一種從新鮮茶葉中提取單體egcg的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法，屬于天然產(chǎn)物化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體包括以下步驟：S1.浸泡；S2.離心；S3.一次吸附；S4.MVR濃縮；S5.CF過濾；S6.二次吸附；S7.濃縮；S8.漂洗；S9.脫水；S10干燥；S11.除鐵。本發(fā)明采用新鮮茶葉為原料，克服了傳統(tǒng)工藝中采用干茶葉粉碎過篩后在高溫下浸提時(shí)易糊化、不易過濾的缺點(diǎn)，以純化水做介質(zhì)直接分離出EGCG單體，減少了一些脂溶性農(nóng)藥的浸出，在純化工藝中采用LX-8樹脂吸附EGCG，HZ818樹脂吸附咖啡因，結(jié)晶、漂洗、干燥得到EGCG單體，產(chǎn)品類白色至白色粉末，含量達(dá)99%左右。該法具有操作簡單、分離效率高、成本低、生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)的產(chǎn)品純度高的優(yōu)點(diǎn)，適用于工廠化大規(guī)模生產(chǎn)。
【專利說明】一種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]EGCG，即表沒食子兒茶素沒食子酸酯，是從綠茶中提取的一種成分，它是綠茶主要的活性和水溶性成分，占綠茶毛重的9-13%，EGCG是綠茶茶多酚的主要組成成分，也是綠茶兒茶素類的主成分，它占綠茶兒茶素類總量的10-15%，兒茶素類包括:沒食子酸兒茶素(Gallocatechin, GC)、表沒食子酸兒茶素(Epigallocatechin，ECG)、表沒食子酸兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、表沒食子酸兒茶素(EGC)和表兒茶素(EC)等，其中抗氧化活性依次為EC< ECG < EGC < EGCG。因?yàn)榫哂刑厥獾牧Ⅲw化學(xué)機(jī)構(gòu)，EGCG是綠茶中最有效的抗氧化多酚，具有非常強(qiáng)的抗氧化、抗癌、抗突變等活性。抗氧化活性至少是維生素C的100多倍，是維生素E的25倍，能夠保護(hù)細(xì)胞和DNA受損害，這種損害相信與癌癥、心臟疾病和其它重大疾病有關(guān)，EGCG的這些功效歸結(jié)于它們對氧自由基的清除能力。EGCG在抗癌和心血管疾病方面擔(dān)當(dāng)了重要的角色。此外，它也用作腫瘤多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)劑，能夠改善癌細(xì)胞對化療的敏感性并減輕對心臟的毒性。許多研究表明EGCG具有抗自由基DNA損害，抗輻射和紫外線，阻止油脂過氧化，減少血清中低密度膽固醇、超低密度膽固醇和甘油三酯的含量，干擾癌細(xì)胞生存所需的信號傳遞，抑制飲食中的致癌物質(zhì)，與腸、肝和肺中的其它酶和抗氧化劑作用共同阻止某些致癌物質(zhì)的活力，清除自由基，抵御污染、日曬和吸煙的影響，防治皮膚老化和起皺。
[0003]目前分離兒茶素的方法一般分為兩步:首先從茶末中提取含有兒茶素的茶多酚粗制品；其次從粗提取物中純化分離兒茶素組分。若要得到兒茶素中的各種單體組分，則需進(jìn)一步經(jīng)過柱色譜法、半制備高效液相色譜法(HPLC)純化或者其它儀器方法純化。由于兒茶素各組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)十分相近，采用一般的方法很難分離，根據(jù)資料分析，目前分離制備兒茶素單體的方法主要有以下幾種:
[0004](I)柱層析分離法
[0005]該方法是將茶多酚粗品經(jīng)一定的溶劑溶解后，上柱分離，用洗脫劑洗脫，收集兒茶素。柱層析的關(guān)鍵是柱填料與洗脫劑的選擇。國內(nèi)外報(bào)道的柱填料有三大類型:吸附型柱、離子交換柱、凝膠柱。這種分離方法繁瑣、費(fèi)時(shí)、產(chǎn)品純度不高、還有溶劑殘留。
[0006](2)高效液相(HPLC)制備色譜法
