專利名稱：一種木耳多糖的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種木耳多糖的提取方法。
背景技術(shù)：
木耳營(yíng)養(yǎng)豐富，食味鮮美，不但是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高的食用菌，而且是藥用價(jià)值較高的藥用菌，是世界公認(rèn)的保健品。隨著木耳栽培業(yè)的迅速發(fā)展及應(yīng)用范圍的拓寬，對(duì)木耳的營(yíng)養(yǎng)成分以及在醫(yī)療保健作用方面的研究也在逐步深入。
木耳提取生物活性多糖可作為口服液和其它功能性食品的有效成分。傳統(tǒng)木耳多糖提取采用水體系，木耳細(xì)胞粗大，壁厚，多糖難以從胞內(nèi)擴(kuò)散出來(lái)。而酸、堿法容易破壞多糖的結(jié)構(gòu)，降低其生物利用率。本文采用多種酶協(xié)同作用于木耳真菌細(xì)胞壁構(gòu)成物質(zhì)，使得木耳真菌細(xì)胞壁破裂，促進(jìn)多糖的溶出，提高了多糖的提取率。為木耳保健食品的開發(fā)提供一條新的工藝路線和方法。本方法采用酶法提取，使提取率大為提高，這對(duì)于木耳的綜合開發(fā)利用及提高其經(jīng)濟(jì)價(jià)值具有實(shí)際意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種以木耳為原料，利用酶法分別采用不同的工藝條件，提取活性多糖的新方法。
一、原料及處理取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。
用2～10倍乙醇于60～100℃對(duì)粉碎后的原料處理1～4小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作1～3次。
二、木耳多糖的提取工藝1.預(yù)處理①將20～50倍的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，靜置4小時(shí)，讓其充分復(fù)水。
或②微波處理將20～50倍的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)微波2450MHz下處理1～15分鐘。取出后加入原料干重10～40倍的水，再次用微波2450MHz下處理1～15分鐘。重復(fù)此操作2～6次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。
或③超聲波處理將20～50倍的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)超聲波27KHz下處理1～15分鐘。取出后加入原料干重10～40倍的水，再次用超聲波27KHz下處理1～15分鐘。重復(fù)此操作2～6次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。
2.酶解、提取將上述合并后的濾液加入適量的水(不經(jīng)物理波處理的則直接加入水)，使混合液的重量達(dá)到原料干重的50倍，調(diào)節(jié)其pH值至3～7.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至40～60℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)0～2.0％、纖維素酶(45萬(wàn)u/g)0～2.0％和木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)0～2.0％，酶用量按原料干重計(jì)算，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解0.5～3小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至70～100℃，保持1～4小時(shí)。
3.粗濾及精濾將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。
4.后處理將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。
5.精制
將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/8～1/2，得木耳多糖粗品。然后加入濃縮液體積1～5倍75％～100％的乙醇，于2～5℃醇沉2～20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
三、下腳料的利用將上述提取過(guò)程中產(chǎn)生出來(lái)的木耳殘?jiān)占饋?lái)，用堿法提取出其中的水不溶性木耳多糖。方法如下1.原料收集上述提取過(guò)程中產(chǎn)生的木耳濾渣，稱重備用。
2.堿解取濾渣重10～50倍的水，用20％NaOH溶液調(diào)節(jié)酸堿度，使其初始pH值為7～12，再加入木耳濾渣，于50～95℃下堿解1～5小時(shí)。然后離心，分離出濾渣，收集上清液。重復(fù)此操作2～5次。
3.提純將收集后得到的上清液合并，用1mol/LHCl調(diào)節(jié)其pH值至5～8，再將其減壓濃縮至原體積的1/8～1/2，得堿性木耳多糖粗品。
4.純化將上述多糖粗品加入濃縮液體積1～5倍75％～100％的乙醇，于2～5℃醇沉2～20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得堿性木耳多糖純品。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1.將木耳中不同種類的多糖提取、濃縮、富集起來(lái)，使制品最大程度地發(fā)揮出抗腫瘤、降血壓、降血脂、降血糖等功效。
2.將傳統(tǒng)水提法與現(xiàn)代生物技術(shù)相結(jié)合，運(yùn)用復(fù)合酶使細(xì)胞壁破碎，從而使細(xì)胞內(nèi)的多糖能夠充分溶出，既提高了對(duì)原料的利用程度，降低了生產(chǎn)成本。
3.在提取過(guò)程中引入了微波萃取工藝和超聲波萃取方法，簡(jiǎn)化了提取工藝，提高了多糖得率，縮短了提取時(shí)間，減小了由于長(zhǎng)時(shí)間加熱而引起的對(duì)其活性成分的破壞。
4.在酶法提取木耳多糖之后，用堿法提取廢渣中的堿溶性木耳多糖，充分利用了原料，節(jié)約了生產(chǎn)成本。
具體實(shí)施例方式
例1取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用20公斤乙醇于60℃對(duì)粉碎后的原料處理4小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作3次。將500公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)微波2450MHz下處理15分鐘。取出后加入400公斤的水，再次用微波2450MHz下處理15分鐘。重復(fù)此操作2次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的的量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至3.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至40℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)200克(酶用量按原料干重計(jì)算)，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解3小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至100℃，保持1小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/5，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積5倍75％的乙醇，于2℃醇沉20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例2取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用50公斤乙醇于100℃對(duì)粉碎后的原料處理1小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作2次。