物具有凝血作用。后來肝素具有的最優(yōu)的作用抗凝血性被科學家Brinkhous等人進一步確認和證實了。隨著科學技術的進步和發(fā)展，越來越多的科學家對肝素鈉表現出了極大的興趣，也推動肝素鈉的研宄，Charles等人最早作為抗凝血劑應用到臨床上的研宄，在此之后肝素鈉作為商業(yè)產品大量應用，肝素鈉在抗凝血方面表現出的優(yōu)越性在全世界產生了廣泛的影響，受到了各個國家的廣泛重視。


【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明提供一種從腸衣中提取肝素鈉的新工藝，豐富了肝素鈉的制備來源，創(chuàng)造了巨大的社會經濟效益。
[0004]本發(fā)明是通過以下技術方案實現的:
一、新樹脂的處理方法
(I )、將樹脂置于較大的容器內，用清水且最好用純水漂洗干凈，抽干，用80~90%工業(yè)酒精(或無水乙醇)浸泡24小時左右，洗去樹脂中的有機雜質，抽干。(酒精可回收)
(2)、用40-50°C熱水反復清洗至無酒精味，抽干。
[0005](3 )、用2倍于樹脂量的4%HC1溶液浸泡2~3小時，并不斷地翻動，用純水洗至近中性。
[0006](4)、用2倍于樹脂量的4%(lmol/L)NaOH溶液浸泡2小時，用純水洗至近中性，抽干。
[0007](5)、最后再用2倍于樹脂量的4%HC1溶液浸泡3~4小時，并不斷攪拌，用純水洗至近中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小時，用水洗凈鹽水，抽干，備用。
[0008]二、腸衣提取肝素鈉
(I)將腸衣投入反應鍋中，按腸衣重的5%加入胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液調pH為8~9之間，同時攪拌升溫達40°C時左右，維持2.5h后，升溫達60°C時，按腸衣重的2%加入NaCl固體，然后升溫到90°C，調pH為6~7之間，保持1min后直接加熱到沸騰，然后趁熱用200目尼龍篩子過濾。
[0009]三、吸附
待濾液冷卻至60°C左右時，用3mol/L的NaOH溶液調pH8?9之間，然后加入已處理好的樹脂，加量為濾液量的5%，攪拌吸附6h后，靜置lh，用200目尼龍篩子過濾。整個吸附過程的pH保持8?9。
[0010]四、脫附
在樹脂中加入等體積自來水漂洗數次，再用3mol/LNaCl溶液攪拌洗脫樹脂2h，NaCl溶液的用量與樹脂量相等；脫附后以200目尼龍篩子過濾，收集濾液。重復脫附兩次，合并幾次濾液。
[0011]五、沉淀
在濾液中加入等體積乙醇，攪拌lOmin，然后靜置12h以上。
[0012]六、脫水干燥
收集下層沉淀物，乙醇脫水3次。將沉淀置于60°C烘箱中烘干得肝素鈉粗品。

【具體實施方式】
[0013]下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0014]實施例1:
一、新樹脂的處理方法
(I )、將20KG樹脂置于較大的容器內，用清水且最好用純水漂洗干凈，抽干，用90%工業(yè)酒精(或無水乙醇)浸泡24小時，洗去樹脂中的有機雜質，抽干。(酒精可回收)
(2)、用50°C熱水反復清洗至無酒精味，抽干。
[0015](3 )、用40L的4%HC1溶液浸泡3小時，并不斷地翻動，用純水洗至中性。
[0016](4)、用40L的4%(lmol/L)NaOH溶液浸泡2小時，用純水洗至中性，抽干。
[0017](5)、最后再用40L的4%HC1溶液浸泡4小時，并不斷攪拌，用純水洗至中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小時，用水洗凈鹽水，抽干，備用。
[0018]二、腸衣提取肝素鈉
(I)將50KG腸衣投入反應鍋中，加水50KG，加2.5KG胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液調pH為9，同時攪拌升溫達40°C時，維持2.5h后，升溫達60°C時，加入NaCl固體1KG，然后升溫到90°C，調pH為7之間，保持1min后直接加熱到沸騰，然后趁熱用200目尼龍篩子過濾。
