具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法，具體步驟如下：(1)配體HL的合成：將無(wú)水乙醇10ml，PMBP(1-苯基-3-甲基-4-苯甲?；?5-吡唑啉酮)1.0mmol和4-甲基水楊酰肼1.0mmol加入到50ml的圓底燒瓶中，在75℃下回流攪拌3h，冷卻后有淡黃色固體生成(HL)。抽濾，乙醇重結(jié)晶(HL·EtOH)。(2)配合物4-甲基水楊酰腙銅的合成：取1mmol配體HL和1mmol的CuCl2·2H2O加入到5ml乙醇和四氫呋喃(體積比1∶1)的混合溶液中，攪拌使其溶解，常溫下靜置一周，出現(xiàn)棕色塊狀晶體，即為配合物4-甲基水楊酰腙銅。本發(fā)明方法找到了一種新的藥物合成方法，具有較大的醫(yī)學(xué)和藥學(xué)價(jià)值，為抗腫瘤藥物的研究開(kāi)發(fā)和應(yīng)用推廣提供了一條重要的依據(jù)。
【專利說(shuō)明】具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法，屬于配合物合成【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]PMBP(1-苯基-3-甲基-4-苯甲?；?5-吡唑啉酮)是優(yōu)良的金屬離子萃取劑，其酰腙衍生物具有抗病毒抗菌、抗腫瘤等多種藥理活性。多數(shù)PMBP酰腙金屬配合物的抗腫瘤活性強(qiáng)于配體。本發(fā)明提供一種具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法，以便更好地制備出具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物。
[0004]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下。
[0005]一種具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法，具體步驟如下:
[0006](I)配體HL的合成:將無(wú)水乙醇10ml，PMBP (1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰基_5_批唑啉酮)1.0mmol和4-甲基水楊酰肼1.0mmol加入到50ml的圓底燒瓶中，在75°C下回流攪拌3h，冷卻后有淡黃色固體生成(HL)，抽濾，乙醇重結(jié)晶(HL -EtOH)，產(chǎn)率為76%。熔點(diǎn)138-142°C。核磁共振檢測(cè)結(jié)果為，1H NMR(CDCl3,400MHz)，δ (ppm):6.708-8.046 (13H, m,Ar-H) ；2.377 (3H, s’ CH3) ；1.276 (3H, s’ CH3)。
[0007](2)配合物4-甲基水楊酰腙銅的合成:取Immo配體HL和Immol的CuCl2.2H20加入到5ml乙醇和四氫呋喃(體積比1:1)的混合溶液中，攪拌使其溶解，常溫下靜置一周，出現(xiàn)棕色塊狀晶體，即為配合物4-甲基水楊酰腙銅，其產(chǎn)率為82% (基于HL計(jì)算)。
[0008]進(jìn)一步地，針對(duì)上述配合物進(jìn)行抗腫瘤活性測(cè)試，其具體步驟為:
[0009](I)細(xì)胞培養(yǎng):將A549人肺癌細(xì)胞株和H印G2人肝癌細(xì)胞株分別培養(yǎng)在含10%胎牛血清液的RPM1-1640介質(zhì)中，內(nèi)含100U / ml青霉素(盤(pán)尼西林)和100g / ml鏈霉素，置于飽和濕度、37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。
[0010](2)化合物的細(xì)胞毒性采用噻唑藍(lán)法確定。在96孔塑料培養(yǎng)板中進(jìn)行，使每孔中細(xì)胞數(shù)為5X IO3個(gè)，次日，在每個(gè)孔中加入200L溶解在培養(yǎng)液中的梯度濃度的待測(cè)物溶液(含體積百分?jǐn)?shù)I %的DMSO助溶)。48小時(shí)后，加入溶解于牛血清中的濃度為0.5mg / ml的20LMTT(噻唑藍(lán))。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后，在各培養(yǎng)孔中加入200L 二甲基亞砜用于溶解被還原的MTT的藍(lán)紫色晶體，然后用酶標(biāo)儀測(cè)定570nm的吸光度(0D值)，空白組不加待測(cè)物，按公式:細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=[(空白OD值-給藥組的OD值)/空白OD值]XlOO%計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，求出各組濃度的平均抑制率，作圖求出抑制率為50%時(shí)的濃度(即半數(shù)抑制濃度IC50)。結(jié)果表明，配體HL和配合物I的對(duì)A549和Hep G2抑制作用明顯，IC50范圍在18.39-62.55mol / ml，是潛在的抗腫瘤藥物。