將200公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)微波2450MHz下處理5分鐘。取出后加入300公斤的水，再次用微波2450MHz下處理5分鐘。重復(fù)此操作2次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的的量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至4.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至60℃，加入纖維素酶(45萬(wàn)u/g)200克，開動(dòng)攪拌器混勻后酶解0.5小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至90℃，保持2小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/2，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積1倍100％的乙醇，于3℃醇沉15小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例3取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用100公斤乙醇于100℃對(duì)粉碎后的原料處理2小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作1次。將500公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)微波2450MHz下處理10分鐘。取出后加入400公斤的水，再次用微波2450MHz下處理10分鐘。重復(fù)此操作2次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至7.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至60℃，加入木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)200克，酶用量按原料干重計(jì)算，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解3小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至100℃，保持4小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/2，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積5倍75％的乙醇，于5℃醇沉20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例4
取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用100公斤乙醇于100℃對(duì)粉碎后的原料處理1小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作1次。將500公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)微波2450MHz下處理1分鐘。取出后加入400公斤的水，再次用微波2450MHz下處理1分鐘。重復(fù)此操作6次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至4.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至40℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)200克和纖維素酶(45萬(wàn)u/g)100克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解3小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至100℃，保持1小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/8，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積5倍75％的乙醇，于2℃醇沉20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例5取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用500公斤乙醇于80℃對(duì)粉碎后的原料處理3小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作2次。將400公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)微波2450MHz下處理10分鐘。取出后加入200公斤的水，再次用微波2450MHz下處理10分鐘。重復(fù)此操作4次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至5.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至55℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)100克和木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)200克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解2小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至80℃，保持3小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/5，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積4倍95％的乙醇，于4℃醇沉10小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例6取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用20公斤乙醇于100℃對(duì)粉碎后的原料處理4小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作3次。將200公斤水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)微波2450MHz下處理15分鐘。取出后加入100公斤的水，再次用微波2450MHz下處理15分鐘。重復(fù)此操作6次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至7.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至60℃，加入纖維素酶(45萬(wàn)u/g)200克和木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)200克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解0.5小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至70℃，保持4小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/8，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積5倍80％的乙醇，于2℃醇沉20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例7取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用50公斤乙醇于70℃對(duì)粉碎后的原料處理4小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作3次。