專利名稱：等排抗皰疹肽衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有抗皰疹性質(zhì)的肽衍生物，并涉及使用該衍生物治療病毒傳染的方法。更具體地說，本發(fā)明涉及具有抗皰疹病毒活性的肽衍生物(下文稱為“肽”)，涉及含有肽的藥物組合物以及涉及使用肽以抑制皰疹病毒的復(fù)制和治療病毒感染的方法。
皰疹病毒使人和動(dòng)物遭受多種疾病，例如，皰疹單純性病毒，1型和2型(HSV-1和HSV-2)分別引起唇皰疹和生殖器的損害;水痘帶狀皰疹病毒(VZV)會(huì)引起水痘和帶狀皰疹;非洲淋巴細(xì)胞瘤病毒(EBV)會(huì)引起傳染性單核細(xì)胞增多癥。
在過去20年來，在研究處置皰疹病毒傳染的新治療劑中，研究人員對(duì)已知的如嘌呤和嘧啶核苷類似物一類的化合物予以最大的注意。結(jié)果，有幾種核苷類似物已開發(fā)為抗病毒劑。至今最成功的是無環(huán)鳥苷(acyclovir)，它是選為治療生殖器皰疹單純性感染的藥物。
但是，雖然有一些重要進(jìn)展，但對(duì)用于治療皰疹病毒感染的有效、安全的治療劑的需求繼續(xù)存在。有關(guān)這方面的現(xiàn)代治療劑的述評(píng)可參閱M.C.Nahata，“Antiviral DrugsPharmacokinetics，Adverse Effects and Therapeutic Use”，J.Pharm.Technol.，3，100(1987)。
本申請(qǐng)揭示了一組具有抗皰疹病毒活性的肽衍生物。這些肽的抗皰疹病毒的選擇作用，與大的安全度相結(jié)合，使得這些肽成為抗皰疹病毒所要求的制劑。
下述文獻(xiàn)公開了涉及抗皰疹活性的肽或肽衍生物B.M.Dutia等人，Nature，321，439(1986)，E.A.Cohen等人，Nature，321，411(1986)，J.H.Subak-Sharpe等人，UK英國專利申請(qǐng)2185024，7月，8月，1987出版，P.Gaudreau等人，J.Biol.Chem.，262，12413(1987)，E.A.Cohen等人，美國專利4，795，740，1月，3，1989，R.Freidinger等人，美國專利4，814，432，3月，21，1989，V.M.Garskey等人，美國專利4，837，304，6月，6，1989，R.Colonno等人，美國專利4，845，195，7月，4，1989，P.Gaudreau等人，J.Med.Chem.，33，723(1990)，J.Adams等人，歐洲專利申請(qǐng)408，973，1月，23，1991出版，P.L.Beaulieu等人，歐洲專利申請(qǐng)411，332，2月，6，1991出版，J.Adams等人，歐洲專利申請(qǐng)411，333，2月，6，1991出版，J.Adams等人，歐洲專利申請(qǐng)411，334，2月，6，1991出版，R.L.Tolman等人，歐洲專利申請(qǐng)412，595，2月，13，1991出版，W.T.Ashton等人，歐洲專利申請(qǐng)438，873，7月，31，1991出版，P.L.Beaulieu等人，歐洲專利申請(qǐng)461，546，12月，18，1991出版，以及P.Gaudreau等人，J.Med.Chem.，35，346(1992)。
上述文獻(xiàn)中的主題肽和本申請(qǐng)的肽可以通過特征的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)上的不同而區(qū)別的。
區(qū)別本發(fā)明肽和常用的明顯結(jié)構(gòu)特征在于取代內(nèi)在酰胺的酮亞甲基。因而本發(fā)明的肽可以認(rèn)為是酮亞甲基等排物。
下文所用的縮略語和符號(hào)的定義列于本申請(qǐng)的“發(fā)明詳述”的一節(jié)中。
本發(fā)明的肽，或其治療上可用鹽，可以用通式1表示
其中A是苯基(低級(jí))鏈烷?；?在其芳基部分用低級(jí)烷基、氨基、鹵素、羥基或低級(jí)烷氧基單取代的苯基(低級(jí))鏈烷酰基;用苯基或單取代的苯基雙取代的低級(jí)鏈烷?；?，其中，單取代的基選自低級(jí)烷基、鹵素、羥基和低級(jí)烷氧基;或者是｛苯基(低級(jí))烷基｝氨羰基｝;而B是N(CH3)-CHR4(CO)其中R4是低級(jí)烷基;或者A和B一起形成通式為R5-NH-C(O)的飽和或未飽和的烷基氨羰基，其中，R5是(2-10C)-烷基、低級(jí)環(huán)烷基、1-(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基)、1-(2-丙烯)-3-丁烯基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基或1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基;
D是NH-CHR6C(O)，其中R6是低級(jí)烷基或用羧基、羥基、巰基或芐氧基取代的低級(jí)烷基;
R1是低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、1-(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基)或NR7R8，其中，R7是氫原子或低級(jí)烷基而R8是低級(jí)烷基，或R7和R8與其相連的氮原子一起形成吡咯烷代、哌啶子基、嗎啉代或4-甲基哌嗪代;R2是氫或低級(jí)烷基而R3是低級(jí)烷基，或者R2是氫而R3是低級(jí)烷烯基或苯基-(1-4C)烷基，或者R2和R3與和其相連的碳原子一起形成低級(jí)環(huán)烷基;
E是NHR9，其中R9是(4-9C)烷基;低級(jí)環(huán)烷基;用低級(jí)烷基或(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基)單取代或雙取代的低級(jí)環(huán)烷基;或者E是NHNR10-R11，其中R10是氫或低級(jí)烷基而R11是(4-9C)烷基;或者E是NHCH(R12)-Z，其中R12是(4-9C)烷基;低級(jí)環(huán)烷基或(低級(jí)環(huán)烷基)-(低級(jí)烷基)和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是低級(jí)烷基。
本發(fā)明的肽或其治療上可用鹽的優(yōu)選類是用通式1表示的，其中A是苯基(低級(jí))鏈烷?；?(4-氨基苯)(低級(jí))-鏈烷?；?(4-鹵代苯)-(低級(jí))鏈烷?；?，(4-羥苯基)-(低級(jí))鏈烷?；?｛4-(低級(jí)烷氧基)苯基｝-(低級(jí))鏈烷?；?用苯基、4-鹵代苯基或4-(低級(jí)烷氧基)苯基雙取代的低級(jí)鏈烷?；?，或者苯基(低級(jí))烷基氨羰基;而B是(N-Me)Val，(N-Me)Ile或(N-Me)Tbg;或者A和B一起形成飽和或未飽和的通式為R5-NH-C(O)的烷基氨羰基，其中R5如上所定義的;D是(S)-2-氨基-3-羥基-3-甲丁酸或(R)-2-氨基-3-巰基-3-甲丁酸的氨基酸殘基或是選自Val、Ile、Tbg和β-EtNva的氨基酸殘基，R1是低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、1-(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基)、NMe2、NEt2、吡咯烷代或嗎啉代;R2和R3如上所定義的;而E是NHR9其中R9是(4-9C)烷基;低級(jí)環(huán)烷基;以低級(jí)烷基單取代或雙取代的低級(jí)環(huán)烷基;或(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基);或E是NHNR10R11，其中R10是氫、甲基或乙基而R11是(4-9C)烷基;或E是NHCH(R12)-Z其中R12是(4-9C)烷基或(低級(jí)環(huán)烷基)--甲基而Z如上所定義的。
本發(fā)明肽或其治療上可用鹽的更優(yōu)選的系類是以通式1表示的，其中A是苯乙?；?、苯丙酰基、(4-氨苯基)丙酰基、(4-氟苯基)丙?；?、(4-羥苯基)丙?；?、(4-甲氧苯基)丙?；?、2-(苯甲基)-3-苯丙?；?-｛(4-氟苯基)甲基｝-3-(4-氟苯基)丙?；?-｛(4-甲氧苯基)甲基｝-3-(4-甲氧苯基)丙?；蚱S氨羰基;B是(N-Me)-Val或(N-Me)-Ile;D是Val、Ile或Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、1-甲環(huán)戊基、NMe2、NEt2、吡咯烷代或嗎啉代;R2是氫而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基、丙基、2-丙烯基或芐基，含有R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或R2和R3分別各為甲基或乙基或者R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基;而E是NHR9其中R9是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲丙基，2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1(R)-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基、1(R)-乙基-3，3-二甲丁基、2，2-二甲戊基順或反-2-甲環(huán)己基、2，2-二甲環(huán)己基或環(huán)己基甲基;或者E是NHR10R11，其中R10是氫、甲基、或乙基和R11是1，1-二甲乙基;或E是NHCH(R12)-Z1，其中含有R12的碳原子有(S)-構(gòu)型，R12是1，1-二甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基或環(huán)己基甲基而Z是CH2OH、C(O)OH、CONH2或C(O)OR13其中R13是甲基、乙基或丙基。
肽或其治療上可用鹽的另外更優(yōu)選的類是以通式1表示的，其中A和B一起形成飽和或未飽和的烷基氨羰基，它選自丁氨羰基、1-甲乙基氨羰基、1-甲丙基氨羰基、1-乙丙基氨羰基、1，1-二甲丁基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、1-乙戊基氨羰基、1-丁戊基氨羰基、2-乙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙環(huán)戊基)氨羰基、(1-丙環(huán)己基)-氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基和1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基以及D、R1、R2、R3和E都如上面最后情況所定義的。
本發(fā)明或其治療上可用鹽的最佳類是通式1表示的，其中A是苯丙酰基、2-(苯甲基)-3-苯丙?；蚱S氨羰基;B是(N-Me)Val;D是Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基或1-甲環(huán)戊基;R2是氫原子和R3是甲基、乙基、1-甲乙基、丙基或芐基，而含有R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或R2和R3各分別為甲基或乙基，或R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基;而E是NHR9，其中R9是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲丁基或E是NHCH(R12)-Z，其中含有R12的碳原子有(S)-構(gòu)型，R12是2，2-二甲丙基而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基乙基或丙基。
本發(fā)明肽或其治療上可用的鹽的另一類最優(yōu)選的是由通式1表示的，其中A和B一起形成飽和或未飽和的烷基氨羰基，它選自1-乙丙基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙環(huán)戊基)-氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯氨羰基以及1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;而D、R1、R2、R3和E與最后一種情況中所定義的一樣。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)包括的有一種藥用組合物，它含有抗皰疹病毒有效量的通式1的肽，或其治療上可用鹽，以及藥物上或獸醫(yī)上可用載體。
本發(fā)明范圍內(nèi)也包括一種化妝組合物，它含有通式1的肽或其治療上可用鹽以及適用于局部使用的生理上可用載體。
本發(fā)明的一個(gè)重要方面包括通過對(duì)哺乳動(dòng)物施用抗皰疹病毒有效量的本發(fā)明通式1的肽或其治療上可用鹽而治療皰疹病毒感染的一種方法。
另一重要方面包括抑制皰疹病毒復(fù)制的方法，它通過將病毒與皰疹病毒核苷酸還原酸抑制量的通式1的肽或其治療上可用鹽相接觸。
還有另一方面包括對(duì)哺乳動(dòng)物的皰疹病毒感染的治療方法，它通過對(duì)哺乳動(dòng)物施用一種抗皰疹病毒有效量的通式1的肽或其治療上可用鹽以及一種抗病毒核苷類似物的混合物。一種含該混合物的藥用組合物也屬于本發(fā)明范圍之內(nèi)。
通式1的肽的制備方法描述于下文。
發(fā)明詳述或者通式1可描述如下
涉及氨基酸或氨基酸衍生物的術(shù)語“殘基”是指由相應(yīng)的α-氨基酸，通過除去羧基的羥基和α-氨基的氫所衍生物的基團(tuán)。
一般來說，對(duì)氨基酸和保護(hù)基，本文所用的縮略語是基于生物化學(xué)命名法的IUPACIUB委員會(huì)所推薦的，參閱European Journal of Biochemistry 138，9(1984)。例如Val、Ile、Asp和Leu分別代表L-纈氨酸、L-異亮氨酸、L-天冬氨酸和L-亮氨酸。
