專利名稱：抗病毒藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗病毒藥物領(lǐng)域并且特別涉及HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。本發(fā)明提供新的化合物、含有這些化合物的藥用組合物和使用它們用于抑制HIV的方法。
背景技術(shù)：
在HIV的治療中，在HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制方面已經(jīng)顯示出臨床相應(yīng)活性的藥物當(dāng)中，大多數(shù)為核苷類似物例如AZT、ddI、ddC和D4T。這些核苷類似物并不是象所要求的那樣是特異性的，因此不得不以相對(duì)高的劑量水平給藥。在這些劑量水平下，核苷類似物引起相當(dāng)?shù)亩拘裕拗屏怂鼈兊拈L(zhǎng)期使用。
為克服這些特異性和毒性問題，已開發(fā)多種所述HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的非核苷類抑制劑。例如來自楊森公司的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑TIBO在納摩爾濃度下抑制HIV且未呈現(xiàn)出臨床顯著的毒性。TIBO和所述非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑奈韋拉平兩者迅速進(jìn)行患者II期臨床試驗(yàn)。然而，不久變得明顯的是這些非核苷類抑制劑體內(nèi)迅速選擇出其對(duì)抗通常劑量的所述各自抑制劑的HIV突變型。例如在奈韋拉平情況中，僅在治療四周后，患者血清中分離出的病毒與未治療患者中分離出的病毒相比較對(duì)所述藥物的敏感性低100倍(Drug Design & Discovery1992 8第255-263頁)。對(duì)已進(jìn)入臨床試驗(yàn)的其它非核苷類RT抑制劑已出現(xiàn)了相似的模式，即當(dāng)給予患者時(shí)，有體外活性的默克公司的L-697661和普強(qiáng)公司的delavirdine(U-87201)已迅速產(chǎn)生對(duì)抗HIV的突變型。盡管限于在嘗試延緩抗藥性的發(fā)展中的特定聯(lián)合給藥方案，具有上述缺點(diǎn)的奈韋拉平和delavirdine最近已經(jīng)登記用于臨床。
國(guó)際專利申請(qǐng)第WO95／06034號(hào)描述一系列新的脲衍生物，其呈現(xiàn)良好的體外抗HIV逆轉(zhuǎn)錄酶活性并在細(xì)胞培養(yǎng)中呈現(xiàn)良好的抑制HIV復(fù)制作用。然而，在WO95／06034中所述化合物的實(shí)際應(yīng)用受到它們不佳的藥代動(dòng)力學(xué)表現(xiàn)的阻礙。此外，與許多非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑一樣，在WO95／06034中的化合物在緩慢抗藥性發(fā)展的關(guān)鍵參數(shù)上和由其它的抗病毒藥方案產(chǎn)生的抗HIV突變型活性的良好模式上留有改進(jìn)的余地。
_berg等于1995年在Santa Fe舉行的ICAR上用墻報(bào)特別公開了以上提及的WO95／06034中并具有下式的外消旋化合物 此時(shí)，以上描述的化合物被看作比含有帶甲氧基／乙?；谋江h(huán)的硫脲的變體具有更小的意義。然而，與現(xiàn)有技術(shù)的具有良好的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和延長(zhǎng)的病毒抗藥性的時(shí)間的化合物相比較，我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)另外的取代模式證實(shí)它們具有改善的抗藥性模式。因此，本發(fā)明提供了將非核苷類抑制劑優(yōu)越的特異性與所有現(xiàn)有技術(shù)抑制劑缺乏的臨床實(shí)用性相結(jié)合的抑制劑。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明提供式I化合物 其中R1為鹵代；R2為C1-C3烷基；Rx為氰基或溴代；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽和前藥。
本發(fā)明另外提供包括式I化合物和為此藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的藥用組合物。本發(fā)明另外的方面提供了抑制HIV的方法，該方法包括將式I化合物給予HIV的患者。本發(fā)明也擴(kuò)展到治療中式I化合物的用途，例如在制備用于治療HIV感染的藥物中的用途。
在治療HIV引起的疾病中，所述式I化合物優(yōu)選以達(dá)到大約10至1000nM的血漿水平的量給藥并且更優(yōu)選為100至500nM。這相應(yīng)于依所述制劑的生物利用度而定的劑量比例為0．01至10mg／kg／天，優(yōu)選為0．1至2mg／kg／天。正常成人的一般劑量比例將為每天大約0．05至5g，優(yōu)選為每天一至四個(gè)劑量單位，0．1至2g例如500-750mg。
在權(quán)利要求1中特別關(guān)于藥代動(dòng)力學(xué)的優(yōu)選的化合物子集具有所述結(jié)構(gòu)IA 其中R1和R2如上定義，包括它們的藥學(xué)上可接受的鹽和前藥。
在式I中，特別易于形成前藥的另一個(gè)有利的化合物子集包括其中Rx為溴代的化合物。
R1優(yōu)選為氯代并且更優(yōu)選為氟代。適宜的R2基團(tuán)包括甲基、異丙基、正丙基并且優(yōu)選為乙基。
如上所述，所述環(huán)丙基環(huán)以順式構(gòu)型存在，允許存在兩個(gè)對(duì)映體，1S，2S和1R，2R(分別和非常規(guī)指明在SE980016-7和SE9800113-4中為2R，1S和2S，1R) 這些對(duì)映體每一個(gè)為有效的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物，盡管所述不同的對(duì)映體在生理性質(zhì)上能夠表現(xiàn)出細(xì)微的差異。例如所述1S，2S和1R，2R對(duì)映體在所述P450系統(tǒng)中能顯示出不同模式的代謝。其中Rx為氰基的化合物的1S，2S對(duì)映體為特別優(yōu)選，因?yàn)槠洫?dú)一無二地呈現(xiàn)出有能力避免所述P450系統(tǒng)中的關(guān)鍵成分。其它的逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物例如所述HIV蛋白酶抑制劑ritonavir與所述P450系統(tǒng)廣泛地相互作用，導(dǎo)致大量的不合乎需要的生理應(yīng)答，其包括廣泛改變其它聯(lián)合給予藥物的代謝。當(dāng)患者期待多年(如果不是十年的話)服用多種藥劑時(shí)，這與用于慢性感染所給予的藥物特別相關(guān)。
式Ⅰ化合物適宜的前藥包括式Ⅱ那些化合物 其中R1、R2和Rx如上定義，R3為H、(CHm)nNR5R6；R4為H、C1-C3烷基、(CHm)nNR5R6、(CHm)nC(=O)R5、(CHm)nOH、OR7、鹵代、CF3或CN；或者R3和R4一起定義為具有0-2個(gè)雜原子和／或0-2個(gè)不飽和鍵和／或0-2個(gè)取代基的5或6元稠環(huán)；R5為H、C1-C3烷基、C(=O)R7或1至4個(gè)氨基酸的肽；R6為H、C1-C3烷基；或者R5和R6一起定義為具有0或1個(gè)另外的雜原子和／或0-2個(gè)不飽和鍵和／或0-2個(gè)取代基的5或6元環(huán)；R7為H、C1-C12烷基、(CHm)nNR5R6；X和包含其的環(huán)定義為具有0至3個(gè)不飽和鍵和／或0至3個(gè)選自S、O和N的雜原子的5或6元環(huán)；m獨(dú)立為1或2；n獨(dú)立為0、1或2；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
其中Rx為氯代的化合物的相應(yīng)前藥形成本發(fā)明的另一個(gè)方面。
在下文指的是X-環(huán)的含有X的環(huán)結(jié)構(gòu)可為飽和的或具有1-3個(gè)不飽和鍵，包括具有芳香特征的環(huán)。優(yōu)選的X-環(huán)包括環(huán)己環(huán)或環(huán)己烯環(huán)或者更優(yōu)選為苯環(huán)。其它優(yōu)選的X-環(huán)包括嗎啉代或者更優(yōu)選為吡啶環(huán)?；蛘?，X-環(huán)可定義為五元環(huán)例如戊烯基或吡咯基。
在R3和R4結(jié)合形成含有任選雜原子的環(huán)的情況中，對(duì)X-環(huán)適宜的稠合環(huán)系統(tǒng)包括萘基、喹啉基、四氫異喹啉基、吲哚基或苯并咪唑環(huán)系統(tǒng)。在R4和R5結(jié)合形成環(huán)的情況中，對(duì)X-環(huán)的適宜的取代基環(huán)包括嗎啉代和哌啶子基。這些稠合的或取代基的環(huán)可以被鹵代、鹵代甲基、氨基如(CHm)nNR5R6、C(=O)NR5R6、羥基、羥基甲基、羧基、羧基甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基等任選取代。
X-環(huán)可與相鄰的羰基部分通過亞甲基或亞乙基隔開，其可以被取代基如鹵代、鹵代甲基、氨基、氨基甲基、羥基、羥基甲基、羧基、羧基甲基、C1-3烷基、C1-3烷氧基等任選取代。優(yōu)選X-環(huán)與所述羰基相鄰。
由X-環(huán)系統(tǒng)、R3、R4和如果存在的R5-R7表示的部分優(yōu)選具有一點(diǎn)堿性。這能通過選擇適宜的堿性雜環(huán)作為所述X-環(huán)，例如吡啶基或苯并吡啶基來達(dá)到?；蛘撸琑3至R7中的一個(gè)或多個(gè)可包含堿性取代基如伯、仲或叔胺、氨基酸等。
有利的R3和／或R4基團(tuán)包括NH2、N(CH2)2和NHC1-3烷基如NHCH3或NHCH2CH3。R3優(yōu)選處于相對(duì)于所述羰基和其任選的間隔基團(tuán)的間位，尤其是當(dāng)含有X的環(huán)為苯基或者當(dāng)含有X的環(huán)為雜芳香環(huán)例如吡啶-3-基時(shí)，R3處于對(duì)位。通常優(yōu)選的p和／或n的值為零，即各自的基團(tuán)不存在。
本發(fā)明優(yōu)選化合物包括(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-丁酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
其它優(yōu)選的化合物包括(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明其它合適的化合物包括(1R，2R)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-乙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
其它合適的化合物包括(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-氟，2-羥基，3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴代吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N[順式-2-(2-(6-氟，2-羥基，3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-乙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
另外優(yōu)選的化合物包括(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-丁?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)-6-氟-3-乙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
式Ⅰ化合物的適宜的藥學(xué)上可接受的鹽包括有機(jī)羧酸鹽，例如乙酸、乳酸、葡糖酸、枸櫞酸、酒石酸、馬來酸、蘋果酸、泛酸、羥乙磺酸、草酸、乳糖酸和琥珀酸，有機(jī)磺酸例如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對(duì)氯苯磺酸和對(duì)甲苯磺酸的鹽；并且包括無機(jī)酸例如鹽酸、氫碘酸、硫酸、磷酸和氨基磺酸鹽。
在保持采用HIV抑制劑通常實(shí)踐中，共同給予一至三種另外的抗病毒藥物以提供協(xié)同應(yīng)答和確?；パa(bǔ)抗性模式是有利的。這樣另外的抗病毒藥可包括AZT、ddI、ddC、D4T、3TC、abacavir、adefoviradefovir dipivoxil、雙-POC-PMPA、膦甲酸、羥基脲、赫斯特-拜耳HBY097、efavirenz、trovirdine、奈韋拉平、delaviridine、PFA、H2G、ABT606、DMP-450、loviride、ritonavir、沙奎那韋、indinavir、amprenavir(Vertex VX478)、nelfinavir等，一般的以反應(yīng)它們各自的活性和生物利用度的摩爾比例給藥。一般這樣的比例相對(duì)于式I化合物為25∶1至1∶25。
盡管對(duì)于所述活性劑而言可單獨(dú)給藥，但是其優(yōu)選作為藥用制劑的一部分存在。這樣的制劑將包括與一種或多種可接受的載體一起的以上定義的活性劑并且任選包括其它的治療成分。所述載體必須在與所述制劑的其它成分相容性方面是可接受的并且對(duì)接受者無害。
所述制劑包括那些適宜于口服、直腸、鼻、局部(包括頰和舌下)、陰道或非腸道(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈和透皮)給藥。所述制劑可便利地以單位劑型例如片劑和緩釋膠囊劑形式存在，并且可通過任何藥學(xué)領(lǐng)域熟知的方法進(jìn)行制備。
這樣的方法包括使以上定義的活性劑與所述載體混合在一起的步驟。所述制劑一般通過使活性劑與液體載體或粉末的固體載體或兩者皆有之均勻地和緊密地混合在一起，然后如果必要，使所述產(chǎn)物成形來制備。
在本發(fā)明中用于口服的制劑可作為獨(dú)立的單位如每一種含有預(yù)先確定量的所述活性劑的膠囊劑、扁囊劑或片劑，作為散劑或顆粒劑，作為所述活性劑在水溶性或非水溶性液體中的溶液劑或混懸劑或者作為水包油液體乳劑或油包水液體乳劑和作為大藥丸(bolus)等呈現(xiàn)。