將200公斤水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)微波2450MHz下處理5分鐘。取出后加入100公斤的水，再次用微波2450MHz下處理5分鐘。重復(fù)此操作3次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至5.0，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至50℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)150克、纖維素酶(45萬(wàn)u/g)90克和木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)200克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解1.5小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至90℃，保持1小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/8，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積4倍90％的乙醇，于4℃醇沉15小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例8取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用20公斤乙醇于60℃對(duì)粉碎后的原料處理4小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作3次。將500公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)超聲波27KHz下處理15分鐘。取出后加入400公斤的水，再次用超聲波27KHz下處理15分鐘。重復(fù)此操作2次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至3.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至40℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)200克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解3小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至100℃，保持1小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/5，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積5倍75％的乙醇，于2℃醇沉20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例9取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用50公斤乙醇于100℃對(duì)粉碎后的原料處理1小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作2次。將200公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)微波2450MHz下處理5分鐘。取出后加入300公斤的水，再次用微波2450MHz下處理5分鐘。重復(fù)此操作2次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至4.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至60℃，加入纖維素酶(45萬(wàn)u/g)200克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解0.5小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至90℃，保持2小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/2，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積1倍100％的乙醇，于3℃醇沉15小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例10取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用100公斤乙醇于100℃對(duì)粉碎后的原料處理2小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作1次。將500公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)超聲波27KHz下處理10分鐘。取出后加入400公斤的水，再次用超聲波27KHz下處理10分鐘。重復(fù)此操作2次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至7.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至60℃，加入木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)200克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解3小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至100℃，保持4小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后得到的清液通過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8人孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/2，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積5倍75％的乙醇，于5℃醇沉20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例11取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用100公斤乙醇于100℃對(duì)粉碎后的原料處理1小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作1次。將500公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)超聲波27KHz下處理1分鐘。取出后加入400公斤的水，再次用超聲波27KHz下處理1分鐘。重復(fù)此操作6次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至4.