當(dāng)E是如上所限定的NHCH(R12)-Z時(shí)，在通式1的肽的主線性軸(即主鏈)上的不對(duì)稱碳原子，(該主鏈除去端基A和Z(E的)，但含有帶“R12”的碳原子)具有S構(gòu)型。但有例外，對(duì)含有CH2C(O)R1的碳原子，其中R1是低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基或1-(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基)和對(duì)含有2-巰基烷基支鏈的碳原子，在當(dāng)D的R6是上述支鏈的情況下。對(duì)后面兩個(gè)例外，碳原子有R構(gòu)型。
當(dāng)E如上面所定義的是NHR9時(shí)，在端基A和在端基E中，存在于氨基酸或衍生氨基酸殘基的支鏈中的不對(duì)稱碳原子可以有S或R構(gòu)型。
符號(hào)“Me”、“Et”、“Pr”和“Bu”分別代表甲基、乙基、丙基和丁基的烷基基團(tuán)。
例如符號(hào)“MeEt2C”和“EtPr2C”分別代表1-乙基-1-甲丙基和1-乙基-1-丙丁基。
符號(hào)“Tbg”代表(S)-2-氨基-3，3-二甲丁酸的氨基酸殘基。符號(hào)“Cpg”代表(S)-α-氨環(huán)戊基乙酸的氨基酸殘基。符號(hào)“rMeLeu”代表(S)-2-氨基-4，4-二甲戊酸的氨基酸殘基。符號(hào)“z-Me亮氨醇”代表(S)-2-氨基-4，4-二甲戊醇，并由α-氨基中移去一個(gè)氫。符號(hào)“β-EtNva”代表(S)-2-氨基-3-乙戊酸的氨基酸殘基。
本文所用的其他符號(hào)是對(duì)(S)-3-甲基-2-(甲氨基)-丁酸的殘基是(N-Me)Val;對(duì)(S)-3-甲基-2-(甲氨基)-戊酸的殘基是(N-Me)Ile;對(duì)(S)-2-(甲氨基)-3，3-二甲丁酸的殘基是(N-Me)Tbg;對(duì)(S)-α-氨基-1-羧環(huán)丁烷乙酸的殘基是Asp(cyBu);對(duì)(S)-α-氨基-1-羧基環(huán)戊乙酸的殘基是Asp(cyPn);對(duì)3-(R)-甲基-L-天冬氨酸(即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-甲丁二酸)的殘基是Asp{(R)-Me};對(duì)3-(R)-丙基-L-天冬氨酸(即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-丙丁二酸)的殘基是Asp{(R)-Pr};對(duì)3-(R)-烯丙基-L-天冬氨酸(即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-(2-丙烯基)丁二酸)的殘基是Asp{(R)-烯丙基｝。
用于本文的術(shù)語“鹵素”是指選自溴、氯、氟或碘的鹵素基團(tuán)。
本文所用的術(shù)語“(2-10C)烷基”是指含有2～10個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烷基基團(tuán)，包括乙基、丁基、1-甲丙基、1-乙丙基、1-丙丁基、2-丙戊基等。
本文所用的術(shù)語“(4-9C)烷基”是指含有4～9個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烷基基團(tuán)，包括，如1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1，2，2-三甲丙基、3，3-二甲丁基、1-乙基-2，2-二甲丁基和4，4-二甲戊基。
本文所用的術(shù)語“低級(jí)烷基”或單獨(dú)或與另一基團(tuán)相連而用時(shí)都是指含1-6個(gè)碳原子的直鏈烷基基團(tuán)和含有3-6個(gè)碳原子的支鏈烷基基團(tuán)并包括甲基、乙基、丙基、丁基、己基、1-甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基和1，1-二甲乙基。
本文所用的術(shù)語“1-(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基)”是指在位1有低級(jí)烷基取代基的低級(jí)環(huán)烷基基團(tuán);例如，1-乙環(huán)丙基、1-丙環(huán)戊基和1-丙環(huán)己基。
本文所用的術(shù)語“低級(jí)環(huán)烷基”無論是單獨(dú)使用或與其它基團(tuán)結(jié)合使用時(shí)，都是指含有3-6個(gè)碳原子的飽和環(huán)烴基團(tuán)，包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
本文所用的術(shù)語“低級(jí)鏈烯基”是指含有2-6個(gè)碳原子的直鏈鏈烯基和含3-6個(gè)碳原子的支鏈鏈烯基基團(tuán)，包括乙烯、1-丙烯、2-丙烯、1-甲基-乙烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基和2-丁烯基。
本文所用的術(shù)語“低級(jí)烷氧基”是指含有1-4個(gè)碳原子的直鏈烷氧基基團(tuán)和含有3-4個(gè)碳原子的支鏈烷氧基基團(tuán)，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、1-甲乙氧基、丁氧基和1，1-二甲乙氧基。最后的基團(tuán)通常認(rèn)為是叔丁氧基。
本文所用的術(shù)語“苯基-(1-4C)烷基”是指苯烷基團(tuán)，其中其烷基部分是含有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，包括芐基、2-苯乙基、3-苯丙基、2-甲基-2-苯乙基｛PhCH(CH3)CH2}、1-乙基-2-苯乙基｛PhCH2CH(C2H5)｝等。
本文所用的術(shù)語“低級(jí)鏈烷酰基”或單獨(dú)使用或與其它基團(tuán)結(jié)合使用，是指1-氧代烷基基團(tuán)，其中，其1-氧代烷基部分是指含有2-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的1-氧代烷基例如乙?；?、丙?；?1-氧代丙基)和1-氧代-5-甲己基。
本文所用的術(shù)語“藥物上可用載體”或“獸醫(yī)上可用載體”是指無毒的、通常為隋性的用于活性組份的賦形劑，它對(duì)活性組份沒有副作用。
本文所用的術(shù)語“生理上可用載體”是指含一個(gè)或多個(gè)無毒賦形劑的可用的化妝用載體，它不與其中所含的活性組分反應(yīng)或降低其效力。
本文所用的術(shù)語“獸醫(yī)上可用載體”是指用于對(duì)家畜給藥的藥品物質(zhì)的生理上可用賦形劑，包括一種或多種無毒藥物上可用賦形劑，它與藥品物質(zhì)不反應(yīng)或降低其效力。
術(shù)語“有效量”是指抗病毒劑的預(yù)定抗病毒的劑量，也就是制劑的量足以有效地抵抗體內(nèi)病毒有機(jī)體。
本文所用的術(shù)語“偶合劑”是指一種制劑，它能夠引起氨基酸或肽游離羧基與另一個(gè)氨基酸或肽的游離氨基脫水偶合而在反應(yīng)物之間形成酰胺鍵。同樣，這樣的制劑能實(shí)施酸和醇的偶合而形成相應(yīng)的酯并通過活化羧基基團(tuán)促進(jìn)并便于脫水偶合。這種偶合劑和活化基團(tuán)描述于肽化學(xué)的普通教科書中;例如，E.Schroeder和K.L.Lubke，“The Peptides”Vol 1.Academic Press，New York，N.Y.1965，pp2～128，和K.D.Kopple，“Peptides and Aminoacids”，W.A.Benjamin，Inc.New York，N.Y.1966，pp33～51。偶合劑的實(shí)例有二苯磷酰疊氮化物、1，1′-羰基二咪唑、二環(huán)己基碳化二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺或1-羥基-苯并三唑，并在有二環(huán)己基碳化二亞胺存在情況下使用。一種很有實(shí)效和有用的偶合劑是(苯并三唑-1-基氧)三(二甲氨基)-磷鎓六氟磷酸鹽，它描述于B.Castro等人的文章Tetrahedron Letters，1219(1975)，也可參閱D.Hudson，J.Org.Chem，53，617(1988)，或就其本身，或在1-羥基苯并三唑存在下進(jìn)行。還有另一個(gè)極有效和有用的偶合劑是商購的2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲脲鎓四氟硼酸鹽。
通式1的肽的制備方法，其中可結(jié)合肽合成中所常用的方法，例如，氨基酸殘基和/或肽碎片的經(jīng)典的溶液偶合。這種方法描述于，如，上述的E.Schroder和K.Luke，教科書系“The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology”，E.Gross等人編輯，Academic Press，New York，N.Y.1979-1987，Vol 1-8，和J.M.Stewart和J.D.Young的“Solid Phase Peptide Synthesis”，2nd ed.Pierce Chem Co.，Rockford，IL，USA，1984。
上述肽制備方法的一般特征是用合適的保護(hù)基團(tuán)，保護(hù)各種氨基酸殘基或衍生物的氨基酸殘基(或者，如有必要，肽的非肽碎片)的可反應(yīng)的側(cè)鏈基團(tuán)，所述合適的保護(hù)基團(tuán)將阻止在該位點(diǎn)上發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)直到保護(hù)基團(tuán)最后除去。當(dāng)整體在羧酸基反應(yīng)時(shí)也通常保護(hù)在氨基酸或碎片上的α-氨基基團(tuán)，接著選擇性地除去α-氨基保護(hù)基團(tuán)，以使在該位點(diǎn)上進(jìn)行其后的反應(yīng)。另一個(gè)共同特征是用一個(gè)合適的保護(hù)基團(tuán)初步保護(hù)氨基酸殘基或肽碎片的C-端羧基，如有的話，它是成為肽的C-端官能基，該合適的保護(hù)基團(tuán)將阻止在該位點(diǎn)上發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)直到所要求的肽的順序已裝配后除去保護(hù)基團(tuán)。
通式Ⅰ的肽的主要中間體是通式2的中間體
其中W是α-氨基保護(hù)基，如叔丁基氧羰基(Boc)，芐氧羰基(Z)或芴-9-基甲氧羰基(Fmoc)，而D和R1如上所限定的。化合物的制備可通過將通式W-D-CH2C(O)OCH2CH＝CH2的烯丙酯以邁克爾法加到通式為(低級(jí)烷基)-OC(O)CH＝CHC(O)R1的芴衍生物中，以得到通式為W-D-CH{C(O)OCH2CH＝CH2}CH{CH2C(O)R1}C(O)O-(低級(jí)烷基)的邁克爾加成化合物。
此后，將后者化合物用四重三苯膦的鈀化合物和三苯膦，在有吡咯烷存在下，按照R.De′ziel的方法(Tetrahedron Letter，28，4371(1987)，進(jìn)行處理而實(shí)施水解，然后將稀丙酯脫羧基而得到主中間體的相應(yīng)烷基酯。將后者酯在有堿，如氫氧化鈉或氫氧化鋰的存在下進(jìn)行水解而得到作為主中間體的非對(duì)映異構(gòu)體的混合物。
或者，通式2的主中間體中，W和D如上面最后情況下所定義的，而R1是NR7R8，其中R7和R8各為低級(jí)烷基或R7和R8和與它們相連的氮原子一起形成吡咯烷代、哌啶子基、嗎啉代或4-甲基哌嗪代，其制備方法如下將上面提及的通式W-D-CH2C(O)OCH2CH＝CH2(其中W和D如本文所定義的)的烯丙酯與通式BzlOC(O)CH＝CHC(O)OBzl{(E)-2-丁烯二酸二芐酯的富馬酰衍生物，按邁克爾反應(yīng)條件進(jìn)行反應(yīng)而得到通式W-D-(RS)-CH{CH{C(O)OBzl}CH2C(O)OBzl}C(O)-OCH2CH＝CH2的相應(yīng)邁克爾加成化合物。將后面的加成物在有吡咯烷存在下用四重三苯膦鈀化合物和三苯膦處理(De′ziel，參閱上面)得到通式W-D-CH2-(R，S)-CH{CH2C(O)OBzl}C(O)OBzl的相應(yīng)的二芐酯。其后，在有覆蓋氫氧化鈀的碳存在下進(jìn)行氫解，得到相應(yīng)的二羧酸，該酸通過與過量乙酸酐加熱而轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酸酐。在有吡啶存在下用合適的仲胺與酸酐反應(yīng)而得到主要為通式W-D-CH2-(RS)-CH{CH2C(O)NR7R8｝C(O)-OH(其中W、D和NR7R8如上所定義的)的所要異構(gòu)體的區(qū)域異構(gòu)體(regioisomers)混合物。后者的產(chǎn)品轉(zhuǎn)化為其芐基酯而所得的區(qū)域異構(gòu)體的混合物通過高效液體色譜分離而得到作為主要產(chǎn)品的所要異構(gòu)體。然后在有氫氧化鈀覆蓋的碳存在下氫化后者產(chǎn)品而得到通式2的主中間物，其中W和D如本文所定義的而R1是本文所定義的NR7R8。
因此，通常通式1的肽可通過逐步偶合而制備，按肽、合適的氨基酸或衍生的氨基酸殘基，以及肽的非肽碎片(如主中間體)的順序的次序而進(jìn)行，如有必要，這些都可適當(dāng)保護(hù)并且如果有，則在完成逐步偶合而得到通式1的肽時(shí)除去全部保護(hù)基。較具體的方法描述于下面的實(shí)施例中。
本發(fā)明式Ⅰ的肽可以按治療上可用鹽的形式制備。在特定肽具有堿功能殘基的情況下，這種堿的鹽的實(shí)例有與有機(jī)酸如乙酸、乳酸、琥珀酸、甲磺酸或?qū)?甲苯磺酸、以及聚合酸如丹寧酸或羧甲基纖維素配合的鹽，也有與無機(jī)酸如氫鹵酸，如鹽酸、或硫酸或磷酸配合的鹽。如有必要，特定酸的加成鹽轉(zhuǎn)成另一酸的加成鹽例如按R.A.Boissonnas等人(Helv.Chim.Acta，43，1849)，(1960))所描述的方法通過用合適的離子交換樹脂處理而轉(zhuǎn)成非毒性的、藥物上可用的鹽。
