一種快速制備高含量花椒不飽和酰胺類成分的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速制備高含量花椒不飽和酰胺類成分的方法，采用下述工藝步驟：（1）以花椒油樹脂為原料，加入弱極性溶劑攪拌抽濾，得到固體剩余物；（2）向上述固體剩余物中加入正己烷、環(huán)己烷、異辛烷中的一種或幾種進(jìn)行加熱回流提取后過濾；（3）濾液在-10℃～-20℃條件下冷凍結(jié)晶；(4)結(jié)晶經(jīng)洗滌抽濾后，采用高純氮?dú)庠?5～5℃中吹掃干燥，得高含量花椒不飽和酰胺類成分。本方法避免了現(xiàn)有方法中的色譜柱層析方法使用，能快速有效地制備高含量的不飽和酰胺類成分，簡單可靠，成本低廉。所得晶體經(jīng)質(zhì)譜鑒定為山椒素及同分異構(gòu)體，經(jīng)高效液相色譜檢測含量在95%以上，可以達(dá)到含量測定、質(zhì)量評價等方面作為對照品應(yīng)用的基本要求。
【專利說明】一種快速制備高含量花椒不飽和酰胺類成分的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種花椒中高含量不飽和酰胺類成分的快速制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]花椒是指紅花椒{ZanthoxylumBungeanum Maxim)和青花椒{Zanthoxylumarmatum v.novemfolius)的干燥成熟果皮，隸屬蕓香科iRutaceae')花椒屬{Zanthoxylum)，為我國特有的香辛料資源?；ń诽卣餍韵銡夂吐槲妒蛊浔粡V泛應(yīng)用于各種菜系尤其是川菜的烹飪調(diào)味中[2]，賦予菜肴獨(dú)特的風(fēng)味。
[0003]花椒中主要化學(xué)成分有揮發(fā)油、酰胺類、生物堿等，其中揮發(fā)油和酰胺類這兩個呈味成分分別反映花椒的香氣和麻味特征，也是花椒品質(zhì)評價中最為重要的兩個特征性指標(biāo)。與一般味覺刺激味蕾不同，麻味是刺激舌黏膜和觸覺神經(jīng)而產(chǎn)生痛感，但具體如何激活以及被激活受體是什么尚未有清晰定論。目前認(rèn)為，花椒的麻味口感，是其中的山椒素類化合物通過激活體感神經(jīng)細(xì)胞而產(chǎn)生麻感。因此，研究人員通常將花椒中以山椒素為代表的具有感官刺激活性的鏈狀不飽和脂肪族酰胺類化合物統(tǒng)稱為花椒麻素。目前已有22種天然長鏈不飽和脂肪酸酰胺類物質(zhì)被國內(nèi)外學(xué)者從花椒中分離得到，主要是a-山椒素、β -山椒素、Y -山椒素、δ -山椒素以及在氨基部分氫被羥基取代的同系物。
[0004]除了烹飪調(diào)味方面的應(yīng)用外，不飽和族酰胺類還具有麻醉、鎮(zhèn)痛、抗凝血等藥理活性。因此，豐富的藥用價值和經(jīng)濟(jì)價值使其具有廣闊的市場前景。然而，因?yàn)榛ń分谐煞謴?fù)雜，不飽和酰胺類素的分 離純化主要通過柱層析的方法進(jìn)行制備，同時由于不飽和酰胺類中的長鏈不飽和脂肪酸結(jié)構(gòu)十分不穩(wěn)定，在空氣中極易氧化變質(zhì)，這一系列因素導(dǎo)致了高含量不飽和酰胺類的大規(guī)模制備存在技術(shù)瓶頸，作為花椒麻味成分定量分析的對照品無商品供應(yīng)，缺乏對花椒及其產(chǎn)品的麻味進(jìn)行質(zhì)量評價的有效手段，同時阻礙了其在醫(yī)藥和食品等領(lǐng)域更廣泛深入的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種快速制備高含量花椒不飽和酰胺類成分的方法，為花椒麻味成分分析和質(zhì)量評價提供對照品。