一種滑菇多糖粗品的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種滑菇多糖粗品的制備方法，涉及抗腫瘤藥物領域，其具體工藝過程如下：粉碎、篩分→微波處理→浸提→酶解→膜過濾→提取→脫色→干燥八個步驟完成；本發(fā)明的優(yōu)點在于：1、純度高，純度為70~75%高純度的可溶性滑菇多糖。2、生產(chǎn)工藝簡單，避免了傳統(tǒng)真菌多糖提取工藝中大量使用有機溶劑、工藝過程復雜的缺點，簡化了生產(chǎn)工藝。3、產(chǎn)率高，本發(fā)明制備滑菇多糖的產(chǎn)率高，一般為2~3%，均高于其他食用菌制備真菌多糖的產(chǎn)率。
【專利說明】一種滑菇多糖粗品的制備方法
[0001]一、【技術領域】
本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物領域，尤其涉及一種滑菇多糖粗品的制備方法。
[0002]二、【背景技術】
由于腫瘤細胞與人體某些正常細胞有高度的相似性，能直接殺傷癌細胞的化療藥大多也能殺傷那些正常細胞，這正是大多數(shù)化療藥產(chǎn)生毒副作用的原因所在。由于腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與機體免疫能力密切相關，因此，有專家提出“腫瘤免疫法”的概念:在正常人體內(nèi)存在著多種免疫因子，它們可對癌細胞實施有效攻擊，例如香菇多糖、云芝多糖、滑菇多糖具有廣泛免疫調(diào)劑和抗腫瘤活性，現(xiàn)已批準成為臨床常用的抗癌藥物。這種通過提高自身免疫力的療法不失為治療腫瘤的有效途徑之一，腫瘤免疫療法確有其獨具的潛力和實用價值。
[0003]滑燕(Pholiota nameko),又名珍珠燕、滑子蘑,擔子菌綱,傘菌目，蓋球燕科,磷傘屬。臺灣稱為珍珠菇，日本稱為納美菇。滑菇屬低溫結實型菇類，菌絲體生長的溫度范圍為4~32°C，子實體生長的溫度范圍為5~20°C，能耐酸性，適合其生長的pH范圍一般為
4.0~8.0 ;菇傘直徑3~8cm，菇柄長2~5cm，菇傘呈茶褐色或橙褐色，也有的呈黃色或銹橙色。由于子實體表面附有粘液，手摸粘滑，故以滑菇得名。它是一種木材腐生菌，營養(yǎng)豐富。含氨基酸15.78%、粗脂肪4%，并含有多種礦物質(zhì)元素?；庸焦襟w小、長勢叢集、表面有半透明黏膠質(zhì) 、生長旺盛、耐寒性強、味道鮮美、營養(yǎng)豐富，是湯料的美好添加品?；庸皆a(chǎn)于日本，上世紀80年代在東北引種成功。近年來研究表明，滑菇能提高機體免疫功能、增進智力、改善視力、提高耐力；尤其是滑菇中多糖物質(zhì)，對腫瘤具有抑制作用，并可預防葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎桿菌、結核桿菌的感染。松本保久研究發(fā)現(xiàn)，熱水提取的滑菇多糖(PNP)對小白鼠肉瘤180的抑制率達86.5%，此外，滑菇子實體的熱水提取物對小鼠S-180的抑制率為60%，氫氧化鈉溶液提取物對小白鼠肉瘤180的抑制率達90%，對艾氏腹水癌的抑制率達70%。
[0004]三、
【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的目的在于提供一種滑菇多糖粗品的制備方法；其具體工藝過程如下:一種滑菇多糖粗品的制備方法，是由以下步驟完成:
步驟一:粉碎、篩分，將滑菇子實體在粉碎機里粉碎，粉碎的粉末過用10~20目篩網(wǎng)篩分，篩下物加入到容器中，并加入篩下物重量的8~15倍的水；
步驟二:微波處理，微波波長為2450MHz，功率為800w，處理時間為3~5分鐘；步驟三:浸提，將步驟二微波處理過的溶液加熱至90~100°C，時間2~4小時，間歇攪拌，并加水保持容器內(nèi)液面高度不變，煎煮液用60~80目濾布過濾，得提取液，濾渣繼續(xù)加入8~15倍重量的水，重復步驟二、步驟三，除去殘渣，合并兩次提取的上清液；
步驟四:酶解，將步驟三得到的上清液加熱至40~60°C，保溫，加入上清液重量的
0.25%~0.5%的中性蛋白酶，PH值為6.0~8.0,間歇攪拌，酶解2~4小時后將酶解液升溫至90~100°C，保溫25~35分鐘，保溫結束后，用60~100目濾布過濾酶解液；
步驟五:膜過濾，將步驟四得到的過濾酶解液用截留分子量為5000~10000D的超濾膜過濾，收集截流液，將截留液濃縮至滑菇子實體粉I~2倍的重量；
步驟六:提取，再向步驟五得到的濃縮液中加入3~4倍重量的濃度為95%的乙醇，邊加邊攪拌，室溫放置24~28小時，2000~3500rpm離心機分離8~12分鐘，收集沉淀物，將沉淀物再溶于滑菇子實體粉I~2倍的重量水中，重復上述步驟2次；
步驟七:脫色，將步驟六得到的沉淀物溶于滑菇子實體I~2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.02~0.1倍重量濃度為10~11%的雙氧水，于40~60°C攪拌2~3小時，至溶液變白；
步驟八:干燥，將步驟七得到的白色水溶液加熱升溫至90~100°C，保溫15分鐘，55°C~105°C噴霧干燥，使水份除到5~8%，得到滑菇多糖粗品產(chǎn)物；
本發(fā)明具有如下有益效果:1、純度高，本發(fā)明以新鮮滑菇子實體為原料，采用微波輔助熱水浸提、蛋白酶水解、超濾膜過濾、乙醇沉淀的方式，使滑菇中的膠體、鞣質(zhì)和蛋白質(zhì)被去除，再采用雙氧水進行脫色，使滑菇多糖色澤鮮白，最后經(jīng)干燥得到品質(zhì)好、純度為70-75%高純度的可溶性滑菇多糖。2、生產(chǎn)工藝簡單，本發(fā)明利用現(xiàn)代生物技術，采用蛋白酶水解、超濾膜過濾的方式，大量的去除蛋白、色素等雜質(zhì)，避免了傳統(tǒng)真菌多糖提取工藝中大量使用有機溶劑、工藝過程復雜的缺點，簡化了生產(chǎn)工藝。3、產(chǎn)率高，本發(fā)明制備滑菇多糖的產(chǎn)率高，一般為2~3%。
[0005]四、【具體實施方式】
實施例1:一種滑菇多糖粗品的制備方法，其是由以下步驟完成:
步驟一:粉碎、篩分，將滑菇子實體在粉碎機里粉碎，粉碎的粉末過用10目篩網(wǎng)篩分，將20kg篩下物加入到容器中，并加入篩下物重量的8倍的水；
步驟二:微波處理，微波波 長為2450MHz，功率為800w，處理時間為3分鐘；
步驟三:浸提，將步驟二微波處理過的溶液加熱至90°C，時間2小時，間歇攪拌，并加水保持容器內(nèi)液面高度不變，煎煮液用60目濾布過濾，得提取液，濾渣繼續(xù)加入8倍重量的水，重復步驟二、步驟三，除去殘渣，合并兩次提取的上清液；
步驟四:酶解，將步驟三得到的上清液加熱至40°C，保溫，加入上清液重量的0.25%的中性蛋白酶，PH值為6.0,間歇攪拌，酶解2小時后將酶解液升溫至90°C，保溫25分鐘，保溫結束后，用60目濾布過濾酶解液；