在特定肽具有一個(gè)或多個(gè)羧基的情況下，這種羧基鹽的實(shí)例有與鈉、鉀或鈣陽離子相結(jié)合的鹽或與有機(jī)堿，例如與三乙胺或N-甲基嗎啉相結(jié)合的鹽。
抗皰疹活性式Ⅰ肽的抗病毒活性可以通過生物化學(xué)、微生物學(xué)以及生物學(xué)方法來說明，表明化合物對(duì)皰疹單純性病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)以及其它皰疹病毒如水痘帶狀皰疹病毒和非洲淋巴細(xì)胞瘤病毒的復(fù)制得有抑制作用。
在下面實(shí)施例中指出了代表性的式1肽對(duì)皰疹核苷酸還原酶的抑制效應(yīng)。值得注意的是，與這種特定的抑制皰疹核苷酸還原酶有關(guān)的是肽對(duì)正常細(xì)胞復(fù)制所需的細(xì)胞核苷酸還原酶活性的這種抑制效應(yīng)相當(dāng)小或沒有。
用于說明式1肽對(duì)病毒復(fù)制的抑制效應(yīng)的方法是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù);參閱，例如，T.Specfor等人的文章，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82，4254(1985)。
肽的治療效用可以按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來說明，例如，通過使用一種基于因皰疹單純性病毒誘發(fā)眼病的老鼠模型的檢測(cè)以進(jìn)行抗病毒藥劑試驗(yàn)，這描述于C.R.Brandt等人的文章，J.Virol.Meth.，36，209(1992)。
當(dāng)本發(fā)明的肽或其治療上可用鹽之一，用作抗病毒劑時(shí)，對(duì)溫血?jiǎng)游锶缛?、豬或馬是局部給藥或全身給藥，以含有一種或多種藥物上可用載體的賦形劑配制，其比例決定于肽的溶解度和化學(xué)性質(zhì)，和所選擇的給藥的途徑和標(biāo)準(zhǔn)的生物學(xué)實(shí)踐。對(duì)局部給藥，肽可以配制在藥物上可用賦形劑中，它含有0.1-5%，最好為0.5-2%的有效成分。這種制劑可以是溶液、霜?jiǎng)┗蛳磩?br> 作為全身的給藥，式1的肽是通過靜脈、皮下或肌肉注射、以與藥物上可用賦形劑或載體的組合物形式給藥。為了注射給藥，肽最好是在滅菌水溶液賦形劑的溶液中使用，賦形劑中也可含有如緩沖劑或防腐劑的其它溶質(zhì)以及足量的藥物上可用鹽或葡萄糖，以使溶液等滲。
上述制劑的合適賦形劑或載體描述于標(biāo)準(zhǔn)藥物教科書中，如，在“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，18版，Mack，Publishing Company，Easton，Penn，1990。
肽的劑量隨著給藥方式和所擇特定有效成分而不同。再者它也隨著治療的特定宿主而不同。通常，治療是以小增量開始直到達(dá)到在這種治療情況下的最佳效果。一般來說，肽最好是按可產(chǎn)生抗病毒療效而不會(huì)引起任何有毒或有害副作用的濃度量給藥。
涉及局部使用，肽是按合適的局部制劑對(duì)身體的感染面積即皮膚或口部或生殖腔部分，以足以覆蓋感染面積的量皮膚給藥。要重復(fù)治療，例如，每4-6小時(shí)一次直到損害治愈。
涉及全身的給藥，式1的肽的給藥劑量是每天每公斤體重10μg-500μg，雖然上面提到的劑量會(huì)有不同。但，為了達(dá)到有效結(jié)果，最好使用的劑量是每天每公斤體重約10μg-200μg。
本發(fā)明的另一方面是含有皰疹病毒預(yù)防量的式1肽，或其治療上可用鹽、與生理上可用的化妝用載體一起的化妝組合物。在制劑中可以含有另外組分，如皮膚軟化劑。本發(fā)明的化妝制劑是用于預(yù)防地阻止皮膚皰疹損傷的產(chǎn)生。對(duì)皮膚的易感染面積可以夜間施用。通?；瘖y制劑比相應(yīng)的用于局部使用的藥物組合物含有更少的肽。在化妝組合物中肽的優(yōu)先含量為0.01-0.2%(重量)。
雖然上述公開的制劑表明是用于治療皰疹病毒感染的有效并相當(dāng)安全的藥劑，不排除這些制劑可以和其它抗病毒藥物療法或藥物一起給藥以獲得有利的結(jié)果。這種其它的抗病毒藥物療法或藥物包括抗病毒核苷，如無環(huán)鳥苷和抗病毒表面活性劑或抗病毒干擾素，如在美國專利4，507，281(1985，3月26日)，由S.S.Asculai和F.Rapp所公開的那些藥物。
更具體地涉及通過同時(shí)給藥以治療皰疹病毒感染，發(fā)現(xiàn)與式1的肽結(jié)合使用抗病毒核苷類似物可以協(xié)同增加其抗皰疹活性，而不伴隨毒性作用的增加。因而，同時(shí)提供用于治療哺乳動(dòng)物的皰疹感染的藥物組合物，它含有一種藥物上或獸醫(yī)上可用的載體、有效量的一種抗病毒核苷類似物或其治療上可用鹽和一種式Ⅰ的核糖核苷酸還原酶抑制肽或其治療上可用鹽相結(jié)合的混合物。
本文也提供了一種治療哺乳動(dòng)物皰疹病毒感染的方法。方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物以一種抗皰疹病毒有效量的組合物給藥，該組合物是式1化合物或其治療上可用鹽和一種抗病毒核苷類似物或其治療上可用鹽的結(jié)合物。
用于組合物的抗病毒核苷類似物是一種可酶促地轉(zhuǎn)化(體內(nèi))為皰疹DNA聚合酶的病毒DNA聚酶抑制劑和/或用于皰疹DNA聚合酶的另外基質(zhì)。抗病毒核苷類似物可選自已知的核苷類似物。本發(fā)明的優(yōu)先核苷類似物包括無環(huán)鳥苷及其類似物，例如通式2的化合物或其治療上可用鹽
其中R14是氫、羥基或氨基(當(dāng)通式2中R14是羥基時(shí)就代表無環(huán)鳥苷)。
按照本發(fā)明所使用的其它優(yōu)選抗病毒核苷類似物包括阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羥甲無環(huán)鳥苷(ganciclovir)、依多西啶(edoxudine)、布羅瓦維(brovavir)、弗西它平(fiacitabine)、潘西克羅維(penciclovir)、法西克羅維(famciclovir)、洛西克羅維(rociclovir)。
術(shù)語“協(xié)同效應(yīng)”當(dāng)用于上面定義的核苷類似物和通式1的肽結(jié)合物的抗病毒或抗皰疹活性時(shí)，是指抗病毒或抗皰疹效應(yīng)大于結(jié)合物中二個(gè)單獨(dú)組分的預(yù)計(jì)加成的效應(yīng)。
當(dāng)使用本發(fā)明結(jié)合物以治療皰疹感染時(shí)，則對(duì)溫血?jiǎng)游?，如人、豬或馬，以在含有一種或多種藥物上可用載體的賦形劑中的結(jié)合物給藥，其比例決定于核苷類似物和通式1的肽的溶解度和化學(xué)性質(zhì)，所擇的給途藥徑、標(biāo)準(zhǔn)的生物學(xué)實(shí)踐，以及由兩個(gè)活性組分的相對(duì)量，以提供一種協(xié)同抗病毒效應(yīng)。最好，結(jié)合物以局部給藥。例如，兩種活性制劑(即抗病毒核苷類似物和通式1的肽，或它們治療上可用鹽)可以在藥物上可用賦形劑中配制成溶液、乳劑、霜?jiǎng)┗蛳磩┬问健＿@種制劑可含有0.01-1.0%(重量)的核苷類似物，或一種其治療上可用鹽，和約0.05-1%(重量)的通式1肽或其治療上可用鹽。
在任何情況下，兩種活性制劑在藥物組合物中的含量是按可提供協(xié)同抗皰疹效應(yīng)的量。
以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。溫度是以攝氏度數(shù)給出的。溶液百分率或比率按體積對(duì)體積關(guān)系表示，除非另有說明，核磁共振譜記錄在Bruker 200MHz或400MHz的分光計(jì)(而400MHz光譜在前言注明);化學(xué)位移(δ)按百萬分之幾報(bào)導(dǎo)。用于實(shí)例的縮略語包括Boc叔丁氧羰基;Bu丁基;Bzl芐基;DMF二甲基甲酰胺;Et乙基;EtOH乙醇;EtOAc乙酸乙酯;Et2O二乙醚;Me甲基;MeOH甲醇;Pr丙基;TLC薄層色譜THF四氫呋喃。
實(shí)施例1用于偶合反應(yīng)的一般方法｛也可參閱R.Knorr等人，Tetrahedron Letters，30，1927(1989)｝將第一反應(yīng)物，即游離胺(或其氫氯化物鹽)，溶于CH2Cl2或乙腈中，溶液冷至4℃。在氮?dú)夥障?，在攪拌的溶液中加?當(dāng)量的N-甲基嗎啉。20分鐘后，加入1當(dāng)量第二反應(yīng)物，即游離羧酸，和1.05當(dāng)量的偶合劑。為此目的的實(shí)用和有效的偶合試劑是(苯并三唑-1-基氧)三-(二甲氨)磷鎓六氟磷酸鹽，或優(yōu)選的是2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲脲鎓四氟硼酸鹽。反應(yīng)用TLC監(jiān)測(cè)。反應(yīng)完成后，在低壓下蒸發(fā)CH2Cl2(或乙腈)。殘留物溶于EtOAc。溶液依次用1N檸檬酸水溶液、10% Na2CO3水溶液和鹽水洗滌。干燥有機(jī)相(MgSO4)，過濾并在減壓下濃縮至干。殘留物按照Still的快速色層技術(shù)｛W.C.Still等人，J.Org.Chem，43，2923(1978)｝在硅膠(SiO2)上純化。
實(shí)施例2中間體H-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CM3)CH2OBzl的制備(a)(S)-α-疊氮-1-｛(苯甲氧基)羰基｝環(huán)戊乙酸這化合物是由描述于M.N.Aboul-Enein等人的Pharm.Acta.Helv.，55，50(1980)中的2-氧代螺[4.4]壬烷-1，3-二酮，按照不對(duì)稱疊氮化方法，使用Evan助劑[參閱D.A.Evans等人，J.Amer.Chem.Soc.，112，4011(1990)]而制備的。
更明確地說，在氬氣氛下，將1.6M的丁基鋰的己烷溶液(469ml，750mmol)滴加到手性助劑4(S)-(1-甲乙基)-2-噁唑烷酮(oxazolidinone)｛96.8g，750mmol，描述于L.N.Pridgen and J.Prol.，J.Org.Chem.，54，3231，(1989)中｝在-40℃的無水THF的溶液中?；旌衔镌?40℃下攪拌30分鐘然后冷卻到-78℃。將2-氧代螺[4.4]壬烷-1，3-二酮逐滴加到冷卻的混合物中。然后將混合物在0℃攪拌1小時(shí)。然后將20%(w/v)的檸檬酸水溶液(600ml)加到混合物中，分離有機(jī)相并用EtOAc提取水相。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，干燥(MgSO4)并在減壓下濃縮而得到3-｛2-(1-羧基環(huán)戊基)-1-氧乙基)｝-4(S)-(1-甲乙基)-2-噁唑烷酮的淺紅色固體(300g)。
后者固體(約750mmol)溶于乙腈(1升)中。將芐基溴化物(128.3g，89.2ml，750mmol)和1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]-十一碳-7-烯(114g，112ml，750mmol)加到溶液中。在氬氣下攪拌混合物16小時(shí)。在減壓下除去揮發(fā)物。殘留物溶于H2O/EtOAc。分出有機(jī)相，用10%(w/v)的檸檬酸水溶液、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并在減壓下濃縮至干并得到油狀物。油狀物由己烷/EtOAc中結(jié)晶而得到白色固體的相應(yīng)芐基酯(204g，73%)。
在無水THF(200ml)中的后者化合物(70g，187mmol)的溶液冷卻至-78℃。含6%(w/v)枯烯的0.66M的1，1，1，3，3，3-六甲二硅氮烷鉀的THF溶液(286ml，189mmol)在15分鐘期間加到冷溶液中?；旌衔镌?78℃攪拌45分鐘。將2，4，6-三異丙基苯磺酰基疊氮化物(67g，216mmol)在無水THF中的溶液以一次性加到冷的混合物中，2分鐘后加入冰醋酸(50ml，860mmol)。加熱混合物并在35～45℃攪拌1小時(shí)，減壓下移去揮發(fā)物。用己烷/EtOH(4∶1，1.7升)研制黃色殘留物。所得白色固體收集在濾器上。濾液和SiO2(230～240篩孔)混合。在減壓下除去揮發(fā)物，在35℃減壓下干燥殘留固體以除去枯烯。然后將殘留固體放在SiO2柱上。用己烷/EtOAc(9∶1)洗脫殘留固體和SiO2并濃縮洗脫液而得到3-｛｛2(S)-疊氮-1-氧代-2-｛1-｛苯甲氧基｝-羰基｝環(huán)戊基｝乙基｝-4(S)-(1-甲乙基)-2-噁唑烷酮(66g，86%)。
將后者化合物(13.42g，32.4mmol)在THF/H2O(3∶1，608ml)的溶液冷卻到0℃。在冷溶液中加入過氧化氫/H2O(3∶7，16.3ml，518mmolH2O2)，接著加入LiOH·H2O(2.86g，68.2mmol)?；旌衔镌?℃攪拌45分鐘，然后用10%(w/v)的硫化鈉水溶液(400ml)驟冷，在加入NaHCO3(1.93g)后，在減壓下濃縮混合物。通過連續(xù)提取(NaHCO3水溶液/氯仿)20小時(shí)而回收手性助劑。此后將水相冷至0℃，加入濃鹽酸使之酸性并用EtOAc提取。用鹽水洗滌提取物，干燥(MgSO4)并在減壓下濃縮得到白色固體的所要化合物(8.2g，84%)，化合物的1H NMR(CDCl3)表明為δ1.6-1.8(m，5H)，1.95-2.05(m，2H)，2.20-2.30(m，1H)，4.55(s，1H)，5.12(s，2H)和7.4(m，5H)。
化合物用于本實(shí)施例的(c)節(jié)中。