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下述工藝步驟展開:(1)以花椒油樹脂為原料，向不飽和酰胺類含量為30%~60%的花椒油樹脂中加入石油醚、6號溶劑油或正己烷中的一種或幾種弱極性溶劑，物料與溶劑的比例為:1:5~1:10 (w/v);溶解溫度為5~20°C，溶解攪拌，時間為2~4h，反復(fù)溶解3~5次，真空抽濾，得到固體剩余物；(2)向上述固體剩余物中按物料和溶劑的比例為:1:10~1:20 (w/v)加入己烷、環(huán)己烷、異辛烷中的一種或幾種溶劑，在70~90°C溫度范圍加熱回流提取，共提取3~5次，并趁熱快速過濾得到濾液；(3)濾液放入密閉容器在自來水浴中快速冷卻至常溫，放在冰箱中在-10°C~_20°C放置24~48h冷凍析晶、結(jié)晶，過濾后得到白色結(jié)晶；(4)白色結(jié)晶用2-3倍體積己烷、環(huán)己烷、異辛烷中的一種或幾種溶劑洗滌3-4次，過濾，濾晶放入干燥器中，通入-5~5°C的高純氮?dú)膺M(jìn)行吹掃干燥，得高純度花椒不飽和酰胺類成分；(5)經(jīng)質(zhì)譜分析其分子量為264，對照相關(guān)數(shù)據(jù)，鑒定為為山椒素類成分，經(jīng)高效液相色譜分析，山椒素類成分含量> 95%。
[0007]本發(fā)明基本思路為:本發(fā)明首先利用極性極弱的溶劑在低溫或常溫下溶解能夠溶解揮發(fā)油、油脂等脂溶性成分，有效去除花椒油樹脂中的脂溶性雜質(zhì)，從而提高剩余物中花椒不飽和酰胺類成分的含量；利用不飽和酰胺類在熱弱極性溶劑中能夠少量溶解，在低溫條件下析晶的的特性，采用弱極性溶劑對固體剩余物進(jìn)行加熱回流提取，得到不飽和酰胺類成分的提取液；對提取液冷凍結(jié)晶，即可得到高含量的花椒不飽和酰胺類成分的結(jié)晶產(chǎn)物。
[0008]采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于:本發(fā)明避免了利用現(xiàn)有方法中的硅膠層析柱以及制備型高效液相色譜的制備過程繁瑣復(fù)雜、制備量小、，能快速有效地提取和分離花椒中的麻味物質(zhì)，獲得高含量的不飽和酰胺類成分，方法既簡單可靠又節(jié)約成本。本方法所得的晶體進(jìn)行質(zhì)譜分析得分子量為264，根據(jù)裂解規(guī)律并結(jié)合文獻(xiàn)鑒定為羥基-a-山椒素，對晶體進(jìn)行高效液相色譜分析，純度為95%左右，可以達(dá)到含量測定、質(zhì)量評價等方面對標(biāo)準(zhǔn)品的基本要求，又可以充分滿足食品醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用要求。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0010]圖1本發(fā)明所得花椒不飽和酰胺類成分的質(zhì)譜圖。
[0011]圖2本發(fā)明所得不飽和酰胺類成分的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施方案
[0012]實(shí)施例1:稱取50g含量為50%的超臨界CO2萃取法生產(chǎn)的紅花椒油樹脂，加入300mL石油醚，5°C攪拌溶解3h，共重復(fù)3次，5°C真空抽濾后得固體剩余物31.2g ;向固體剩余物中加入250mL己烷，70°C加熱回流提取，提取3次，趁熱快速過濾；濾液采用_20°C冷凍放置結(jié)晶24h，5°C真空抽濾，得白色結(jié)晶，再用少量己烷洗滌，_5°C真空抽濾，所得結(jié)晶放入干燥器用_5°C高純氮?dú)膺M(jìn)行吹掃干燥20分鐘并密封保存，即得高含量的花椒不飽和酰胺類晶體，經(jīng)高效液相分析，含量為96.9%。
[0013]實(shí)施例2:稱取10g含量為30%的乙醇提取的紅花椒油樹脂，加入800mL6號溶劑油，15°C攪拌溶解2h，共重復(fù)3次，4°C真空抽濾后得固體殘渣52.8g ;向固體殘渣中加入600mL環(huán)己烷，80°C加熱回流提取，提取3次，趁熱快速過濾；濾液采用_15°C冷凍放置結(jié)晶24h，0°C真空抽濾，得白色結(jié)晶，再用環(huán)己烷洗滌，(TC真空抽濾，所得結(jié)晶放入干燥器用0°C高純氮?dú)膺M(jìn)行吹掃干燥25分鐘密封保存，即得高純度的花椒不飽和酰胺類晶體，對其進(jìn)行高效液相分析，含量為95.2%。