關(guān)于口服給藥的組合物(例如片劑和膠囊劑)，術(shù)語適宜的載體包括媒介物例如普通的賦形劑，例如粘合劑如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮(povidone)、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥基丙基甲基纖維素、蔗糖和淀粉；填充劑和載體如玉米淀粉、明膠、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、高嶺土、甘露糖醇、磷酸二鈣、氯化鈉和藻酸；和潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂和其它的金屬硬脂酸鹽、硬脂酸、硅酮液、滑石粉、蠟類、油類和膠態(tài)二氧化硅。也能夠使用矯味劑例如薄荷、冬青油、櫻桃香精等。可要求加入著色劑以使所述劑型易于辨別。也可以本領(lǐng)域熟知的方法包衣片劑。
用于口服給藥的合適的載體包括以溶液劑、混懸劑或乳劑形式存在的，任選以常規(guī)方法包囊化的或以單位劑型存在的液體制劑。有利的制劑包括阿拉伯膠／吐溫／水、吐溫／水、丙二醇、具有10-20％乙醇的植物油(如花生油、紅花油、橄欖油等)、植物油／Capmul MGM、Capmul MCM／丙二醇、甲基纖維素／水、植物油／硬脂酰基單甘油酯、植物油／單不飽和脂肪酸甘油酯等。
片劑可通過任選與一種或多種輔助成分一起壓制或模壓來制備。通過在適宜的機(jī)械中，壓制與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑任選混合的，以自由流動(dòng)的形式如粉末或顆粒存在的所述活性劑可制備壓制片劑。通過在適宜的機(jī)械中，模壓用惰性液體稀釋劑濕潤(rùn)的粉末狀化合物的混合物可制備模壓片劑。所述片劑可任選被包衣或刻痕并且配制以便提供緩慢或控制釋放的所述活性劑。
適宜用于局部給藥的制劑包括含有在矯味的基質(zhì)通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠中的所述活性劑的糖錠劑、在惰性基質(zhì)例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中的所述活性劑的錠劑和含有在適宜的液體載體中的所述活性劑的漱口劑。
適宜用于皮膚局部給藥的制劑包括可作為含有活性劑和藥學(xué)上活性載體的軟膏劑、霜?jiǎng)?、凝膠劑和糊劑呈現(xiàn)。舉例說明的局部傳遞系統(tǒng)為含有所述活性劑的透皮貼劑。其它的局部制劑包括防腐藥簽，其在例如注射器或毛細(xì)管采血樣的侵襲性過程之前釋放所述活性劑到皮膚上。這樣的藥簽中和來自所述侵襲性過程流出的血液或血清中的HIV，由此幫助防止HIV經(jīng)針頭意外轉(zhuǎn)移至健康的護(hù)理工作者。這樣的藥簽可包括浸泡在揮發(fā)性溶劑例如乙醇中的所述活性劑溶液中的滅菌手術(shù)紗布?jí)|并且單個(gè)包裝在密封的香囊中。
用于直腸或陰道給藥的制劑可作為具有包括例如可可豆脂或水楊酸鹽的適宜的基質(zhì)的栓劑和陰道栓。其它的陰道制劑能夠作為棉塞劑、霜?jiǎng)⒛z劑、糊劑、泡沫劑或噴霧劑呈現(xiàn)，它們含有除了所述活性劑以外的作為在本領(lǐng)域是已知的適當(dāng)?shù)妮d體。
適宜用于鼻給藥的其中所述載體為固體的制劑包括具有粒子體積例如在所述范圍20至500微米的粗粉末，該粉末以其中服用鼻吸藥的方式給藥，即通過從舉至貼近鼻子的所述粉末容器迅速吸入給藥。適宜用于例如作為鼻噴霧劑或者作為鼻滴劑給藥的其中所述載體為液體的制劑包括所述活性劑的水或油溶液。
適宜用于非腸道給藥的制劑包括可含有抗氧化劑、緩沖液、殺菌劑和使所述制劑與所打算的接受者的血液等滲的溶質(zhì)的水和非水滅菌注射溶液劑和其可包括懸浮劑和增稠劑的水和非水滅菌混懸劑。所述制劑可以單位-劑量或多-劑量容器例如密封安瓿和小瓶呈現(xiàn)，并且可在凍干(冷凍干燥)條件下貯存，使用前僅需要立即加入所述滅菌液體載體例如注射用水。可由先前描述的那種滅菌散劑、顆粒劑和片劑制備臨時(shí)的注射溶液和懸浮液劑。
本發(fā)明另一方面提供用于制備式I化合物尤其是所述順式異構(gòu)體的方法，該方法包括下式化合物的庫(kù)爾提斯重排 隨后通過使下式化合物偶合和脫除保護(hù)，其中R1、R2和Rx如上定義并且PG為羥基保護(hù)基團(tuán) 本發(fā)明所述方法另外包括用活化的式III化合物?；牟襟E 其中R3、R4、X和n如上定義但任選被保護(hù)，并且R8為氫或常規(guī)活化基團(tuán)。或者本發(fā)明所述方法可另外包括用式IIIa化合物烷基化的步驟 其中n、R3、R4和X如上定義，但暴露的胺、羥基等取代基用常規(guī)保護(hù)基團(tuán)保護(hù)。
因此，式I對(duì)映體化合物可通過以下反應(yīng)流程制備 以上流程闡明其中Rx為氰基、R1為F和R2為乙基的本發(fā)明(1S，2S)化合物的制備，但是相應(yīng)的方法適合于其它的Rx、R1和R2的變體。適用于第四步驟的所述手性配體可包括例如下式化合物
為制備1R，2R對(duì)映體，使用鏡像手性配體。或者為形成外消旋體而省去所述手性配體。
其中p為0的式Ⅱ的前藥能夠通過用活化的式Ⅲ化合物?；舰窕衔飦砗铣桑?其中R3、R4、X和n如上定義但是任選被保護(hù)，并且R8氫或常規(guī)活化基團(tuán)。
活化的式Ⅲ化合物包括在偶合劑例如二環(huán)己基-碳二亞胺存在下的酰鹵、酸酐、活化酸的酯或者所述酸。代表性的活化酸衍生物包括酰氯、甲酸和乙酸衍生的混合酸酐、衍生于烷氧基羰基鹵例如異丁氧基羰基氯等的酸酐、N-羥基琥珀酰胺衍生的酯、N-羥基苯鄰二甲酰亞胺衍生的酯、N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰胺衍生的酯、2，4，5-三氯苯酚衍生的酯等。用于式Ⅲ化合物特別是任何取代基的胺的適宜的任選保護(hù)基團(tuán)包括那些打算保護(hù)氨基酸或肽的N-末端或者打算保護(hù)氨基基團(tuán)以在合成過程中對(duì)抗不合乎需要的反應(yīng)的基團(tuán)。常用的N保護(hù)基團(tuán)在Greene的“在有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)”(John Wiley &Sons，New York，1981)中公開，其通過引用結(jié)合到本文中。N-保護(hù)基團(tuán)包括?；鶊F(tuán)例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、三甲基乙?；⑹宥』阴；?、2-氯乙?；?-溴乙?；?、三氟乙酰基、三氯乙?；?、鄰苯二甲酰基、鄰硝基苯氧基乙?；?、α-氯丁?；?、苯甲?；?、4-氯苯甲?；?、4-溴苯甲?；?-硝基苯甲?；龋换酋；绫交酋；?、對(duì)甲苯磺酰基等，氨基甲酸酯形成基團(tuán)例如芐氧基羰基、對(duì)氯芐氧基羰基、對(duì)甲氧基芐氧基羰基、對(duì)硝基芐氧基羰基、2-硝基芐氧基羰基、對(duì)溴芐氧基羰基、3，4-二甲氧基芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、2-硝基-4，5-二甲氧基芐氧基羰基、3，4，5-三甲氧基芐氧基羰基、1-(對(duì)聯(lián)苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基芐氧基羰基、二苯甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、二異丙基甲氧基羰基、異丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基、環(huán)戊氧基羰基、金剛烷氧基羰基、環(huán)己氧基羰基、苯基硫代羰基等；烷基例如芐基、三苯基甲基、芐氧基甲基等；和甲硅烷基例如三甲基甲硅烷基等。有利的N-保護(hù)基團(tuán)包括甲酰基、乙?；⒈郊柞；?、三甲基乙?；⑹宥』阴；?、苯磺?；?、芐基、叔丁氧基羰基(BOC)和芐氧基羰基(Cbz)。
所述酰化反應(yīng)用常規(guī)酯化條件例如DMAP和DCC在溶劑例如二甲基甲酰胺或吡啶中進(jìn)行。任選保護(hù)基團(tuán)可以用如在以上Greene中綜合討論的常規(guī)技術(shù)除去，例如TFA、HCl(aq)／二氧六環(huán)或在催化劑存在下氫化，得到式Ⅱ化合物。
其中p為1的式Ⅱ化合物能夠通過如下方法制備在常規(guī)烷基化條件下，使式Ⅲ化合物與碘氯甲烷或者混合的二氯甲烷／碘氯甲烷反應(yīng)，形成式Ⅲa化合物 其中n、R3、R4和X如上定義，但是暴露的胺、羥基等取代基用常規(guī)保護(hù)基團(tuán)保護(hù)。然后，一般在堿性條件下，例如含有氫化鈉的有機(jī)溶 劑中，式Ⅲa化合物通過與NaI反應(yīng)優(yōu)選轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的碘代衍生物隨后與式Ⅰ化合物偶合。詳細(xì)描述本發(fā)明的這些方面現(xiàn)在將通過實(shí)施例闡明，僅參照以下非限制性實(shí)施例和附圖，其中；

圖1描述如同在生物實(shí)施例2中介紹的本發(fā)明化合物與現(xiàn)有技術(shù)化合物相比較的抗藥性發(fā)展速率與時(shí)間的關(guān)系。
圖2描述如同在生物實(shí)施例5中介紹的本發(fā)明化合物或者現(xiàn)有技術(shù)化合物口服給予大鼠后的時(shí)間與血漿水平的關(guān)系。
圖3描述以如同在生物實(shí)施例10中介紹的如表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振方法測(cè)定的本發(fā)明化合物與現(xiàn)有技術(shù)化合物相比較的逆轉(zhuǎn)錄酶的結(jié)合動(dòng)力學(xué)。
中間體的制備實(shí)施例13-[1，1-(亞乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯甲醛在室溫下，于5分鐘內(nèi)，向3-氟苯酚(22．4g，0．2mol)、吡啶(24ml，0．3mol)和二氯甲烷(200ml)的溶液中加入20ml(0．225mol)丙酰氯。該反應(yīng)放熱。將所述溶液攪拌另外30分鐘。加入二氯甲烷后，以飽和NaHCO3溶液和水洗滌所述有機(jī)相，經(jīng)MgSO4干燥并真空濃縮。得到33．8g(100％)3-氟-1-丙酰氧基苯。在150℃下，使該化合物與33．3g(0．25mol)AlCl3反應(yīng)10分鐘。在小心以水驟冷后，所述反應(yīng)混合物以乙醚提取三次。干燥(MgSO4)所述醚相并蒸發(fā)，得到29．5g(0．176mol，88％)重排產(chǎn)物。將該中間體溶于200ml丙酮和K2CO3(42，0．3mol)中并加入MeI(25ml，0．4mol)。在40℃下，將所述反應(yīng)混合物加熱12小時(shí)。過濾反應(yīng)混合物并蒸發(fā)丙酮。將殘余物溶于乙醚并以0．5MNaOH溶液和水洗滌所述醚相。干燥(MgSO4)并蒸發(fā)，得到31．2g(0．17mol，三步收率86％)的4-氟-2-甲氧基苯基乙基酮。
向4-氟-2-甲氧基苯基乙基酮(31．2g，0．171mol)、乙二醇(10．5ml，0．188mol)在苯(300ml)的溶液中加入1g對(duì)甲苯磺酸。在迪安-斯達(dá)克裝置中將所述反應(yīng)混合物回流大約12小時(shí)。在冷卻后，以1M NaOH溶液洗滌所述有機(jī)相幾次并干燥(Na2SO4和K2CO3)。蒸發(fā)溶劑并得到大約38g縮醛。根據(jù)毛細(xì)管GC其純度為88％和雜質(zhì)基本上為未反應(yīng)的酮。在-65℃和在氮?dú)夥障拢蛩隹s醛在THF(450ml)的溶液中滴加入128ml(0．32mol)的2．5M正丁基鋰。在保持所述溫度在大約-65℃的同時(shí)，加入DMF(25ml，0．32mol)在THF(50ml)中的溶液。使所述反應(yīng)混合物緩慢達(dá)到室溫并根據(jù)GC在大約30分鐘后未留下起始原料。在另一個(gè)1小時(shí)后，所述反應(yīng)混合物以飽和NH4Cl溶液驟冷并以乙醚提取三次。干燥(Na2SO4)后在硅膠柱(來自默克硅膠60，粒度0．04-0．063mm)上純化所述殘余物，以EtOAc1和己烷9洗脫，得到10g(25％)標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3)δ0．85(t，3H)，2．1(q，2H)，3．8-3．95(m，2H)，3．97(s，3H)，4．0-4．15(m，2H)，6．9(t，1H)，7．7-7．8(m，1H)，10．4(s，1H)。實(shí)施例23-[1，1-(亞乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯乙烯在室溫下和在氮?dú)夥罩?，向甲基三苯基溴化鏻(14．3g，40mmol)在THF(250ml)的懸浮液中加入16ml(40mmol)的2．5M正丁基鋰。然后向得到的溶液中加入在THF(30ml)中的3-[1，1-(亞乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯甲醛(10g，39．5mmol)。然后在室溫下將所述反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)并傾入到己烷和鹽水的混合物中。所述有機(jī)相以鹽水洗滌兩次和以水洗滌一次。蒸發(fā)溶劑后，通過以氧化鋁(來自默克的氧化鋁90acc．Brockmann)填充的漏斗過濾所述殘余物并以EtOAc1和己烷9洗脫，以便于除去所形成的三苯基氧化鏻。蒸發(fā)有機(jī)溶劑得到殘余物，最后將其在硅膠柱上純化，以EtOAc1和己烷9洗脫，得到6．9g(70％)如同通過毛細(xì)管GC測(cè)定的具有94．5％純度的標(biāo)題化合物。1H NMR(250 MHz，CDCl3)δ0．85(t，3H)，2．1(q，2H)，3．8(s，3H)，3．8-3．95(m，2H)，4．0-4．1(m，2H)，5．55-5．65(m，1H)，5．95-6．05(m，1H)，6．7-6．85(m，2H)，7．3-7．4(m，1H)。實(shí)施例3(1S，2R)-順式-2-(6-氟-2-甲氧基-3-丙?；交?環(huán)丙基羧酸如同Evans等在J．Am．Chem．Soc．1991，113，726-728中通常描述的那樣，使用通過三氟甲磺酸銅(I)(679mg，1．35mmol)和手性配體([2，2’-亞異丙基雙((4R)-4-叔丁基-2-噁唑啉)](794mg，2．7mmol)催化的不對(duì)稱環(huán)丙烷化反應(yīng)，由3-[1，1-(亞乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯乙烯(19．4g，69mmol)和重氮基乙酸乙酯(29ml，275mmol)制備(1S，2R)-順式-2-[3-(1，1-亞乙二氧基)乙基-6-氟(2-甲氧基-苯基)環(huán)丙基羧酸乙酯。在硅膠層析法后，得到9．4g(40．5％)所述乙酯。通過在手性柱上的HPLC測(cè)定，對(duì)映體過量為99％。將所述酯溶于150ml二氧六環(huán)中并且加入30ml的6M HCl。將所述反應(yīng)混合物攪拌過夜并在乙醚和鹽水之間分配。蒸發(fā)溶劑，得到19g粗品。將所述產(chǎn)物溶于甲醇(250ml)和水(75ml)中并加入6g(250mmol)的LiOH。將所述反應(yīng)混合物加熱至90℃反應(yīng)24小時(shí)并且蒸發(fā)大部分溶劑。將殘留的混合物酸化并以二氯甲烷提取三次。蒸發(fā)溶劑，得到11．2g的標(biāo)題化合物。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ1．15(t，3H)，1．59(t，2H)，2．10-2．17(m，1H)，2．22-2．32(m，1H)，2．91(q，2H)，3．80(st，3H)，6．82(t，1H)，7．44-7．50(m，1H)，11．30(寬s，1H)。實(shí)施例4(1R，2S)-順式-2-(6-氟-2-甲氧基-3-丙酰基苯基)環(huán)丙基羧酸如同對(duì)實(shí)施例3中所述酸描述的那樣，由3-[1，1-(亞乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯乙烯制備該化合物。所使用的手性配體為2，2’-亞異丙基雙((4S)-4-叔丁基-2-噁唑啉)。1H NMR(250Mhz，CDCl3)δ7．48(q，1H)，6．84(t，1H)，3．82(s，3H)，2．93(q，2H)，2．29(q，1H)，2．14(q，1H)，1．60(m，2H)，1．16(t，3H)。制備式I和II化合物實(shí)施例5(±)N-[順式-2-(2-(6-氟-2-羥基-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲在氮?dú)夥障拢瑢?-[1，1-(亞乙二氧基)丙基]-6-氟-2-甲氧基苯乙烯(32．4g，實(shí)施例2)和溴化銅-二甲硫復(fù)合物(0．30g)在二氯乙烷(200ml)中的溶液加熱至80℃。在7小時(shí)內(nèi)加入在二氯乙烷(600ml)中的重氮基乙酸乙酯(54ml)。加入完成后，結(jié)束加熱。在16小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑并在硅膠上純化所述殘余物，以乙酸乙酯和己烷洗脫，得到順式-酯(6．5g)。
