專利名稱：一種絞股藍多糖的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物化學，特別是涉及從絞股藍中提取絞股藍多糖的方法。
背景技術(shù)：
絞股藍(Gynostemma Pentaphyllum(Thunb.)Makino)又名七葉膽、甘茶蔓、七葉參，是葫蘆科絞股藍屬植物。絞股藍主要有效成分之一為絞股藍總皂甙，有80余種。絞股藍有“南方人參”之稱，其總皂甙含量是人參總皂甙的四倍，具有降血脂，降血壓，坑疲勞，抗衰老，促生長，防癌抗癌等功效。
絞股藍主要有效成分之二是絞股藍多糖，它具有SOD類似的活性，可清除超氧陰離子(O2-)和羥基自由基(OH)，據(jù)最近有關(guān)研究證實，絞股藍多糖可抑制腫瘤細胞的增殖，絞股藍多糖無任何毒副作用，且能對抗化療藥物引起的骨髓抑制等不良反應(yīng)，保護細胞免受自由基的攻擊，對機體的免疫機能有一定的增強作用，并有抗氧化、抗衰老等作用(唐曉玲等.絞股藍粗多糖抗腫瘤作用及其對荷瘤動物免疫機能的影響.江蘇藥學與臨床研究，1999，7(1)15；沈愛寶.絞股藍粗多糖抗癌作用的初步觀察.南通醫(yī)學院學報，1995，15(1)148；婁振嶺.絞股藍多糖生物學作用的研究.河南腫瘤學雜志，1996，9(3)168)。
現(xiàn)有從絞股藍中提取的絞股藍多糖通常有下面一些方法(1)將絞股藍先用80％乙醇提取3次，再用20％乙醇提取多糖3次，再回收乙醇、濃縮、過濾、醇析、干燥，絞股藍粗多糖的收率6％，平均含量9.59％(唐曉玲等.絞股藍粗多糖的提取與初步分析.中成藥，1995，17(7)7-8)。但這種方法提取不完全，提取效率低，為粗提物，且通常提取溫度較高，容易導(dǎo)致具有活性的多糖成分因長時間受熱破壞損失；(2)水煎煮提取，再濃縮、過濾、醇析、干燥(中國專利申請?zhí)?3109421.6)。這種方法也存在提取不完全、提取效率低、提取溫度較高、容易導(dǎo)致具有活性的多糖成分因長時間受熱破壞損失的缺點。
關(guān)于絞股藍總皂甙的提取，與本發(fā)明相近的方法有絞股藍在pH值為3.9-4.5的酸性條件下，溫度在40℃以下，按0.04-0.1％的量加入由半纖維素酶與果膠酶以任何比例混合的酶進行保溫攪拌，浸提，隨后按0.01-1％的量加入沉淀助濾劑，經(jīng)靜置沉淀過濾得到富含維生素C的絞股藍總皂甙有效成份的提取液(中國專利申請?zhí)?3106940.8)。但該專利通篇未提及多糖的提取，且本發(fā)明與該專利提取條件不一樣pH值不同、溫度不同、酶的組成不同。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種在較低溫度下，提取率較高，適合工業(yè)化生產(chǎn)的提取絞股藍多糖的方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是取絞股藍全草，破碎，脫脂或不脫脂處理后，加多倍量的水，調(diào)PH值4.5-8.0，加入纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反應(yīng)5h，調(diào)PH值至中性，煮沸10分鐘，濾出提取液。再在濾渣中加多倍量的水，調(diào)PH值4.5-8.0，加入纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反應(yīng)5h，調(diào)PH值至中性，煮沸10分鐘，濾出提取液，如此提取濾渣共1-2次。合并幾次提取液，濃縮至加水總量的1/5-1/6體積，離心分離除去沉淀，得到澄清液。澄清液加入相當于總體積分數(shù)為70％的酒精，沉淀24h以上，離心分出多糖沉淀，丙酮脫水，真空干燥即得絞股藍粗多糖，絞股藍全草粗多糖收率為11％以上，多糖含量10％以上，再用常用的方法純化可得純絞股藍多糖；酒精溶液可分離絞股藍總皂甙。
在本發(fā)明中采用加入蛋白酶酶促反應(yīng)除蛋白，具體方法是蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取時與纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)一同加入、或在提取液中加入、或在幾次提取液合并后的濃縮液中加入，無論在哪一工序加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，均需在PH值為4.5-8.0，溫度為40℃-70℃下酶促反應(yīng)。
具體實施例方式
實施例一取破碎絞股藍全草150g，脫脂或不脫脂處理后，加多倍量的水，調(diào)PH值4.5-8.0，加入纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)和蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反應(yīng)5h，調(diào)PH值至中性，煮沸10分鐘，濾出提取液。再在濾渣中加多倍量的水，調(diào)PH值4.5-8.0，加入纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)和蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反應(yīng)5h，調(diào)PH值至中性，煮沸10分鐘，濾出提取液，如此提取濾渣共1-2次。合并幾次提取液，濃縮至加水總量的1/5-1/6體積，離心分離除去沉淀，得到澄清液。澄清液加入相當于總體積分數(shù)為70％的酒精，沉淀24h以上，離心分出多糖沉淀，丙酮脫水，真空干燥即得絞股藍粗多糖，再用常用的方法純化可得純絞股藍多糖；酒精溶液可分離絞股藍總皂甙。