[0007]制備型HPLC主要用于分離純化出兒茶素的單體組分。工藝流程是粗品經(jīng)葡聚糖凝膠SephadexLH-20柱分離純化出兒茶素混合物，一般以不同梯度的丙酮水溶液作洗脫劑，分離得到酯型兒茶素和非酯型兒茶素兩組流分，再經(jīng)HPLC制備柱分離純化，采用甲醇/水為洗脫劑，進(jìn)一步純化得到兒茶素單體組分，所得兒茶素產(chǎn)品純度較高，但存在成本高，周期長、后期溶劑難以完全`除盡等缺點(diǎn)。
[0008](3 )高速逆流色譜法(HSCCC )[0009]高速逆流色譜法是80年代發(fā)展起來的新技術(shù)，其特點(diǎn)是高速運(yùn)轉(zhuǎn)產(chǎn)生的重力場使固定相能在分離柱中實(shí)現(xiàn)高的保留，從而大大提高了分離能力，該法屬儀器分離法，溶劑系統(tǒng)中各溶劑在分液漏斗中混合后，上層為固定相，灌入色譜分離柱；下層為流動(dòng)相，將粗品溶解成5-10%的溶液。當(dāng)流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱時(shí)，兒茶素各組分得到分離。這種分離方法是在兩相之間進(jìn)行的，克服了使用固體吸附材料造成的樣品不可逆吸附或降解的缺點(diǎn)，樣品可最大限度的得以回收。但該方法成本高，制備量小，不適宜工廠化大規(guī)模生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供一種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法，該法具有操作簡單、分離效率高、成本低、生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)的產(chǎn)品純度高的優(yōu)點(diǎn)。
[0011]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):一種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法，它包括以下步驟:
[0012]S1.浸泡:將新鮮茶葉置于浸提器中，加入純化水恒溫浸泡1.8~2.5h，將浸提器中的混合液過18~24目篩，得濾液；其中，所述恒溫浸泡溫度為65~100°C ；
[0013]S2.離心:將濾液置于溫度為30~50°C、壓強(qiáng)為0.1~0.3MPa的環(huán)境下離心50~70s,棄去沉淀,離心液用于下步操作；其中,所述離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為6500~7000轉(zhuǎn)/min ；
[0014]S3.一次吸附:將步驟S2所得離心液上樣于LX-8樹脂，吸附離心液中的EGCG，用70~75%的乙醇洗脫，收集固形物含量為4~6%的洗脫液；
[0015]S4.MVR濃縮:將收集到的洗脫液加至MVR濃縮器中濃縮100~140min，濃縮溫度為60~75 °C，得濃縮液；
[0016]S5.CF過濾:采用CF過濾器對濃縮液進(jìn)行過濾，至固形物含量3~5% ;其中，操作溫度為35~45°C，操作壓強(qiáng)為0.1~0.3MPa，濾膜孔徑為0.02 μ m ;
[0017]S6.二次吸附:將步驟S5所得固形物含量為3~5%的濾液上樣于HZ818樹脂，吸附濾液中的咖啡因，收集流出液；
[0018]S7.濃縮:先采用截留分子量為100的反滲透膜濃縮步驟S6收集到的流出液，濃縮至固形物含量> 20%，膜濃縮溫度為35~45°C ;再將濃縮液加熱至溫度> 75°C，蒸發(fā)濃縮至固形物含量≤50%,冷卻析出晶體；
[0019]S8.漂洗:將步驟S7所得晶體用溫度≤250C的純凈水漂洗2~3次；
[0020]S9.脫水:將漂洗后的晶體置于轉(zhuǎn)速為1500~1700轉(zhuǎn)/min離心機(jī)中離心13~18min,脫去多余水分；
[0021]S10.干燥:將脫水后的晶體置于溫度為60~70°C的微波下干燥，至水分≤5.0% ；
[0022]Sll.除鐵:將干燥后的固體用粉碎機(jī)粉碎，過50~90目篩，用磁鐵吸附除鐵，除鐵后將粉末混合均勻，再次過篩、磁鐵吸附除鐵，所得粉末即為高純度EGCG。
[0023]進(jìn)一步地，步驟SI中所述新鮮茶葉與純化水的重量比為1:5~8。