將所述順式-酯(3．7g，10．9mmol)溶于乙醇(20ml)中并將KOH(1．8g，32．7mmol)溶于水(10ml)中。合并所述溶液并加熱至回流3小時(shí)。加入水(30ml)并以己烷(20ml)洗滌所述溶液兩次。在冰浴上冷卻水相并以稀HCl酸化。以甲苯提取所述溶液三次。干燥(MgSO4)甲苯相并蒸發(fā)，得到1．9g的(±)-順式-2-[3-(1，1-亞乙二氧基丙基)-6-氟-2-甲氧基苯基]環(huán)丙基羧酸。
將三乙胺(59μl，0．43mmol)和二苯基磷?；B氮化物(92μl，0．43mmol)加入到所述酸(120mg，0．39mmol)在干燥甲苯的溶液中。在室溫下，將所述溶液攪拌1小時(shí)，然后加熱至120℃。在1小時(shí)后，加入2-氨基-5-氰基吡啶(51mg，0．43mmol)。維持加熱另外3小時(shí)。在16小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑，所述殘余物溶于二氯甲烷(30ml)中并以稀HCl洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)，得到152mg。將所述產(chǎn)物溶于二氧六環(huán)中并加入HCl(6N，1ml)。在2小時(shí)后，蒸發(fā)所述混合物，使其溶于二氯甲烷(25ml)中，以水(10+10ml)洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)，得到117mg。所述殘余物在硅膠上純化，以乙酸乙酯和己烷洗脫，得到37mg的2-甲氧基苯基中間體產(chǎn)物。
在-60℃下，將三溴化硼在二氯甲烷中的1M溶液(194μl，0．194mmol)加入到所述2-甲氧基苯基中間體(37mg，0．097mmol)在二氯甲烷中的溶液中。在10分鐘后，撤除冷卻浴并繼續(xù)攪拌2小時(shí)。以二氯甲烷稀釋所述溶液，以稀NaHCO3和水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。所述殘余物由MeCN重結(jié)晶，得到17mg標(biāo)題化合物。1H NMR(250MHz，DMSO-d6)δ1．07-1．16(m，4H)，1．41-1．50(m，1H)，1．91-2．01(m，1H)，3．06-3．19(m，3H)，6．86(dd，lH)，7．43(d，lH)，7．80-7．90(m，1H)，7．97-8．08(m，2H)，8．32(d，1H)，9．83(s，1H)，13．2(d，1H)。實(shí)施例6(1R，2R)-N-(順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基)-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲將三乙胺(0．85ml，6．1mmol)和二苯基磷?；B氮化物(1．72g，6．1mmol)加入到在實(shí)施例4中制備的所述酸(1．47g，5．5mmol)在干燥甲苯(15mL)中的溶液中。在室溫下，于氬氣氛中將所述溶液攪拌30分鐘，然后加熱至120℃。在15分鐘后，加入2-氨基-5-氰基吡啶(0．99g，8．9mmol)在DMF(3mL)中的溶液。繼續(xù)加熱4小時(shí)。蒸發(fā)甲苯，所述混合物以乙醚(100mL)和乙酸乙酯(50mL)稀釋并以1M HCl、H2O和鹽水洗滌。干燥(Na2SO4)所述有機(jī)層并濃縮。所述殘余物以硅膠快速柱層析法純化，以乙酸乙酯／正己烷1∶10至1∶1洗脫，得到1．6g(66％)所述2-甲氧基苯基中間體。
在-72℃下，于氬氣氛中將三氯化硼在CH2Cl2中的1M溶液(11．0mL，11．0mmol)加入到所述2-甲氧基苯基中間體(1．40g，3．66mmol)在CH2Cl2(80mL)中的溶液中。在10分鐘后，撤除冷卻浴并繼續(xù)攪拌1小時(shí)15分鐘。所述溶液以CH2Cl2稀釋并以NaHCO3水溶液、H2O和鹽水洗滌。干燥(NaSO4)有機(jī)層并濃縮。來自乙腈／H2O 1∶1的沉淀給出0．62g純的標(biāo)題化合物。將其殘余物濃縮并通過以乙酸乙酯／正己烷1∶10至1∶1和乙酸乙酯洗脫的層析法，然后從乙腈結(jié)晶，給出0．2g標(biāo)題產(chǎn)物。其產(chǎn)量為0．82g(61％)。如同通過在手性柱上的HPLC測(cè)定的那樣，其ee為95％。[α]22d-171．2°(c=0．50，CH2Cl2)。1H NMR(250Mhz，CDCl3)δ13．35(d，1H)，10．02(brs，1H)，9．40(brs，1H)，8．11(s，1H)，7．71(m，2H)，7．00(m，1H)，6．61(t，1H)，3．21(m，1H)，3．01(q，2H)，2．03(m，1H)，1．55(m，1H)，1．29(m，4H)。實(shí)施例7(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲在室溫下，于氬氣氛中向在實(shí)施例6中描述的化合物(1．64g，4．4mmol)、BOC-保護(hù)的3-氨基苯甲酸(1．6g，6．6mmol)和4-二甲基氨基吡啶(269mg，2．2mmol)在20ml二氯甲烷和10ml的DMF中的溶液中加入1．36g(6．6mmol)DCC。將所述反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)。小心蒸發(fā)溶劑并使用作為溶劑的己烷／乙酸乙酯1∶1，在硅膠上純化殘余物，得到2．6g的BOC-保護(hù)的標(biāo)題產(chǎn)物。在0℃下，將所述產(chǎn)物加入到75ml三氟乙酸中。然后在0℃下將所述混合物攪拌1小時(shí)。小心真空除去溶劑。在乙酸乙酯和飽和碳酸鉀之間分配所述殘余物。干燥所述有機(jī)相并蒸發(fā)。使用作為洗脫劑的乙酸乙酯／己烷4∶1，在硅膠柱上純化殘余物，得到1．03g為游離堿的標(biāo)題化合物。以在乙醚中的3ml的1M HCl處理該中間體并得到標(biāo)題化合物0．84g。HPLC純度為大約97％。1H NMR釋出的胺(250MHz，CDCl3)δ1．09 (t，3H)，1．2-1．3(m，1H)，1．4-1．5(m，1H)，1．95-2．00(m，1H)，2．83(q，2H)，3．15-3．25(m，1H)，3．85(s，2H)，6．90(dd，2H)，7．09(t，1H)，7．20-7．27(m，1H)，7．44-7．46(m，1H)，7．56(dd，1H)，7．65-7．77(m，2H)，8．13(d，1H)，9．1(寬s，1H)，9．6(寬s，1H)。實(shí)施例8(1S，2S)-N-(順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙?；交?-環(huán)丙基)-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲在氮?dú)夥障?，將三乙?670μl，4．8mmol)和二苯基磷酰基疊氮化物(1．05ml，4．9mmol)加入到在實(shí)施例3中制備的所述酸(1．2g，4．5mmol)在干燥甲苯(10ml)中的溶液中。在室溫下，將所述溶液攪拌30分鐘，然后加熱至120℃。在15分鐘后，加入2-氨基-5-氰基吡啶(0．80g，6．7mmol)在二甲基甲酰胺(1．5ml)中的溶液并繼續(xù)加熱4小時(shí)。所述溶液以乙醚稀釋并以1M鹽酸洗滌。干燥(MgSO4)所述有機(jī)層并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠快速層析法純化(梯度洗脫，開始以正己烷／乙酸乙酯1∶1，以純的乙酸乙酯完成)，得到稍微不純的2-甲氧基苯基衍生物(0．93g)。如同以上描述的那樣，重復(fù)層析法，得到所述純的2-甲氧基苯基衍生物(0．70g，41％)。
在-60℃下，將三氯化硼在二氯甲烷中的1M溶液(5．5ml，5．5mmol)加入到所述2-甲氧基苯基中間體(700mg，1．8mmol)在二氯甲烷中的溶液中。在10分鐘后，撤除冷卻浴并繼續(xù)攪拌2小時(shí)。所述溶液以二氯甲烷稀釋并以碳酸氫鈉水溶液洗滌。干燥(MgSO4)所述有機(jī)層并濃縮，將殘余物通過硅膠快速層析法(梯度，正己烷∶乙酸乙酯2∶1、1∶1、1∶2，乙酸乙酯∶甲醇(8∶1)純化，得到標(biāo)題化合物(500mg，74％)。[α]D22+165．0°(C=0．5，CH2Cl2)。1H NMR(DMSO-d6)δ1．10-1．16(m，4H，CH3，CH2-環(huán)丙基)，1．45(dd，1H，CH2-環(huán)丙基)，1．96(q，1H，CH-環(huán)丙基)，3．10-3．19(m，3H，CH-環(huán)丙基，CH2)，6．85(t，1H，Ar)，7．43(d，1H，Ar)，7．86-8．07(m，3H)，8．32(s，1H)，9．83(s，1H)，13．22(s，1H，Ar-OH)。實(shí)施例9(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲從在實(shí)施例6中描述的化合物開始，并使用在實(shí)施例7中描述的方法，得到作為鹽酸鹽的標(biāo)題產(chǎn)物。1H NMR(250MHz，DMSO-d6)δ0．94(t，3H)，0．9-1．0(m，1H)，1．3-1．4(m，1H)，1．85-1．95(m，1H)，2．91(q，2H)，3．05-3．15(m，1H)，7．4-7．5(m，2H)，7．6-7．7(m，1H)，7．9-8．1(m，5H)，8．08(d，1H)，9．85(s，1H)。實(shí)施例10(1S，2S)-N-(順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙?；交?-環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲在室溫下，于氬氣氛中將(1S，2R)-順式-2-(6-氟-2-甲氧基-3-丙?；交?環(huán)丙基羧酸(3．0g，11．3mmol)、三乙胺(1．58ml，11．3mmol)和二苯基磷?；B氮化物(2．44ml，11．3mmol)溶于干燥甲苯(8ml)中。在室溫下，將所述反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，之后將溫度升至120℃并維持另外15分鐘。然后，加入2-氨基-5-溴吡啶(2．08g，12mmol)并在120℃下將所述反應(yīng)混合物攪拌2．5小時(shí)。加入苯和1M HCl溶液并將所述有機(jī)相蒸發(fā)。使用己烷／乙酸乙酯1∶1作為洗脫劑，在硅膠上純化殘余物。收集適當(dāng)?shù)牟糠植⒌玫?．0g(1S，2S)-N-(順式-2-(6-氟-2-甲氧基-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲。將所述化合物溶于二氯甲烷(100ml)中，將所述溶液保持在氬氣氛下并冷卻至-65℃。加入三氯化硼(30ml在二氯甲烷中的1M溶液，30mmol)并使所述反應(yīng)混合物達(dá)到室溫過夜。加入二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉。蒸發(fā)有機(jī)相并使用乙酸乙酯∶甲醇9∶1作為洗脫液，在硅膠上純化殘余物。得到1．96g(41％)標(biāo)題化合物。分析計(jì)算值C 51．2，H 4．1，N 9．9。實(shí)測(cè)值C 51．5，H 3．7，N 9．5。Mp198-199℃。[α]D22+149．8°(c=0．50，CH2Cl2)。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ1．28(t，3H)，1．52-1．62(m，2H)，1．94-2．05(m，1H)，2．97-3．06(m，2H)，3．17-3．20(m，1H)，6．60(t，1H)，6．76(寬s，1H)，7．57(dd，1H)，7．67-7．72(m，1H)，7．83(寬s，1H)，8．53(寬s，1H)，13．32(d，1H)。實(shí)施例11(1R，2R)-N-(順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲使用手性配體2，2’-亞異丙基雙(4S)-4-叔丁基-2-嗯唑啉(從Aldrich得到)，如同在實(shí)施例3中描述的那樣，對(duì)在實(shí)施例2中描述的化合物實(shí)施不對(duì)稱環(huán)丙烷化反應(yīng)。然后把得到的(1R，2S)-順式-2-(6-氟-2-甲氧基-3-丙?；交?環(huán)丙基羧酸以類似于實(shí)施例10的方法使用，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(250MHz，DMSO-d6)δ1．05-1．15(m，1H)，1．12(t，3H)，1．40-1．50(m，1H)，1．90(q，1H)，3．00-3．10(m，1H)，3．12(q，2H)，6．82(t，1H)，7．18(d，1H)，7．78(dd，1H)，7．88(寬s，1H)，7．95-8．05(m，1H)，9．41(寬s，1H)，13．20(s，1H)。[α]D22-153．8°(c=0．50，CH2Cl2)。實(shí)施例12(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲在室溫下，于氬氣氛中向?qū)嵤├?0的化合物(633mg，1．