[0019]三、吸附
待濾液冷卻至60°C時，用3mol/L的NaOH溶液調pH9之間，然后加入已處理好的樹脂25KG，攪拌吸附6h后，靜置lh，用200目尼龍篩子過濾。整個吸附過程的pH保持9。
[0020]四、脫附
在樹脂中加入50L自來水漂洗數次，再用3mol/LNaCl溶液攪拌洗脫樹脂2h，NaCl溶液的用量為25L;脫附后以200目尼龍篩子過濾，收集濾液。重復脫附兩次，合并幾次濾液。
[0021]五、沉淀
在濾液中加入50L乙醇，攪拌lOmin，然后靜置12h以上。
[0022]六、脫水干燥
收集下層沉淀物，乙醇脫水3次。將沉淀置于60°C烘箱中烘干得肝素鈉粗品。
[0023]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施案例而已，并非是對本發(fā)明作其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術人員可能利用上述解釋的技術內容加以變更或改型為同等變化的等效實施例，但凡是未脫離本發(fā)明技術方案內容，依據本發(fā)明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改，等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術方案的保護范圍。
【權利要求】
1.一種從腸衣中提取肝素鈉的方法，其特征在于，采用鹽解加酶解，以及二次酶解法酶解絞碎后的腸衣，用新型樹脂采用正向反相兩種吸附方法，吸附肝素鈉，結合分級洗脫樹脂法，得到不同分子量片段的肝素鈉。
2.根據權利要求1所述的一種從腸衣中提取肝素鈉的方法，其特征包括如下步驟: 一、新樹脂的處理方法 (I )、將樹脂置于較大的容器內，用清水且最好用純水漂洗干凈，抽干，用80~90%工業(yè)酒精(或無水乙醇)浸泡24小時左右，洗去樹脂中的有機雜質，抽干；(酒精可回收) (2)、用40-50°C熱水反復清洗至無酒精味，抽干； (3)、用2倍于樹脂量的4%HC1溶液浸泡2~3小時，并不斷地翻動，用純水洗至近中性； (4)、用2倍于樹脂量的4%(ImoVL)NaOH溶液浸泡2小時，用純水洗至近中性，抽干； (5)、最后再用2倍于樹脂量的4%HC1溶液浸泡3~4小時，并不斷攪拌，用純水洗至近中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小時，用水洗凈鹽水，抽干，備用； 二、腸衣提取肝素鈉 (I)將腸衣投入反應鍋中，按腸衣重的5%加入胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液調pH為8~9之間，同時攪拌升溫達40°C時左右，維持2.5h后，升溫達60°C時，按腸衣重的2%加ANaCl固體，然后升溫到90°C，調pH為6~7之間，保持1min后直接加熱到沸騰，然后趁熱用200目尼龍篩子過濾； 三、吸附 待濾液冷卻至60°C左右時，用3mol/L的NaOH溶液調pH8?9之間，然后加入已處理好的樹脂，加量為濾液量的5%，攪拌吸附6h后，靜置lh，用200目尼龍篩子過濾； 整個吸附過程的PH保持8?9 ; 四、脫附 在樹脂中加入等體積自來水漂洗數次，再用3mol/LNaCl溶液攪拌洗脫樹脂2h，NaCl溶液的用量與樹脂量相等；脫附后以200目尼龍篩子過濾，收集濾液； 重復脫附兩次，合并幾次濾液； 五、沉淀 在濾液中加入等體積乙醇，攪拌lOmin，然后靜置12h以上； 六、脫水干燥 收集下層沉淀物，乙醇脫水3次； 將沉淀置于60°C烘箱中烘干得肝素鈉粗品。
【文檔編號】C08B37/10GK104448049SQ201410813606
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月24日 優(yōu)先權日:2014年12月24日
【發(fā)明者】劉乃山, 劉汝榮, 遲培升 申請人:青島九龍生物醫(yī)藥有限公司