[0024]進(jìn)一步地，步驟S3和S6中所述洗脫速度為1.8~2.4m3/h。
[0025]進(jìn)一步地，步驟Sll中所述磁鐵的磁力為10000~15000高斯。
[0026]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明采用新鮮茶葉為原料，克服了傳統(tǒng)工藝中采用干茶葉粉碎過篩后在高溫下浸提時(shí)易糊化、不易過濾的缺點(diǎn)，以純化水做介質(zhì)直接分離出EGCG單體，減少了一些脂溶性農(nóng)藥的浸出，在純化工藝中采用了兩次樹脂吸附，第一次吸附采用LX-8樹脂，吸附濾液中的EGCG，第二次吸附采用HZ818樹脂，吸附濾液中的咖啡因，結(jié)晶、漂洗、干燥得到EGCG單體，產(chǎn)品類白色至白色粉末，含量達(dá)99%左右。該法具有操作簡單、分離效率高、成本低、生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)的產(chǎn)品純度高的優(yōu)點(diǎn)，適用于工廠化大規(guī)模生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的描述，本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于以下所述。
[0028]實(shí)施例1:一種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法，它包括以下步驟:
[0029]S1.浸泡:將新鮮茶葉2000kg置于浸提器中，加入純化水10000kg，恒溫浸泡
1.8h，將浸提器中的混合液過18目篩，得濾液；其中，所述恒溫浸泡溫度為65°C ；
[0030]S2.離心:將濾液置于溫度為30°C、壓強(qiáng)為0.1MPa的環(huán)境下離心50s，棄去沉淀，離心液用于下步操作；其中，所述離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為6500轉(zhuǎn)/min ；
[0031]S3.一次吸附:將步驟S2所得離心液上樣于LX-8樹脂，吸附離心液中的EGCG，用70%的乙醇洗脫，洗脫速度為1.8m3/h,收集固形物含量為4%的洗脫液；
[0032]S4.MVR濃縮:將收集到的洗脫液加至MVR濃縮器中濃縮lOOmin，濃縮溫度為60°C，得濃縮液；
[0033]S5.CF過濾:采用CF過濾器對濃縮液進(jìn)行過濾，至固形物含量3% ;其中，操作溫度為35°C，操作壓強(qiáng)為 0.1MPa,濾膜孔徑為0.02 μ m ;
[0034]S6.二次吸附:將步驟S5所得固形物含量為3%的濾液上樣于HZ818樹脂，吸附濾液中的咖啡因，洗脫速度為1.8m3/h，收集流出液；
[0035]S7.濃縮:先采用截留分子量為100的反滲透膜濃縮步驟S6收集到的流出液，濃縮至固形物含量20%，膜濃縮溫度為35°C ;再將濃縮液加熱至75°C，蒸發(fā)濃縮至固形物含50%，冷卻析出晶體；
[0036]S8.漂洗:將步驟S7所得晶體用25°C的純凈水漂洗2次；
[0037]S9.脫水:將漂洗后的晶體置于轉(zhuǎn)速為1500轉(zhuǎn)/min離心機(jī)中離心13min，脫去多余水分；
[0038]S10.干燥:將脫水后的晶體置于溫度為60°C的微波下干燥，至水分為5.0% ；
[0039]Sll.除鐵:將干燥后的固體用粉碎機(jī)粉碎，過50目篩，用磁力為10000高斯磁鐵進(jìn)行一次吸附除鐵，除鐵后將粉末混合均勻；將一次除鐵后的粉末過70目篩，用磁力為10000高斯磁鐵進(jìn)行二次吸附除鐵，得到純度為98.8%的EGCG粉末50kg。
[0040]實(shí)施例2:—種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法，它包括以下步驟:
[0041]S1.浸泡:將新鮮茶葉2000kg置于浸提器中，加入純化水16000kg，恒溫浸泡
2.5h，將浸提器中的混合液過24目篩，得濾液；其中，所述恒溫浸泡溫度為100°C ；