5mmol)、BOC-保護(hù)的3-氨基苯甲酸(475mg，2mmol)和4-二甲基氨基吡啶(123mg，1mmol)在20ml二氯甲烷∶DNF 1∶1中的溶液中加入415mg(2mmol)的DCC。將所述反應(yīng)混合物攪拌36小時(shí)。小心蒸發(fā)溶劑并使用作為溶劑的己烷∶乙酸乙酯1∶1，在硅膠上純化殘余物，得到811mg的BOC-保護(hù)的標(biāo)題產(chǎn)物。將該產(chǎn)物溶于二氧六環(huán)(20ml)中并加入10ml的6M HCl，并將所述混合物攪拌過夜。小心真空除去溶劑。以乙醇和乙醚處理殘余物，得到255mg作為HCl鹽的標(biāo)題產(chǎn)物。所述HPLC純度為大約93％。1H-NMR(250MHz，CD3OD)δ1．15(t，3H)，1．3-1．4(m，1H)，1．5-1．6(m，1H)，2．05-2．15(m，3H)，3．04(q，2H)，3．23-3．27(m，1H)，7．16(d，1H)，7．34(t，1H)，7．85-7．93(m，2H)，8．05(dd，1H)，8．19(寬d，1H)，8．26(寬s，1H)，8．35-8．37(m，1H)，8．42-8．46(m，1H)。實(shí)施例13(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-L-丙氨酰氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲參見例如Bodanszky的“肽合成的實(shí)踐”第二版，Springer，使用標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)方法從TCE-保護(hù)的3-氨基苯甲酸制備起始化合物BOC-保護(hù)的3-L-丙氨酰氨基苯甲酸。如同在實(shí)施例12中描述的那樣，使該化合物與實(shí)施例10的化合物反應(yīng)，得到作為HCl鹽的標(biāo)題產(chǎn)物。1H-NMR(250MHz，釋出的胺，CDCl3)δ1．10 (t，3H)，1．15-1．25(m，1H)，1．4-1．5(m，1H)，1．42(d，2H)，1．76(寬s，2H)，1．88-1．97(m，1H)，2．84(q，2H)，3．1-3．2(m，1H)，3．59-3．67(m，1H)，6．78(d，1H)，7．09(t，1H)，7．85-7．93(m，2H)，8．08(d，1H)，8．11(s，1H)，8．29(寬s，1H)，9．05(寬s，1H)，9．70(寬s，1H)。實(shí)施例14(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(4-吡啶基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-溴吡啶-2-基)脲以類似實(shí)施例12的方法，使實(shí)施例10的產(chǎn)物與異煙酸縮合，得到作為HCl鹽的標(biāo)題產(chǎn)物。1H-NMR(250MHz，CD3OD)δ9．26(d，2H)，8．83(d，2H)，8．14(m，2H)，8．04(dd，1H)，7．39(t，1H)，7．10(d，1H)，3．38(m，1H)，3．08(m，2H)，2．15(m，1H)，1．62(m，1H)，1．38(m，1H)，1．13(t，3H)。實(shí)施例15(1S，2S)-N-{順式-2-[2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交鵠環(huán)丙基}-N’-(5-溴吡啶-2-基)脲以類似于實(shí)施例12的方法，使實(shí)施例10的產(chǎn)物與3-二甲基氨基苯甲酸縮合，得到作為HCl鹽的標(biāo)題產(chǎn)物。1H-NMR(250MHz，CD3OD)δ8．61(s，1H)，8．45(d，1H)，8．15-8．03(m，4H)，7．92(t，1H)，7．34(t，1H)，7．10(d，1H)，3．48(s，6H)，3．28(m，1H)，3．00(m，2H)，2．11(m，1H)，1．58(m，1H)，1．38(m，1H)，1．14(t，3H)。實(shí)施例16(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基甲基苯甲酰氧基甲氧基)-5-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲以四丁基氫氧化銨溶液(1M在MeOH中)處理3-叔丁氧基羰基酰氨基甲基苯甲酸至pH9并蒸發(fā)。將殘余物溶于二氯甲烷中并以氯碘甲烷處理過夜。以水洗滌所述溶液并蒸發(fā)，得到粗品3-叔丁氧基羰基酰氨基甲基苯甲酰氧基甲基氯。用少量碘化鈉作為催化劑，該物料與實(shí)施例10的鈉鹽(在DMF中用氫化鈉制備)反應(yīng)。在2小時(shí)反應(yīng)后，以乙酸驟冷所述溶液并以二氯甲烷稀釋，以水洗滌并蒸發(fā)。經(jīng)以乙酸乙酯／己烷1∶2洗脫，在硅膠上純化所述粗品產(chǎn)物，并以三氟乙酸處理所述純的物料并蒸發(fā)，得到作為固體的標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽。1H-NMR(CDCl3)δ1．1(t，3H)，1．3-1．5(m，2H)，2．2(q，1H)，2．9(m，2H)，3．2(bs，1H)，4．2(s，2H)，5．9(q，2H)，6．8(d，2H)，7．0(t，1H)，7．3-8．1(m，9H)。實(shí)施例17(1S，2S)-N-(順式-2-(2-(3-氨基-4-甲基苯甲酰氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲按照在實(shí)施例12中方法，使來自實(shí)施例10的(1S，2S)-N-(順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲與3-叔丁氧基羰基酰氨基-4-甲基苯甲酸縮合。將其產(chǎn)物以三氟乙酸處理并蒸發(fā)，得到作為固體的標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽。1H-NMR(CDCl3)δ1．1(t，3H)，1．3-1．5(m，2H)，1．9(q，1H)，2．4(s，3H)，2．9(q，2H)，3．1(BS，1H)，7．1(t，1H)，7．4(d，1H)，7．8(m，1H)，7．9(m，2H)，8．1(s，1H)，8．3(s，1H)。實(shí)施例18(1S，2S)-N-(順式-2-(2-(3-乙基氨基苯甲酰氧基)-6-氟-3-丙?；交?環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲按照在實(shí)施例12中方法，將實(shí)施例10的化合物與3-(N-乙基-叔丁氧基羰基酰氨基)苯甲酸縮合，并將其產(chǎn)物以三氟乙酸處理并蒸發(fā)，得到作為固體的標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽。1H NMR(CDCl3)δ1．1(t，3H)，1．3-1．6(m，5H)，2．9(q，2H)，3．1(bs，1H)，3．5(q，2H)，7．1(t，1H)，7．2(bs，1H)，7．6(t，1H)，7．7-7．8(m，2H)，7．9(d，1H)，8．1(s，1H)，8．2(d，1H)，8．4(s，1H)。實(shí)施例19(1S，2S)-N-(順式-2-(2-quinolo-4-基氧基-6-氟-3-丙?；交?環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲按照實(shí)施例12中方法，將實(shí)施例10的化合物與4-喹啉酸縮合，并將其產(chǎn)物溶于三氟乙酸中并蒸發(fā)，得到作為固體的標(biāo)題化合物的乙酸鹽。1H NMR(CDCl3)δ1．1(t，3H)，1．2(m，1H)，1．5(m，1H)，1．9(m，1H)，2．8(q，2H)，3．2(bs，1H)，6．7(d，1H)，7．2(t，1H)，7．5(m，1H)，7．7(t，1H)，7．8-8．0(m，2H)，8．2(d，1H)，8．3(d，1H)，8．8(d，1H)，9．1(m，2H)，9．2(bs，1H)。實(shí)施例20(1S，2S)-N-(順式-2-(3-氨基甲基-2-甲基苯甲酰氧基)-氟-3-丙?；交?環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲按照實(shí)施例12中方法，將實(shí)施例10的化合物與3-叔丁氧基羰基酰氨基-2-甲基苯甲酸縮合。將其產(chǎn)物以三氟乙酸處理并蒸發(fā)，得到作為固體的標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3)δ1．1(t，3H)，1．1-1．3(m，2H)，1．9(m，1H)，2．5(s，3H)，2．9(q，2H)，3．1(bs，1H)，4．2(s，2H)，7．0-7．2(m，2H)，7．4(d，1H)，7．6-7．7(m，2H)，7．8-8．0(m，2H)，8．2(bs，2H)。實(shí)施例21(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-(4-氨基甲基苯基羰基氧基)-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲通過向4g4-氰基苯甲酸在200ml MeOH中的溶液中加入6．5gDCC制備4-(叔丁氧基羰基酰氨基甲基)苯甲酸。將所述混合物在室溫下攪拌70小時(shí)，過濾除去沉淀出的二環(huán)己基脲并在真空下濃縮濾液，得到7g粗產(chǎn)物。將所述甲基酯溶于500ml MeOH中并加入9．6gCoCl26H2O。將所述混合物以NaBH4分次處理。5小時(shí)后把所述反應(yīng)混合物濃縮并除去沉淀。濾液以150ml的lM HCl(aq．)酸化并以2×100ml的CH2Cl2提取。該酸性的水相以100ml的25％NH3(aq．)處理，以3×100ml CH2Cl2提取，以Na2SO4干燥并濃縮，得到2．64g棕色的油。
將該油溶于30ml的二氧六環(huán)／水混合物(2∶1)中并以1．5g NaOH(s)處理20小時(shí)。除去溶劑并加入40ml叔丁醇／水混合物(1∶1)。加入3．7g二碳酸二叔丁基酯后將該溶液攪拌24小時(shí)，然后加入更多的水并用2×50ml己烷提取該混合物。將所述水相以NaHSO4酸化(pH～1．5-2．0)并以3×75ml乙醚提取。將該合并的提取液以50ml鹽水洗滌，以Na2SO4干燥并蒸發(fā)，得到作為白色固體的中間體4-(叔丁氧基羰基酰氨基甲基)苯甲酸。
將4-(叔丁氧基羰基酰氨基甲基)苯甲酸和來自實(shí)施例10的(1S，2S)-N-(順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙?；交?-環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲縮合，并使用實(shí)施例12中描述的方法除去BOC-保護(hù)基團(tuán)，得到作為鹽酸鹽的標(biāo)題產(chǎn)物。1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ0．98(t，3H)，1．05-1．20(m，1H)，1．31-1．49(m，1H)，1．69-1．90(m，1H)，2．65(q，2H)，3．33-3．49(m，1H)，4．31(寬s，2H)，7．02-7．22(m，2H)，7．35-7．49(m，1H)，7．50-7．68(m，2H)，7．69-7．83(m，2H)，8．08(d，1H)，8．37(寬s，1H)。實(shí)施例22(1S，2SR)-N-[順式-2-(6-氟-2-(N-甲基吲哚-5-羰基氧基)-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲i)N-甲基吲哚-5-羧酸的制備在室溫下，將0．1g吲哚-5-羧酸與2當(dāng)量的三氟甲磺酸甲酯在1mlDMF中混合。5小時(shí)后蒸發(fā)溶劑并記錄1H-NMR1H-NMR(250MHz，DMSO-d6)δ2．76(s，3H)，6．57(寬s，1H)，7．46-7．50(m，2H)，7．75(dd，1H)，8．23-8．29(m，2H)，11．56(寬s，1H)。ii)制備標(biāo)題化合物使用實(shí)施例12中描述的方法，將N-甲基吲哚-5-羧酸和來自實(shí)施例10的(1S，2S)-N-(順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙?；交?-環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲縮合，得到作為鹽酸鹽的標(biāo)題產(chǎn)物。1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ1．08(t，3H)，1．15-1．25(m，1H)，1．39-1．50(m，1H)，1．92-2．08(m，1H)，2．89(q，2H)，2．90(s，3H)，3．20-3．35(m，1H)，6．55(寬s，1H)，6．65(寬d，1H)，7．11(t，1H)，7．20-7．29(m，2H)，7．41(dd，1H)，7．72-7．83(m，2H)，7．95(dd，1H)，8．51(寬s，1H)，9．25(寬s，1H)，9．43(寬s，1H)。實(shí)施例23(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-(吲哚-4-羰基氧基)-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲使用實(shí)施例12中描述的方法，將吲哚-4-羧酸和來自實(shí)施例10的(1S，2S)-N-(順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙?；交?-環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲縮合，得到作為鹽酸鹽的標(biāo)題產(chǎn)物。1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ1．07(t，3H)，1．17-1．30(m，1H)，1．31-1．47(m，1H)，1．90-2．10(m，1H)，2．89(q，2H)，3．02-3．18(m，1H)，6．75(寬d，1H)，7．00-7．35(m，4H)，7．55(dd，1H)，7．60(d，1H)，7．79(dd，1H)，7．89(d，1H)，8．10(d，1H)，9．27(寬d，2H)。實(shí)施例24(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-(3-氨基-4-氯苯基羰基氧基)-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲使用實(shí)施例12中描述的方法，將3-氨基-4-氯苯甲酸和來自實(shí)施例10的(1S，2S)-N-(順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙?；交?-環(huán)丙基)-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲縮合，得到作為鹽酸鹽的標(biāo)題產(chǎn)物。1H-NMR(250MHz，釋出的胺，CDCl3)δ1．10(t，3H)，1．17-1．30(m，1H)，1．42-1．52(m，1H)，1．88-2．01(m，1H)，2．88(q，2H)，3．19-3．31(m，1H)，4．25(寬s，2H)，6．80(寬d，1H)，7．09(t，1H)，7．35 (t，1H)，7．48-7．60(m，2H)，7．66(d，1H)，7．73-7．88(m，2H)，9．25(寬s，2H)。實(shí)施例25(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-(吡啶-3-基羰基氧基)-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲 將實(shí)施例8的化合物(50g，0．68mmo1)、N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(0．168g，0．81mmol)、煙酸(0．1g，0．81mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(0．041g，0．34mmol)的干燥混合物溶于CH2Cl2(5ml)和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(2．5ml)中。然后在室溫下攪拌該混合物。20小時(shí)后，過濾所述混合物并真空干燥，然后再溶解在最小量的二氯甲烷中并過濾。將該澄清的溶液在硅膠上蒸發(fā)并通過層析法(乙酸乙酯)純化，得到標(biāo)題化合物(0．168g，50％)。通過從氯仿-己烷重結(jié)晶得到分析樣品。1H NMR(CDCl3)9．89(brs，1H)，9．41(m，1H)，9．33(brs，1H)，8．86(dd，1H)，8．46(dt，1H)，8．18(d，1H)，7．80(dd，1H)，7．71(dd，1H)，7．49(ddd，1H)，7．13(t，1H)，6．92(d，1H)，3．18(m，1H)，2．88(q，2H)，1．99(m，1H)，1．52(m，1H)，1．25(m，1H)，1．13(t，3H)。實(shí)施例26(1R，2R)-N-[順式-2-(6-氟-2-(吡啶-3-基羰基氧基)-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲 將實(shí)施例6的化合物(0．1g，0．27mmol)、N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(0．067g，0．33mmol)和煙酸(0．037g，0．3mmol)的干燥混合物懸浮于二氯甲烷(2ml)中。滴加最少的DMF以得到相當(dāng)澄清的溶液。然后加入4-(二甲基氨基)吡啶(0．016g，0．14mmol)。在室溫下，攪拌該反應(yīng)混合物。20小時(shí)后，真空蒸發(fā)溶劑并將粗品殘余物溶于鹽酸水溶液(pH1-2)中并過濾。然后以碳酸氫鈉使所述澄清溶液呈稍微堿性并過濾所沉淀出的產(chǎn)物。通過層析法(二氯甲烷-甲醇，15∶1)純化，得到標(biāo)題化合物0．072g(56％)。1H NMR(CDCl3)9．85(brs，1H)，9．42(s，1H)，9．35(brs，1H)，8．86(d，1H)，8．47(dt，1H)，8．18(d，1H)，7．81(dd，1H)，7．71(dd，1H)，7．48(dd，1H)，7．13(t，1H)，6．92(d，1H)，3．19(m，1H)，2．91(q，2H)，1．99(m，1H)，1．49(m，1H)，1．24(m，1H)，1．13(t，3H)。實(shí)施例27(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-(N-乙基，N-Boc-氨基)苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲 將實(shí)施例8的化合物(0．37g，1．0mmol)、N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(0．25g，1．2mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0．06g，0．5mmol)和3-(N-乙基-N-丁氧基羰基)氨基苯甲酸(0．320g，1．2mmol)(通過3-氨基苯甲酸的還原性胺化，隨后保護(hù)所述氨基來制備)溶于二氯甲烷(8ml)和DMF(3ml)中。然后在室溫下將所述混合物攪拌。在18小時(shí)后，真空除去溶劑并將粗品產(chǎn)物再溶于二氯甲烷中且過濾。所述澄清溶液在硅膠上蒸發(fā)并通過層析法(乙酸乙酯-己烷，3∶2)純化，得到足夠純的標(biāo)題化合物(0．24g，39％)。1H NMR(CDCl3)10．0(brs，2H)，8．20(d，1H)，8．06(d，1H)，8．03(m，1H)，7．77(dd，1H)，7．70(dd，1H)，7．48(m，2H)，7．10(t，1H)，6．95(d，1H)，3．71(q，2H)，3．14(m，1H)，2．90(q，2H)，1．95(q，1H)，1．44(s，10H)，1．2-1．09(m，7H)。實(shí)施例28(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲 將三氟乙酸(5ml)加入到實(shí)施例27的化合物(0．120mg，0．19mmol)在二氯甲烷(10ml)中攪拌著的溶液中。在室溫下，將所述混合物放置1-2小時(shí)。然后蒸發(fā)至干。在HPLC(制備型C-18柱，40％水在乙腈中)上純化所述粗品產(chǎn)物，得到0．045g(30％)作為三氟乙酸鹽的標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3)11．08(brs，2H)，9．83(brs，1H)，9．36(brs，1H)，8．23-8．08(m，3H)，7．82-7．54(m，4H)，7．13(t，1H)，7．02(d，1H)，3．42(q，2H)，3．20(m，1H)，2．83(q，2H)，1．94(q，1H)，1．46(m，1H)，1．34(t，3H)，1．24(m，1H)，1．06(t，3H)。實(shí)施例29(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲 將實(shí)施例8的化合物(0．1g，0．27mmol)、N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(0．067g，0．33mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0．016g，0．14mmol)和3-二甲基氨基苯甲酸(0．054g，0．39mmol)溶于二氯甲烷(3ml)和DMF(1ml)中。在室溫下將所述反應(yīng)物放置16小時(shí)。然后真空除去溶劑并將固體再溶于二氯甲烷中且過濾。通過層析法(乙酸乙酯-己烷，2∶1)隨后經(jīng)HPLC(C-18柱，0．1％TFA在乙腈中)純化，得到作為三氟乙酸鹽的標(biāo)題化合物0．1g(58％)。1H NMR(CDCl3)8．38-8．23(m，3H)，7．92-7．69(m，4H)，7．15(t，1H)，7．05(m，1H)，3．32(s，6H)，3．26(m，1H)，2．89(q，2H)，2．02(m，1H)，1．55-1．27(m，2H)，1．10(t，3H)。實(shí)施例30(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-L-纈氨酰氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲 a)3-(N-Boc-L-纈氨酰)氨基甲基苯甲酸酯 類似Villaneuve和Chan的方法，四面體快報(bào)，1997，第37卷第6489-6492頁制備該中間體。在氮?dú)夥障?，將N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酸(2．17g，10mmol)和六氯丙酮(1．32g，5mmol)在二氯甲烷(20ml)中的混合物攪拌并冷卻至-78℃。滴加入在二氯甲烷(10ml)中的三苯基膦(2．6g，10mmol)并把所述混合物攪拌30分鐘。然后滴加入在二氯甲烷(10ml)中的3-氨基苯甲酸甲酯(1．5g，10mmol)，隨后加入在二氯甲烷中的三乙胺(1g，10mmol)。然后使所述反應(yīng)物達(dá)到室溫，之后真空下蒸發(fā)溶劑。經(jīng)硅膠層析法(己烷-乙酸乙酯，3∶1)純化殘余物，隨后從乙酸乙酯-己烷中重結(jié)晶，得到0．7g(28％)以上描述的純的中間體。1H NMR(CDCl3)8．30(brs，1H)，8．07(d，1H)，7．85-7．75(m，2H)，7．37(t，1H)，5．15(d，1H)，4．05(m，1H)，3．91(s，3H)，2．26(m，1H)，1．48(s，9H)，1．03(dd，6H)。b)3-(N-Boc-L-纈氨酰)氨基苯甲酸 將步驟a)中間體(0．65mg，1．8mmol)懸浮于甲醇(6ml)和水(2ml)中。加入氫氧化鋰(0．11g，3．9mmol)并在室溫下將所述混合物攪拌24小時(shí)。然后加入水(10ml)并把其體積減少至一半。以10-20ml乙酸乙酯洗滌所述水溶液，然后以鹽酸水溶液酸化。以乙酸乙酯(2×20ml)提取，干燥并真空蒸發(fā)，得到以上描述的純的中間體0．524g(84％)。1H NMR(CD3OD)8．23(t，1H)，7．84(d，1H)，7．76(d，1H)，7．42(t，1H)，6．70(d，1H)，4．00(m，1H)，2．08(m，1H)，1．45(a，9H)，1．00(d，6H)。c)(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-N-Boc-L-纈氨酰氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲 將實(shí)施例8的化合物(0．23g，0．62mmol)、N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(0．153g，0．74mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0．038g，0．3mmol)和步驟b)中間體(0．25g，0．74mmol)溶于二氯甲烷(9ml)和DMF(3ml)中。在室溫下，將所述反應(yīng)物放置19小時(shí)。真空除去溶劑并將固體重新溶于二氯甲烷中且過濾。通過層析法(乙酸乙酯-己烷，1∶1)純化，得到0．029g(67％)純的N-保護(hù)標(biāo)題化合物。1H NMR(CD3OD)8．56(t，1H)，8．27(s，1H)，7．98-7．82(m，4H)，7．53(t，1H)，7．23(t，1H)，7．10(d，1H)，3．98(d，1H)，3．09(m，1H)，2．90(q，2H)，2．06-1．93(m，2H)，1．44(m，10H)，1．18-0．94(m，10H)。d)(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-L-纈氨酰氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲 將N-保護(hù)的步驟c)的化合物(0．16g，0．23mmol)和苯硫酚(0．054g，0．46mmol)溶于二氯甲烷(6ml)中并冷卻至0℃。加入三氟乙酸(6ml)并使所述混合物達(dá)到室溫且放置1小時(shí)。蒸發(fā)至干，隨后經(jīng)層析法(二氯甲烷-甲醇，10∶1．5)純化，得到0．150g(90％)作為TFA鹽的標(biāo)題化合物。1H NMR(CD3OD)8．60(s，1H)，8．25(d，1H)，8．0-7．85(m，4H)，7．53(t，1H)，7．21(t，1H)，7．09(d，1H)，5．0(m，1H)，3．12(m，1H)，2．96-2．87(m，2H)，2．20(m，1H)，1．97(m，1H)，1．46(m，1H)，1．09-1．03(m，10H)。實(shí)施例31(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-乙基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲 a)6-乙基氨基煙酸 通過與實(shí)施例35步驟a)中描述的相同的方法，從6-氯煙酸和乙基胺制備該中間體。以1-丁醇替代乙酸乙酯用于提取。重結(jié)晶(MeOH-CHCl3)得到0．53g(50％)。1H NMR(DMSO-d6)12．1(brs，1H)，8．54(d，1H)，7．77(dd，1H)，7．15(t，1H)，6．45(dd，1H)，3．33(m，2H)，1．14(t，3H)。b)(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-乙基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲 將實(shí)施例8的化合物(0．1g，0．27mmol)、6-乙基氨基煙酸(0．084g，0．54mmol)、N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(0．127g，0．62mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0．016g，0．13mmol)溶于DMF(3ml)中并在環(huán)境溫度下放置。在19小時(shí)后，真空除去溶劑并把殘余物懸浮于二氯甲烷中且過濾。除去溶劑并經(jīng)層析法(乙酸乙酯-己烷，2∶1)純化所述粗品產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物(0．063g，45％)。1H NMR(CDCl3)9．85(brs，1H)，9．25(brs，1H)，8．91(d，1H)，8．18-8．02(m，3H)，7．76-7．67(m，2H)，7．65(t，1H)，6．96(d，1H)，6．37(d，1H)，5．40(m，1H)，3．37(m，2H)，3．19(m，1H)，2．8(q，2H)，1．98(m，1H)，1．49(m，1H)，1．28(t，3H)，1．15(m，1H)，1．10(t，3H)。實(shí)施例32(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(5-溴吡啶-3-基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲 將5-溴煙酸(0．065g，0．33mmol)、實(shí)施例8的化合物(0．1g，0．27mmol)N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(0．127g，0．62mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0．016g，0．13mmol)溶于二氯甲烷(4ml)中并在環(huán)境溫度下放置。在19小時(shí)后，將所述混合物過濾并真空除去溶劑。經(jīng)層析法(乙酸乙酯-己烷，1∶1)純化所述粗品產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物(0．040g，27％)。1H NMR(CDCl3)9．80(brs，1H)，9．30(d，1H)，9．17(brs，1H)，8．89(d，1H)，8．57(dd，1H)，8．57(dd，1H)，7．80(dd，1H)，7．70(dd，1H)，7．12(t，1H)，6．83(d，1H)，3．25(m，1H)，2．87(q，2H)，2．00(q，H)，1．50(m，1H)，1．24(m，1H)，1．12(t，3H)。實(shí)施例33(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲 a)6-氨基煙酸甲酯 將6-氨基煙酸(2g，22mmol)溶于甲醇(10ml)和硫酸(0．5ml)中。將所述溶液回流過夜并真空蒸發(fā)溶劑。將其粗品產(chǎn)物溶于水-EtOAc中并經(jīng)碳酸氫鈉水溶液使之堿化。通過EtoAc提取，得到以上描述的純的中間體(2．3g，70％)。1H NMR(DMSO-d6)8．51(dd，1H)，7．81(dd，1H)，6．66(brs，2H)，6．45(dd，1H)，3．77(s，3H)。b)6-丁氧基羰基氨基煙酸甲酯 將步驟a)中間體(0．75g，4．9mmol)溶于THF(5ml)中。滴加入雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉(5ml，2M在THF中)。在室溫下攪拌30分鐘。加入在THF(8ml)中的二碳酸二叔丁基酯(1．1g，5mmol)。在氮?dú)夥障?，將所述反?yīng)混合物放置過夜。然后將所述溶液真空蒸發(fā)并使之溶于EtOAc(40ml)和0．1M鹽酸(100ml)中。分層并以EtOAc(40ml)提取所述水相兩次，然后以碳酸氫鈉水溶液將其稍微堿化并以EtOAc(20ml)再提取一次。合并所述有機(jī)部分，經(jīng)硫酸鈉干燥并經(jīng)層析法(EtOAc-己烷，1∶4)純化，得到以上描述的純的中間體(0．5g，40％)。1H NMR(CDCl3)8．93(dd，1H)，8．62(s，1H)，8．26(dd，1H)，8．06(dd，1H)，3．91(s，3H)，1．60(s，9H)。c)6-叔丁氧基羰基氨基煙酸 將步驟c)中間體(0．4g，1．6mmol)懸浮于甲醇(4ml)和水(1．25ml)中。加入LiOH(0．1g，4mmol)。在室溫下，將所述漿化物放置48小時(shí)。然后將澄清的溶液真空濃縮并溶于水中，以乙酸酸化(pH=4-5)。以EtOAc提取，得到以上描述的純的中間體(0．27g，70％)。1H NMR(DMSO-d6)9．98(s，1H)，8．74(d，1H)，8．18(d，1H)，8．88(d，1H)，1．49(s，9H)。d)(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-叔丁氧基羰基氨基-吡啶-3-基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲 將實(shí)施例8的化合物(0．150g，0．41mmol)、步驟c)中間體(0．17g，0．49mmol)、N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(0．1g，0．49mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0．06g，0．49mmol)溶于DMF(2ml)中。在室溫下，將所述混合物攪拌過夜，然后放入50℃油浴中2小時(shí)。在硅膠上蒸發(fā)并經(jīng)層析法純化，得到N-保護(hù)的標(biāo)題化合物(0．048g，20％)。1H NMR(CDCl3／CD3OD)9．02(s，1H)，8．43(dd，1H)，8．22(d，1H)，8．10(d，1H)，7．81-7．75(m，2H)，7．15(t，1H)，7．08(d，1H)，3．15-3．05(m，1H)，2．90(q，2H)，1．96(m，1H)，1．56(s，9H)，1．50-1．40(m，1H)，1．25-1．09(m，4H)。e)(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲 將步驟d)中間體(0．048g，0．08mmol)溶于二氯甲烷(2ml)中。加入三氟乙酸(1ml)并把所述混合物攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)，得到粗品標(biāo)題化合物。將所述產(chǎn)物溶于乙醚(2ml)中并放置過夜。濾出形成的白色沉淀，得到作為三氟乙酸鹽的純的標(biāo)題化合物(0．032g，65％)。1H NMR(CD3OD／CDCl3)8．71(d，1H)，8．29(dd，1H)，8．16(t，1H)，8．82．7．74(m，2H)，7．20 7．10(m，2H)，6．96(d，1H)，3．25(m，1H)，2．86(m，2H)，1．96(m，1H)，1．52-1．43(m，1H)，1．24-1．19(m，1H)，1．09(t，3H)。實(shí)施例34(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-氯吡啶-3-基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲 將實(shí)施例8的化合物(0．15g，0．4mmol)、6-氯煙酸(0．076g，0．49mmol)、N，N’二環(huán)己基碳二亞胺(0．1g，0．49mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0．024g，0．2mmol)溶于二氯甲烷(4ml)中。將所述混合物放置過夜，真空蒸發(fā)，經(jīng)層析法(EtOAc-己烷，1∶2)純化，得到標(biāo)題化合物(0．067g，32％)。1H NMR(CDCl3)9．77(brs，1H)，9．18(brd，2H)，8．39(dd，1H)，8．14，7．79(dd，1H)，7．71(dd，1H)，7．46(d，1H)，7．13(t，1H)，6．92(d，1H)，3．25(m，1H)，2．88(q，2H)，2．00-1．90(m，1H)，1．55-1．46(m，1H)，1．25-1．22(m，1H)，1．11(t，3H)。實(shí)施例35(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-二甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲 a)6-二甲基氨基煙酸 在130℃下，在密封壓力容器中將6-氯煙酸(0．5g，3．17mmol)和二甲基胺(10ml，40％在水中)加熱6小時(shí)。然后除去溶劑并以水提取殘余物，并把其pH調(diào)至4-5。以二氯甲烷提取，得到以上描述的純的中間體(0．1g，20％)。1H NMR(CDCl3)8．87(dd，1H)，8．04(dd，1H)，6．49(dd，1H)，3．18(s，6H)。b)(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-二甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲將實(shí)施例8的化合物(0．13g，0．3mmol)、步驟a)中間體(0．05g，0．3mmol)、N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(0．09g，0．4mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0．02g，0．18mmol)溶于二氯甲烷(3ml)和DMF(1ml)中。將所述混合物放置過夜，真空蒸發(fā)并經(jīng)層析法(EtOAc-己烷，2∶1)純化，得到標(biāo)題化合物(0．06g，39％)。1H NMR(CDCl3)10．10(brs，1H)，9．29(brs，1H)，8．18(d，1H)，8．12(dd，1H)，7．76-7．60(m，2H)，7．06(t，1H)，6．95(d，1H)，6．62(d，1H)，3．18(m，7H)，2．83(q，2H)，2．10-1．99(m，1H)，1．51-1．42(m，1H)，1．19(m，1H)，1．09(t，3H)。實(shí)施例36(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-O-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲-O-4-羥基苯甲酸酯a)4-芐氧基苯甲酸向4-羥基苯甲酸(6．9g，50mmole)在150ml的DMF中的溶液中加入叔丁醇鉀(12．34g，110mmole)，并在室溫下將所述混合物攪拌一小時(shí)。加入芐基溴(20．5g，120mmole)并在室溫下將所述混合物攪拌兩天。減壓下蒸發(fā)所述混合物并加入100ml的1，4-二氧六環(huán)和氫氧化鈉(6．0g，150mmole)在50ml水中的溶液。將所述混合物回流兩小時(shí)，冷卻并減壓下蒸發(fā)。加入水并以乙酸使所述混合物酸化。將所述產(chǎn)物過濾，以冷水洗滌并干燥。產(chǎn)量10．2g=89％。b)4-芐氧基苯甲酰氯向4-芐氧基苯甲酸(2．28g，10mmole)在20ml干燥二氯甲烷中的混合物中加入5滴DMF和2．5ml亞硫酰氯。將所述混合物回流三小時(shí)并減壓下蒸發(fā)。產(chǎn)量2．45g=100％。c)(1S，2H)-N-[順式-2-(6-氟-2-O-3-丙?；交?環(huán)丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶-2-基)脲-O-4-芐氧基苯甲酸酯向(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙?；交?環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲(184mg，0．5mmole)在3ml的DMF中的溶液中加入叔丁醇鉀(78．5mg，0．7mmole)，并在室溫下將所述混合物攪拌一小時(shí)。加入4-芐氧基苯甲酰氯(185mg，0．75mmole)在1ml的DMF中的溶液并在室溫下把所述混合物攪拌過夜。加入40ml乙酸乙酯并以水將所述有機(jī)相洗滌四次。以硫酸鈉干燥所述溶液并減壓下蒸發(fā)。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離。產(chǎn)量180mg=62％。1H-NMR(DMSOδ-6)0．92(m，4H)，1．31(m，1H)，1．85(m，1H)，2．82(m，2H)，3．06(m，1H)，5．26(s，2H)，7．20(m，2H)，7．38-8．12(m，11H)，8．38(m，1H)。d)(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)]脲-O-4-羥基苯甲酸酯的合成在室溫和正常壓力下，將(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-O-3-丙?；交?環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲-O-4-芐氧基苯甲酸酯(170mg，0．29mmole)在15ml乙酸乙酯和15ml甲醇中的溶液用10％披鈀炭(30mg)氫化三次。過濾催化劑并以乙酸乙酯和甲醇洗滌，并減壓下將所述溶液蒸發(fā)。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法分離。產(chǎn)量100mg=70％。1H-NMR(DMSOδ-6)0．93(m，4H)，1．32(m，1H)，1．88(m，1H)，2．85(m，2H)，3．05(m，1H)，6．92(m，2H)，7．38(m，2H)，8．00(m，4H)，8．38(m，1H)。實(shí)施例37(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-O-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶基)]脲-O-亞甲基-4-羥基苯甲酸酯a)4-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酸甲酯向4-羥基苯甲酸甲酯(6．85g，45mmole)在80ml DMF中的溶液中加入叔丁醇鉀(5．6g，51mmole)并在室溫下將所述混合物攪拌一小時(shí)。加入4-甲氧基芐基氯(8．3g，52mmole)并在室溫下將所述混合物攪拌過夜。減壓下將所述混合物蒸發(fā)并加入200ml乙酸乙酯。以水將所述有機(jī)相洗滌四次，以硫酸鈉干燥并減壓下蒸發(fā)。產(chǎn)量12．3g=100％。1H-NMR(CDCl3)3．82(s，3H)，3．88(s，3H)，5．03(s，2H)，6．96(m，4H)，7．36(d，2H)，7．98(d，2H)。b)4-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酸向4-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酸甲酯(12．2g，44．8mmole)在50ml的1，4-二氧六環(huán)中的溶液中加入氫氧化鋰(2．15g，89．6mmole)溶液并在60℃下把所述混合物攪拌過夜。減壓下蒸發(fā)所述混合物并加入5％乙酸。將所述產(chǎn)物過濾，以水洗滌并干燥。產(chǎn)量10．1g=87％。1H-NMR(DMSOδ-6)3．74(s，3H)，5．08(s，2H)，6．92(d，2H)，7．06(d，2H)，7．36(d，2H)，7．90(d，2H)。c)4-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酸氯甲酯向4-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酸(5．16g，20mmole)在100ml的1，4-二氧六環(huán)中的溶液中加入40％氫氧化四丁基銨(14．27g，22mmole)溶液并在室溫下將所述混合物攪拌2小時(shí)。減壓下將所述混合物蒸發(fā)并與1，4-二氧六環(huán)共同蒸發(fā)兩次且與甲苯共同蒸發(fā)兩次。將所述干燥的產(chǎn)物溶于60ml二氯甲烷中并加入碘氯甲烷(35．3g，200mmole)。在室溫下，將所述溶液攪拌兩天并減壓下蒸發(fā)。加入大約100ml乙酸乙酯并以水洗滌所述有機(jī)相兩次。以硫酸鈉干燥并減壓下蒸發(fā)。經(jīng)硅膠柱層析法純化其產(chǎn)物。產(chǎn)量4．48g=73％。1H-NMR(CDCl3)3．83(s，3H)，5．06(s，2H)，5．94(s，2H)，7．00(m，4H)，7．