精品硫酸軟骨素a和c和制備精品硫酸軟骨素a和c的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種精品硫酸軟骨素A和C和制備精品硫酸軟骨素A和C的方法。其中制備精品硫酸軟骨素A和C的方法包括：向含硫酸軟骨素A和C成分的硫酸軟骨素混合物的溶液中加入硫酸軟骨素酶B，使其與含硫酸軟骨素A和C的硫酸軟骨素混合物中的硫酸皮膚素成分反應。
【專利說明】精品硫酸軟骨素 A和C和制備精品硫酸軟骨素 A和C的方 法 發(fā)明領域
[0001] 本文涉及精品硫酸軟骨素 A和C，以及制備精品硫酸軟骨素 A和C的方法。

【背景技術】
[0002] 硫酸軟骨素 （chondroitin sulfate，以下簡稱為"CS"）廣泛存在于各種動物組 織中，尤其在軟骨和結締組織中含量豐富。由于不同生物或者相同生物的不同組織所含CS 的種類和量均不同，CS通常是一種混合物，主要由硫酸軟骨素 A(chondroitin sulfate A， 以下簡稱為"CS-A"）、硫酸軟骨素 C (chondroitin sulfate C，以下簡稱為"CS-C"）、軟骨 素（chondroitin)和硫酸皮膚素 （chondroitin sulfate B，dermatan sulfate，以下簡稱 為"DS"）構成，上述這些均為二糖單元構成的線性高分子，平均分子量均為25000道爾頓左 右，其各自的二糖結構單元如圖1所示。
[0003] 如上所述，硫酸軟骨素（CS)是多種多糖組成的混合物，因此其結構與活性是 復雜多樣的。作為一類重要的生物大分子，CS具有廣泛的生物活性，作為安全有效的保 健食品和藥品在世界各國得到了廣泛應用。大量研究表明，CS具有降血脂、抗動脈粥樣 硬化和抗病毒性肝炎等活性，臨床中已用于防治關節(jié)炎、腎炎、神經(jīng)痛和偏頭痛等（參 見：張?zhí)烀瘢枧鎸W，糖胺聚糖研究新進展[J].食品與藥品，2008, 10(9) : 1-5 ;Volpi N.Quality of different chondroitin sulfate preparations in relation to their therapeutic activity[J]. J Pharm Pharmacol, 2009, 61:1271-1280 ；Uebelhart D,Knols R，de Bruin E D 等人，Treatment of knee osteoarthritis with oral chondroitin sulfate[J].Adv Pharmacol，2006,53:475 _ 488;Kahan A，Uebelhart D，De Vathaire F等 人，Long-term effects of chondroitins4and6sulfate on knee osteoarthritis:the study on osteoarthritis progression prevention,a two-year, randomized,double -blind，placebo-controlled trial[J]· Arthritis Rheum，2009,60:524-533(正確）； Christina Malavaki，Shuji Mizumoto 等人，Recent Advances in the Structural Study of Functional Chondroitin Sulfate and Dermatan Sulfate in Health and Disease. Connective Tissue Research, 49:133 - 139, 2008) 〇
[0004]

【權利要求】
1. 一種精制的精品硫酸軟骨素 A和C，其中，硫酸皮膚素成分在所述精品硫酸軟骨素 A 和C的總量中所占的比例為5質量％以下、優(yōu)選為3質量％以下、進一步優(yōu)選為1質量％以 下、優(yōu)選為〇. 8質量％以下、優(yōu)選為0. 5質量％以下、優(yōu)選為0. 3質量％以下、優(yōu)選為0. 1質 量％以下、優(yōu)選為〇. 05質量％以下。
2. 根據(jù)權利要求1所述的精品硫酸軟骨素 A和C，其中，硫酸軟骨素 A和C成分在所述 精品硫酸軟骨素 A和C的總量中所占的比例為90質量％以上、優(yōu)選為93質量％以上、優(yōu)選 為95質量％以上、優(yōu)選為97質量％以上、優(yōu)選為98質量％以上、優(yōu)選為99質量％以上、進 一步優(yōu)選為99. 5質量％以上、優(yōu)選為99. 7質量％以上、優(yōu)選為99. 9質量％以上。
3. -種制備精品硫酸軟骨素 A和C的方法，其包括： 向含硫酸軟骨素 A和C成分的硫酸軟骨素混合物的溶液中加入硫酸軟骨素酶B，使其與 含硫酸軟骨素 A和C的硫酸軟骨素混合物中的硫酸皮膚素成分反應。
4. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其還包括： 通過分離方法分離除去混合物中的經(jīng)酶分解后得到的低分子量的硫酸皮膚素。
5. 根據(jù)權利要求4所述的方法，其中所述低分子量的硫酸皮膚素為分子量在2000道爾 頓以下的經(jīng)降解的硫酸皮膚素。
6. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其中，所述硫酸軟骨素酶B是與MBP融合的硫酸軟骨素 酶 B，即 MBP-ChonB(SEQ ID NO:1)。
7. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其中包括進一步除去硫酸軟骨素酶B，其中，通過將加 入了硫酸軟骨素酶B的溶液加熱至70°C以上，優(yōu)選加熱至80°C以上以停止硫酸軟骨素酶B 與所述硫酸皮膚素成分的反應，然后通過離心分離從所述溶液中除去加熱后的硫酸軟骨素 酶B。
8. 根據(jù)權利要求4所述的方法，其中，所述分離方法為醇沉淀分離。
9. 根據(jù)權利要求4所述的方法，其中，所述分離方法為超濾膜分離。
10. 根據(jù)權利要求8所述的方法，其中，所述醇沉淀分離是一級乙醇沉淀分離。
11. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其中，硫酸軟骨素酶B與硫酸皮膚素的反應在20? 40°C的條件下，優(yōu)選在25?35°C的條件下進行，以及在pH為6. 5-9的條件下，優(yōu)選pH為 7?8. 5的條件下進行。
12. 根據(jù)權利要求3所述的方法，所述硫酸軟骨素酶B和所述硫酸軟骨素混合物的比例 為：100IU?10000IU硫酸軟骨素酶B/kg硫酸軟骨素混合物，優(yōu)選為500IU?5000IU硫酸 軟骨素酶B/kg硫酸軟骨素混合物，更優(yōu)選為1000IU-5000IU硫酸軟骨素酶B/kg硫酸軟骨 素混合物。
13. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其中，所述含硫酸軟骨素 A和C的硫酸軟骨素混合物 來自豬、牛、羊、驢、雞等的軟骨；來自鱘魚、鯊魚、魷魚、魟、鰩、鰻、鱔魚等的軟骨；以及來自 貝類、海參、蚯蚓、鹿茸和蛋殼膜的基本含硫酸軟骨素 A和C的混合物，優(yōu)選所述硫酸軟骨素 混合物來自豬、牛、羊等的軟骨。
14. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其中，所述硫酸軟骨素混合物溶液的濃度為lg/L? 500g/L，優(yōu)選為 lg/L ?100g/L。
【文檔編號】C08B37/08GK104140472SQ201410190564
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2014年5月7日 優(yōu)先權日:2013年5月8日
【發(fā)明者】邢新會, 吳敬君, 張翀 申請人:清華大學