(b)NH2-(S)CH(CH2CMe3)CH2OBzl按照A.Giannis和K.Sandhoff(Angew.Chem.Int.Ed.Engl，28，218(1989))方法，將H-γ MeLeu-OH用LiBH4/Me3SiCl還原而得到氨基醇NH2-(S)-CH(CH2(Me3)CH2OH。將后者化合物(812mg，6.2mmol)、三乙胺(659mg，6.51mmol)和二-叔-丁基二碳酸酯(1.42g，6.51mmol)在無水THF(15ml)中的混合物，在4℃氮?dú)夥障聰嚢?5分鐘，然后在室溫再攪拌4小時(shí)。減壓下蒸發(fā)THF。殘留物溶于EtOAc。溶液用10%檸檬酸水溶液、5%NaHCO3水溶液和鹽水洗滌。干燥有機(jī)相(MgSO4)并在減壓下濃縮至干。通過快速色層法純化(SiO2，洗脫液∶己烷-EtOAc，2∶1)殘留物而得到Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)-CH2OH(1.23g，86%)。
在Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)-CH2OH(1.23g，5.35mmol)在芐基氯(13ml)的溶液中依次加入四丁銨二硫酸鹽(106mg)和50%NaOH水溶液(3ml)。所得混合物在35～40℃下攪拌90分鐘，用EtOAc稀釋，并用H2O和鹽水洗滌。有機(jī)相干燥(MgSO4)并在減壓下濃縮至干。殘留物溶于己烷。溶液倒入SiO2柱。用己烷洗脫以除去芐基氯，然后用己烷-EtOAc(2∶1)洗脫而得到Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl。最后化合物的1H NMR(CDCl3)表明為δ0.95(s，9H)，1.42(s，9H)，1.30-1.55(m，2H)，3.42(d，J＝4Hz，2H)，3.88(闊，1H)，4.54(m，3H)，7.23-7.4(m，5H)。后者化合物(1.23g，3.99mmol)溶于6N HCl/二噁烷(10ml)。溶液在氮?dú)夥障?℃時(shí)攪拌45分鐘。蒸發(fā)溶劑得到所求化合物的鹽酸鹽(1.05g)?；衔镉糜诒緦?shí)施例的下一節(jié)中而不需再純化。
(c)本實(shí)施例的標(biāo)題化合物通過按照實(shí)施例1的偶合方法，并使用上節(jié)的NH2-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的鹽酸化物作為第一反應(yīng)物而將本實(shí)施例(a)節(jié)的(S)-α-疊氮-1-｛(苯甲氧基)-羰基｝環(huán)戊乙酸作為第二反應(yīng)物，得到N-{(S)-1-芐氧甲基-3，3-二甲丁基｝-(S)-α-疊氮-1-｛(苯甲氧基)羰基｝環(huán)戊乙酰胺。按照N.Maiti等人的方法(Tetrahedron Letter，27，1423(1986))在MeOH中用二氯化錫還原后者化合物而得到本實(shí)施例的標(biāo)題化合物?；衔锏?H NMR(CDCl3)表明為δ0.98(s，9H)，1.22-2.25(m，12H)，3.4(d，J＝4Hz，2H)，3.64(s，1H)，4.18(寬，m，1H)，4.52(s，2H)，5.12(s，2H)，7.18(d，J＝7Hz，1H)，7.22-7.38(寬，m，10H)。
實(shí)施例3中間體Boc-Tbg-CH2-(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OH的制備(a)丙二酸單烯丙酯的鎂鹽將2，2-二甲基-1，3-二噁烷-4，6-二酮(100g，0.69mol)和烯丙醇(47ml，0.69mol)在苯(800ml)中的溶液加熱回流24小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)溶劑。在減壓下蒸餾殘留物得到丙二酸單烯丙酯(71g，71%，bp123-127°/2.2mmHg)。將后者酯(71g，0.48mol)溶于無水THF(300ml)中。溶液中加入乙醇鎂(28.5g，0.245mol)。在氬氣下在室溫(20～22℃)攪拌混合物4小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)，殘留物用Et2O研制而得到一種褐色固體。將固體研磨這細(xì)粒并在減壓下干燥而得到所要鎂鹽(56g，73%)。該鹽用于本實(shí)施例的下一節(jié)。
(b)將Boc-Tbg-CH2C(O)OCH2＝CH21，1-羰基二咪唑(12.6g，78mmol)加到Boc-Tbg-OH(15g，64mmol)在無水乙腈(150ml)的溶液中。在氬氣氛下在室溫?cái)嚢杌旌衔?小時(shí)。將丙二酸單烯丙酯的鎂鹽(24g，78mmol)和4-(N，N-二甲氨基)吡啶(100mg)加到混合物中?；旌衔锛訜峄亓?小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。其后，在減壓下濃縮混合物。殘留物溶于EtOAc(300ml)中。將溶液用10%檸檬酸水溶液(2×100ml)和鹽水(2×100ml)洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)至干。殘留物用快速色層法純化(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，9∶1)而得到棕色油狀的所要烯丙酯(19.4g，96%)，放置結(jié)晶。1H NMR(CDCl3)表明，該化合物作為在氯仿中按3∶1之比的酮-烯醇互變體混合物存在，δ0.96(s，9H，烯醇形式)，1.04(s，9H)，1.46(s，9H)，3.65(s，2H)，3.90(d，J＝8.5Hz，1H，烯醇形式)，4.20(d，J＝7.5Hz，4.65(m，2H)，5.10(寬，d，J＝7.5Hz，1H)，5.20-5.40(m，2H)，5.80-6.05(m，1H)，12(s，1H，烯醇形式)。
烯丙酯用于本實(shí)施例的(d)節(jié)中。
(c)(E)-5，5-二甲-4-氧代-2-己烯酸乙基酯按照S.Manfredini等人的方法(Tetrahedron Letters，29，3997(1988))制備這種乙基酯。粗制油狀產(chǎn)品用快速色層(SiO2，洗脫液己烷)純化而得到黃色油狀的所要乙基酯。1H NMR(CDCl3)δ1.21(s，9H)，1.33(t，J＝7.5Hz，3H)，4.28(q，J＝7.5Hz，2H)，6.78(d，J＝15.5Hz，1H)，7.51(d，J＝15.5Hz，1H)。
乙基酯用于本實(shí)施例的下一節(jié)。
(d)本實(shí)施例的標(biāo)題化合物將描述于本實(shí)施例(b)節(jié)的Boc-Tbg-CH2C(O)OCH2＝CH2(0.67g，2.1mmol)在氬氣氛下溶于無水THF(25ml)中。溶液中加入氫化鈉(60%油分散體，0.095g，2.4mmol)?；旌衔镌谑覝?cái)嚢?0分鐘。將本實(shí)施例(c)節(jié)中描述的(E)-5，5-二甲基-4-氧代-2-己烯酸乙酯(0.435g，2.36mmol)加到混合物中，攪拌混合物直到TLC判斷反應(yīng)完成為止(約6小時(shí))。其后，混合物用10%檸檬酸水溶液驟冷。減壓下除去THF而所得濃縮液用EtOAc提取(3×25ml)。提取物用水洗，干燥(MgSO4)并在減壓下濃縮。殘留物用快速色層法(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，9∶1)純化而得到相應(yīng)的邁克爾反應(yīng)加成物(1.06g，100%)。
邁克爾加成物按下面轉(zhuǎn)化為Boc-Tbg-CH2-(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OH在氬氣氛下將四重三苯膦鈀(O)(0.20g，0.18mmol)和三苯膦(0.060g，0.23mmol)溶于CH2Cl2(10ml)中。加入乙腈(20ml)并將溶液冷卻到0℃。在溶液中加入吡咯烷(0.28ml，2.7mmol)后加入邁克爾加成物(1.06g，2.1mmol)。將混合物在1小時(shí)期間升至室溫并攪拌20小時(shí)。之后在氬氣下回流加熱反應(yīng)混合物1小時(shí)以完成反應(yīng)。蒸發(fā)溶劑并用快速色層法(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc 9∶1)純化殘留物而得到Boc-Tbg-CH2(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OEt(0.77g，83%)。然后將后者化合物(0.77g，1.7mmol)溶于乙二醇二甲醚-H2O(1∶1，10ml)中。在溶液中加入氫氧化鋰一水化合物(0.31g，7.4mmol)。在室溫?cái)嚢杌旌衔?小時(shí)，用10%檸檬酸水溶液(20ml)使之酸化并用EtOAc(3×25ml)提取。干燥提取物(MgSO4)并在減壓下濃縮而得到褐色固體的本實(shí)施例的標(biāo)題化合物(0.69g，由Boc-Tbg-CH2C(O)O-CH2CH＝CH2的總產(chǎn)率為80%)。產(chǎn)品是55045的非對(duì)映異構(gòu)體混合物(由NMR表明)。1H NMR(CDCl3)δ0.99(s，9H，少量異構(gòu)體)，1.14(s，9H，主要異構(gòu)體)，1.43(s，9H)，2.68-3.12(m，4H)，3.30(m，1H)，4.09(d，J＝9Hz，1H)，5.11(d，J＝9Hz，1H)。
實(shí)施例4中間體H-TbgCH2CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CM3)CH2OBzl的制備按照本實(shí)施例1的偶合方法并使用實(shí)施例2的標(biāo)題化合物(3.42g，7.13mmol)作為第一反應(yīng)物將實(shí)施例3的標(biāo)題化合物(2.50g，6.48mmol)用作第二反應(yīng)物，粗制產(chǎn)品的快速色層分離(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，4∶1)得到標(biāo)題化合物的相應(yīng)N-Boc衍生物(4.64g，84%;Rf＝0.21，己烷-EtOAc，7∶3)。后者衍生物(4.64g，5.44mmol)在6N HCl/二噁烷(50ml)的溶液中在室溫?cái)嚢?小時(shí)，并在減壓下濃縮。殘留物溶于Et2O。將后者溶液用NaHCO3的飽和水溶液和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮而得到含有二種非對(duì)映異構(gòu)體黃色油。通過快速色層(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc-MeOH，5∶4.5∶0.5)而分離二種異構(gòu)體。得到無色油狀的所要化合物(即，更極性;Rf＝0.18，EtOAc-己烷-MeOH 7∶3∶0.5)，(2.52g，52%)。本實(shí)施例的標(biāo)題化合物的異構(gòu)體是用于下一個(gè)實(shí)施例中而不需再純化。
實(shí)施例5Boc-(N-Me)Val-Tbg-CH2(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的制備按照實(shí)施例1的偶合方法并使用實(shí)施例4的標(biāo)題化合物(4.45g，5.95mmol)作為第一反應(yīng)物而用N-甲基纈氨酸(4.41g，17.9mmol)作為第二反應(yīng)物，粗制產(chǎn)品的快速色層分離(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，7∶3)得到本實(shí)施例的標(biāo)題化合物(4.02g，72%收率)。1H NMR(CDCl3)δ0.87(d，J＝7Hz，6H)，0.90(s，18H)，1.10(s，9H)，1.48(s，9H)，1.5-2.0(m，10H)，2.30(m，1H)，2.5-3.1(m，5H)，2.80(s，3H)，3.30(m，2H)，4.0(d，J＝12.5Hz，1H)，4.20(m，1H)，4.32(d，J＝8.5Hz，1H)，4.49(d，J＝4.5Hz，2H)，4.64(d，J＝11Hz，1H)，5.18(d，J＝5Hz，2H)，6.78(寬，d，J＝8.5Hz，1H)，7.11(寬，d，J＝8.5Hz，1H)，7.18(寬，d，J＝11Hz，1H)，7.2-7.45(m，10H)。
實(shí)施例6PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(CyPn)-γMe亮氨醇的制備實(shí)施例5的標(biāo)題化合物(4.02g，4.25mmol)在6N HCl/二噁烷(30ml)中的溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，在減壓下濃縮，得到以鹽酸鹽形式的實(shí)施例5標(biāo)題化合物的游離N-端氨基衍生物。之后，按實(shí)施例1偶合方法并用后者化合物作第一反應(yīng)物而將苯基丙酸(2.00g，13.3mmol)作為第二反應(yīng)物，通過快速色層(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，3∶2)純化粗制產(chǎn)品得到PhCH2CH2C(O)-N-Me-Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp-(cyPn)(OBzl)-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的白色泡沫狀物(4.00g，94%)，Rf＝0.35，己烷-EtOAc，1∶1)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.79(d，J＝7Hz，3H)，0.91(s，9H)，0.93(s，9H)，1.08(s，9H)，1.5-1.9(m，10H)，2.27(m，1H)，2.5-2.85(m，7H)，2.90(s，3H)，2.97(m，4H)，3.27(dd，J＝11，7Hz，1H)，3.55(dd，J＝11，4.5Hz，1H)，3.48(q，J＝7.5Hz，2H)，4.22(m，1H)，4.27(d，J＝8Hz，1H)，4.48(1，J＝8.5Hz，2H)，4.53(d，J＝11Hz，1H)，4.63(d，J＝0.5Hz，1H)，5.16(q，J＝13Hz，2H)，6.72(d，J＝8Hz，1H)，7.02(d，J＝8.5Hz，1H)，7.17(d，J＝9.5Hz，1H)，7.18-7.4(m，10H)。