36(d，2H)，8．05(d，2H)。d)4-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酸碘甲酯向4-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酸氯甲酯(0．77g，2．5mmole)在15ml干燥丙酮中的溶液中加入碘化鈉(1．87g，12．5mmole)并在室溫下將所述混合物攪拌過夜。減壓下將所述混合物蒸發(fā)并以乙酸乙酯／水提取。以5％硫代硫酸鈉溶液洗滌所述有機(jī)相，以硫酸鈉干燥并減壓下蒸發(fā)。產(chǎn)量0．86g=86％。1H-NMR(CDCl3)3．84(s，3H)，5．05(s，2H)，6．14(s，2H)，6．98(m，4H)，7．36(d，2H)，8．00(d，2H)。e)(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)環(huán)丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶基)脲-O-亞甲基-4-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酸酯向(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙酰基苯基)環(huán)丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶基)脲(368mg，1mmole)在5ml的DMF中的溶液中加入60％氫化鈉在礦物油中的懸浮液(44mg，1．1mmole)并在室溫下將所述混合物攪拌一小時(shí)。加入4-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酸碘甲酯(0．84g，2．1mmole)在2ml的THF中的溶液并在室溫下將所述混合物攪拌過夜。加入50ml乙酸乙酯并以水把所述有機(jī)相洗滌四次，以硫酸鈉干燥并減壓下蒸發(fā)。經(jīng)硅膠柱層析法分離所述產(chǎn)物。產(chǎn)量525mg=82％。1H-NMR(CDCl3)0．91(m，3H)，1．32(m，1H)，1．60(m，1H)，2．04(m，1H)，2．90(m，2H)，3．20(m，1H)，3．82(s，3H)，5．04(s，2H)，5．84-6．06(m，2H)，6．91-8．18(m，13H)。f)(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)環(huán)丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶基)]脲-O-亞甲基-4-羥基苯甲酸酯向(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟-2-O-3-丙酰基苯基)環(huán)丙基]-N’-[2-(5-氰基吡啶基)脲-O-亞甲基-4-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酸酯(100mg，0．156mmole)在4ml二氯甲烷中的溶液中加入TFA(0．5ml)并在室溫下將所述溶液攪拌一小時(shí)。減壓下將所述溶液蒸發(fā)并經(jīng)硅膠柱層析法分離產(chǎn)物。產(chǎn)量45mg=55％。1H-NMR(DMSOδ-6)0．84(m，3H)，1．10(m，1H)，1．48(m，1H)，2．12(m，1H)，2．80(m，2H)，3．19(m，1H)，5．85-6．02(m，2H)，6．84(m，2H)，7．18(m，1H)，7．46(m，2H)，7．74(m，2H)，8．04(m，2H)，8．38(m，1H)。實(shí)施例39(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲 通過以實(shí)施例31相同的方法，由6-甲基氨基煙酸(0．050g，0．33mmol)和實(shí)施例8的化合物(0．1g，0．27mmol)制備該化合物。經(jīng)層析法(乙酸乙酯)純化所述粗品產(chǎn)物(含有標(biāo)題化合物和未反應(yīng)的原料)，得到0．030g(22％)標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3)9．8(brs，1H)，9．25(brs，1H)，8．90(d，1H)，8．20(d，1H)，8．10(m，1H)，7．72(m，2H)，7．08(t，1H)，6．9(d，1H)，6．37(d，1H)，3．20(m，1H)，2．95(d，3H)，2．85(q，2H)，1．95(m，1H)，1．48(m，1H)，1．10(t，3H)。生物實(shí)施例1抗性模式檢測(cè)本發(fā)明化合物用于抗多種HIV株的抗病毒活性，所述的多種HIV株包括野生型和使用從在Schinazi等的綜述中，InternationalAntiviral News，第4卷，第6期，95-107頁(1996)描述的其它非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑所出現(xiàn)的已知突變型。結(jié)果呈現(xiàn)在表1中。表1

所述測(cè)試包括在MT-4細(xì)胞中以XTT誘導(dǎo)的多種測(cè)定(Weislow等，JNat Cancer Inst 1989，第81卷第8期，577頁等)，這包括在50％人血清存在下表明有助于蛋白結(jié)合的作用的測(cè)定。ED50以μg／ml呈現(xiàn)?；谟?jì)算的治療指數(shù)(SI)的原始數(shù)據(jù)也被呈現(xiàn)，其定義在相應(yīng)于無HIV細(xì)胞產(chǎn)生50％毒性的劑量除以所述ED50。來自所述1995 ICARSanta Fe的現(xiàn)有技術(shù)的化合物如上描述。
顯而易見地是本發(fā)明化合物特別是所述對(duì)映體具有比迄今已知的化合物明顯更低的ED50值，包括抗已知未定的突變型K103N和Y181C以及L100I和雙重突變型L100I、Y181C的值。此外，所述對(duì)映體的治療指數(shù)比現(xiàn)有技術(shù)的化合物高5至10倍。在HIV療法的內(nèi)容中將觀察到這些結(jié)果，即使患者生命的其余部分不能顯著抗眾所周知的原病毒HIV，那么患者也能夠期待長(zhǎng)期服藥治療。因此，需要大的SI以避免蓄積毒性，同時(shí)適當(dāng)給藥以維持治療壓力并且防止自發(fā)產(chǎn)生對(duì)HIV株的抗性。生物實(shí)施例2時(shí)間與抗性在微量滴定板上，以5-10 TCID50的HIV-1IIIB感染每孔2×104MT4細(xì)胞。使用每濃度8對(duì)，以大約ED50的濃度加入受試化合物。孵育6天后測(cè)量在10μl上清液中的RT活性。
在隨后每周一次培養(yǎng)物傳代之后，進(jìn)行以下過程使在顯示＞50％的未處理感染細(xì)胞的RT活性的受試化合物的濃度(SIC，初始抑制濃度)下產(chǎn)生的病毒傳代給新鮮的MT4細(xì)胞。將來自所述八對(duì)試驗(yàn)的每一個(gè)試驗(yàn)的15μl上清液轉(zhuǎn)移至無受試化合物的細(xì)胞(對(duì)照組)中和含有相同濃度受試化合物的細(xì)胞中，并且另兩種分別具有五倍高的濃度。(參見以下表2)。
當(dāng)允許病毒在最高非毒性濃度(5-40μM)下生長(zhǎng)時(shí)，收集2-4平行孔并且擴(kuò)展給出物料用于結(jié)果的分析和交叉方式抗性。表2允許病毒生長(zhǎng)所抑制的病毒產(chǎn)生125×SIC125×SIC25×SIC→25×SIC 5×SIC25×SIC5×SIC→無化合物25×SIC 5×SIC→ 無化合物5×SICSICSIC→ 無化合物SIC→無化合物傳代(pass)1 傳代2 傳代3 傳代4 傳代5圖1描繪了對(duì)于本發(fā)明化合物(實(shí)施例8)病毒抗性生長(zhǎng)對(duì)時(shí)間的曲線。也描繪了以上提到的最近的Santa Fe化合物的相應(yīng)曲線。顯而易見的是本發(fā)明化合物顯示顯著低的抗藥性發(fā)展的速率。生物實(shí)施例3P450代謝在以人細(xì)胞色素P450 cDNA(超體(supersomes))Gentest公司W(wǎng)oburn USA轉(zhuǎn)染的桿狀病毒感染的昆蟲細(xì)胞中，測(cè)定本發(fā)明化合物經(jīng)過人細(xì)胞色素系統(tǒng)P450的主要同種型的代謝。
在過度表達(dá)多種細(xì)胞色素P450同種型的超體的存在下，在0．5、5和50μM的濃度下，一式兩份孵育所述受試化合物，該同種型包括CYP1A2+P450還原酶、CYP2A6+P450還原酶、CYP2C9-Arg144+P450還原酶、CYP2C19+P450還原酶、CYP2D6-Val374+P450還原酶和CYP3A4+P450還原酶。孵育液含有固定濃度(例如50皮摩爾)的細(xì)胞色素P450并且進(jìn)行1小時(shí)以上。通過UV HPLC色譜測(cè)量母體化合物的消失來測(cè)定在所述受試化合物代謝中所涉及的給定同種型。
將所述三種濃度測(cè)試7．5分鐘后，所述壽命保留百分比圖提示CYP3A4、1A2、2C19和2A6參與實(shí)施例7化合物的代謝。相似構(gòu)象的P450同種型也參與現(xiàn)有技術(shù)的Santa Fe鹵代吡啶基化合物的代謝。
令人驚奇地是對(duì)實(shí)施例8化合物，未記錄到明顯的具有任何異構(gòu)體的P450代謝，暗示所述化合物在體內(nèi)穩(wěn)定并且聯(lián)合給予藥物的代謝干擾的可能性是相應(yīng)低的。生物實(shí)施例4藥物代謝動(dòng)力學(xué)監(jiān)控來自口服給予式II的前藥的式I化合物在大鼠中的釋放。以相應(yīng)于0．027mmol／kg的劑量，將實(shí)施例7化合物溶解在丙二醇媒介中并且口服給予成對(duì)禁食的雄性Sprague-Dawley大鼠。在指明的時(shí)間間隔，從植入canis頸靜脈的導(dǎo)管采集0．2ml的血，離心并冷凍用于以后的分析。釋放的式I藥物(實(shí)施例6)經(jīng)HPLC測(cè)試。將含有40-100μl的每個(gè)血漿樣品的等分試樣與等體積乙腈混合(10秒，Vibrofex)。將所述樣品離心(2分鐘，14000RPM)并把30μl的上清液注射進(jìn)入如下的HPLC系統(tǒng)。預(yù)柱RP-18，7μM，15×3．2mm柱 YMC基質(zhì)，3μM，150×3mm流動(dòng)相 60％乙腈在3mM乙酸銨中，pH6．4流速0．4ml／min檢測(cè)UV，250nm表3

在表3中，很清楚，口服給予式Ⅱ的前藥體內(nèi)釋放臨床上顯著量的式Ⅰ化合物。生物實(shí)施例5-8ⅰ)預(yù)備在藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)施例中使用的大鼠為體重大約200-250g的雄性Sprague-Dawley大鼠。在實(shí)驗(yàn)之前，所述大鼠至少禁食16小時(shí)，但是自由接近水。在所述實(shí)驗(yàn)的前一天，使用的Efrane_、笑氣和氧的混合物麻醉所述大鼠。將導(dǎo)管插入大鼠頸靜脈。在實(shí)驗(yàn)?zāi)翘?，記錄大鼠的體重。在口服給予藥物或靜脈給藥注射進(jìn)入到所述頸的背部之前，短暫麻醉所述動(dòng)物。每種物質(zhì)給予兩只大鼠。
在口服給藥之前，猴子禁食12小時(shí)，但是自由接近水。借助嬰兒鼻胃喂飼管給予所述受試化合物。在6小時(shí)后，所述猴子得到蘋果。ⅱ)劑量制備把在以下實(shí)施例中描述的適當(dāng)量的所述活性成分溶解／懸浮在丙二醇溶液中或10％阿拉伯膠和1％吐溫在水的溶液中，以用于口服給藥。將化合物溶于DMSO中以用于靜脈給藥。ⅲ)血樣采集在藥物給予前，采集血樣(大鼠一般為0．6ml，猴子為2ml)并在在藥物給予后于指定的時(shí)間間隔內(nèi)(如圖所示)，如同前者取得血樣。從股靜脈輕叩使猴血進(jìn)入含有EDTA的試管中。將血樣離心，以1％SDS／64°／20分鐘中和感染的藥物并將血漿于-20℃下貯存。ⅳ)生物分析如下制備血漿樣品將40-100μl的血漿與等體積乙腈混合(10秒，Vibrofex)。將所述樣品離心(2分鐘，14000RPM)并把30μl的上清液注射進(jìn)入如下的HPLC系統(tǒng)。預(yù)柱RP-18，7μM，15×3．2mm柱 YMC基質(zhì)，3μM，150×3mm流動(dòng)相 60％乙腈在3mM乙酸銨中，pH6．4流速0．4ml／min檢測(cè)UV，250nm生物實(shí)施例5與最接近的現(xiàn)有技術(shù)化合物的比較將式I化合物的體內(nèi)穩(wěn)定性和有效性與最接近的Santa Fe化合物即(+／-)-N-(順式-2-(6-氟-2-羥基-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基)-N’-(5-氯吡啶-2-基)-脲相比較，從而給予在DMSO媒介中0．024mmol／kg劑量的所述各化合物。圖2為整個(gè)時(shí)間內(nèi)所述各化合物的血漿水平的曲線圖(在每種情況下n=2)。顯而易見的是所述各曲線按照常規(guī)模式，但是本發(fā)明化合物具有超過最接近的現(xiàn)有技術(shù)化合物的AUC(0-4小時(shí))1．5倍的AUC(0-4小時(shí))。換言之，本發(fā)明化合物比先前描述的衍生物提供大于50％的體內(nèi)接觸，無論是否由于本發(fā)明化合物比現(xiàn)有技術(shù)化合物更緩慢的清除率還是更高程度的組織結(jié)合也已經(jīng)被測(cè)定。生物實(shí)施例6前藥與母體化合物的生物等效性將多種式II化合物(即式I化合物的前藥)給予大鼠并全程監(jiān)控本發(fā)明母體化合物(在這個(gè)實(shí)施例中為實(shí)施例10化合物)的血漿水平。所述溶媒為在水或丙二醇中10％阿拉伯膠和1％吐溫(加星號(hào))。在表4中的血漿水平數(shù)據(jù)指的是個(gè)體動(dòng)物。表4


顯而易見地是式II的前藥體內(nèi)將臨床相應(yīng)量的式I化合物釋放進(jìn)入血液。所述絕對(duì)口服生物利用度(相對(duì)于所述iv劑量進(jìn)行測(cè)定，如同在制備部分描述的那樣)對(duì)實(shí)施例37的化合物為28-33％和對(duì)服用實(shí)施例27的化合物的評(píng)價(jià)動(dòng)物為27％。生物實(shí)施例7不同物種中的生物利用度將本發(fā)明式II的前藥(實(shí)施例12)以相同劑量(0．026mmol／kg)和相同的溶媒(在水中10％阿拉伯膠和1％吐溫)給予大鼠和短尾猴。式I母體化合物(實(shí)施例10)的血漿水平作為時(shí)間的函數(shù)來測(cè)量。表5

顯而易見地是式II的前藥體內(nèi)釋放臨床相應(yīng)量的式I化合物。釋放既發(fā)生在嚙齒動(dòng)物也發(fā)生在靈長(zhǎng)目動(dòng)物，在靈長(zhǎng)目動(dòng)物中存在顯著更高的血漿水平。
實(shí)施例28的化合物的相應(yīng)數(shù)據(jù)(大鼠阿拉伯膠／吐溫，猴子丙二醇)顯示在表5A中表5A

