紫丹參甲素磺酸鈉的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了紫丹參甲素磺酸鈉的制備方法。該制備方法包括下述步驟：采用高效液相反相色譜法分離丹參酮類磺化液，即可；其中，高效液相反相色譜法的條件如下：流動相A為0.1%三乙胺-水、流動相B為0.1%三乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%二乙胺-水、流動相B為0.1%二乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%乙胺-水、流動相B為0.1%乙胺-甲醇；或，流動相A為水、流動相B為甲醇；百分比為組分占流動相的體積百分比；檢測波長為271nm。本發(fā)明的制備方法制備能力強、制備量大、周期短、效率高，并且減少了有機溶劑的使用，工藝操作連續(xù)性強易于進行質(zhì)量控制和生產(chǎn)。
【專利說明】紫丹參甲素磺酸鈉的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物領域，具體涉及紫丹參甲素磺酸鈉的制備方法。
【背景技術】
[0002]丹參,又名血參、赤根、紅根、血生根,為唇形科植物(Salvia miltiorrhza)的根莖，其入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。中醫(yī)認為，其味苦微寒，具有活血痛經(jīng)、祛瘀止痛、清心除煩、涼血消癰的功效，適用于治療月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、經(jīng)閉、崩漏、帶下、冠心病、動脈粥樣硬化、高血脂、心絞痛、跌打淤血、失眠、神經(jīng)衰弱、乙肝等疾病，為婦科、內(nèi)科及外傷科證屬血瘀兼熱者常用。
[0003]現(xiàn)代藥學研究表明，丹參中化學成分復雜，主要為水溶性丹參酚酸類和脂溶性二萜醌類丹參酮類化合物。其中，丹參酮類化合物主要包括丹參酮1、丹參酮II A、丹參酮II B、異丹參酮1、異丹參酮II A、隱丹參酮、異隱丹參酮、甲基丹參酮、羥基丹參酮等。[0004]丹參酮II A是重要的丹參有效成分。丹參酮II A磺酸鈉(Sodium Tanshinone II ASulfonate，STS)，則是丹參酮II A經(jīng)磺化后得到的水溶性磺酸鹽。由于磺酸基的引入，在治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞等疾病方面，丹參酮II A磺酸鈉相比丹參酮IIA具有更多的優(yōu)越性，從而成為主要的心血管類丹參提取物中藥。
[0005]丹參酮IIA是制備丹參酮IIA磺酸鈉的原料，從丹參藥材飲片提取，故難免混有少量、或極低含量其他結構較為相似的組分，如丹參酮II B、丹參酮1、隱丹參酮、紫丹參甲素等。若要制備高純度丹參酮IIA磺酸鈉，則獲得這些極低含量相關組分標準品、以及這些標準品在丹參酮IIA磺酸鈉原料相關成分含量控制中的應用，具有重要意義。
[0006]但是，由于該類化合物結構復雜，化學全合成難度大，要獲得高純度對照品成為挑戰(zhàn)。有研究報道從丹參酮II A磺酸鈉原料藥中提取相關物質(zhì)，由于其含量極低，HPLC純度通常不到百分之一，采用高效液相法分離提取，工作量大、難度高。因此，丹參提取物中極低含量組分的高純度標準品規(guī)?；苽洌捌湓诘⑼狪IA磺酸鈉原料藥相關物質(zhì)含量監(jiān)控中的應用成為本領域長期以來難以解決的技術難題。
[0007]紫丹參甲素也是丹參脂溶性二萜醌類化合物有效成分之一，不僅耐缺氧作用比丹參酮II A更強，而且抗菌作用也強于隱丹參酮，并對多種實驗腫瘤動物有效。
[0008]現(xiàn)有技術公開了紫丹參甲素提取方法，如專利CN02104328.0 “高純度紫丹參甲素的制備方法”和專利CN201210494022.9 “紫丹參甲素的醫(yī)藥用途”均采用有機溶劑提取和硅膠柱分離，其分離效果差、流速低、制備量小、周期長；專利CN201210371880.4 “一種紫丹參甲素的制備方法”采用閃式提取、超濾濃縮，其中透膜損失大、設備投入高；專利CN201310349682.2 “一種紫丹參甲素的提取方法”采用超臨界C02逆流色譜提取，使用耐20MPa高壓設備，投入成本大、風險高，后處理采用大孔樹脂和重結晶，有機溶劑消耗量大，有效成分損失大、收率低。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0009]本發(fā)明所要解決的技術問題在于為了克服現(xiàn)有技術中紫丹參甲素提取困難、效率低的缺陷，提供了紫丹參甲素磺酸鈉及其制備方法和應用。本發(fā)明的紫丹參甲素磺酸鈉水溶性好，解決了紫丹參甲素脂溶性太大水溶性不好限制其在醫(yī)藥領域應用的問題，且純度高，其制備方法的制備能力強、制備量大、周期短、效率高，并且減少了有機溶劑的使用，工藝操作連續(xù)性強易于進行質(zhì)量控制和生產(chǎn)。
[0010]本發(fā)明通過以下技術方案解決上述技術問題。
[0011]本發(fā)明提供了紫丹參甲素磺酸鈉，其結構如下式:
[0012]
【權利要求】
1.一種紫丹參甲素磺酸鈉的制備方法，其包括下述步驟:采用高效液相反相色譜法分離丹參酮類磺化液，即可； 其中，高效液相反相色譜法的條件如下: 流動相A為0.1%三乙胺-水、流動相B為0.1%三乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1% 二乙胺-水、流動相B為0.1% 二乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%乙胺-水、流動相B為0.1%乙胺-甲醇；或，流動相A為水、流動相B為甲醇；百分比為組分占流動相的體積百分比；檢測波長為271nm，保留時間為50~70min。