[0011]該發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明提供了具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法，并進(jìn)行了藥理學(xué)分析，證明該化合物的具有抗腫瘤活性作用，適合在抗腫瘤領(lǐng)域中使用。本發(fā)明方法找到了一種新的藥物合成方法，具有較大的醫(yī)學(xué)和藥學(xué)價(jià)值，為抗腫瘤藥物的研究開(kāi)發(fā)和應(yīng)用推廣提供了一條重要的依據(jù)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0012]圖1是本發(fā)明實(shí)施例中HL.EtOH的晶體結(jié)構(gòu)示意圖。
[0013]圖2是本發(fā)明實(shí)施例中配合物4-甲基水楊酰腙銅晶體結(jié)構(gòu)示意圖(形態(tài)一)。
[0014]圖3是本發(fā)明實(shí)施例中配合物4-甲基水楊酰腙銅晶體結(jié)構(gòu)示意圖(形態(tài)二)。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行描述，以便更好的理解本發(fā)明。
[0016]實(shí)施例
[0017]一種具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法，具體步驟如下:
[0018](1)配體HL的合成:將無(wú)水乙醇10ml，PMBP(l-苯基-3-甲基-4-苯甲?；?5-批唑啉酮)1.0mmol和4-甲基水楊酰肼1.0mmol加入到50ml的圓底燒瓶中，在75°C下回流攪拌3h，冷卻后有淡黃色固體生成(HL)。抽濾，乙醇重結(jié)晶(HL*EtOH)。其產(chǎn)率為，76%。熔點(diǎn)為 138-142°C。核磁共振檢測(cè)結(jié)果為，1H NMR(CDCl3,400MHz)，δ (ppm):6.708-8.046 (13H,m, Ar-H) ；2.377 (3H，s’ CH3) ；1.276 (3H，s’ CH3)。其晶體結(jié)構(gòu)示意圖見(jiàn)圖1。
[0019](2)配合物4-甲基水楊酰腙銅的合成:取Immol配體HL和Immol的CuCl2.2H20加入到5ml乙醇和四氫呋喃(體積比1:1)的混合溶液中，攪拌使其溶解，常溫下靜置一周，出現(xiàn)棕色塊狀晶體，即為配合物4-甲基水楊酰腙銅，其產(chǎn)率為82% (基于HL計(jì)算)。其晶體結(jié)構(gòu)不意圖見(jiàn)圖2和圖3。
[0020]針對(duì)上述配合物進(jìn)行抗腫瘤活性測(cè)試，其具體步驟為:
[0021](1)細(xì)胞培養(yǎng):將A549人肺癌細(xì)胞株和H印G2人肝癌細(xì)胞株分別培養(yǎng)在含10%胎牛血清液的RPM1-1640介質(zhì)中，內(nèi)含100U / ml青霉素(盤(pán)尼西林)和100g / ml鏈霉素，置于飽和濕度、37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。
