一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備方法
【專利摘要】一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備方法,步驟為:(1)對新鮮牛乳進行殺菌處理;(2)對殺菌后的新鮮牛乳進行脫脂處理,脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品;(3)對脫脂乳進行濃縮;(4)對微濾膜過濾截留液進行透析處理,以除去其它雜蛋白;(5)加入NaCl,間歇攪拌;(6)采用透析的方式將步驟(5)中的乳鐵蛋白進行回收;(7)對透析液進行超濾處理;(8)對超濾膜截留液進行透析處理,得到牛乳蛋白濃縮液;(9)對牛乳蛋白濃縮液進行干燥處理。本發(fā)明充分利用牛乳體系中酪蛋白與乳鐵蛋白的動態(tài)包裹解析機制,實現(xiàn)乳鐵蛋白最大程度的釋放,使得乳鐵蛋白制備得率與現(xiàn)有技術(shù)相比提高15-30%,實現(xiàn)技術(shù)的重大突破。
【專利說明】一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白 制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種乳鐵蛋白的制備方法,具體涉及一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài) 吸附解析機制的乳鐵蛋白制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 牛乳蛋白主要是酪蛋白和乳清蛋白,其中乳鐵蛋白(Lactoferrin,LF)主要存在于 乳清蛋白中,在牛乳中的含量約為〇. 1-0. 4mg/mL。LF具有多種重要的生物學(xué)功能,例如抗 菌活性、很強的離子親和力、抵抗病毒對機體的入侵、提高機體的免疫調(diào)節(jié)能力、促進傷口 的愈合、增強機體對于病的抵抗能力、促進成骨細(xì)胞的增殖等等。廣泛應(yīng)用于嬰幼兒配方奶 粉、食品、醫(yī)藥、保健等領(lǐng)域,具有非常廣泛的市場應(yīng)用前景。
[0003] 從1960年開始,人們就開始從不同的原料乳如牛乳、牛初乳、人乳、山羊乳和駱駝 初乳等中,采用各種方法如超濾、鹽析、硫酸銨沉淀、離子交換色譜法、鹽析結(jié)合凝膠層析 法、超濾結(jié)合離子交換色譜法、親和色譜法、混合模式擴張床吸附法、固定化單克隆抗體等 方法。Groves采用了 DEAE陰離子交換層析成功地分離出了 LF,接著Foley又對Groves 的磷酸纖維素交換層析進行了改進,制備了純度達81%的LF,隨后人們又研究出更有效的 羧甲基陽離子交換層析法分離LF。目前,主要采用強陽離子交換層析梯度洗脫的方法,結(jié)合 超濾濃縮以及凝膠過濾層析相結(jié)合的方法分離高純度的乳鐵蛋白。如S Sepharose Fast Flow、SP Sepharose Big Beads等陽離子交換樹脂,通過陽離子交換樹脂方法最后獲得LF 純度>95%,與親和層析法相比成本較低且應(yīng)用廣泛。而硫酸銨沉淀和超濾等方法則成本低 廉,易操作,但獲得的LF純度(〈50%)較低,所以該方法通常用于分離LF粗品及輔助陽離子 交換層析和親和層析等方法以獲取高純度LF。生產(chǎn)及實驗中通常采用陽離子交換層析和超 濾、凝膠層析等方法相結(jié)合以快速獲取高純度LF。
[0004] 盡管利用上述方法可以得到純度高達90%以上的乳鐵蛋白產(chǎn)品,但這些方法本身 也存在諸多技術(shù)局限性,如生產(chǎn)成本過高,生產(chǎn)步驟繁瑣,需要對層析材料進行洗脫等。固 定化單克隆抗體法分離效果好純度高,但制備工藝復(fù)雜、成本昂貴,難以工業(yè)化生產(chǎn);而超 濾法操作簡便,費用相對低,易形成工業(yè)化規(guī)模,但超濾膜需經(jīng)常處理,其產(chǎn)品純度不如層 析法高。此外,乳鐵蛋白本身在牛乳中的含量極低,而在酪蛋白膠體中的分布又使得存在于 乳清中的乳鐵蛋白(僅有30%到50%)更是少之又少,這無疑加大了處理液體的體積,增加 了提取難度。因此人們最終不得不考慮在工業(yè)生產(chǎn)中利用其他技術(shù)方法,對牛乳中的乳鐵 蛋白進行分離提取。近年來,膜過濾技術(shù)被廣泛應(yīng)用。其2007年Jimenez-Lopez研究了微 膜過濾對牛乳中各成分的影響,從而可以通過膜過濾技術(shù)對乳鐵蛋白進行分離提取。