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的高效液相反相色譜法包括富集純化、中間純化和精制純化；其中，所述的富集純化的條件如下: 流動相A為0.1%三乙胺-水、流動相B為0.1%三乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%二乙胺-水、流動相B為0.1% 二乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%乙胺-水、流動相B為0.1%乙胺-甲醇；或，流動相A為水、流動相B為甲醇；流速為80~120mL/min，檢測波長為27Inm ； 將丹參酮類磺化液與流動相A按體積比為1:4的混合物上樣29~30min，80%流動相A+20%流動相B平衡lmin，以流動相A和流動相B按照下述體積比進行線性梯度洗脫45min:80%A+20%B — 35%A+65%B，再以100%流動相B再生lOmin，收集保留時間為50~70min的洗脫液得到富集純化樣品溶液； 所述的中間純化的條件如下: 流動相A為0.1%三乙胺-水、流動相B為0.1%三乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%二乙胺-水、流動相B為0.1% 二乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%乙胺-水、流動相B為0.1%乙胺-甲醇；或，流動相A為水、流動相B為甲醇；流速為80~120mL/min，檢測波長為27Inm ； 將所述的富集純化樣品溶液與流動相A按體積比為1:1的混合物上樣28min，80%流動相A+20%流動相B平衡I~2min，以流動相A和流動相B按照下述體積比進行線性梯度洗脫40min:80%A+20%B — 40%A+60%B，再以100%流動相B再生lOmin，收集保留時間為50~65min的洗脫液得到中間純化樣品溶液； 所述的精制純化的條件如下: 流動相A為0.1%三乙胺-水、流動相B為0.1%三乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%二乙胺-水、流動相B為0.1% 二乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%乙胺-水、流動相B為0.1%乙胺-甲醇；或，流動相A為水、流動相B為甲醇；流速為20~30mL/min，檢測波長為27Inm ； 將所述的中間純化樣品溶液與流動相A按體積比為1:1的混合物上樣20min，80%流動相A+20%流動相B平衡4min，以流動相A和流動相B按照下述體積比進行線性梯度洗脫35min:80%A+20%B — 45%A+55%B，再以100%流動相B再生lOmin，收集保留時間為50~60min的洗脫液得到精制純化樣品溶液。
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的富集純化采用的裝置如下:采用PrepStar SD-1制備系統(tǒng)和L&L4002色譜柱，裝PLRP-S反相C18聚合物填料160.0g,動態(tài)軸向壓縮系統(tǒng)裝填至壓力650psi，靜態(tài)鎖緊至柱床高度25cm ;柱溫為10~30°C ； 和/或，所述的中間純化采用的裝置如下:采用Pr印Star SD-1制備系統(tǒng)和L&L4002色譜柱，裝PLRP-S反相C18聚合物填料160.0g，動態(tài)軸向壓縮系統(tǒng)裝填至壓力650psi，靜態(tài)鎖緊至柱床高度25cm ;柱溫為10~30°C ; 和/或，所述的精制純化采用的裝置如下:采用Pr印Star SD-1制備系統(tǒng)和L&L4001色譜柱，裝ODS-AQ反相C18硅膠填料80.0g，動態(tài)軸向壓縮系統(tǒng)裝填至壓力650psi，靜態(tài)鎖緊至柱床高度25cm ;柱溫為10~30°C。
4.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的富集純化中，所述的流速為lOOmL/min ； 和/或，所述的中間純化中，所述的流速為100mL/min ； 和/或，所述的精制純化中，所述的流速為25mL/min。
5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的丹參酮類磺化液通過下述步驟制得: (1)將丹參提取物溶解于冰醋酸-乙酸酐的混合溶液中，再加入濃硫酸-冰醋酸的混合溶液，進行反應得到反應液； (2)將石油醚、二氯甲烷和水的混合溶液加入步驟(1)的反應液，再加入氯化鈉溶液，抽濾，得到濾餅； (3)用石油醚-二氯甲烷的混合溶液浸泡步驟(2)的濾餅，抽濾干燥得粗品； (4)用甲醇溶解步驟(3)的粗品，活性炭過濾，濾液濃縮，冷卻結晶過濾，濾液即為丹參酮類磺化液。`
6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述的冰醋酸-乙酸酐的混合溶液與所述的丹參提取物的體積質(zhì)量比為7~9ml/g ； 和/或，所述的冰醋酸-乙酸酐的混合溶液為冰醋酸與乙酸酐體積比為1: (2~3)的混合溶液； 和/或，所述的濃硫酸-冰醋酸的混合溶液為濃硫酸與冰醋酸體積比為1:1的混合溶液； 和/或，所述的石油醚、二氯甲烷和水的混合溶液為石油醚、二氯甲烷和水的體積比為1:2: (2~2.5)的混合溶液； 和/或，所述的石油醚-二氯甲烷的混合溶液為石油醚與二氯甲烷體積比為1:3的混合溶液； 和/或，所述的丹參提取物通過下述步驟制得:將丹參用乙醇提取，過濾，濾液濃縮，干燥，即得。
7.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的精致純化結束后還包括凍干過程；所述的凍干過程包括如下步驟:將所述的精制純化樣品溶液濃縮，冷凍干燥，即可。
8.如權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述的濃縮的壓力為-0.08MPa~-0.1MPa，所述的濃縮的溫度為30~40°C。
【文檔編號】C07J73/00GK103864884SQ201410093550
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月14日 優(yōu)先權日:2014年3月14日
【發(fā)明者】洪勇, 琚姝, 黃臻輝 申請人:上海第一生化藥業(yè)有限公司