專利名稱：瑞拜克霉素類似物的穩(wěn)定溶液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗腫瘤化合物8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素[8-N-diethylaminoethyl)-rebeccamycin]的穩(wěn)定溶液及制備該溶液的優(yōu)選方法。
Kaneko等(美國專利No.4，785，085)公開了包括8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素在內(nèi)的具有下式的瑞拜克霉素(rebeccamycin)類似物，
其中n為2.R1和R2各自為乙基。
在Kaneko等的美國專利No.4，785，085中將該化合物稱為6-(2-二乙氨基乙基)瑞拜克霉素。其制備方法在該專利的實例1中敘述，它在試驗動物系統(tǒng)中抑制腫瘤生長的效果見該專利的表3。但是，當為了配制注射用的水溶液而將該化合物加到水中時，它不是完全可溶解的，而是形成了懸浮液。
Kaneko等在其公開專利的第9欄第9～41行中提出采用酸加成鹽和堿式鹽的方法來增加瑞拜克霉素類似物的溶解度，在Kaneko等公開專利的實例2中敘述了8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的鹽酸鹽(在該專利中稱為6-(2-二乙氨基乙基)瑞拜克霉素鹽酸鹽)的制備方法，并在該專利的表3中表明了上述化合物在試驗動物系統(tǒng)中抑制腫瘤生長的效應。
關(guān)于8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的酸加成鹽包括其鹽酸鹽，遇到的問題是當將1摩爾當量的酸與游離堿反應生成的結(jié)晶狀酸加成鹽加到水中配制足夠濃度的藥用劑型應用時者稀釋時，結(jié)晶狀的酸加成鹽不能形成貯存穩(wěn)定的水溶液。相反，長期研究結(jié)果表明，異常的物理不穩(wěn)定性的時間范圍小于藥用組合物可以接受的時間范圍(即在室溫下至少2年)。上述不希望有的物理不穩(wěn)定性質(zhì)包括膠凝、沉淀、渾濁性和形成液體結(jié)晶相，結(jié)果使結(jié)晶狀鹽的溶液不適合作為注射溶液實際應用，也不適合用水稀釋作為注射溶液應用。
本發(fā)明的目的是提供用于注射的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜霉素的水溶液或稀釋液，它們在室溫下至少2年內(nèi)在化學上或物理上是穩(wěn)定的。
如果在其他方面沒有限制，本文所用的術(shù)語“穩(wěn)定”是指當避光貯存時(例如用不透明的材料遮蔽光線或?qū)⑷芤悍庋b在琥珀色玻璃容器內(nèi))，于室溫下至少2年期間內(nèi)在化學上和物理上是實質(zhì)穩(wěn)定的。術(shù)語“化學上實質(zhì)穩(wěn)定”意指經(jīng)分析表明，至少95%(按重量計)原先溶解量的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素仍然在溶液中。術(shù)語“物理上實質(zhì)穩(wěn)定”意指實際上不形成使溶液不適合作為注射溶液應用的凝膠、沉淀、混濁、液體結(jié)晶相或其他顆粒狀物質(zhì)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，將一定量特定的酸與8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素有效濃度的水溶液結(jié)合起來，可以提供8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素在該濃度下穩(wěn)定的水溶液。所用的酸是藥學上適用的酸，其1摩爾當量可以使得8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素增溶。為了使pH小于4，酸的用量應超過所述摩爾當量。應用1摩爾當量的酸不能形成本發(fā)明的優(yōu)點。因此，將結(jié)晶狀的酸加成鹽本身配制在水溶液中不能提供穩(wěn)定的溶液。
除了在室溫下是穩(wěn)定的以外，本發(fā)明所述的溶液在低溫(例如在裝運或貯存時所遇到的冷凍溫度或冷芷條件等)下可增加溶解度。
本發(fā)明所述的穩(wěn)定溶液主要包括(a)水，(b)有效劑量的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素，其濃度高至50mg/ml水，(c)其摩爾當量的存在可以使(b)增溶的可藥用酸，所述酸的存在量應超過所述摩爾當量以使pH的范圍穩(wěn)定在3～4。
此處所用術(shù)語“有效劑量”意指當服用溶液本身或者其稀釋液后能有效地抗腫瘤的劑量。
術(shù)語“摩爾當量”或“摩爾等效量”意指對于1.0摩爾8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素，需要1.0摩爾當量的酸，以便使游離堿充分地中和。因此，對于雙質(zhì)子的酸(如酒石酸)，1.0摩爾8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素需要0.5摩爾雙質(zhì)子的酸作為1摩爾當量的酸，多于0.5摩爾的酸提供了超過所述摩爾當量的酸。