將后者化合物(4.00g，4.03mmol)進(jìn)行氫解｛20%Pd(OH)2/C(200mg)，1大氣壓H2，EtOH，5小時(shí)｝。反應(yīng)完成后，以通過45μm膜的過濾而從反應(yīng)混合物中除去催化劑。減壓下濃縮濾液得到一種清徹油。將油溶于Et2O(100ml)。減壓下將溶液蒸發(fā)至干。重復(fù)溶解和蒸發(fā)方法，從而得到一種白色固體。固體用己烷研制，過濾并在減壓下干燥而得到標(biāo)題化合物(3.12g，95%)，1H NMR(d6-DMSO)，400MHz，表明化合物以50∶50的兩種旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物存在于DMSO中。δ0.71-0.92(m，24H)，1.05(s，4.5H)，1.06(s，4.5H)，1.20-1.78(m，10H)，1.93-2.16(m，2H)，2.48-2.83(m，6H)，2.84(s，1.5H)，2.92(s，1.5H)，2.96-3.06(m，1H)，3.10-3.23(m，2H)，3.72-3.81(m，1H)，4.09-4.14(m，1H)，4.22(d，8Hz，0.5H)，4.54-4.62(寬m，1H)，4.73-4.81(m，1.5H)，7.12-7.29(m，6H)，7.94(d，J＝10Hz，1H)，8.04(d，J＝8Hz，0.5H)，8.32(d，J＝8.5Hz，0.5H)。
按照實(shí)施例6的方法，但以2-(苯甲基)-3-苯丙酸(二芐基乙酸代替苯丙酸。得到(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇。
實(shí)施例7Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)CO-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇的制備將異氰酸1-乙丙酯(28mg，0.248mmol)加到實(shí)施例4的標(biāo)題化合物(23mg，0.030mmol)和三乙胺(6mg，0.057mmol)在無水CH2Cl2的溶液中。在氬氣氛下在0℃攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。TLC(EtOAc-己烷，1∶1)表明反應(yīng)完成。減壓下蒸發(fā)溶劑。通過快速色層(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，6∶4)純化殘留物而得到本實(shí)施例的標(biāo)題化合物的相應(yīng)的二芐基衍生物(16mg)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.9(t，J＝7Hz，3H)，0.92(t，J＝7Hz，3H)，0.94(s，9H)，0.95(s，9H)，1.10(s，9H)，1.25-1.90(m，14H)，2.52(m，1H)，2.68(m，1H)，2.81(m，1H)，2.94-3.07(m，2H)，3.27(dd，J＝7.2，9Hz，1H)，3.36(dd，J＝5.5，9Hz，1H)，3.46(m，1H)，4.07(d，J＝9Hz，1H)，4.23(m，1H)，4.28(d，J＝9Hz，1H)，4.48(dd，J＝10Hz，2H)，4.66(d，J＝10Hz，1H)，4.74(d，J＝9Hz，1H)，5.17(dd，J＝14Hz，2H)，7.10(d，J＝8.5Hz，1H)，7.2-7.45(m，11H)。
將后面二芐基衍生物進(jìn)行氫解(10%鈀覆蓋的碳，1大氣壓，EtOH)而得到標(biāo)題化合物。質(zhì)譜703(M+Na)+。
實(shí)施例8用于加工通式1肽C-端的其它代表性中間體的制備(a)NH2-(R)-CH(Et)CMe3在4，4-二甲基-3-戊酮(106g，0.92mmol)和(R)-α-甲芐胺(111g，0.92mmol)在苯(1升)中的冷溶液(0℃)中，加入TiCl4(50.5ml，0.46mmol)在苯(200ml)中的溶液，其速度是要使混合物的溫度保持在10°以下。然后，混合物在40°機(jī)械攪拌3小時(shí)，冷卻到室溫并通過硅藻土過濾。用Et2O洗滌硅藻土。合并濾液和洗液并濃縮。殘留物溶于無水MeOH(2升)中。溶液冷卻到0°并分批加入NaBH4(20g，0.53mmol)，同時(shí)將混合物的溫度保持在5°以下。蒸發(fā)甲醇。殘留物溶于Et2O。將溶液用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)至干而得到紅色油(NMR表明是一種18∶1的非對(duì)映異構(gòu)體的混合物)。用快速色層(SiO2，洗脫液EtOAc/己烷，7∶93)純化油而得到一種液體的N-(1-(R)-苯乙基)-1(R)-乙基-2，2-二甲丙胺(110g，54%)。將這物質(zhì)溶于己烷(1.5升)。在溶液中，在15分鐘期間加入6N HCl的二噁烷溶液(90ml)。所得白色固體收集在濾器中然后用己烷洗滌而得到N-(1(R)-苯基-乙基)-1(R)-乙基-2，2-二甲丙基氫氯化物(125g，97%)。1H NMR(CDCl3)δ0.55(t，J＝7.5Hz，3H)，1.14(s，9H)，1.54-1.95(m，2H)，2.23(d，J＝6.5Hz，3Hz)，2.36-2.44(m，1H)，4.31-4.49(m，1H)，7.30-7.48(m，3H)，7.74-7.79(m，2H)。
后面化合物(41.5g)在MeOH(120ml)中的溶液與10%(W/V)Pd/C混合，并在帕爾(Parr)氫解器上在50psi氫氣下在室溫?cái)噭?dòng)混合物48小時(shí)。過濾混合物，濃縮濾液而得到以其鹽酸加成鹽形式存在的所要NH2-(R)-CH(Et)CMe3的白色固體(25g，100%)。1H NMR(CDCl3)δ1.10(s，9H)，1.22(t，J＝7Hz，2H)，1.58-1.90(m，2H)，2.70-2.85(m，1H)，8.10-8.40(寬，s，3H)。
按同樣方法，按前面方法中，以3，3-二甲基-2-丁酮代替4，4-二甲基-3-戊酮，而得到NH2-(R)-CH(Me)CMe3·HCl。
(b)NH2N(Me)CMeNaOH(3.3g，8.2mmol)加到鹽酸叔丁基肼(5.1g，41mmol)溶液中。15分鐘后，在混合物中加入二叔丁基二碳酸酯(9.0g，42mmol)在THF(15ml)中的溶液中?；旌衔镌谑覝?cái)嚢?5小時(shí)后用Et2O(3×20ml)萃取。合并的提取物用Na2CO3的飽和水溶液洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮而得到一種白色固體(7.6g)。后面的物質(zhì)(1.3g，6.9mmol)溶于無水DMF。在溶液中加入NaH在礦物油的60%(W/V)分散液(0.28g，即6.9mmol的NaH)，然后加入DMF(1.5ml)?；旌衔飻嚢?0分鐘后，加入純甲基碘(0.97g，6.9mmol)。在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物15小時(shí)后在H2O2和Et2O之間分配。分出有機(jī)相，用0.5N HCl水溶液洗滌(2×)。合并的水相用NaHCO3堿化并用EtPAc提取(3×)。EtOAc提取物干燥(MgSO4)并濃縮至干而得到Boc-NHN(Me)CMe3的白色固體(0.9g，64%);1H NMR(CDCl3)δ1.07(s，9H)，1.44(s，9H)，2.43(s，3H)，5.29(s，1H)。后面固體(0.9g)溶于6N HCl/二噁烷(5ml)。溶液在室溫放置30分鐘后濃縮至干。用己烷研制殘留物而得到白色固體的NH2N(CH3CMe3·HCl(0.5g)。
按同樣方式，但用乙基碘代替前面方法中的甲基碘，得到NH2N(Et)-CMe3·HCl，mp.129-134℃。
實(shí)施例9按照實(shí)施例7的方法，制備用于加工通式1的肽的N-端的其它代表性中間體的方法(a)異氰酸1-丙基丁酯這中間體由商購的4-氨基庚烷通過V.S.Goldesmidt和M.Wick，Liebigs.Ann.Chem，575 1217(1952)的方法制備。
(b)異氰酸1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯酯將丙腈(14.5g，264mmol)在無水Et2O(40ml)的溶液滴加到1.0M烯丙基溴化鎂/Et2O(880ml)中。反應(yīng)混合物在回流時(shí)機(jī)械攪拌2小時(shí)，然后冷卻到0℃。在冷卻的反應(yīng)混合物中小心地加入NH4Cl飽和水溶液(320ml)。分出有機(jī)相，干燥(MgSO4)，冷卻至0°并在同樣溫度下與1M HCl/Et2(200ml)混合。收集所得固體，在減壓下干燥(約27g)。后面物質(zhì)溶于CH2Cl2(200ml)。用10%(W/V)的Na2CO3水溶液(2×)洗滌溶液，然后用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮至干以得到黃色油。蒸發(fā)該油(82-85°/20乇)得到無色液體的1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯胺(11.6g，34%);1H NMR(CDCl3)，400MHz)δ0.89(t，J＝7Hz，3H)，1.39(q，J＝7Hz，2H)，2.11(d，J＝7Hz，2H)，5.06-5.14(m，4H)，5.80-5.89(m，2H)。
后者化合物通過V.S.Goldesmidt和M.Wick(同上)的方法轉(zhuǎn)化為異氰酸1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯酯。
上一節(jié)(b)方法的第一步，即1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯胺的制備是基于G.Alvernhe和A.Laurent[Tetrahedron Lett.，1057(1973)]所述的通用方法。其總體方法是在適當(dāng)選擇可用于制備其它所需異氰酸酯中間體的反應(yīng)物，以最終制備在N-端有不飽和的通式1的肽，即通式1的肽，其中A-B是通式R5-NH-C(O)的不飽和的烷氨基羰基，其中R5是支鏈的不飽和烴基團(tuán)，如1-甲基-1-(2-丙烯)-3-丁烯基。但要注意，當(dāng)所需異氰酯中間體是用于按照實(shí)施例7的方法，則最終產(chǎn)品將是N-端飽和的通式1的相應(yīng)肽。再者，后者方法代表用于制備這種相應(yīng)肽的實(shí)用方法，例如，MePr2CNHC(O)-或EtPr2-CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Aap(cyPn)-NHCH2CMe3，分別參閱實(shí)施例13的表Ⅳ中所列的第8和第5個(gè)化合物。
另一方面，當(dāng)需要保留N-端的不飽和時(shí)，通式1的N-端不飽和肽可以按相應(yīng)的飽和肽相同方法制備，只是要使用羧基保護(hù)基，這種保護(hù)基可以在有不飽和存在時(shí)選擇性地除去。用于此目的的實(shí)用羧基保護(hù)基是烯丙基。因此，所需要的N-端不飽和肽可以按照實(shí)施例2-4和7的方法制備，但要以(S)-α-疊氮-1-(2-丙烯基氧羰基)-環(huán)戊酸代替實(shí)施例2的(S)-α-疊氮-1-｛(苯甲氧基)-羰基｝環(huán)戊酸。前者化合物可以按實(shí)施例2(a)中用于苯甲氧基衍生物所述的完全相同的方法制備，除了用烯丙基溴代替芐基溴之外。最后去保護(hù)步驟(即除去羧基保護(hù)基、或當(dāng)目的肽的E是NHCH(12)-Z，其中R12按本文所限定的，Z為C(O)OH的情況下的基團(tuán))可以按照R.Déziel，Tetrahedron Lett.，28 4371(1987)中所述方法進(jìn)行，最好在有四重(三苯膦)鈀(O)存在下使用吡咯烷進(jìn)行。這樣制備的通式1的N-端不飽和肽的實(shí)例是Me(CH2＝CH-CH2)2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，參見列于實(shí)施例13表Ⅳ中的第7個(gè)化合物。
也應(yīng)注意，當(dāng)目的N-端不飽和肽的E是NHCH(R10)-Z(其中R10按本文所定義的，Z是CH2OH)時(shí)，則用于將含羥基C-端單元結(jié)合進(jìn)行所需肽中的中間體要保護(hù)原來的C端羥基。在這種情況下的羥基保護(hù)基也可以是能在有不飽和時(shí)選擇性除去的保護(hù)基。在這種情況下方便的保護(hù)基是烯丙氧羰基基團(tuán)，參見E.J.Corey和J.W.Suggs，J.Org.Chem，38，3223(1973)。
因此，通過使用適當(dāng)?shù)闹虚g體，實(shí)施例1-7的系列偶合和去保護(hù)方法就可以用來制備通式1的其它化合物，例如在以下實(shí)施例表中所列舉的那些。在某些情況下，最終產(chǎn)品的沉淀不是純物質(zhì)。在這種情況下，產(chǎn)品可以通過半制備HPLC在C-18反相柱上，使用各含0.06%TFA的乙腈和水的梯度而進(jìn)行純化。為此，在純化前將粗制產(chǎn)品溶于0.1M NH4OH水溶液，使用0.1M AcOH水溶液使溶液pH回到約7。當(dāng)使用時(shí)，在這方式下，非對(duì)映異構(gòu)體的混合物可以分離。
可以這樣制備的通式1其它化合物的一些實(shí)例是(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3和(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3。
實(shí)施例10抑制皰疹單純性病毒(HSV-1)核糖核苷酸還原酶(a)酶的制備HSV-1核糖核苷酸還原酶(部分純化)是通過用菌株F HSV-1病毒以形成10菌斑單位/細(xì)胞感染的休眠BHK 21/C13細(xì)胞而制得的，如描述于E.A.Cohen等人，J.Gen.Virol.，66 733(1985)中的方法。