步驟五:膜過濾，將步驟四得到的過濾酶解液用截留分子量為5000D的超濾膜過濾，收集截流液，將截留液濃縮至滑菇子實體粉I倍的重量；
步驟六:提取，再向步驟五得到的濃縮液中加入3倍重量的濃度為95%的乙醇，邊加邊攪拌，室溫放置24小時，2000rpm離心機分離8分鐘，收集沉淀物，將沉淀物再溶于滑菇子實體粉I倍的重量水中，重復上述步驟2次；
步驟七:脫色，將步驟六得到的沉淀物溶于滑菇子實體I倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.02倍重量濃度為10%的雙氧水，于40°C攪拌2~3小時，至溶液變白；
步驟八:干燥，將步驟七得到的白色水溶液加熱升溫至90°C，保溫15分鐘，55°C噴霧干燥，使水份除到8%,得到0.458kg滑菇多糖粗品產(chǎn)物，滑菇粗多糖的純度為71.8%，產(chǎn)率為2.29%ο
[0006]實施例2:—種滑菇多糖粗品的制備方法，其是由以下步驟完成:
步驟一:粉碎、篩分，將滑菇子實體在粉碎機里粉碎，粉碎的粉末過用12目篩網(wǎng)篩分，將20kg篩下物加入到容器中，并加入篩下物重量的10倍的水；
步驟二:微波處理，微波波長為2450MHz，功率為800w，處理時間為3.5分鐘；
步驟三:浸提，將步驟二微波處理過的溶液加熱至93°C，時間2.5小時，間歇攪拌，并加水保持容器內(nèi)液面高度不變，煎煮液用65目濾布過濾，得提取液，濾渣繼續(xù)加入10倍重量的水，重復步驟二、步驟三，除去殘渣，合并兩次提取的上清液；
步驟四:酶解，將步驟三得到的上清液加熱至45°C，保溫，加入上清液重量的0.30%的中性蛋白酶，PH值為6.5，間歇攪拌，酶解2.5小時后將酶解液升溫至95°C，保溫28分鐘，保溫結束后，用70目濾布過濾酶解液；
步驟五:膜過濾，將步驟四得到的過濾酶解液用截留分子量為6500D的超濾膜過濾，收集截流液，將截留液濃縮至滑菇子實體粉1.2倍的重量；
步驟六:提取，再向步驟五得到的濃縮液中加入3.2倍重量的濃度為95%的乙醇，邊加邊攪拌，室溫放置25小時，2500rpm離心機分離9分鐘，收集沉淀物，將沉淀物再溶于滑菇子實體粉1.2倍的重量水中，重復上述步驟2次；
步驟七:脫色，將步驟六得到的沉淀物溶于滑菇子實體1.2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.04倍重量濃度為10.2%的雙氧水，于45°C攪拌2.2小時，至溶液變白；
步驟八:干燥，將步驟七得到的白色水溶液加熱升溫至92°C，保溫15分鐘，65°C V噴霧干燥，使水份除到7%，得到0.47kg滑菇多糖粗品產(chǎn)物，滑菇粗多糖的純度為73.5%，產(chǎn)率為2.37%。
[0007]實施例3: —種滑菇多糖粗品的制備方法，其由以下步驟完成:
步驟一:粉碎、篩分，將滑菇子實體在粉碎機里粉碎，粉碎的粉末過用15目篩網(wǎng)篩分，將20kg篩下物加入到容器中，并加入篩下物重量的11倍的水；
步驟二:微波處理，微波波長為2450MHz，功率為800w，處理時間為4分鐘；
步驟三:浸提，將步驟二微波處理過的溶液加熱至95°C，時間3小時，間歇攪拌，并加水保持容器內(nèi)液面高度不變，煎煮液用70目濾布過濾，得提取液，濾渣繼續(xù)加入8~15倍重量的水，重復步驟二、步驟三，除去殘渣，合并兩次提取的上清液；
步驟四:酶解，將步驟三得到的上清液加熱至50°C，保溫，加入上清液重量的0.33%的中性蛋白酶，PH值為7.0,間歇攪拌，酶解3小時后將酶解液升溫至95°C，保溫30分鐘，保溫結束后，用80目濾布過濾酶解液；
