專利名稱：一種連錢草多糖的制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物成分分離，特別是一種連錢草多糖的制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
連錢草為唇形科植物活血丹Glechoma Iongituba(Nakai) Kupr.的干燥地上部分，味辛、微苦，微寒，具有利濕通淋，清熱解毒，散瘀消腫的功效，用于熱淋，石淋，濕熱黃疸，瘡癰腫痛，跌打損傷。目前，對于中藥連錢草的研究仍止步于其所含有的萜類、黃酮和黃酮苷類、有機酸類、揮發(fā)油類、留體類、醇類等成分，但有關(guān)連錢草多糖的研究尚未見報道。多糖作為一種免疫促進和調(diào)節(jié)劑，是許多天然藥物的主要免疫活性物質(zhì)，普遍具有抗菌、抗病毒、抗寄生蟲、抗腫瘤、抗輻射、抗衰老且對正常細胞無毒副作用的優(yōu)點，因而基于各種藥用植物中多糖類成分活性的報道屢見不鮮，本發(fā)明首次涉及連錢草中多糖成分的研究，因此，本發(fā)明的研制成功具有統(tǒng)計學(xué)上的意義，有利于連錢草藥材的開發(fā)，經(jīng)濟效益和社會效益巨大，是中藥提取物上的一大創(chuàng)舉。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為進一步開發(fā)連錢草藥材的藥用、經(jīng)濟價值，填補這方面的研究空白，本發(fā)明之目的就是提供一種連錢草多糖的制備方法及應(yīng)用，可有效解決這方面的研究空白。本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，將連錢草粉碎，稱取連錢草粉末，再稱取連錢草粉末重量的0. 5% 2. 5%的酶，在酶中加入酶重量的15 20倍的35 60°C的水，溶解，35 60°C水浴活化15 30min，成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末與水以I :8 15的重量比混合，60 90°C水浴浸泡30 90min，冷卻至18 25°C，用鹽酸調(diào)pH至4. 0 5. 5，搖勻水浴加熱至40 55°C，加入上述活化的酶溶液，混勻，酶解2 6小時，在微波功率300 500W、溫度60 90°C時提取10 15min，過濾，藥渣再加入連錢草粉末重量的8 15倍量體積濃度為5 15%的乙醇，在微波功率300 500W、溫度60 90°C時提取10 15min，合并提取液，真空濃縮至連錢草重量的3倍，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，得上清液，上清液通過大孔吸附樹脂柱，收集流出液，大孔吸附樹脂柱再用連錢草重量的2 4倍的蒸餾水沖洗，沖洗液和上述收集的流出液合并，減壓濃縮至連錢草重量的2倍，得濃縮液，再邊攪拌邊加體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為70 80%，靜置12小時，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇先洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20 50°C下減壓干燥，即得。所述的酶為纖維素酶、果膠酶、蛋白酶中的一種或兩種以上的混合，所述的大孔吸附樹脂柱為DlOl型或AB-8型大孔吸附樹脂柱。本發(fā)明連錢草多糖可用于抗氧化、抗菌藥物和保健品的開發(fā)，以此開辟連錢草藥材的應(yīng)用新前景，具有巨大的社會、經(jīng)濟效益。具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的具體實施方式
作進一步詳細說明。實施例I取連錢草50g，粉碎，再稱取0. 25g的纖維素酶，在纖維素酶中加入4g的35°C的水，溶解，在35°C下，水浴活化15min，成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末加水400g，60°C水浴浸泡30min,冷卻至18°C,用鹽酸調(diào)pH至4. 0,搖勻水浴加熱至40°C,加入上述活化的酶溶液，混勻，酶解2小時，微波功率300W、溫度60°C提取lOmin，過濾，藥渣再加入400g體積濃度為5%的乙醇，微波功率300W、溫度60°C時提取lOmin，合并提取液，真空濃縮至連錢草重量的3倍，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，得上清液，上清液通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，收集流出液，DlOl型大孔吸附樹脂柱再用連錢草重量的2倍的蒸餾水沖洗，沖洗液和上述收集的流出液合并，減壓濃縮至連錢草重量的2倍，得濃縮液，再邊攪拌邊加體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為80%，靜置12小時，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇先洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20°C下減壓干燥，即得連錢草多糖。實施例2取連錢草50g，粉碎，再稱取I. 25g的果膠酶，在果膠酶中加入25g的35°C的水，溶解，在35°C下，水浴活化30min，成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末加水750g，70°C水浴浸泡40min，冷卻至20°C，用鹽酸調(diào)pH至4. 5，搖勻水浴加熱至45°C，加入上述活化的酶溶液，混勻，酶解6小時，微波功率500W、溫度90°C時提取15min，過濾，藥渣再加入750g體積濃度為15%的乙醇，微波功率500W、溫度90°C提取15min，合并提取液，真空濃縮至連錢草重量的3倍，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，得上清液，上清液通過AB-8大孔吸附樹脂柱，收集流出液，AB-8大孔吸附樹脂柱再用連錢草重量的4倍的蒸餾水沖洗，沖洗液和上述收集的流出液合并，減壓濃縮至連錢草重量的2倍，得濃縮液，再邊攪拌邊加體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為70%，靜置12小時，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇先洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，50°C下減壓干燥，即得連錢草多糖。實施例3取連錢草50g，粉碎，再稱取纖維素酶與果膠酶各0. 