[0005] 有研究表明,在牛乳體系中乳鐵蛋白以兩種形式存在,一種是自由乳鐵蛋白,即自 由存在于牛乳乳清蛋白中;一種是與酪蛋白膠體(Casein micelles, CM)相互作用的固定 乳鐵蛋白,形成酪蛋白膠體與乳鐵蛋白復(fù)合物(LF-CM)。根據(jù)L. Phelebon的研究結(jié)果表 明,二者之間存在著一個可逆平衡。酪蛋白(Casein,CN)在牛乳條件下并不是以單分子形 式存在的,而是主要由4種不同類型的酪蛋白a si-、a S2-、β-、κ -CN相互結(jié)合形成酪蛋 白膠體復(fù)合物(Casein micelles, CM)。利用牛乳體系中酪蛋白與乳鐵蛋白的動態(tài)包裹解析 機制,可以在工業(yè)化生產(chǎn)中開發(fā)一種新型的乳鐵蛋白純化方法。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白 制備方法,充分利用牛乳體系中酪蛋白與乳鐵蛋白的動態(tài)包裹解析機制,實現(xiàn)乳鐵蛋白最 大程度的釋放,使得乳鐵蛋白制備得率與現(xiàn)有技術(shù)相比提高15%_30%,實現(xiàn)技術(shù)的重大突 破。
[0007] 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的: 一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備方法,包括如下步驟: (1) 對新鮮牛乳進行殺菌處理; (2) 對殺菌后的新鮮牛乳進行脫脂處理,脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品; (3) 采用0. 1 μ m的微濾膜過濾方法對脫脂乳進行濃縮,溫度控制在35-55 °C,將濃縮倍 數(shù)控制在1-3倍; (4) 對微濾膜過濾截留液進行透析處理,透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾膜,溫度控制在 35-55°C,采用去離子水作為透析溶液,控制截留溶液中總蛋白濃度為20-50g/L ; (5) 向截留溶液中加入100-500 mmol/L的NaCl,并將pH值調(diào)為6. 0-7.0,溫度控制在 25-35°C ;經(jīng)過調(diào)配后在4-6°C條件下間歇攪拌2-8h ; (6) 采用透析的方式將步驟(5)中的乳鐵蛋白進行回收,透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾 膜,溫度控制在35-55°C,采用去離子水作為透析溶液; (7) 采用截流分子量為5-10kDa的超濾膜對透析液進行超濾處理,達到固形物含量 15-50wt.%,溫度控制在 35-55°C ; (8) 對超濾膜截留液進行透析處理,得到牛乳蛋白濃縮液,透析膜規(guī)格為3500-1000Da, 采用去離子水作為透析溶液; (9) 對牛乳蛋白濃縮液進行干燥處理。
[0008] 本發(fā)明根據(jù)"一種是與酪蛋白膠體(Casein micelles, CM)相互作用的乳鐵蛋白, 形成酪蛋白膠體與乳鐵蛋白復(fù)合物(LF-CM),兩者之間存在可逆的動態(tài)平衡"理論,通過調(diào) 控牛乳體系因素,如pH、離子強度和溫度等因素,實現(xiàn)了對CM與LF結(jié)合和釋放過程的控制; 通過工藝技術(shù)工藝參數(shù)優(yōu)化,可將原本包裹在酪蛋白膠束中的乳鐵蛋白(占總?cè)殍F蛋白含 量的15%-30%)從LF-CM復(fù)合物中釋放出來,并進一步通過膜分離技術(shù)提取出來,從而使得 乳鐵蛋白的提取率較傳統(tǒng)技術(shù)提高15%_30% ;而且本發(fā)明的工藝技術(shù)中無需經(jīng)過離子交換 等耗時環(huán)節(jié),大大提商了生廣效率。因此,本發(fā)明對于科研和工作生廣中能商效提取制備LF 具有重要的科學(xué)意義和經(jīng)濟效益。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0009] 圖1為乳鐵蛋白制備工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0010]