步驟五:膜過濾，將步驟四得到的過濾酶解液用截留分子量為7500D的超濾膜過濾，收集截流液，將截留液濃縮至滑菇子實體粉1.5倍的重量；
步驟六:提取，再向步驟五得到的濃縮液中加入3.5倍重量的濃度為95%的乙醇，邊加邊攪拌，室溫放置26小時，2750rpm離心機分離10分鐘，收集沉淀物，將沉淀物再溶于滑菇子實體粉1.5倍的重量水中，重復上述步驟2次；
步驟七:脫色，將步驟六得到的沉淀物溶于滑菇子實體1.5倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.06倍重量濃度為10.5%的雙氧水，于50°C攪拌2.5小時，至溶液變白；
步驟八:干燥，將步驟七得到的白色水溶液加熱升溫至95°C，保溫15分鐘，85°C噴霧干燥，使水份除到6%，得到0.578kg滑菇多糖粗品產(chǎn)物；滑菇粗多糖的純度為78.6%，產(chǎn)率為2.89%ο
[0008]實施例4:一種滑菇多糖粗品的制備方法，其特征是:是由以下步驟完成:步驟一:粉碎、篩分，將滑菇子實體在粉碎機里粉碎，粉碎的粉末過用17目篩網(wǎng)篩分，將20kg篩下物加入到容器中，并加入篩下物重量的14倍的水；
步驟二:微波處理，微波波長為2450MHz，功率為800w，處理時間為4.5分鐘；
步驟三:浸提，將步驟二微波處理過的溶液加熱至97°C，時間3.5小時，間歇攪拌，并加水保持容器內(nèi)液面高度不變，煎煮液用75目濾布過濾，得提取液，濾渣繼續(xù)加入14倍重量的水，重復步驟二、步驟三，除去殘渣，合并兩次提取的上清液；
步驟四:酶解，將步驟三得到的上清液加熱至55°C，保溫，加入上清液重量的0.45%的中性蛋白酶，PH值為7.5，間歇攪拌，酶解3.5小時后將酶解液升溫至98°C，保溫32分鐘，保溫結束后，用90目濾布過濾酶解液； 步驟五:膜過濾，將步驟四得到的過濾酶解液用截留分子量為8500D的超濾膜過濾，收集截流液，將截留液濃縮至滑菇子實體粉I~2倍的重量；
步驟六:提取，再向步驟五得到的濃縮液中加入3.8倍重量的濃度為95%的乙醇，邊加邊攪拌，室溫放置27小時，3000rpm離心機分離11分鐘，收集沉淀物，將沉淀物再溶于滑菇子實體粉1.8倍的重量水中，重復上述步驟2次；
步驟七:脫色，將步驟六得到的沉淀物溶于滑菇子實體1.8倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.08倍重量濃度為10.8%的雙氧水，于55°C攪拌2.8小時，至溶液變白；
步驟八:干燥，將步驟七得到的白色水溶液加熱升溫至98°C，保溫15分鐘，95°C噴霧干燥，使水份除到5.5%，得到0.526kg滑菇多糖粗品產(chǎn)物，滑菇粗多糖的純度為75.1%，產(chǎn)率為2.63%。
[0009]實施例5: —種滑菇多糖粗品的制備方法，其特征是:是由以下步驟完成:
步驟一:粉碎、篩分，將滑菇子實體在粉碎機里粉碎，粉碎的粉末過用20目篩網(wǎng)篩分，將20kg篩下物加入到容器中，并加入篩下物重量的15倍的水；
步驟二:微波處理，微波波長為2450MHz，功率為800w，處理時間為5分鐘；
步驟三:浸提，將步驟二微波處理過的溶液加熱至100°C，時間4小時，間歇攪拌，并加水保持容器內(nèi)液面高度不變，煎煮液用80目濾布過濾，得提取液，濾渣繼續(xù)加入15倍重量的水，重復步驟二、步驟三，除去殘渣，合并兩次提取的上清液；