25g，在酶中加入IOg的38°C的水，溶解，在39°C下，水浴活化25min，成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末加水400g，80°C水浴浸泡50min，冷卻至18°C，用鹽酸調(diào)pH至5. O，搖勻水浴加熱至50°C，加入上述活化的酶溶液，混勻，酶解2小時，微波功率400W、溫度75°C提取lOmin，過濾，藥渣再加入400g體積濃度為10%的乙醇，微波功率400W、溫度75°C提取12min，合并提取液，真空濃縮至連錢草重量的3倍，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，得上清液，上清液通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，收集流出液，DlOl型大孔吸附樹脂柱再用連錢草重量的3倍的蒸餾水沖洗，沖洗液和上述收集的流出液合并，減壓濃縮至連錢草重量的2倍，得濃縮液，再邊攪拌邊加體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為75%，靜置12小時，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇先洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，35°C下減壓干燥，即得連錢草多糖。實施例4、
取連錢草50g,粉碎,再稱取纖維素酶、果膠酶與蛋白酶各0. 25g,在酶中加入15g的48°C的水，溶解，在39°C下，水浴活化18min，成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末加水500g，90°C水浴浸泡70min，冷卻至24°C，用鹽酸調(diào)pH至5. 5，搖勻水浴加熱至55°C，加入上述活化的酶溶液，混勻，酶解5小時，微波功率400W、溫度67°C提取14min，過濾，藥渣再加入500g體積濃度為12%的乙醇，微波功率400W、溫度67°C提取12min，合并提取液，真空濃縮至連錢草重量的3倍，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，得上清液，上清液通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，收集流出液，AB-8型大孔吸附樹脂柱再用連錢草重量的2倍的蒸餾水沖洗，沖洗液和上述收集的流出液合并，減壓濃縮至連錢草重量的2倍，得濃縮液，再邊攪拌邊加體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為75%，靜置12小時，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇先洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，45°C下減壓干燥，即得連錢草多糖。 連錢草多糖的抗氧化及抗菌活性實驗I.連錢草多糖的體內(nèi)抗氧化試驗情況如下取體重18 — 22g的昆明種小鼠48只，適應(yīng)性飼養(yǎng)I周后，隨機分成4組，每組12只。分別為空白對照組，多糖低劑量組(IOOmg kg^1),多糖中劑量組(200mg kg—1)，多糖高劑量組(300mg kg—1)。每天灌胃給藥I次(0. 2ml/10g),連續(xù)給藥15天(空白對照組給等量蒸餾水)。末次給藥后24h，眼球取血，離心得小鼠血清，按照SOD、GSH-Px試劑盒的操作過程，測定連錢草多糖對小鼠血清中的SOD及GSH-Px的影響，結(jié)果見表I :表I連錢草多糖對小鼠血清中SOD、GSH-Px的影響
權(quán)利要求
1.一種從連錢草中分離多糖的制備方法，其特征在于，將連錢草粉碎，稱取連錢草粉末，再稱取連錢草粉末重量的0. 5% 2. 5%的酶，在酶中加入酶重量的15 20倍的35 60°C的水，溶解，35 60°C水浴活化15 30min，成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末與水以I :8 15的重量比混合，60 90°C水浴浸泡30 90min，冷卻至18 25°C，用鹽酸調(diào)pH至4. 0 5. 5，搖勻水浴加熱至40 55°C，加入上述活化的酶溶液，混勻，酶解2 6小時，在微波功率300 500W、溫度60 90°C時提取10 15min，過濾，藥渣再加入連錢草粉末重量的8 15倍量體積濃度為5 15%的乙醇，在微波功率300 500W、溫度60 90°C時提取10 15min，合并提取液，真空濃縮至連錢草重量的3倍，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心IOmin,得上清液，上清液通過大孔吸附樹脂柱，收集流出液，大孔吸附樹脂柱再用連錢草重量的2 4倍的蒸餾水沖洗，沖洗液和上述收集的流出液合并，減壓濃縮至連錢草重量的2倍，得濃縮液，再邊攪拌邊加體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為70 80%，靜置12小時，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇先洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20 50°C下減壓干燥，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從連錢草中分離多糖的制備方法，其特征在于，所述的酶為纖維素酶、果膠酶、蛋白酶中的一種或兩種以上的混合，所述的大孔吸附樹脂柱為DlOl型或AB-8型大孔吸附樹脂柱。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從連錢草中分離多糖的制備方法，其特征在于，取連錢草50g，粉碎，再稱取0. 25g的纖維素酶，在纖維素酶中加入4g的35°C的水，溶解，在35°C下，水浴活化15min，成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末加水400g，60°C水浴浸泡30min，冷卻至18°C，用鹽酸調(diào)pH至4. 