【具體實施方式】一:如圖1所示,本實施方式提供了一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動 態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備方法,具體步驟如下: 一、乳鐵蛋白的制備 (1)殺菌處理:新鮮牛乳經(jīng)過低溫長時巴氏殺菌(62-65°C保持25-35min)、高溫短時巴 氏殺菌(72-75°C保持10-20S),或者經(jīng)過1. 4 μ m的微濾膜除菌,或者先經(jīng)過巴式殺菌再經(jīng) 過膜過濾除菌。
[0011] (2)牛乳樣品處理:殺菌后的新鮮牛乳于4-6°C條件下,5000-10000rpm離心15-30 min脫除脂肪,脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品。
[0012] (3)微濾膜過濾:采用0. 1 μ m的微濾膜進行過濾,溫度控制在35-55°C,酪蛋白和 乳鐵蛋白得到同樣程度的濃縮,將濃縮倍數(shù)控制在1-3倍,即膜過濾截留液中總蛋白質(zhì)濃 度變?yōu)槌跏紳舛鹊?-3倍。
[0013] (4)透析處理:對膜過濾截留液進行透析處理,以除去其它雜蛋白,保留乳鐵蛋白 和酪蛋白,透析膜規(guī)格為〇. 1 μ m的微濾膜,溫度控制在35_55°C,采用去離子水作為透析溶 液,使用量為脫脂后牛乳體積的4-6倍,并采用凱氏定氮法監(jiān)測截留溶液中的總蛋白濃度, 控制截留溶液中總蛋白濃度為20-50g/L。
[0014] (5)釋放乳鐵蛋白:向截留溶液中加入100-500 mmol/L的NaCl,并將pH值調(diào)為 6. 0-7. 0,溫度控制在25-35°C ;經(jīng)過調(diào)配后在4-6°C條件下間歇攪拌2-8h,得到乳鐵蛋白與 酪蛋白復(fù)合物。
[0015] (6)透析處理回收乳鐵蛋白:采用透析的方式將乳鐵蛋白進行回收,透析膜規(guī)格為 〇. 1 μ m的微濾膜,溫度控制在35_55°C,采用去離子水作為透析溶液,使用量為脫脂后牛乳 體積的3-6倍。
[0016] (7)超濾處理:采用截流分子量為5-10kDa的超濾膜對乳鐵蛋白進行超濾處理,一 方面脫出乳鐵蛋白中殘留的NaCl,另一方面使乳鐵蛋白溶液得到濃縮,達到固形物含量(即 質(zhì)量濃度)為15-50%,溫度控制在35-55°C。
[0017] (8)透析處理:對超濾膜截留液進行透析處理以進一步除去鹽,實現(xiàn)保留乳鐵蛋白 和酪蛋白,透析膜規(guī)格為3500-1000Da,采用去離子水作為透析溶液,使用量為超濾膜截留 液體積的3-6倍,最終保持固形物含量為15-50wt. %。
[0018] (9)乳鐵蛋白干燥:采用噴霧干燥技術(shù)對牛乳蛋白濃縮液進行干燥,進口溫度 130-170°C,出口溫度60-90°C,進行噴霧干燥之前的濃縮液固形物含量在15-50%。
[0019] 也可以采用低溫噴霧干燥的方式進行干燥,進風(fēng)溫度60-80°C,出風(fēng)溫度30-45°C; 進行低溫噴霧干燥之前的濃縮液固形物含量要求15-50%。
[0020] 也可以采用真空冷凍干燥的方式,冷阱溫度-73~-40°C,真空度0. 01~0. 5mbar,時 間:T24h。
[0021] 干燥之后的產(chǎn)品水分含量控制在5%以內(nèi)。
[0022] 二、主要相關(guān)測定方法 (1)蛋白質(zhì)測定 采用自動凱氏定氮儀法進行測定。計算的時候氮的換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)為6. 38。以重 復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,蛋白質(zhì)含量>1 g/l〇〇 g時,結(jié) 果保留三位有效數(shù)字。
[0023] (2)免疫擴散方法(IDR)測定乳鐵蛋白含量 IDR方法是利用乳鐵蛋白與對應(yīng)抗體的免疫反應(yīng)而對樣品中乳鐵蛋白定量的一種方 法。測量中所需的試劑盒和標(biāo)準(zhǔn)乳鐵蛋白購買自Sigma公司。乳鐵蛋白含量根據(jù)如下公式 進行計算: mLF =[LFtotal] XV樣品= [LFtotal] X (m樣品/p 樣品)。