實施例二取破碎絞股藍全草150g，脫脂或不脫脂處理后，加多倍量的水，調(diào)PH值4.5-8.0，加入纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反應(yīng)5h，調(diào)PH值至中性，煮沸10分鐘，濾出提取液。再在濾渣中加多倍量的水，調(diào)PH值4.5-8.0，加入纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反應(yīng)5h，調(diào)PH值至中性，煮沸10分鐘，濾出提取液，如此提取濾渣共1-2次。合并幾次提取液，加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，調(diào)PH值為4.5-8.0，溫度為40℃-70℃下酶促反應(yīng)2h-48h。濃縮至加水總量的1/5-1/6體積，離心分離除去沉淀，得到澄清液。澄清液加入相當于總體積分數(shù)為70％的酒精，沉淀24h以上，離心分出多糖沉淀，丙酮脫水，真空干燥即得絞股藍粗多糖，再用常用的方法純化可得純絞股藍多糖；酒精溶液可分離絞股藍總皂甙。
實施例三取破碎絞股藍全草150g，脫脂或不脫脂處理后，加多倍量的水，調(diào)PH值4.5-8.0，加入纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反應(yīng)5h，調(diào)PH值至中性，煮沸10分鐘，濾出提取液。再在濾渣中加多倍量的水，調(diào)PH值4.5-8.0，加入纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反應(yīng)5h，調(diào)PH值至中性，煮沸10分鐘，濾出提取液，如此提取濾渣共1-2次。合并幾次提取液，濃縮至加水總量的1/5-1/6體積，加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，調(diào)PH值為4.5-8.0，溫度為40℃-70℃下酶促反應(yīng)2h-48h。離心分離除去沉淀，得到澄清液。澄清液加入相當于總體積分數(shù)為70％的酒精，沉淀24h以上，離心分出多糖沉淀，丙酮脫水，真空干燥即得絞股藍粗多糖，再用常用的方法純化可得純絞股藍多糖；酒精溶液可分離絞股藍總皂甙。
權(quán)利要求
1.一種從絞股藍中提取絞股藍多糖的方法，其技術(shù)特征在于絞股藍在PH值為4.5-8.0水中，溫度為40℃-70℃下用纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)酶促反應(yīng)提取，每次提取后調(diào)PH值至中性，煮沸。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，采用加入蛋白酶酶促反應(yīng)除蛋白，具體方法是蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取時與纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)一同加入、或在提取液中加入、或在合并提取液的濃縮液中加入，無論在哪一工序加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，均需在PH值為4.5-8.0，溫度為40℃-70℃下酶促反應(yīng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物化學，特別是涉及從絞股藍中提取絞股藍多糖的方法。絞股藍在pH值為4.5－8.0水中，溫度為40℃－70℃下用纖維素酶(或含纖維素酶的混合酶)酶促反應(yīng)提取數(shù)次，合并提取液濃縮、去沉淀，澄清液加入酒精沉淀24h以上，分出多糖沉淀、脫水、真空干燥即得絞股藍多糖。在本發(fā)明中采用蛋白酶法除蛋白，蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取時與纖維素酶一同加入、或在提取液中加入、或在三次提取液的濃縮液中加入，無論在哪一工序加入蛋白酶，均需在pH值為4.5－8.0，溫度為40℃－70℃下酶促反應(yīng)。本發(fā)明提供了一種在較低溫度下，提取率較高，適合工業(yè)化生產(chǎn)的提取絞股藍多糖的方法。
文檔編號C08B37/00GK1490338SQ03157680
公開日2004年4月21日 申請日期2003年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月5日
發(fā)明者余愛農(nóng) 申請人:余愛農(nóng)