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至40℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)200克和纖維素酶(45萬(wàn)u/g)100克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解3小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至100℃，保持1小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/8，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積5倍75％的乙醇，于2℃醇沉20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例12取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用50公斤乙醇于80℃對(duì)粉碎后的原料處理3小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作2次。將400公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)超聲波27KHz下處理10分鐘。取出后加入200公斤的水，再次用超聲波27KHz下處理10分鐘。重復(fù)此操作4次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至5.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至55℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)100克和木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)200克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解2小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至80℃，保持3小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/5，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積4倍95％的乙醇，于4℃醇沉10小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例13
取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用20公斤乙醇于100℃對(duì)粉碎后的原料處理4小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作3次。將200公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)超聲波27KHz下處理15分鐘。取出后加入100公斤的水，再次用超聲波27KHz下處理15分鐘。重復(fù)此操作6次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至7.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至60℃，加入纖維素酶(45萬(wàn)u/g)200克和木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)200克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解0.5小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至70℃，保持4小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/8，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積5倍80％的乙醇，于2℃醇沉20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例14取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)。將挑選后的干燥木耳10公斤進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用50公斤乙醇于70℃對(duì)粉碎后的原料處理4小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失。將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇。重復(fù)操作3次。將200公斤的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)超聲波27KHz下處理5分鐘。取出后加入100公斤的水，再次用超聲波27KHz下處理5分鐘。重復(fù)此操作3次。然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液。將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到500公斤，調(diào)節(jié)其pH值至5.0，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至50℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)150克、纖維素酶(45萬(wàn)u/g)90克和木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)200克，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解1.5小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至90℃，保持1小時(shí)，然后將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入貯罐貯存待用。將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用。將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素。將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/8，得木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積4倍90％的乙醇，于4℃醇沉15小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
例15收集上述提取過(guò)程中產(chǎn)生的木耳濾渣10公斤，加入100公斤的水，用20％NaOH溶液調(diào)節(jié)酸堿度，使其初始pH值為7，再加入木耳濾渣，于70℃下堿解1小時(shí)。然后離心，分離出濾渣，收集上清液。重復(fù)此操作3次。將收集后得到的上清液合并，用1mol/LHCl調(diào)節(jié)其pH值至7，再將其減壓濃縮至原體積的1/5，得堿性木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積3倍90％的乙醇，于3℃醇沉10小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得堿性木耳多糖純品。
例16收集上述提取過(guò)程中產(chǎn)生的木耳濾渣10公斤，加入300公斤的水，用20％NaOH溶液調(diào)節(jié)酸堿度，使其初始pH值為12，再加入木耳濾渣，于95℃下堿解3小時(shí)。然后離心，分離出濾渣，收集上清液。重復(fù)此操作5次。將收集后得到的上清液合并，用1mol/LHCl調(diào)節(jié)其pH值至8，再將其減壓濃縮至原體積的1/2，得堿性木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積5倍100％的乙醇，于5℃醇沉20小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得堿性木耳多糖純品。