0，搖勻水浴加熱至40°C，加入上述活化的酶溶液,混勻，酶解2小時，微波功率300W、溫度60°C提取lOmin，過濾，藥渣再加入400g體積濃度為5%的乙醇，微波功率300W、溫度60°C時提取lOmin，合并提取液，真空濃縮至連錢草重量的3倍，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，得上清液，上清液通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，收集流出液，DlOl型大孔吸附樹脂柱再用連錢草重量的2倍的蒸餾水沖洗，沖洗液和上述收集的流出液合并，減壓濃縮至連錢草重量的2倍，得濃縮液，再邊攪拌邊加體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為80%，靜置12小時，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇先洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20°C下減壓干燥，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從連錢草中分離多糖的制備方法，其特征在于，取連錢草50g，粉碎，再稱取I. 25g的果膠酶，在果膠酶中加入25g的35°C的水，溶解，在35°C下，水浴活化30min，成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末加水750g，70°C水浴浸泡40min，冷卻至200C，用鹽酸調(diào)pH至4. 5，搖勻水浴加熱至45°C，加入上述活化的酶溶液，混勻，酶解6小時，微波功率500W、溫度90°C時提取15min，過濾，藥渣再加入750g體積濃度為15%的乙醇，微波功率500W、溫度90°C提取15min，合并提取液，真空濃縮至連錢草重量的3倍，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，得上清液，上清液通過AB-8大孔吸附樹脂柱，收集流出液，AB-8大孔吸附樹脂柱再用連錢草重量的4倍的蒸餾水沖洗，沖洗液和上述收集的流出液合并，減壓濃縮至連錢草重量的2倍，得濃縮液，再邊攪拌邊加體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為70%，靜置12小時，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇先洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，50°C下減壓干燥，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從連錢草中分離多糖的制備方法，其特征在于，取連錢草50g,粉碎，再稱取纖維素酶與果膠酶各0. 25g，在酶中加入IOg的38°C的水，溶解，在39°C下，水浴活化25min，成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末加水400g，80°C水浴浸泡50min，冷卻至18°C，用鹽酸調(diào)pH至5. 0，搖勻水浴加熱至50°C，加入上述活化的酶溶液，混勻，酶解2小時，微波功率400W、溫度75°C提取lOmin，過濾，藥渣再加入400g體積濃度為10%的乙醇，微波功率400W、溫度75°C提取12min，合并提取液，真空濃縮至連錢草重量的3倍，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，得上清液，上清液通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，收集流出液，DlOl型大孔吸附樹脂柱再用連錢草重量的3倍的蒸餾水沖洗，沖洗液和上述收集的流出液合并，減壓濃縮至連錢草重量的2倍，得濃縮液，再邊攪拌邊加體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為75%，靜置12小時，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇先洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，35°C下減壓干燥，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從連錢草中分離多糖的制備方法，其特征在于，取連錢草 50g，粉碎，再稱取纖維素酶、果膠酶與蛋白酶各0. 25g，在酶中加入15g的48°C的水，溶解，在39°C下，水浴活化18min，成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末加水500g，90°C水浴浸泡70min,冷卻至24°C，用鹽酸調(diào)pH至5. 5，搖勻水浴加熱至55°C，加入上述活化的酶溶液，混勻，酶解5小時，微波功率400W、溫度67°C提取14min，過濾，藥渣再加入500g體積濃度為12%的乙醇，微波功率400W、溫度67°C提取12min，合并提取液，真空濃縮至連錢草重量的3倍，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，得上清液，上清液通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，收集流出液，AB-8型大孔吸附樹脂柱再用連錢草重量的2倍的蒸餾水沖洗，沖洗液和上述收集的流出液合并，減壓濃縮至連錢草重量的2倍，得濃縮液，再邊攪拌邊加體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為75%，靜置12小時，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇先洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，45°C下減壓干燥，即得。
7.權(quán)利要求I或3-6任何一項所述方法制備的連錢草多糖在抗氧化和抑制金葡萄菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及連錢草多糖的制備方法及應(yīng)用，可有效解決這方面的研究空白，解決的技術(shù)方案是，稱取連錢草粉末和酶，在酶中加水，溶解，水浴活化成活化的酶溶液，備用；連錢草粉末與水混合，水浴浸泡，冷卻，用鹽酸調(diào)pH，搖勻水浴加熱，加上述活化的酶溶液，混勻，酶解，提取，過濾，藥渣加乙醇，提取，合并提取液，真空濃縮，離心，得上清液，上清液通過大孔吸附樹脂柱，收集流出液，大孔吸附樹脂柱用蒸餾水沖洗，沖洗液和流出液合并，減壓濃縮，得濃縮液，濃縮液加乙醇，濾取沉淀物，無水乙醇洗去沉淀物中的水分，丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，減壓干燥，即得，本發(fā)明可有效用于抗氧化和抗菌的藥物或保健品的開發(fā)。
文檔編號C08B37/00GK102746416SQ20121026396
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月27日
發(fā)明者劉富崗, 楊云 申請人:河南中醫(yī)學(xué)院