[0024] 式中-總?cè)殍F蛋白質(zhì)量(g) ;[LFtotal]-乳鐵蛋白總含量(g. I71); ¥樣品一樣品體積(L) ;m樣品一樣品質(zhì)量(g) ;P樣品一樣品密度(g-Γ1)。 (3)反相高效液相色譜RP-HPLC測定蛋白質(zhì)組成 最終樣品的蛋白質(zhì)組成成分分析,采用反相高效液相色譜法HPLC-RP。在本課題研究 過程中,這種方法被運用于確定樣品中的不同種類的可溶性蛋白質(zhì)含量。樣品首先進行超 速離心處理(100000Xg,l h),取其離心液,為進一步去除其中的微量酪蛋白,加入三氟乙 酸(0. 2%體積質(zhì)量)進行酸沉淀處理,進行第二次離心處理(13000 X g,5 min),取最終離 心液進行分析。
[0025] 三、檢測結(jié)果 本發(fā)明中的工藝參數(shù)具有多種組合,相應(yīng)的乳鐵蛋白產(chǎn)品的組成相差較大,乳鐵蛋白 的含量范圍為23?87. 3%,α-乳白蛋白3. 5?16%,β-乳球蛋白3. 2?15%,血清蛋白f 12%,免 疫球蛋白1?13%,β -酪蛋白(Γ17%,水分3%,灰分1%。
[0026]
【具體實施方式】二:本實施方式提供了一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析 機制的乳鐵蛋白制備方法,具體步驟如下: (1)殺菌處理:新鮮牛乳經(jīng)過低溫長時巴氏殺菌(62-65°C保持30min)。
[0027] (2)牛乳樣品處理:殺菌后的新鮮牛乳于4_6°C條件下,6000離心15 min脫除脂 肪,脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品。
[0028] (3)微濾膜過濾:采用0. 1 μ m的微濾膜進行過濾,溫度35°C,該過程的操作終點通 過"膜過濾截留液中總蛋白質(zhì)濃度變?yōu)槌跏紳舛鹊?倍"判斷。
[0029] (4)透析處理:對膜過濾截留液進行透析處理,透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾膜,溫 度控制在35°C,采用去離子水作為透析溶液,使用量為脫脂后牛乳體積的4倍。
[0030] (5)釋放乳鐵蛋白:控制截留溶液中總蛋白濃度為20g/L,加入200 mmol/L的 NaCl,并將pH值調(diào)為6. 4,溫度控制在25°C ;4°C條件下攪拌3h。
[0031] (6)透析處理回收乳鐵蛋白:透析膜規(guī)格為0. ιμπι的微濾膜,溫度35°C,采用去離 子水作為透析溶液,使用量為脫脂后牛乳體積的3倍。
[0032] (7)超濾處理:采用截流分子量為5kDa的超濾膜對乳鐵蛋白進行超濾處理,達到 固形物含量(即質(zhì)量濃度)為20%,溫度控制在35°C。
[0033] (8)透析處理:對超濾膜截留液進行透析處理以進一步除去鹽,透析膜規(guī)格為 5000Da,采用去離子水作為透析溶液,使用量為超濾膜截留液體積的3倍。
[0034] (9)乳鐵蛋白干燥:采用噴霧干燥技術(shù)對牛乳蛋白濃縮液進行干燥,進口溫度 170°C,出口溫度70°C,進行噴霧干燥之前的濃縮液固形物含量在30%。
[0035] 經(jīng)過上述工序操作,最終得到的乳鐵蛋白粉組成及成份含量如下:乳鐵蛋白的含 量為23%,α-乳白蛋白16%,β-乳球蛋白15%,血清蛋白12%,免疫球蛋白13%,β-酪蛋白 17%,水分3%,灰分1%。
[0036]
【具體實施方式】三:本實施方式提供了一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機 制的乳鐵蛋白制備方法,具體步驟如下: (1)殺菌處理:新鮮牛乳經(jīng)高溫短時巴氏殺菌(72-75°C保持10-20S)再經(jīng)過膜過濾除 菌。
[0037] (2)牛乳樣品處理:殺菌后的新鮮牛乳于4°C條件下,SOOOrpm離心20 min脫除脂 肪,脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品。