步驟四:酶解，將步驟三得到的上清液加熱至60°C，保溫，加入上清液重量的0.5%的中性蛋白酶，PH值為8.0,間歇攪拌，酶解4小時后將酶解液升溫至100°C，保溫35分鐘，保溫結束后，用100目濾布過濾酶解液；
步驟五:膜過濾，將步驟四得到的過濾酶解液用截留分子量為10000D的超濾膜過濾，收集截流液，將截留液濃縮至滑菇子實體粉2倍的重量；
步驟六:提取，再向步驟五得到的濃縮液中加入4倍重量的濃度為95%的乙醇，邊加邊攪拌，室溫放置28小時，3500rpm離心機分離12分鐘，收集沉淀物，將沉淀物再溶于滑菇子實體粉2倍的重量水中，重復上述步驟2次；
步驟七:脫色，將步驟六得到的沉淀物溶于滑菇子實體2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.1倍重量濃度為11%的雙氧水，于60°C攪拌3小時，至溶液變白；
步驟八:干燥，將步驟七得到的白色水溶液加熱升溫至100°C，保溫15分鐘，105°C噴霧干燥，使水份除到5%，得到0.494kg滑菇多糖粗品產(chǎn)物；滑菇粗多糖的純度為74.5%，產(chǎn)率為
2.47%ο
【權利要求】
1.一種滑菇多糖粗品的制備方法，其特征是:是由以下步驟完成: 步驟一:粉碎、篩分，將滑菇子實體在粉碎機里粉碎，粉碎的粉末過用10~20目篩網(wǎng)篩分，篩下物加入到容器中，并加入篩下物重量的8~15倍的水； 步驟二:微波處理，微波波長為2450MHz，功率為800w，處理時間為3~5分鐘；步驟三:浸提，將步驟二微波處理過的溶液加熱至90~100°C，時間2~4小時，間歇攪拌，并加水保持容器內(nèi)液面高度不變，煎煮液用60~80目濾布過濾，得提取液，濾渣繼續(xù)加入8~15倍重量的水，重復步驟二、步驟三，除去殘渣，合并兩次提取的上清液； 步驟四:酶解，將步驟三得到的上清液加熱至40~60°C，保溫，加入上清液重量的`0.25%~0.5%的中性蛋白酶，PH值為6.0~8.0,間歇攪拌，酶解2~4小時后將酶解液升溫至90~100°C，保溫25~35分鐘，保溫結束后，用60~100目濾布過濾酶解液； 步驟五:膜過濾，將步驟四得到的過濾酶解液用截留分子量為5000~10000D的超濾膜過濾，收集截流液，將截留液濃縮至滑菇子實體粉I~2倍的重量； 步驟六:提取，再向步驟五得到的濃縮液中加入3~4倍重量的濃度為95%的乙醇，邊加邊攪拌，室溫放置24~28小時，2000~3500rpm離心機分離8~12分鐘，收集沉淀物，將沉淀物再溶于滑菇子實體粉I~2倍的重量水中，重復上述步驟2次； 步驟七:脫色，將步驟六得到的沉淀物溶于滑菇子實體I~2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.02~0.1倍重量濃度為10~11%的雙氧水，于40~60°C攪拌2~3小時，至溶液變白； 步驟八:干燥，將步驟七得到的白色水溶液加熱升溫至90~100°C，保溫15分鐘，55°C~105°C噴霧干燥，使水份除到5~8%，得到滑菇多糖粗品產(chǎn)物。
【文檔編號】C08B37/00GK103864944SQ201310543563
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2013年11月6日 優(yōu)先權日:2013年11月6日
【發(fā)明者】張紹龍 申請人:青海麟豐農(nóng)業(yè)科技有限公司