例17收集上述提取過(guò)程中產(chǎn)生的木耳濾渣10公斤，加入500公斤的水，用20％NaOH溶液調(diào)節(jié)酸堿度，使其初始pH值為7，再加入木耳濾渣，于50℃下堿解5小時(shí)。然后離心，分離出濾渣，收集上清液。重復(fù)此操作2次。將收集后得到的上清液合并，用1mol/LHCl調(diào)節(jié)其pH值至5，再將其減壓濃縮至原體積的1/8，得堿性木耳多糖粗品。再將上述多糖粗品加入濃縮液體積1倍75％的乙醇，于2℃醇沉2小時(shí)。將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得堿性木耳多糖純品。
權(quán)利要求
1.一種木耳多糖的提取方法，其特征在于①原料及處理取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)，將挑選后的干燥木耳進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下，用2～10倍乙醇于60～100℃對(duì)粉碎后的原料處理1～4小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失，將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇，重復(fù)操作1～3次，②提取木耳多糖a.預(yù)處理將20～50倍的水與處理后的木耳混勻，經(jīng)微波2450MHz下處理1～15分鐘，取出后加入原料干重10～40倍的水，再次用微波2450MHz下處理1～15分鐘，重復(fù)此操作2～6次，然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液，b.酶解、提取將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到原料干重的50倍，調(diào)節(jié)其pH值至3～7.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至40～60℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)0～2.0％、纖維素酶(45萬(wàn)u/g)0～2.0％和木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)0～2.0％(酶用量按原料干重計(jì)算)，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解0.5～3小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至70～100℃，保持1～4小時(shí)，c.粗濾及精濾將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提，提取液打入貯罐貯存待用，將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用，d.后處理將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用，將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素，e.提純將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/8～1/2，得木耳多糖粗品，③純化將上述多糖粗品加入濃縮液體積1～5倍75％～100％的乙醇，于2～5℃醇沉2～20小時(shí)，將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性，粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
2.一種木耳多糖的提取方法，其特征在于①原料及處理取干燥木耳，剔除發(fā)霉、變質(zhì)等不合格木耳及木屑、砂石、頭發(fā)等雜質(zhì)，將挑選后的干燥木耳進(jìn)行粉碎，粒度控制在20目以下，用2～10倍乙醇于60～100℃對(duì)粉碎后的原料處理1～4小時(shí)，保持過(guò)程中乙醇濃度，防止多糖損失，將乙醇處理后的原料抽濾晾干，除去殘留乙醇，重復(fù)操作1～3次，②提取木耳多糖a.預(yù)處理將20～50倍的水與經(jīng)過(guò)處理后的木耳混勻，經(jīng)超聲波27KHz下處理1～15分鐘，取出后加入原料干重10～40倍的水，再次用超聲波27KHz下處理1～15分鐘，重復(fù)此操作2～6次，然后離心分離，分別收集上清液和濾渣，并合并濾液，b.酶解、提取將上述合并后的濾液加入適量的水，使混合液的重量達(dá)到原料干重的50倍，調(diào)節(jié)其pH值至3～7.5，然后將上述的濾渣或除醇后的原料加入混合液中，加熱至40～60℃，加入果膠酶(100萬(wàn)u/ml)0～2.0％、纖維素酶(45萬(wàn)u/g)0～2.0％和木瓜蛋白酶(100萬(wàn)u/g)0～2.0％(酶用量按原料干重計(jì)算)，開動(dòng)攪拌器混勻后保持酶解0.5～3小時(shí)，然后將原料渣及酶解液直接升溫至70～100℃，保持1～4小時(shí)，c.粗濾及精濾將原料渣及提取液冷卻至室溫后，經(jīng)篩網(wǎng)過(guò)濾，分離出的木耳渣用于二次酶解和水提，提取液打入貯罐貯存待用，將粗濾后的提取液經(jīng)硅藻土過(guò)濾后打入貯罐貯存待用。d.后處理將酶解后的混合物抽濾，除去其中的不溶物質(zhì)，收集廢渣待進(jìn)一步利用，將抽濾之后的濾液通過(guò)硅藻土過(guò)濾，然后將過(guò)濾后的清液過(guò)AB-8大孔吸附樹脂柱，以進(jìn)一步去除溶液中的色素，e.提純將AB-8大孔吸附樹脂柱處理后的提取液減壓蒸餾、濃縮至原體積的1/8～1/2，得木耳多糖粗品，③純化將上述多糖粗品加入濃縮液體積1～5倍75％～100％的乙醇，于2～5℃醇沉2～20小時(shí)，將醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性，粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖純品。
3.一種提取木耳下腳料中多糖的方法①原料收集上述提取過(guò)程中產(chǎn)生的木耳濾渣，稱重備用，②堿解取濾渣重10～50倍的水，用20％NaOH溶液調(diào)節(jié)酸堿度，使其初始pH值為7～12，再加入木耳濾渣，于50～95℃下堿解1～5小時(shí)，然后離心，分離出濾渣，收集上清液，重復(fù)此操作2～5次，③提純將收集后得到的上清液合并，用1mol/LHCl調(diào)節(jié)其pH值至5～8，再將其減壓濃縮至原體積的1/8～1/2，得堿性木耳多糖粗品，④純化將上述多糖粗品加入濃縮液體積1～5倍75％～100％的乙醇，于2～5℃醇沉2～20小時(shí)，醇沉后溶液進(jìn)行過(guò)濾、干燥，溫度低于60℃，防止多糖變性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得堿性木耳多糖純品。
全文摘要
一種木耳多糖的提取方法，它是以木耳為原料，采用醇提、微波或超聲波處理，并結(jié)合復(fù)合酶法酶解，將木耳中的多糖物質(zhì)充分溶解出來(lái)，提高了木耳多糖的得率，保持了多糖物質(zhì)的生物活性，有利于人體的吸收。同時(shí)，利用木耳多糖加工過(guò)程中剩余的殘?jiān)崛A性木耳多糖，最大限度地利用了原料、節(jié)約了資源，從而降低了成本。傳統(tǒng)的提取方法多采用單純酸法或堿法，容易破壞多糖的結(jié)構(gòu)，影響多糖的吸收和利用。本發(fā)明的方法對(duì)多糖結(jié)構(gòu)破壞小，多糖得率高，能最大程度地發(fā)揮出抗腫瘤、降血壓、降血脂、降血糖等功效。
文檔編號(hào)C08B37/00GK1580079SQ20041002059
公開日2005年2月16日 申請(qǐng)日期2004年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月21日
發(fā)明者朱蓓薇, 姜紅, 張彧, 董秀萍, 李燕杰, 陳福存 申請(qǐng)人:大連輕工業(yè)學(xué)院