(b)對(duì)所列舉的肽的測(cè)定和結(jié)果按照P.Gaudreau等人在J.Biol.Chem，262，12413(1987)中所述方法，得到列于下面表1的測(cè)定結(jié)果。對(duì)每一個(gè)列舉的通式1化合物的測(cè)定結(jié)果，是以產(chǎn)生50%最大抑制酶活性的化合物濃度(IC50)來表示。用于每個(gè)測(cè)定的酶制劑的單位數(shù)是一定的，它基于酶制劑的比活度。結(jié)果是相對(duì)于不含測(cè)試化合物的對(duì)照實(shí)驗(yàn)中所得的活度，并以四次測(cè)定的平均值表示而且各次之間的相差低于10%。
表1通式1的化合物 FAB/MS IC50(m/z) μM(M+Na)+實(shí)施例6標(biāo)題化合物 813*0.27PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 849 0.19CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 848 0.26CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 791 0.33CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 803 0.32CH{CH2C(O)-(環(huán)戊基)}C(O)-Asp-(cyPn)-NHCH2CMe3PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 751.5 0.33CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 659 0.23CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(S)-CH{CH2C(O)- 716 0.17(吡咯烷代)}C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeuclnolEt2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 717 0.12CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 716 0.22CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2實(shí)施例7的標(biāo)題化合物 703 0.15Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)- 671 0.22(環(huán)戊基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 597*0.20CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3
表1(續(xù))通式1的化合物 FAB/MS IC50(m/z) μM(M+Na)+Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 745 0.15CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 731 0.20CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 665*0.08CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3＊(M+H)+實(shí)施例11在細(xì)胞培養(yǎng)中皰疹單純性病毒(HSV-2)復(fù)制的抑制測(cè)定將BHK-21/C13細(xì)胞(ATCC CCL 10)以加有8%(V/V)胎牛血清(FBS，Gibco Canade Inc)的α-MEM培養(yǎng)基(Gibco Canada Inc，Burlirgton，Ontario，Canada)在150cm2T-錐形瓶(1.5×106細(xì)胞/瓶)培養(yǎng)2天。細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化后轉(zhuǎn)入24孔試驗(yàn)板的新鮮培養(yǎng)基中，得到在每孔750μl培養(yǎng)基中有25×105細(xì)胞。細(xì)胞在37℃保溫6小時(shí)，使其附著在板上，此后，細(xì)胞以500μl加有0.5%(V/V)FBS的α-MEM洗滌一次，然后以750μl相同培養(yǎng)基(低血清)培養(yǎng)3天。在此血清不足階段后，除去低血清培養(yǎng)基，而細(xì)胞在500μlBBMT中培養(yǎng)2-3小時(shí)。｛BBMT培養(yǎng)基描述于P.Brazeau等人的Proc.Natl.Acad，Sci USA，79，7909(1982)｝。之后細(xì)胞在100μl BBMT培養(yǎng)基中以HSV-2(感染復(fù)數(shù)＝0.02.PFU/細(xì)胞)感染。(注所用HSV-2是菌株HG-52，參見Y.Langelier和G.Buttin，J.Gen.Virol.，57，21(1981);病毒保存在-80℃)。在37℃下病毒吸附1小時(shí)后，除去培養(yǎng)基，用BBMT(3×250μl)洗滌細(xì)胞。在每孔的細(xì)胞，以有或沒有(對(duì)照)適當(dāng)濃度的測(cè)試制劑溶于200μl的BBMT培養(yǎng)基培養(yǎng)。在37℃保溫29小時(shí)后，通過先將試驗(yàn)板在-80℃冷凍，接著解凍而收集感染細(xì)胞。藉助于融冰碎片將每孔中的細(xì)胞由孔壁刮下。完全解凍后，收集細(xì)胞懸浮液并用150μl BBMT培養(yǎng)基沖洗每個(gè)孔。病毒樣品(懸浮液加洗液)在4℃輕輕地聲處理4分鐘。通過離心除去細(xì)胞碎片(在4℃，1000×g下10分鐘)。收集上清液并貯存在-80℃直到測(cè)定病毒濃度。
病毒濃度的測(cè)定是按照M.Langlois等人在Iournal of Biological Standardization，14，201(1986)中的比色測(cè)定法的改進(jìn)法進(jìn)行的。
更具體地說，按上述同樣方法，將BHK-21/C13細(xì)胞胰酶消化并轉(zhuǎn)入96孔微滴定板的新鮮培養(yǎng)基中而得到每孔100μl的培養(yǎng)基中有20000細(xì)胞。在制備板上的細(xì)胞在37℃保溫2小時(shí)。在這期間，病毒樣品解凍而輕輕地聲處理15秒鐘，并制成對(duì)數(shù)稀釋樣品系(1/5序列50μl樣品加200μl BBMT培養(yǎng)基，序列稀釋是以多道吸管進(jìn)行的。
在完成上面BHK-21/C13細(xì)胞的兩小時(shí)培養(yǎng)后，培養(yǎng)基以加有3%(V/V)FBS的α-MEM培養(yǎng)基代替。現(xiàn)在細(xì)胞已可以用各種病毒樣品稀釋液進(jìn)行感染。將不同稀釋液的等分樣品(50μl)轉(zhuǎn)入試驗(yàn)板的合適的孔中。所得感染細(xì)胞在37℃保溫2天。然后在每孔中加入50μl 0.15%(V/V)中性紅染料在Hank平衡鹽溶液(pH7.3，Gibco Canada Inc)中的溶液。制備好的試驗(yàn)板在37℃保溫45分鐘。吸出每孔中的培養(yǎng)基，細(xì)胞用200μl Hank平衡鹽溶液洗一次。洗滌后，通過加入100μl 1∶1的0.1M索楞遜(Sorensen)檸檬酸鹽緩沖液(pH4.2)和乙醇的混合物后，染料由細(xì)胞中釋出。(索楞檸檬酸鹽緩沖液按下方式制備首先，在1N NaOH水溶液(200ml)中溶解一水檸檬酸(21g)而制備0.1M檸檬酸二鈉溶液，并加入足量的過濾水制成1升。然后，0.1M檸檬酸二鈉溶液(61.2ml)與0.1N HCl水溶液(38.8ml)混合，如需要，將所得溶液的pH調(diào)到4.2)。對(duì)孔中的混合液進(jìn)行輕輕地旋渦動(dòng)作以保證適當(dāng)?shù)幕旌稀Ｔ囼?yàn)板孔通過分光光度計(jì)板閱讀器(spectrophotometer plate reader)在540μm掃描以計(jì)算存活細(xì)胞數(shù)。在這情況下，對(duì)各種不同濃度試驗(yàn)制劑可以測(cè)定其病毒生長抑制百分率，以及可以計(jì)算出達(dá)到50%抑制病毒復(fù)制的試驗(yàn)制劑的濃度，即EC50。
結(jié)果下面表Ⅱ給出了按照本實(shí)施例細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定法評(píng)估式1的肽所得結(jié)果的實(shí)例。
表Ⅱ通式1的化合物 EC50μM實(shí)施例6的標(biāo)題化合物 15PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH-(R)- 65CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH-(R)- 60CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 56CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(S)-CH{CH2C(O)- 200(吡咯烷代)}C(O)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)- 50(環(huán)戊基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 30CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 24CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3(1-丙環(huán)戊基)氨羰基-Tbg- 40CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)- 30(環(huán)戊基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3
實(shí)施例12對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基抑制HSV-2復(fù)制中無環(huán)鳥苷、實(shí)施例6的式1標(biāo)題肽以及二制劑的結(jié)合物的比較下面表Ⅲ說明了按照實(shí)施例11的測(cè)定方法評(píng)估無環(huán)鳥苷、實(shí)施例6的標(biāo)題肽以及兩者結(jié)合物時(shí)所得的結(jié)果。
表Ⅲ化合物 EC50評(píng)估樣品濃度的范圍 μM無環(huán)鳥苷*0.032 to 20 μM 3.5肽**1.23 to 100 μM 19無環(huán)鳥苷 0.32 to 20 μM 1.4+2μM 肽無環(huán)鳥苷 0.32 to 20 μM 0.9+4μM 肽無環(huán)鳥苷 0.32 to 20 μM 0.9+6μM 肽無環(huán)鳥苷 0.32 to 20 μM 0.8+8μM 肽無環(huán)鳥苷 0.32 to 20 μM 0.42+10μM 肽＊無環(huán)鳥苷得自Bourroughs Wellcome Inc.，Kirkland，Quebec，Canada＊＊實(shí)施例6的式1標(biāo)題肽結(jié)果表明，在無環(huán)鳥苷和式1的肽之間有協(xié)同作用，將肽加到無環(huán)鳥苷所得的結(jié)合物其EC50大大低于單獨(dú)無環(huán)鳥苷所得的EC50。
無環(huán)鳥苷和式1的肽相結(jié)合的協(xié)同作用可通過對(duì)上述結(jié)果使用均等興奮方法(isobole method)而進(jìn)一步說明，參見J.Suhnel，Aritiviral Research，13，23(1990)及其參考文獻(xiàn)。在這方法的使用中所得正結(jié)果在所附

圖1中圖示地說明。
實(shí)施例13本申請(qǐng)的式1肽的其它實(shí)施例綜合于下表Ⅳ和Ⅴ中，包括其特征的質(zhì)譜數(shù)據(jù)以及實(shí)施例10測(cè)試中的測(cè)試結(jié)果，即IC50;和實(shí)施例11的細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試的結(jié)果，即EC50。
表Ⅳ具有通式A-B-Tbg-CH2-(R)-CH- FAB/MS IC50EC50(CH2C(O)Me3)C(O)-Asp(cyPn)-E的 (m/z) μM μM式1化合物 (M+H)+其中A-B和E是如下所規(guī)定的:
A-B EPr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CMe3679 0.28 14Pr2CHNHC(O) NHCH2CMe2Et 679 0.24 16Pr2CHNHC(O) NHCH2-(R,S)-CH(Me)Et 665 0.29 50EtPr2CHNHC(O) NHCH2CHEt2679 0.41 42MePr2CHNHC(O) NHCH2CMe2Et 693 0.36 29Pr2CHNHC(O) NHNHCMe3666 0.22 84Me(CH2=CHCH2)2- NHCH2CMe3691 0.27 30CNHC(O)MePr2CNHC(O) NHCH2CMe3678 0.28 26Pr2CHNHC(O) NHCH2-(cyclohexyl) 691 0.36 47EtPr2CNHC(O) NHCH2CMe3693 16(CH2=CHCH2)2- NHCH2CMe3661 0.37 100CHNHC(O)
表IV(續(xù))具有通式A-B-Tbg-CH2-(R)-CH- FAB/MS IC50EC50(CH2C(O)Me3)C(O)-Asp(cyPn)-E的 (m/z) μM μM式1化合物 (M+H)+其中A-B和E是如下所規(guī)定的:
A-B EBu2CHNHC(O) NHCH2CMe3693 0.53 65Pr2CHNHC(O) NH-(S)-CH(CMe3)CH2OH 695 0.23 48Me2PrCNHC(O) NHCH2CMe3651 0.39 58Pr2CHNHC(O) NHCH2CEt2Me 693 0.34 18Pr2CHNHC(O) NHCMe2CMe3693 0.51 38(CH2=CHCH2)2- NH-(R)-CH(Me)CMe3675 0.32 48CHNHC(O)Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)C(Me)2- 693 0.50 21EtPr2CHNHC(O) cis-NH-(2-甲基- 691 0.67 75環(huán)己基)Pr2CHNHC(O) trans-NH-(2-甲基- 691 0.69 60環(huán)己基)(R,S)-EtPrCH- NHCH2CMe3651 0.23 35NHC(O)(R,S)-EtBuCH- NHCH2CMe3665 0.26 35NHC(O)Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Et)CMe3693 0.34 10Pr2CHNHC(O) NH-(2,2-二甲基- 706 0.40 24環(huán)己基)EtPr2CNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CMe3708 0.41 10Pr2CHNHC(O) NHCH2CMe2Pr 694 0.42 35
表IV(續(xù))具有通式A-B-Tbg-CH2-(R)-CH- FAB/MS IC50EC50(CH2C(O)Me3)C(O)-Asp(cyPn)-E的 (m/z) μM μM式1化合物 (M+H)+其中A-B和E是如下所規(guī)定的:
A-B EPr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3694 0.37 14Pr2CHNHC(O) NHCH2CH2CMe3701*0.58 72Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Pr)CMe3707 0.43 15Pr2CHNHC(O) NH-(2,2-二甲基- 691 0.38 31環(huán)戊基)Pr2CHNHC(O) NH-N(Me)CMe3680 0.27 110Pr2CHNHC(O) NHCH2CEt3707 0.52 19EtPr2CNHC(O) NH-(R)-CH(Et)CMe3722 0.36 6Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CHEt2693 0.33 16Pr2CHNHC(O) NHN(Et)CMe3694 0.22 80*(M+Na)表V通式1的化合物 FAB/MS IC50EC50(m/z) μM μM(M+H)+Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 673*0.36 39C(O)CHMe2)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH- 679 80(CH2C(O)CH2CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-Leu-OH
表V(續(xù))通式1的化合物 FAB/MS IC50EC50(m/z) μM μM(M+H)+Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2- 691 0.37 61C(O)-(環(huán)己基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2- 663 0.31 46C(O)-(環(huán)丁基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 651 0.30 62C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-allyl}-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 653 0.25 46C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Pr}-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 679 0.21 33C(O)CMe2Et)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2- 691 0.24 35C(O)-(1-甲環(huán)戊基}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(CMe2Et)-C(O)- 693 0.25 13CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp-(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3Pr2CHNHC(O)-Val-CH2-(R)-CH(CH2- 665 0.22 37C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3＊(M+Na)
權(quán)利要求
1.通式1的肽，或其治療上可用鹽，其中A是苯基(低級(jí))鏈烷酰基；在其芳基部分用低級(jí)烷基、氨基、鹵素、羥基或低級(jí)烷氧基單取代的苯基(低級(jí))鏈烷酰基；用苯基或單取代苯基雙取代的低級(jí)鏈烷?；?，其中，單取代的基選自低級(jí)烷基、氨基、鹵素、羥基或低級(jí)烷氧基；或者是{苯基(低級(jí))-烷基}氨羰基}；而B是N(CH3)-CHR4(CO)其中R4是低級(jí)烷基；或A和B一起形成通式為R5-NH-C(O)的飽和或未飽和的烷基氨羰基，其中R5是(2-10C)-烷基、低級(jí)環(huán)烷基、1-(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基)、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基或1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基；D是NH-CHR6C(O)，其中R6是低級(jí)烷基或用羧基、羥基、巰基或芐氧基取代的低級(jí)烷基；R1是低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、1-(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基)，或NR7R8，其中R7是氫原子或低級(jí)烷基而R8是低級(jí)烷基，或R7和R8與和它們相連的氮原子一起形成吡咯烷代、哌啶子基、嗎啉代或4-甲基哌嗪代；R2是氫或低級(jí)烷基而R3是低級(jí)烷基，或者R2是氫而R3是低級(jí)烷烯基或苯基-(1-4)烷基，或者R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成低級(jí)環(huán)烷基；E是NHR9，其中R9是(4-9C)烷基；低級(jí)環(huán)烷基；以低級(jí)烷基或(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基)單取代或雙取代的低級(jí)環(huán)烷基；或E是NHNR10R11，其中R10是氫或低級(jí)烷基而R11是(4-9C)烷基；或者E是NHCH(R12)-Z，其中R12是(4-9C)烷基；低級(jí)環(huán)烷基或(低級(jí)環(huán)烷基)-(低級(jí)烷基)和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是低級(jí)烷基。
2.按權(quán)利要求1定義的肽，或其治療上可用鹽，其中A是苯基(低級(jí))鏈烷酰基;(4-氨苯基)-(低級(jí))-鏈烷?；?(4-鹵代苯)-(低級(jí))鏈烷酰基，(4-羥苯基)-(低級(jí))鏈烷?；?｛4-(低級(jí)烷氧基)苯基｝-(低級(jí))鏈烷?；?用苯基、4-鹵代苯基或4-(低級(jí)烷氧基)苯基雙取代的低級(jí)鏈烷?；?，或者苯基(低級(jí))烷基氨羰基;而B是(N-Me)Val，(N-Me)Ile或(N-Me)Tbg;或者A和B一起形成飽和或未飽和的通式為R5-NH-C(O)的烷基氨羰基，其中R5如權(quán)利要求1所定義的;D是(S)-2-氨基-3-羥基-3-甲丁酸或(R)-2-氨基-3-巰基-3-甲丁酸的氨基酸殘基或是選自Val、Ile、Tbg和β-EtNva的氨基酸殘基，R1是低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、1-(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基)、NMe2、NEt2、吡咯烷代或嗎啉代;R2和R3如權(quán)利要求1所定義的;而E是NHR9，其中R9是(4-9C)烷基;低級(jí)環(huán)烷基;以低級(jí)烷基單取代或雙取代的低級(jí)環(huán)烷基;或(低級(jí)烷基)-(低級(jí)環(huán)烷基);或E是NHNR10R11，其中R10是氫、甲基或乙基而R11是(4-9C)烷基;或E是NHCH(R12)-Z，其中R12是(4-9C)烷基或(低級(jí)環(huán)烷基)-甲基而Z是如權(quán)利要求1所定義的。
3.權(quán)利要求2所定義的肽或其治療上可用鹽，其中A是苯乙?；⒈奖；?、(4-氨苯基)-丙?；?、(4-氟苯基)丙?；?、(4-羥苯基)丙酰基、(4-甲氧苯基)丙酰基、2-(苯甲基)-3-苯丙酰基、2-｛(4-氟苯基)甲基｝-3-(4-氟苯基)-丙?；?、2-｛(4-甲氧苯基)甲基｝-3-(4-甲氧苯基)丙?；蚱S氨羰基;B是(N-Me)-Val或(N-Me)-Ile;D是Val、Ile或Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、1-甲環(huán)戊基、NMe2、NEt2、吡咯烷代或嗎啉代;R2是氫而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基、丙基、2-丙烯基或芐基，含有R2和R3的碳原子具有(R)-構(gòu)型，或R2和R3分別各為甲基或乙基，或R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基;而E是NHR9，其中R9是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲丙基，2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1(R)-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基、1(R)-乙基-3，3-二甲丁基、2，2-二甲戊基，順-或反-2-甲環(huán)己基、2，2-二甲環(huán)己基或環(huán)己甲基;或者E是NHR10R11，其中R10是氫、甲基、或乙基而R11是1，1-二甲乙基;或E是NHCH(R12)-Z，其中含有R12的碳原子有(S)-構(gòu)型，R12是1，1-二甲乙基、1-甲丙基、2，甲丙基、2，2-二甲丙基或環(huán)己基甲基而Z是CH2OH、C(O)OH、CONH2或C(O)OR13其中R13是甲基、乙基或丙基。
4.按權(quán)利要求2所定義的肽，或其治療上可用鹽，其中A和B一起形成飽和或未飽和的烷基氨羰基，它選自丁氨羰基、1-甲乙基氨羰基、1-甲丙基氨羰基、1-乙丙基氨羰基、1，1-二甲丁基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、1-乙戊基氨羰基、1-丁戊基氨羰基、2-乙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙環(huán)戊基)氨羰基、(1-丙環(huán)己基)氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯氨羰基和1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;D是Val、Ile或Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、1-甲環(huán)戊基、NMe2、NEt2、吡咯烷代或嗎啉代;R2是氫而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基、丙基、2-丙烯基或芐基，而含R2和R3的碳原子有(R)-構(gòu)型，或R2和R3各分別為甲基或乙基，或R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基;而E是NHR9，其中R9是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基、1-(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基、1(R)-乙基-3，3-二甲丁基、2，2-二甲戊基、順-或反-二甲環(huán)己基、2，2-二甲環(huán)己基或環(huán)己基甲基;或者E是NHNR10R11，其中R10是氫、甲基或乙基而R11是1，1-二甲乙基;或E是NHCH(R12)-Z，其中含R12的碳原子有(S)-構(gòu)型，R12是1，1-二甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基或環(huán)己甲基而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基、乙基或丙基。