[0022](2)化合物的細(xì)胞毒性采用噻唑藍(lán)法確定。在96孔塑料培養(yǎng)板中進(jìn)行，使每孔中細(xì)胞數(shù)為5X IO3個(gè)，次日，在每個(gè)孔中加入200L溶解在培養(yǎng)液中的梯度濃度的待測(cè)物溶液(含體積百分?jǐn)?shù)I %的DMSO助溶)。48小時(shí)后，加入溶解于牛血清中的濃度為0.5mg / ml的20LMTT(噻唑藍(lán))。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后，在各培養(yǎng)孔中加入200L 二甲基亞砜用于溶解被還原的MTT的藍(lán)紫色晶體，然后用酶標(biāo)儀測(cè)定570nm的吸光度(0D值)，空白組不加待測(cè)物，按公式:細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=[(空白OD值-給藥組的OD值)/空白OD值]XlOO%計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，求出各組濃度的平均抑制率，作圖求出抑制率為50%時(shí)的濃度(即半數(shù)抑制濃度IC50)。結(jié)果表明，配體HL和配合物I的對(duì)A549和Hep G2抑制作用明顯，IC50范圍在18.39-62.55mol / ml，是潛在的抗腫瘤藥物。
[0023]以上所述是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法，其特征在于:具體步驟如下: (1)配體HL的合成:將無(wú)水乙醇10ml，PMBP(1-苯基_3_甲基-4-苯甲?；?5-吡唑啉酮)1.0mmol和4-甲基水楊酰肼1.0mmol加入到50ml的圓底燒瓶中，在75°C下回流攪拌3h，冷卻后有淡黃色固體生成(HL)，抽濾，乙醇重結(jié)晶(HL.EtOH)，產(chǎn)率為76% ;熔點(diǎn)138-142°C，核磁共振檢測(cè)結(jié)果為:? NMR(CDCl3,400MHz)，δ (ppm):6.708-8.046 (13H, m,Ar-H) ；2.377 (3H, s’ CH3) ；1.276 (3H, s’ CH3)； (2)配合物4-甲基水楊酰腙銅的合成:取1mmol配體HL和Immol的CuCl2.2Η20加入到5ml乙醇和四氫呋喃(體積比1:1)的混合溶液中，攪拌使其溶解，常溫下靜置一周，出現(xiàn)棕色塊狀晶體，即為配合物4-甲基水楊酰腙銅，其產(chǎn)率為82% (基于HL計(jì)算)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的4-甲基水楊酰腙銅配合物的合成方法，其特征在于:針對(duì)上述配合物進(jìn)行抗腫瘤活性測(cè)試，其具體步驟為: (1)細(xì)胞培養(yǎng):將A549人肺癌細(xì)胞株和H印G2人肝癌細(xì)胞株分別培養(yǎng)在含10%胎牛血清液的RPM1-1640介質(zhì)中，內(nèi)含IOOU / ml青霉素(盤(pán)尼西林)和100g / ml鏈霉素，置于飽和濕度、37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)； (2)化合物的細(xì)胞毒性采用噻唑藍(lán)法確定:在96孔塑料培養(yǎng)板中進(jìn)行，使每孔中細(xì)胞數(shù)為5X IO3個(gè)，次日，在每個(gè)孔中加入200L溶解在培養(yǎng)液中的梯度濃度的待測(cè)物溶液(含體積百分?jǐn)?shù)I %的DMSO助溶)；48小時(shí)后，加入溶解于牛血清中的濃度為0.5mg / ml的20LMTT (噻唑藍(lán))；繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后，在各培養(yǎng)孔中加入200L 二甲基亞砜用于溶解被還原的MTT的藍(lán)紫色晶體，然后用酶標(biāo)儀測(cè)定570nm的吸光度(0D值)，空白組不加待測(cè)物，按公式:細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=[(空白 OD值-給藥組的OD值)/空白OD值]XlOO %計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，求出各組濃度的平均抑制率，作圖求出抑制率為50%時(shí)的濃度(即半數(shù)抑制濃度IC5tl);結(jié)果表明，配體HL和配合物I的對(duì)A549和H印G2抑制作用明顯，IC5tl范圍在.18.39-62.55mol / ml,是潛在的抗腫瘤藥物。
【文檔編號(hào)】C07F1/08GK103896969SQ201410112347
【公開(kāi)日】2014年7月2日 申請(qǐng)日期:2014年3月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月19日
【發(fā)明者】李明, 蔡紅新, 賈磊, 徐君, 李慧軍, 楊中娟 申請(qǐng)人:河南理工大學(xué)