生物實(shí)施例8抗病毒活性在所述XTT甲_測(cè)試中，在有和無50％人血清存在下，測(cè)試式I化合物用于抗野生型HIVIIIB和抗性突變型的HIV-1活性，其中在MT4細(xì)胞中測(cè)試對(duì)致細(xì)胞病變效應(yīng)的抑制作用，在每一種情況下ED50以μM表明。表6

在體內(nèi)可達(dá)到的濃度下，式I化合物對(duì)抗多種HIV株具有高度活性。生物實(shí)施例9抗病毒活性使用現(xiàn)有技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試也對(duì)本發(fā)明化合物與所述最接近的現(xiàn)有技術(shù)化合物進(jìn)行了比較，其中人T細(xì)胞系MT4細(xì)胞在接種進(jìn)入96孔微量滴定板(2·104細(xì)胞／孔)的補(bǔ)充10％胎牛血清、青霉素和鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，以每孔的HIV-1IIIB(野生型)或者載荷有RT Ile100、Cys181或Asn103突變的突變型病毒10-20 TCID50感染。將被連續(xù)稀釋的受試化合物加入到各自的孔中并將所述培養(yǎng)物在37℃下于富含CO2的氣氛中孵育，并且在第五天或第六天用XTT活體染料測(cè)定細(xì)胞生存力。所述結(jié)果顯示以下多種測(cè)定的平均值。結(jié)果表示為ED50μM。表8

本發(fā)明化合物已顯著改善抗野生型并且特別是抗臨床重要的、在以NNRTIs治療期間出現(xiàn)的突變型的性能。生物實(shí)施例10結(jié)合動(dòng)力學(xué)NNRTI在所述靶酶上的結(jié)合與解離率能夠直接通過表面細(xì)胞質(zhì)基因組共振方法進(jìn)行測(cè)試，其中將逆轉(zhuǎn)錄酶固定在嵌片的表面并且通過觀察由伴隨嵌片的質(zhì)量增加或減少引起的折射率的變化來監(jiān)控假定的抑制劑的結(jié)合或者解離。如同以上描述的那樣，將本發(fā)明化合物(實(shí)施例8)與來自Santa Fe的最接近的現(xiàn)有技術(shù)的化合物進(jìn)行比較。實(shí)驗(yàn)在Biacore 2000(Biacore AB，Uppsala，瑞典)上進(jìn)行，使用BIA評(píng)價(jià)軟件(3．0版)用于評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)。所述小的分析物(NNRTI)對(duì)大得多的酶的結(jié)合導(dǎo)致在10-20 RU的范圍內(nèi)結(jié)合應(yīng)答。在流動(dòng)的緩沖液和樣品之間的總體折射率的差異使得評(píng)價(jià)在注射樣品期間得到的數(shù)據(jù)是困難的。在所述解離相期間，在總體折射率方面存在不明顯的變化，因此在這個(gè)相中已評(píng)價(jià)了不同物質(zhì)的結(jié)合。
固定通過直接偶合于伯胺，所述酶和對(duì)照蛋白固定在CM5嵌片上(Markgren等，1998)。對(duì)Fc g(Biacore BR-1000-57)的抗體被用作對(duì)照蛋白并且按照制造商的說明書固定。使用Nanosept離心濃縮器10K(Pall Filron，MA，U．S．A)，將HIV逆轉(zhuǎn)錄酶(Unge等，1990)從3M的(NH4)2SO4轉(zhuǎn)移至含有4mM MgCl2的5mM Hepes，pH7．6中。將相應(yīng)于6800-9700RU量的RT固定于所述傳感器嵌片上。通過注射35ml的0．5M Tris pH7．6、4mM MgCl2、0．5M KCl鈍化所述傳感器表面。所述固定方法在33℃下進(jìn)行。
與抑制劑的相互作用將抑制劑的貯存液(1mg／ml在DMSO中)溶于RT流動(dòng)的緩沖液(10mM Hepes pH7．6、4mM MgCl2、0．25mM精胺、40mM KCl、0．5％Triton X-100、3％DMSO、0．5％胎牛血清)中以達(dá)到10mM的濃度。通過注射200ml的所述稀釋物質(zhì)來分析物質(zhì)對(duì)RT的結(jié)合，流速為20ml／min和溫度為25℃。在每一次注射物質(zhì)后，通過注射在RT的流動(dòng)的緩沖液中的120ml的10％的DMSO洗滌所述系統(tǒng)。
所述結(jié)果在圖3中得到描繪。顯而易見地是本發(fā)明化合物和現(xiàn)有技術(shù)的化合物顯示不同的相互作用動(dòng)力學(xué)，本發(fā)明化合物具有最低的解離率，這表明其更有效地與所述酶結(jié)合。參考文獻(xiàn)Unge T，Ahola H，Bhikhabhai R，Backbro K，Lovgren S，F(xiàn)enyo EM，Honigman A，Panet A，Gronowitz JS，Strandberg B，HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)的表達(dá)、純化和結(jié)晶。AIDS Res Hum Retroviruses 1990年11月；6(11)1297-303。Markgren P-O，Hamalainen M，Danielson UH，使用光學(xué)生物傳感器技術(shù)篩選與HIV-1蛋白酶相互作用的化合物。Analytical Biochemistry1998，第265卷。(在印刷中)。
盡管參照以上具體的實(shí)施例、比較實(shí)施例和附圖已闡明了本發(fā)明的多個(gè)方面和實(shí)施方案，易于理解的是本發(fā)明不以任何方式局限于這些實(shí)施方案，而是擴(kuò)展到整個(gè)所附的權(quán)利要求書的精神和范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1．式Ⅰ化合物 其中Rx為氰基或溴代；R1為鹵代；R2為C1-C3烷基；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽和前藥。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中R1為氟代。
3．權(quán)利要求1的化合物，其中R2為乙基。
4．權(quán)利要求1的化合物，包括至少60％，優(yōu)選至少90％的1S，2S對(duì)映體形式。
5．權(quán)利要求1的化合物，其中Rx為氰基。
6．權(quán)利要求1的化合物，其中所述前藥具有式Ⅱ 其中Rx、R1和R2如上定義，R3為H、(CHm)nNR5R6；R4為H、C1-C3烷基、(CHm)nNR5R6、(CHm)nC(=O)R5、(CHm)nOH、OR7、鹵代、CF3或CN；或者R3和R4一起定義為具有0-2個(gè)雜原子和／或0-2個(gè)不飽和鍵和／或0-2個(gè)取代基的5或6元稠環(huán)；R5為H、C1-C3烷基、C(=O)R7或1至4個(gè)氨基酸的肽；R6為H、C1-C3烷基；或者R5和R6一起定義為具有0或1個(gè)另外的雜原子和／或0-2個(gè)不飽和鍵和／或0-2個(gè)取代基的5或6元環(huán)；R7為H、C1-C12烷基、(CHm)nNR5R6；X和包含其的環(huán)定義為具有0至3個(gè)不飽和鍵和／或0至3個(gè)選自S、O和N的雜原子的5或6元環(huán)；m獨(dú)立為1或2；n獨(dú)立為0、1或2；p為0或1；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
7．權(quán)利要求6的化合物，其中所述含有X的環(huán)為萘基、吡啶基、喹啉基或苯基。
8．權(quán)利要求7的化合物，其中所述含有X的環(huán)為苯基。
9．權(quán)利要求7的化合物，其中所述含有X的環(huán)為吡啶-2-基或優(yōu)選為吡啶-3-基。
10．權(quán)利要求6的化合物，其中R3為-NH2、-NHCH3、-NHCH2CH3或-N(CH3)2。
11．權(quán)利要求6的化合物，其中R3處于相對(duì)于所述羰基的間位，特別是其中所述含有X的環(huán)為苯基時(shí)，或者其中R3處于相對(duì)于所述羰基的對(duì)位，特別是其中所述含有X的環(huán)為雜環(huán)時(shí)。
12．權(quán)利要求6的化合物，其中-(CH2)n-和／或-(CH2)n-不存在，即p和／或n為0。
13．權(quán)利要求6的化合物，其中Rx為氰基。
14．權(quán)利要求6的化合物，其中R1為氟代。
15．權(quán)利要求6的化合物，其中R2為乙基。
16．權(quán)利要求6的化合物，包括至少60％，優(yōu)選至少90％的1S，2S對(duì)映體形式。
17．權(quán)利要求1的化合物選自(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲、(1R，2R)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲、(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲和(1R，2R)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
18．權(quán)利要求17的化合物表示(1S，2S)-N-[順式-2-(6-氟，2-羥基，3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲或它的藥學(xué)上可接受的鹽。
19．權(quán)利要求1的化合物選自(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲，(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲，(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲，(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]-環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲，(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲，(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲，(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-氰基吡啶-2-基)-脲，(1R，2R)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]-環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲，(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲，(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲，(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲，(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙酰基-2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]-環(huán)丙基}-N’-(5-溴吡啶-2-基)脲，(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲，(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-乙基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙酰基苯基)-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲，(1R，2R)-N-[順式-2-(2-(3-二甲基氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)-脲，(1R，2R)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]-環(huán)丙基}-N’-(5-溴吡啶-2-基)脲，和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
20．權(quán)利要求19的化合物表示(1S，2S)-N-{順式-2-[6-氟-3-丙?；?2-(6-甲基氨基吡啶-3-基羰基氧基)苯基]-環(huán)丙基}-N’-(5-氰基吡啶-2-基)脲和它的藥學(xué)上可接受的鹽。
21．權(quán)利要求19的化合物表示(1S，2S)-N-[順式-2-(2-(3-氨基苯基羰基氧基)-6-氟-3-丙?；交?-環(huán)丙基]-N’-(5-溴吡啶-2-基)脲和它的藥學(xué)上可接受的鹽。
22．藥用組合物，包括權(quán)利要求1至21中的任何一項(xiàng)定義的化合物和為此藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
23．權(quán)利要求22的組合物另外包括一種至三種另外的抗病毒藥物。
24．權(quán)利要求23的組合物，其中所述另外的抗病毒藥物選自AZT、ddI、ddC、D4T、3TC、adefovir、adefovir dipivoxil、abacavir、雙-POC-PMPA、膦甲酸、羥基脲、efavirenz、trovirdine、奈韋拉平、delavirdine、PFA、H2G、ABT606、ritonavir、沙奎那韋、indinavir、amprenavir(Vertex VX478)、Mitsubishi MKC-442和nelfinavir。
25．權(quán)利要求1至21中任何一項(xiàng)的化合物用于治療。
26．權(quán)利要求1至21中任何一項(xiàng)的化合物用于制備用于治療或預(yù)防HIV的藥物。
27．用于抑制或預(yù)防HIV感染的方法，包括將有效量的權(quán)利要求1至6中定義的化合物給予需要它們的患者。
28．制備式I化合物的方法，包括下式化合物的疊氮化物的庫(kù)爾提斯重排 隨后與下式化合物偶合和脫除保護(hù) 其中R1、R2和Rx如上定義并且PG為羥基保護(hù)基團(tuán)。
29．權(quán)利要求28的方法還包括以下步驟a)以活化的式Ⅲ化合物?；?其中R3、R4、X和n如上定義但任選被保護(hù)，并且R8為氫或常規(guī)活化基團(tuán)；或者b)以式Ⅲa化合物烷基化 其中n、R3、R4和X如上定義，但其中暴露的胺、羥基等取代基以常規(guī)保護(hù)基團(tuán)保護(hù)。
全文摘要
其中R
文檔編號(hào)C07D213/75GK1292781SQ99803908
公開日2001年4月25日 申請(qǐng)日期1999年1月15日 優(yōu)先權(quán)日1998年1月16日
發(fā)明者C·薩爾貝里, R·諾雷恩, M·赫格貝里, P·恩格爾哈德特 申請(qǐng)人:美迪維爾公司