一種制備上述穩(wěn)定水溶液的優(yōu)選方法包括以下步驟
(a)配制8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的水懸浮液，其濃度至少為1mg/ml水。
(b)加入超過所述摩爾當量的可藥用酸以使pH范圍穩(wěn)定在3～4，所述可藥用酸為其摩爾當量的存在可以使存在于步驟(a)懸浮液中的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素增溶的酸。
我們首先敘述本發(fā)明的穩(wěn)定溶液。
水的成分應當適用于制備注射溶液，例如，美國藥典規(guī)定的注射用水。
8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素一般應該以至少0.1mg/ml水的濃度存在，通常以至少1mg/ml水的濃度或至少5mg/ml水的濃度存在，因為該濃度可以提供或者可以稀釋到抗腫瘤有效的注射濃度范圍。上限濃度可以通過酸成分(c)的增溶作用來實現(xiàn)，并且決定于8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素與摩爾當量的所述酸所形成的酸加成鹽的溶解度。8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的濃度應當在該溶液置于冷芷條件(即2～8℃)下時不析出結(jié)晶。一般的上限濃度50mg/ml水系選用超過藥物毒性試驗所預定的最大預期劑量，因此應將其穩(wěn)定釋到有效劑量。
如上所述，酸成分(c)必須是可藥用的。這是指酸成分(c)應該對游離堿的毒性不產(chǎn)生促進作用。
酸成分(c)最好是這樣的酸，即它的酸加成鹽(由游離堿與摩爾當量的該酸所形成)于室溫下在水中的溶解度大于25mg/ml。符合該溶解度標準的可藥用的酸成分(c)包括例如L-(+)酒石酸、D，L-蘋果酸、L-(-)-蘋果酸、檸檬酸、L-(+)-乳酸、乳糖酸、甲磺酸、磷酸、焦谷氨酸、琥珀酸和硫酸。其中最好的酸是L-(+)-酒石酸。
如上所述，上述酸成分(c)的存在量應超過(b)的摩爾當量，以便使pH范圍約在3～4。為了得以穩(wěn)定的溶液(即物理穩(wěn)定)，pH的上限必須約為4。雖然低于約pH3的制劑是穩(wěn)定的，但在生理上來說這種酸性pH值是不可接受的。當8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的濃度約為10～25mg/ml水時，酸成分(c)的存在最好提供約在3.0～3.6范圍的pH。
最好是用與8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素等摩爾量的酒石酸作為成分(c)。如果8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的濃度為25mg/ml水，那么上述酸提供的pH值為3.2。用水稀釋上述組合物將會使溶液pH向中性增加，這是本領(lǐng)域所熟知的。應該注意的是，盡管有效成分的濃度相同，但是純度不同可以引起pH細微的變化。
如上所述，制備本發(fā)明溶液較好的方法是首先配制8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的水懸浮液，然后加入酸成分以提供所需的pH值。接著進行攪拌，例如于室溫下攪拌5～15小時。通過過濾可以方便地除去任何輕微的混濁。
或者，本發(fā)明的溶液可以按下法制備首先將酸加到水中，然后加入8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素有效成分，或者將酸和有效成分先加到容器內(nèi)，然后再加入水。
為了提高溶解速度，可以應用本領(lǐng)域已知的方法(例如加熱、激烈攪拌、聲波處理等)。
本發(fā)明溶液還可由下法容易地制得，將酸加成鹽加到水中(由酸形成，因此提供了8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素所需的初始溶解度)，然后用生成酸加成鹽同樣的酸或者用符合成分(c)標準的其他酸調(diào)節(jié)pH范圍到3～4。
用于治療患惡性腫瘤的哺乳類宿主(例如試驗動物宿主)，應該服用抑制腫瘤生長有效量(即抑制腫瘤生長劑量)的本發(fā)明溶液。一般說來，抑制腫瘤生長的劑量約在0.1～100mg/kg動物體重/每天的范圍內(nèi)。實際上優(yōu)選的化合物劑量取決于需治療動物的需要量、腫瘤的位置、腫瘤的類型以及給藥途徑，這是可以理解的。熟悉本領(lǐng)域的專業(yè)人員注意到了改變抗腫瘤劑作用的各種因素，本發(fā)明認為有關(guān)的因素包括例如年令、體重及性別、飲食、給藥時間、排泄速度、宿主的狀況及疾病的嚴重程度。應用一般的劑量確定試驗方法，熟悉本領(lǐng)域的專業(yè)人員可以容易地確定已知各種情況適宜的給藥(或應用)劑量。
如果可注射的量可以提供所需要的劑量，那么可以將溶液本身用作注射液，或者如果可注射的量提供了太大的劑量，那么可以將其稀釋后應用。應用美國藥典規(guī)定的注射用水、鹽水、5%葡萄糖溶液等可以容易地進行稀釋。以每毫升水中游離堿的量為單位，注射液濃度一般在0.1～50mg/ml。