[0042]S2.離心:將濾液置于溫度為50°C、壓強(qiáng)為0.3MPa的環(huán)境下離心70s，棄去沉淀，離心液用于下步操作；其中，所述離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為7000轉(zhuǎn)/min ；
[0043]S3.一次吸附:將步驟S2所得離心液上樣于LX-8樹脂，吸附離心液中的EGCG，用75%的乙醇洗脫，洗脫速度為2.4m3/h,收集固形物含量為6%的洗脫液；
[0044]S4.MVR濃縮:將收集到的洗脫液加至MVR濃縮器中濃縮140min，濃縮溫度為75 °C，得濃縮液；[0045]S5.CF過濾:采用CF過濾器對濃縮液進(jìn)行過濾，至固形物含量5% ;其中，操作溫度為45°C，操作壓強(qiáng)為0.3MPa，濾膜孔徑為0.02 μ m ;
[0046]S6.二次吸附:將步驟S5所得固形物含量為5%的濾液上樣于HZ818樹脂，吸附濾液中的咖啡因，洗脫速度為2.4m3/h，收集流出液；
[0047]S7.濃縮:先采用截留分子量為100的反滲透膜濃縮步驟S6收集到的流出液，濃縮至固形物含量30%，膜濃縮溫度為45°C ;再將濃縮液加熱至80°C，蒸發(fā)濃縮至固形物含量為60%，冷卻析出晶體；
[0048]S8.漂洗:將步驟S7所得晶體用15°C的純凈水漂洗3次；
[0049]S9.脫水:將漂洗后的晶體置于轉(zhuǎn)速為1700轉(zhuǎn)/min離心機(jī)中離心18min，脫去多余水分；
[0050]S10.干燥:將脫水后的晶體置于溫度為70°C的微波下干燥，至水分為4.0% ；
[0051]Sll.除鐵:將干燥后的固體用粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，用磁力為12000高斯磁鐵進(jìn)行一次吸附除鐵，除鐵后將粉末混合均勻；將一次除鐵后的粉末過90目篩，用磁力為15000高斯磁鐵進(jìn)行二次吸附除鐵，得到純度為98.7%的EGCG粉末52kg。
[0052]實(shí)施例3:—種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法，它包括以下步驟:
[0053]S1.浸泡: 將新鮮茶葉2000kg置于浸提器中，加入純化水12000kg，恒溫浸泡2h，將浸提器中的混合液過20目篩，得濾液；其中，所述恒溫浸泡溫度為85°C ；
[0054]S2.離心:將濾液置于溫度為40°C、壓強(qiáng)為0.2MPa的環(huán)境下離心60s，棄去沉淀，離心液用于下步操作；其中，所述離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為6800轉(zhuǎn)/min ；
[0055]S3.一次吸附:將步驟S2所得離心液上樣于LX-8樹脂，吸附離心液中的EGCG，用72%的乙醇洗脫，洗脫速度為2m3/h，收集固形物含量為5%的洗脫液；
[0056]S4.MVR濃縮:將收集到的洗脫液加至MVR濃縮器中濃縮120min，濃縮溫度為65 °C，得濃縮液；
[0057]S5.CF過濾:采用CF過濾器對濃縮液進(jìn)行過濾，至固形物含量4% ;其中，操作溫度為42V’操作壓強(qiáng)為0.2MPa，濾膜孔徑為0.02 μ m ;
[0058]S6.二次吸附:將步驟S5所得固形物含量為4%的濾液上樣于HZ818樹脂，吸附濾液中的咖啡因，洗脫速度為2m3/h，收集流出液；
[0059]S7.濃縮:先采用截留分子量為100的反滲透膜濃縮步驟S6收集到的流出液，濃縮至固形物含量40%，膜濃縮溫度為40°C;再將濃縮液加熱至90°C，蒸發(fā)濃縮至固形物含量為75%，冷卻析出晶體；
[0060]S8.漂洗:將步驟S7所得晶體用10°C的純凈水漂洗3次；
[0061]S9.脫水:將漂洗后的晶體置于轉(zhuǎn)速為1600轉(zhuǎn)/min離心機(jī)中離心15min，脫去多余水分；
[0062]S10.干燥:將脫水后的晶體置于溫度為65°C的微波下干燥，至水分為3.0% ；
[0063]Sll.除鐵:將干燥后的固體用粉碎機(jī)粉碎，過65目篩，用磁力為11000高斯磁鐵進(jìn)行一次吸附除鐵，除鐵后將粉末混合均勻；將一次除鐵后的粉末過80目篩，用磁力為14000高斯磁鐵進(jìn)行二次吸附除鐵，得到純度為99%的EGCG粉末55kg。
[0064]實(shí)施例4:對比試驗(yàn)