5.按權(quán)利要求3定義的肽，或其治療上可用鹽，其中A是苯丙?；?、2-(苯甲基)-3-苯丙?；蚱S氨羰基;B是(N-Me)Val;D是Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基或1-甲環(huán)戊基;R2是氫而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、丙基或芐基而含R2和R3的碳原子有(R)-構(gòu)型，或R2和R3各分別為甲基或乙基或R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基;而E是NHR9，其中R9是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-二甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲丁基，或E是NHCH(R12)-Z，其中含有R12的碳原子有(S)-構(gòu)型，R12是2，2-二甲丙基而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基乙基或丙基。
6.按權(quán)利要求4所定義的肽或其治療上可用鹽，其中A和B一起形成飽和或未飽和的烷基氨羰基，它選自1-乙丙基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基(1-丙環(huán)戊基)-氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基以及1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;D是Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基或1-甲環(huán)戊基;R2是氫而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、丙基或芐基，含有R2和R3的碳原子有(R)-構(gòu)型，或者R2和R3各分別為甲基或乙基，或R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基;而E是NHR9，其中R9是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲丁基或E是NHCH(R12)-Z，其中含R12的碳原子有(S)-構(gòu)型，R12是2，2-二甲丙基和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基、乙基或丙基。
7.按權(quán)利要求1定義的肽是選自以下PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(環(huán)戊基)｝C(O)-Asp-(cyPn)-NHCH2CMe3，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH｛CH2C(O)-(吡咯烷代)｝-C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH｛CH2C(O)-(cyclopentyl)}-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(1-丙環(huán)戊基)氨羰基-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH｛CH2C(O)-(環(huán)戊基)｝-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Et，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-(R，S)-CH(Me)Et，EtPr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CHEt2，MePr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHNHCMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHNHCMe3，Me(CH2＝CHCH2)2-CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，MePr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-(環(huán)己基)，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(CH2＝CHCH2)2-CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Bu2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(S)-CH(CMe3)CH2OH，Me2PrCNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CEt2Me，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCMe2CMe3，(CH2＝CHCH2)2-CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)C(Me)2Et，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-cis-NH-(2-甲環(huán)己基)，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-trans-NH-(2-甲環(huán)己基)，(R，S)-EtPrCH-NHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(R，S)-EtBuCH-NHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-(2，2-二甲環(huán)己基)，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Pr，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Pr)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(2，2-二甲環(huán)戊基)，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-N(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CEt3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CHEt2，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHN(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CHMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CH2CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-Leu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(環(huán)己基)｝-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(環(huán)己基)｝-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-allyl}-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Pr}-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe2Et)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(1-甲基-環(huán)戊基｝C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(CMe2Et)-C(O)-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，andPr2CHNHC(O)-Val-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3.
8.一種藥物組合物，它含有抗皰疹病毒有效量的權(quán)利要求1中定義的肽，或其治療上可用鹽，以及藥物上或獸醫(yī)上可用的載體。
9.一種化妝組合物，它含有權(quán)利要求1中所定義的肽或其治療上可用鹽以及生理上可接受的適用于局部使用的載體。
10.一種治療哺乳動(dòng)物的皰疹病毒感染的方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物以一種抗皰疹病毒有效量的權(quán)利要求1所定義的肽或一種其治療上可用的鹽給藥。
11.一種抑制皰疹病毒復(fù)制的方法，將病毒與一種皰疹病毒核糖核苷酸還原酶抑制量的通式1的肽或其治療上可用鹽相接觸。
12.一種藥物組合物，含有一種藥物上或獸醫(yī)上可用載體，以及有效量的一種抗病毒核苷類似物或其治療上可用鹽和一種權(quán)利要求1所定義的核糖核苷酸還原酶抑制肽或其藥物上可用鹽的結(jié)合物。
13.按權(quán)利要求12的一種藥物組合物，其中核苷類似物是通式2的化合物或其治療上可用鹽
其中R14是氫、羥基或氨基。
14.按權(quán)利要求12的藥物組合物，其中抗病毒核苷類似物選自阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羥甲無環(huán)鳥苷、依多西啶、布羅瓦維、弗西它平、潘西克羅維、法西克羅維、洛西克羅維。
15.一種治療哺乳動(dòng)物的皰疹病毒感染的方法，包括對(duì)它施用一種有效量的一種抗病毒核苷類似物或其治療上可用鹽和權(quán)利要求1的通式1的核糖核苷酸還原酶抑制肽或其治療上可用鹽的結(jié)合物。
16.按權(quán)利要求15的方法，其中核苷類似物和通式1的肽是按順序地或同時(shí)給藥。
17.按權(quán)利要求15的方法，其中結(jié)合物是局部給藥。
18.按權(quán)利要求15的方法，其中抗病毒核苷類似物是選自無環(huán)鳥苷、6-脫氧無環(huán)鳥苷、2，6-二氨基-9-｛(2-羥乙氧基)甲基｝嘌呤、阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羥甲無環(huán)鳥苷、依多西啶、布羅瓦維、弗西它平、潘西克羅維、法西克羅維、洛西克羅維。
19.一種治療哺乳動(dòng)物的皰疹單純性病毒型1或型2感染的方法包括對(duì)其施用一種有效量的權(quán)利要求8的藥物組合物，其中組合物的通式1的肽選自以下PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH2CH2CMe3，(1-丙環(huán)戊基)氨羰基-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(cyclopentyl)}-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Et，EtPr2CHNC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NHCH2CEt2Me，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Pr)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NHCH2CEt3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Me)CHEt2，andPr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(CMe2Et)C(O)-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3.
20.按權(quán)利要求1所定義的肽或其治療上可用鹽的肽的制備方法，包括a)按肽、氨基酸或氨基酸殘基的、以及肽的非肽碎片的順序的次序逐步偶合，其中ⅰ)殘基或碎片的反應(yīng)側(cè)鏈基團(tuán)用適宜的保護(hù)基保護(hù)以阻止其在該位點(diǎn)上所產(chǎn)生的化學(xué)反應(yīng)，直到逐步偶合完成后最終除去保護(hù)基為止;ⅱ)偶合反應(yīng)物的α-氨基以α-氨基保護(hù)基保護(hù)，而反應(yīng)物的游離羧基與第二反應(yīng)物的游離α-氨基偶合;α-氨基保護(hù)基是一種可以選擇性地除去以使在該α-氨基上可以進(jìn)行其后的偶合步驟;ⅲ)氨基酸殘基或肽片段的C-端羧基是成為保護(hù)的C-端功能團(tuán)，如果有，則要用一合適的保護(hù)基保護(hù)，該保護(hù)基將阻止在該位點(diǎn)上發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)，直到肽所要的氨基酸順序已裝配后為止;b)在偶合完成后，除去任何保護(hù)基，如需要，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化以得到權(quán)利要求1的肽，并且如必要，將肽轉(zhuǎn)化成治療上可用鹽。
全文摘要
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文檔編號(hào)C07K5/04GK1096300SQ9310679
公開日1994年12月14日 申請(qǐng)日期1993年6月8日 優(yōu)先權(quán)日1993年6月8日
發(fā)明者皮埃爾·L·博蘭尤, 尼爾·莫斯, 羅伯特·德澤爾, 雷蒙德·普蘭特 申請(qǐng)人:比奧·梅加·貝林格爾·英格海姆研究公司