下面介紹實例，以便詳細地敘述本發(fā)明的典型實例，但是不應解釋為是對本發(fā)明范圍的限制。
實例Ⅰ用249.2mg游離堿(即8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素，純度96.2%)、54.0mgL-(+)-酒石酸和20ml無菌注射用水，按下法制備112mg/ml(每毫升水中的游離堿)的溶液。將游離堿懸浮在水中，然后加入酸。在為了避光而用鋁箔包裹的燧石玻璃管形瓶內(nèi)于室溫下攪拌過夜。然后將得到的輕微混濁的溶液通過0.2微米的AcrodiscCR濾器進行過濾，得到澄清的黃色溶液。該配方中的游離堿與酸的摩爾比為1∶1。濾液的pH值為3.6。
當應用520.15mg游離堿和112.6mg酒石酸按上述方法制備溶液時，制得含有25mg/ml(每毫升水中的游離堿)的溶液，該溶液中含有的游堿與酒石酸的摩爾比為1∶1，并且pH值為3.2。
實例Ⅱ用10.40g8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素(純度為96%)、2.26gL-(+)-酒石酸和美國藥典規(guī)定的無菌注射用水加至1000ml，按下法制備10mg/ml(每毫升水中的游離堿)的溶液。將8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素懸浮在部分注射用水(所需量的90%)中。然后加入L-(+)-酒石酸，懸浮液攪拌過夜，生成輕微混濁的溶液。再加適量的注射用水至1000mg，在氮氣壓下，通過GelmanCapsule過濾器(P/N12120)進行無菌過濾，并收集到無菌接收容器內(nèi)。在無菌條件下，將溶液裝到美國藥典規(guī)定的Ⅰ類燧石玻璃安瓿內(nèi)(10mg/安瓿)。用無菌氮氣充溢安瓿，并進行封口。該溶液含有的游離堿與酒石酸的摩爾比為1∶1，并且pH值為3.5。
于直至56℃溫度下貯存4周進行試驗，未發(fā)現(xiàn)有物理或化學變化，這表明于2～30℃避光貯存時可能的貯存其至少為2年。
對于靜脈滴注，可以將所得溶液進行稀釋，例如每毫升水含1mg游離堿的溶液可以用美國藥典規(guī)定的注射用水或5%葡萄糖溶液進行稀釋。在通常的室內(nèi)光照條件下觀察24小時，稀釋溶液在物理上是穩(wěn)定的。
實例Ⅲ用下述酸和酸與堿的摩爾比制備每毫升水中含有25mg8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的溶液。所得溶液于56℃避光貯存4周，結(jié)果如下酸pH物理穩(wěn)定留在溶液中的性結(jié)果堿基(%)L-(+)-酒石酸3.2未觀察到變化96(1酸∶1堿基)L-(+)-酒石酸5.1形成凝膠未分析(1酸∶2堿基)L-(-)-蘋果酸3.4未觀察到變化100(1.7酸∶1堿基)L-(-)蘋果酸3.8形成沉淀94(1酸∶1堿基)磷酸3.5未觀察到變化99(1.2酸∶1堿基)磷酸4.5形成混濁溶液98(1酸∶1堿基)L-(+)-乳酸3.6未觀察到變化100(2.5酸∶1堿基)琥珀酸3.5未觀察到變化99(4酸∶1堿基)乳糖酸3.3未觀察到變化102(3酸∶1堿基)
以上表明了在得到物理穩(wěn)定性時pH的臨界性。上述試驗中沒有物理變化的結(jié)果表明，于2～30℃避光貯存時預計物理穩(wěn)定性至少可達2年。
還可以將上述溶液置于冷凍/溫暖條件下在-20℃和室溫之間1周5次交替地進行試驗。在上述試驗中物理上穩(wěn)定的溶液在本試驗中物理上也是穩(wěn)定的，這表明可以將該溶液進行冷芷或冷凍而無有害影響。
實例Ⅳ按照Geran等在文獻(Cancer Chemother.Repts.，3，1～103，1972)中所述的方法，用8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素和酒石酸制得的溶液進行抗腫瘤活性試驗，所用的瘤株為小白鼠移植的白血病p-338。篩選方法包括向用1×106腹水型細胞經(jīng)腹腔感染的CDF1雌性小白鼠(18～22g)經(jīng)腹腔(IP)給予試驗化合物，以及用1×106腹水型細胞從靜脈感染的CDF1雌性小白鼠(18～22g)經(jīng)靜脈(IV)給予試驗化合物。在第1天(接種的當天)開始進行藥物治療。每天給予1次，連續(xù)5天。應用濃度為每毫升水含25mg游離堿的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素和與游離堿摩爾比為1∶1的酒石酸溶液，通過稀釋使劑量含在0.5ml中用于腹腔(IP)注射，含在0.2ml中用于靜脈(IV)注射，并在下面以“本發(fā)明”表示。在下面的結(jié)果中，MST代表平均存活時間(以天表示);%T/C為試驗動物平均存活時間除以對照動物平均存活時間，再乘100;AWC為5天平均體重變化，以g表示。用絲裂霉素C進行比較。腹腔注射試驗的結(jié)果如下