[0038] (3)微濾膜過濾:采用0. 1 μ m的微濾膜進行過濾,溫度控制在45°C,該過程的操作 終點通過"膜過濾截留液中總蛋白質(zhì)濃度變?yōu)槌跏紳舛鹊?倍"判斷。
[0039] (4)透析處理:對膜過濾截留液進行透析處理,透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾膜,溫 度控制在45°C,采用去離子水作為透析溶液,使用量為脫脂后牛乳體積的6倍,并采用凱氏 定氮法監(jiān)測截留溶液中的總蛋白濃度。
[0040] (5)釋放乳鐵蛋白:控制截留溶液中總蛋白濃度為40g/L,加入300 mmol/L的 NaCl,并將pH值調(diào)為6. 6,溫度控制在35°C ;經(jīng)過調(diào)配后在4°C條件下間歇攪拌8h。
[0041] (6)透析處理回收乳鐵蛋白:透析膜規(guī)格為0. Ιμπι的微濾膜,溫度控制在55°C,采 用去離子水作為透析溶液,使用量為脫脂后牛乳體積的4倍。
[0042] (7)超濾處理:采用截流分子量為10kDa的超濾膜對乳鐵蛋白進行超濾處理;對 截留液再用分子量為30kDa的超濾膜進行處理,使截留液中固形物含量(即質(zhì)量濃度)達到 30%時終止,溫度控制在55 °C。
[0043] (8)透析處理:透析膜規(guī)格為5000Da,采用去離子水作為透析溶液,使用量為超濾 膜截留液體積的4倍。
[0044] (9)乳鐵蛋白干燥:采用低溫噴霧干燥的方式進行干燥,進風(fēng)溫度80°C,出風(fēng)溫度 45°C ;進行低溫噴霧干燥之前的濃縮液固形物含量要求50%。
[0045] 經(jīng)過上述工序操作,最終得到的乳鐵蛋白粉組成及成份含量如下:乳鐵蛋白的含 量為87. 3%,α -乳白蛋白3. 4%,β -乳球蛋白3. 2%,血清蛋白1%,免疫球蛋白1%,水分3. 2%, 灰分0. 9%。
[0046]
【具體實施方式】四:本實施方式提供了一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機 制的乳鐵蛋白制備方法,具體步驟如下: (1)殺菌處理:新鮮牛乳經(jīng)過低溫長時巴氏殺菌(62°C保持30min)、再經(jīng)過1. 4 μπι的 微濾膜除菌。
[0047] (2)牛乳樣品處理:殺菌后的新鮮牛乳于4°C條件下,lOOOOrpm離心15 min脫除 脂肪,脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品。
[0048] (3)微濾膜過濾:采用0. 1 μ m的微濾膜進行過濾,溫度控制在55°C,將濃縮倍數(shù)控 制在3倍。
[0049] (4)透析處理:對膜過濾截留液進行透析處理,透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾膜,溫 度控制在55°C,采用去離子水作為透析溶液,使用量為脫脂后牛乳體積的5倍,并采用凱氏 定氮法監(jiān)測截留溶液中的總蛋白濃度。
[0050] (5)釋放乳鐵蛋白:控制截留溶液中總蛋白濃度為30g/L,加入200 mmol/L的 NaCl,并將pH值調(diào)為6. 8,溫度控制在35°C ;經(jīng)過調(diào)配后在4°C條件下間歇攪拌6h。
[0051] (6)透析處理回收乳鐵蛋白:透析膜規(guī)格為0. ιμπι的微濾膜,溫度控制在55°C,采 用去離子水作為透析溶液,使用量為脫脂后牛乳體積的5倍。
[0052] (7)超濾處理:采用截流分子量為5kDa的超濾膜對乳鐵蛋白進行超濾處理,達到 固形物含量(即質(zhì)量濃度)為40%,溫度控制在50°C。
[0053] (8)透析處理:透析膜規(guī)格為3500Da,采用去離子水作為透析溶液,使用量為超濾 膜截留液體積的5倍。
[0054] (9)乳鐵蛋白干燥:采用真空冷凍干燥的方式,冷阱溫度_73°C,真空度0. Olmbar, 時間24h。
[0055] 經(jīng)過上述工序操作,最終得到的乳鐵蛋白粉組成及成份含量如下:乳鐵蛋白的含 量為56%,α -乳白蛋白16%,β -乳球蛋白16%,血清蛋白4%,免疫球蛋白4%,水分3%,灰分 1%〇
【權(quán)利要求】