[0065]1、從鮮茶葉中提取單體EGCG:[0066]S1.浸泡:將新鮮綠茶IOkg置于浸提器中，加入純化水14000kg，恒溫浸泡2.2h，將浸提器中的混合液過20目篩，得濾液；其中，所述恒溫浸泡溫度為85°C ；
[0067]S2.離心:將濾液置于溫度為45°C、壓強(qiáng)為0.25MPa的環(huán)境下離心60s，棄去沉淀，離心液用于下步操作；其中，所述離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為6700轉(zhuǎn)/min ；
[0068]S3.一次吸附:將步驟S2所得離心液上樣于LX-8樹脂，吸附離心液中的EGCG，用72%的乙醇洗脫，洗脫速度為2.2m3/h，收集固形物含量為5%的洗脫液；
[0069]S4.MVR濃縮:將收集到的洗脫液加至MVR濃縮器中濃縮130min，濃縮溫度為70°C，得濃縮液；
[0070]S5.CF過濾:采用CF過濾器對濃縮液進(jìn)行過濾，至固形物含量5% ;其中，操作溫度為40°C，操作壓強(qiáng)為0.25MPa，濾膜孔徑為0.02 μ m ；
[0071]S6.二次吸附:將步驟S5所得固形物含量為4%的濾液上樣于HZ818樹脂，吸附濾液中的咖啡因，洗脫速度為2.2m3/h，收集流出液；
[0072]S7.濃縮:先采用截留分子量為100的反滲透膜濃縮步驟S6收集到的流出液，濃縮至固形物含量為40%，膜濃縮溫度為38°C ;再將濃縮液加熱至90°C，蒸發(fā)濃縮至固形物含量為70%，冷卻析出晶體；
[0073]S8.漂洗:將步驟S7所得晶體用10°C的純凈水漂洗3次；
[0074]S9.脫水: 將漂洗后的晶體置于轉(zhuǎn)速為1650轉(zhuǎn)/min離心機(jī)中離心15min，脫去多余水分；
[0075]S10.干燥:將脫水后的晶體置于溫度為62°C的微波下干燥，至水分為3.0% ；
[0076]Sll.除鐵:將干燥后的固體用粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，用磁力為12000高斯磁鐵進(jìn)行一次吸附除鐵，除鐵后將粉末混合均勻；將一次除鐵后的粉末過80目篩，用磁力為15000高斯磁鐵進(jìn)行二次吸附除鐵，得EGCG粉末。
[0077]2、從干茶葉中提取單體EGCG:
[0078]提取方法:S1.浸泡:取新鮮綠茶10kg，烘干，將其置于浸提器中，加入純化水14000kg，恒溫浸泡2.2h，將浸提器中的混合液過20目篩，得濾液；其中，所述恒溫浸泡溫度為 85 0C ；
[0079]其余步驟同實(shí)驗(yàn)I。
[0080]3、傳統(tǒng)試驗(yàn)方法制備單體EGCG:
[0081]稱取新鮮綠茶10kg，干燥后用I倍體積氯仿在索氏提取器中連續(xù)萃取48h，再用2000ml乙酸乙酯回流48h，過濾乙酸乙酯溶液，用無水硫酸鈉干燥過夜，濃縮乙酸乙酯到原體積的一半，加3倍量干燥氯仿有白色沉淀析出，用濾紙過濾，用少量干燥氯仿沖洗，干燥得EGCG粗品；將粗品溶于2000ml含水乙醚，上2000g含水乙醚硅膠分配柱，流速每小時(shí)10L, 500ml 一個(gè)餾份，合并前2.5餾份。餾份經(jīng)少量無水硫酸鈉干燥過夜，45°C以下回收得樣品再溶于含水乙醚，上2000g含水乙醚硅膠分配柱，流速每小時(shí)10L，500ml —個(gè)餾份，合并前2.5餾份。餾份再經(jīng)少量無水硫酸鈉干燥過夜，45°C以下回收，得若干瓶白色粉末狀物質(zhì)，每個(gè)餾份用高壓液相檢測，合并相同部分，白色粉末狀物質(zhì)在乙醚中在4°C結(jié)晶，得EGCG單體。
[0082]4、檢測:精確稱量上述實(shí)驗(yàn)1、2、3所制備的產(chǎn)品重量，采用下述實(shí)驗(yàn)方法測定產(chǎn)品的純度(EGCG的含量)和提取物的得率。[0083](I)測定方法:
[0084]A.產(chǎn)品純度的測定采用HPLC法分析，色譜條件為:
[0085]色譜柱:C184.6 X 150mm ;
[0086]流動(dòng)相:7jC:甲醇:磷酸(77:23:0.1)；
[0087]流速:1.0ml/min ；
[0088]波長:280nm；
[0089]柱溫:30°C;