劑量.IP藥物mg/kgMST%T/CAWC絲裂霉素C4.820.5205-0.63.220.5205-0.1本發(fā)明2415.5155-0.81816.5165-1.01215.01500.1對照101001.6靜脈注射試驗的結(jié)果如下藥物mg/kgMST%T/CAWC絲裂霉素C4.812.0160-0.13.211.0147-0.41.69.51270.4本發(fā)明9612.5167-0.78012.0160-0.36411.01470.34810.01331.4對照7.51001.4上述結(jié)果表明，含有酒石酸的本發(fā)明溶液具有抗腫瘤的活性。
很顯然，熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員可以進行許多變化。因此，本發(fā)明的范圍由權(quán)利要求書確定。
權(quán)利要求
1.一種主要由以下成分組成的穩(wěn)定溶液(a)水，(b)有效劑量的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素，其濃度最高為50mg/ml水，(c)其摩爾當量的存在可以使(b)增溶的可藥用酸，所述酸的存在量應超過所述摩爾當量以使pH范圍穩(wěn)定在3～4。
2.按照權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定溶液，其中加入了所述的酸以使pH范圍為3.0～3.6。
3.按照權(quán)利要求2所述的穩(wěn)定溶液，其中所述的酸與8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素形成的酸加成鹽于室溫下在水中的溶解度大于25mg/ml。
4.按照權(quán)利要求3所述的穩(wěn)定溶液，其中所述的酸系選自L-(+)-酒石酸、D，L-蘋果酸、L-(-)-蘋果酸、檸檬酸、L-(+)-乳酸、乳糖酸、甲磺酸、磷酸、焦谷氨酸、琥珀酸和硫酸。
5.按照權(quán)利要求4所述的穩(wěn)定溶液，其中所述的酸系選自L-(+)-酒石酸、L-(-)-蘋果酸、磷酸、L-(+)-乳酸、琥珀酸和乳糖酸。
6.按照權(quán)利要求5所述的穩(wěn)定溶液，其中所述的酸為L-(+)-酒石酸。
7.按照權(quán)利要求6所述的穩(wěn)定溶液，其中L-(+)-酒石酸與8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素以等摩爾的量存在。
8.按照權(quán)利要求7所述的穩(wěn)定溶液，其中8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的濃度為10mg/ml水。
9.按照權(quán)利要求7所述的穩(wěn)定溶液，其中8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的濃度為25mg/ml水。
10.制備8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素穩(wěn)定水溶液的方法，該方法包括以下步驟(a)配制8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的水懸浮液，其濃度至少為1mg/ml。(b)加入超過所述摩爾當量的可藥用酸以使pH范圍穩(wěn)定在3～4，所述可藥用酸為其摩爾當量可以使步驟(a)懸浮液中的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素增溶的酸。
11.按照權(quán)利要求10所述的方法，其中在步驟(a)中加入所述酸以使pH在3.0～3.6范圍。
12.按照權(quán)利要求11所述的方法，其中所述的酸為L-(+)-酒石酸。
13.按照權(quán)利要求12所述的方法，其中將等摩爾量所述酸加到8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素中。
14.按照權(quán)利要求10～13中任何一項所述的方法，其中步驟(a)中8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的濃度為10mg/ml。
15.按照權(quán)利要求10～13中任何一項所述的方法，其中步驟(a)中8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的濃度為25mg/ml。
全文摘要
瑞拜克霉素類似物的穩(wěn)定溶液主要由下述成分構(gòu)成(a)水，(b)有效劑量的8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素，(c)其摩爾當量的存在可以使(b)增溶的可藥用酸，所述酸的存在量應超過所述摩爾當量以使pH范圍穩(wěn)定在3～4，最好為3.0～3.6。較好的溶液含有10mg/ml游離堿，并且酒石酸與游離堿為等摩爾量，以便使pH為3.5。優(yōu)先選用的制備方法是首先配制8-N-(二乙氨基乙基)瑞拜克霉素的水懸浮液，然后加入酸，以便使pH范圍為3～4。
文檔編號C07H17/02GK1047204SQ90102658
公開日1990年11月28日 申請日期1990年5月9日 優(yōu)先權(quán)日1989年5月10日
發(fā)明者烏布拉尼·V·文卡塔拉姆, 米里亞姆·K·弗蘭基尼, 約瑟夫·B·博加達斯 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司