1. 一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備方法,其特征在于所 述乳鐵蛋白制備方法為: (1) 對新鮮牛乳進行殺菌處理; (2) 對殺菌后的新鮮牛乳進行脫脂處理,脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品; (3) 采用0. 1 μ m的微濾膜過濾方法對脫脂乳進行濃縮,溫度控制在35-55 °C,將濃縮倍 數(shù)控制在1-3倍; (4) 對微濾膜過濾截留液進行透析處理,透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾膜,溫度控制在 35-55°C,采用去離子水作為透析溶液,控制截留溶液中總蛋白濃度為20-50g/L ; (5) 向截留溶液中加入100-500 mmol/L的NaCl,并將pH值調(diào)為6. 0-7.0,溫度控制在 25-35°C ;經(jīng)過調(diào)配后在4-6°C條件下間歇攪拌2-8h ; (6) 采用透析的方式將步驟(5)中的乳鐵蛋白進行回收,透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾 膜,溫度控制在35-55°C,采用去離子水作為透析溶液; (7) 采用截流分子量為5-10kDa的超濾膜對透析液進行超濾處理,達到固形物含量 15-50wt.%,溫度控制在 35-55°C ; (8) 對超濾膜截留液進行透析處理,得到牛乳蛋白濃縮液,透析膜規(guī)格為3500-1000Da, 采用去離子水作為透析溶液; (9) 對牛乳蛋白濃縮液進行干燥處理。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備 方法,其特征在于所述步驟(1)中,殺菌處理方法為:巴氏殺菌或者經(jīng)過1. 4 μ m的微濾膜 除菌或者先經(jīng)過巴式殺菌再經(jīng)過膜過濾除菌。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備 方法,其特征在于所述巴氏殺菌方法為:62-65°C低溫長時巴氏殺菌25-35min或72-75°C高 溫短時巴氏殺菌l〇-20s。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備 方法,其特征在于所述步驟(2 )中,脫脂方法為:于4-6 °C條件下,5000-1 OOOOrpm離心15-30 min脫除脂肪。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備 方法,其特征在于所述步驟(9)中,采用噴霧干燥技術(shù)對牛乳蛋白濃縮液進行干燥,進口溫 度 130-170°C,出 口溫度 60-90°C。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備 方法,其特征在于進行噴霧干燥之前,濃縮液固形物含量在15-50wt. %。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備 方法,其特征在于所述步驟(9)中,采用低溫噴霧干燥的方式進行干燥,進風(fēng)溫度60-80°C, 出風(fēng)溫度30-45 °C。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備 方法,其特征在于進行低溫噴霧干燥之前,濃縮液固形物含量要求15-50wt. %。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動態(tài)吸附解析機制的乳鐵蛋白制備 方法,其特征在于所述步驟(9)中,采用真空冷凍干燥的方式,冷阱溫度-73~-40°C,真空度 0· 01 ?5mbar,時間:T24h。
【文檔編號】C07K14/79GK104151423SQ201410368631
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年7月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月30日
【發(fā)明者】杜明, 張?zhí)m威, 周英爽, 王聰, 劉猛, 樊鳳嬌, 貝君, 白成軍 申請人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)