[0014]實(shí)施例3:稱取150g含量為40%左右的超臨界CO2萃取法生產(chǎn)的青花椒油樹脂，加入100mL正己烷，25°C攪拌溶解3h，共重復(fù)3次，30°C真空抽濾后得固體殘渣87.4g ；向固體殘渣中加入100mL異辛烷，90°C加熱回流提取，提取3次，趁熱快速過濾；濾液采用-10°C冷凍放置結(jié)晶24h，5°C真空抽濾，得白色結(jié)晶，再用異辛烷洗滌，5°C真空抽濾，所得結(jié)晶放入干燥器用5°C高純氮?dú)膺M(jìn)行吹掃干燥30分鐘密封保存，即得高純度的花椒不飽和酰胺類晶體，對其進(jìn)行高效液相分析，含量為95.7%。
【權(quán)利要求】
1.一種快速制備高含量花椒不飽和酰胺類成分的方法，其特征在于，所述方法的步驟為: (1)雜質(zhì)脫除:以花椒油樹脂為原料，向花椒油樹脂中加入弱極性溶劑，常溫溶解攪拌，抽濾，脫除精油等脂溶性雜質(zhì)得到固體剩余物； (2)溶解提取:向上述固體剩余物中加入弱極性溶劑，加熱回流提取，過濾得到濾液； (3)冷凍結(jié)晶:濾液經(jīng)冷凍析晶過濾后得到白色結(jié)晶； (4)洗滌干燥:結(jié)晶采用弱極性溶劑洗滌、過濾、氣體吹掃干燥后，即得高含量山椒素類成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速制備花椒中不飽和酰胺類成分的方法，其特征在于，所述步驟(1)中:超臨界C02萃取或乙醇、丙酮等溶劑提取的花椒油樹脂，山椒素類成分含量在 30% ~60%ο
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速制備花椒中不飽和酰胺類成分的方法，其特征在于，所述步驟(1)中:弱極性溶劑為石油醚、6號溶劑油或己烷中的一種或幾種；花椒油樹脂和溶劑的固液比為1:5~1:10 (w/v);溶解溫度為5~25°C，時間為2~4h，反復(fù)溶解3~5次；抽濾為真空抽濾，真空度≥0.09MPa，抽濾溫度為5~25°C。
4.根據(jù)權(quán)利要 求1所述的快速制備花椒中不飽和酰胺類成分的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的弱極性溶劑為己烷、環(huán)己烷、異辛烷中的一種或幾種，固體剩余物和溶劑的比例為:1:10~1:20 (w/v)，加熱回流提取溫度為70~90°C，共提取3~5次，并趁熱快速過濾。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速制備花椒中不飽和酰胺類成分的方法，其特征在于:在所述步驟(3)中的濾液采用-10°C~_20°C冷凍放置析晶，結(jié)晶24~48h ;過濾均為真空抽濾，抽濾條件為真空度> 0.09MPa，抽濾溫度為-10~5°C;洗滌用溶劑為己烷、環(huán)己烷、異辛烷中的一種或幾種；氣體吹掃干燥采用高純氮?dú)膺M(jìn)行吹掃干燥，吹掃溫度為-5~5°C，時間20~30分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的不飽和酰胺類成分的特征是:經(jīng)質(zhì)譜分析其分子量為264，為山椒素及其同分異構(gòu)體，經(jīng)高效液相色譜分析，山椒素類成分含量> 95%。
【文檔編號】C07C231/24GK104030937SQ201410266147
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月16日
【發(fā)明者】趙伯濤, 張衛(wèi)明, 朱羽堯, 張國琳, 錢驊, 黃曉德, 陳斌 申請人:中華全國供銷合作總社南京野生植物綜合利用研究所