[0090]a.標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:取經(jīng)五氧化二磷干燥24小時(shí)以上的綠茶對照樣品(經(jīng)咖啡因、EGCG單一組分的標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn))25mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加水約40ml，超聲處理使其完全溶解，放冷至室溫，用水定容至刻度，搖勻，用孔徑為0.45 μ m的微孔濾膜過濾，即得。
[0091]b.供試品溶液制備:精密稱取綠茶提取物25mg，置50ml (或100ml)容量瓶中，加水適量超聲使其溶解，取出放冷，加水定容至刻度，搖勻，用孔徑為0.45 μ m的微孔濾膜過濾，即得。
[0092]c.測定:分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品溶液各20 μ I,注入液相色譜議，測定，即得。
[0093]d.結(jié)果計(jì)算
[0094]各個(gè)組分的含量通過下式進(jìn)行計(jì)算:
[0095]各組分(％)=(A樣品 XC對照 XVXFi)/ (Aw Xff) X 100%
[0096]式中:W——試樣重量，mg ； A樣品——試樣峰面積；
[0097]A對照對照品峰面積；C對照對照品濃度，mg/ml ；
[0098]V——供試液體積，ml; Fi——各個(gè)組分經(jīng)校準(zhǔn)的含量系數(shù)。
[0099]B.提取率的計(jì)算:提取物的得率(％)=產(chǎn)品重量/茶葉濕重X 100%
[0100]( 2 )實(shí)驗(yàn)結(jié)果:如表1所示:
[0101]表1:從干茶葉和鮮茶葉中提取單體EGCG的對比試驗(yàn)
[0102]
【權(quán)利要求】
1.一種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法，其特征在于，它包括以下步驟: 51.浸泡:將新鮮茶葉置于浸提器中，加入純化水恒溫浸泡1.8~2.5h，將浸提器中的混合液過18~24目篩，得濾液；其中，所述恒溫浸泡溫度為65~100°C ； 52.離心:將濾液置于溫度為30~50°C、壓強(qiáng)為0.1~0.3MPa的環(huán)境下離心50~70s,棄去沉淀,離心液用于下步操作；其中,所述離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為6500~7000轉(zhuǎn)/min ； 53.一次吸附:將步驟S2所得離心液上樣于LX-8樹脂，吸附離心液中的EGCG，用70~75%的乙醇洗脫，收集固形物含量為4~6%的洗脫液； 54.MVR濃縮:將收集到的洗脫液加至MVR蒸發(fā)器中濃縮100~140min，濃縮溫度為60~75 °C，得濃縮液； 55.CF過濾:采用CF過濾器對濃縮液進(jìn)行過濾，至固形物含量3~5%;其中，操作溫度為35~45°C，操作壓強(qiáng)為0.1~0.3MPa，濾膜孔徑為0.02 μ m ; 56.二次吸附:將步驟S5所得固形物含量為3~5%的濾液上樣于HZ818樹脂，吸附濾液中的咖啡因，收集流出液； 57.濃縮:先采用截留分子量為100的反滲透膜濃縮步驟S6收集到的流出液，濃縮至固形物含量> 20%，膜濃縮溫度為35~45°C ;再將濃縮液加熱至溫度> 75°C，蒸發(fā)濃縮至固形物含量> 50%，冷卻析出晶體； 58.漂洗:將步驟S7所得晶體用溫度<25°C的純凈水漂洗2~3次； 59.脫水:將漂洗后的晶體置于轉(zhuǎn)速為1500~1700轉(zhuǎn)/min離心機(jī)中離心13~18min,脫去多余水分； 510.干燥:將脫水后的晶體置于溫度為60~70°C的微波下干燥，至水分 ≤5.0% ； 511.除鐵:將干燥后的固體用粉碎機(jī)粉碎，過50~90目篩，用磁鐵吸附除鐵，除鐵后將粉末混合均勻，再次過篩、磁鐵吸附除鐵，所得粉末即為高純度EGCG。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法，其特征在于，步驟SI中所述新鮮茶葉與純化水的重量比為1:5~8。
3.如權(quán)利要求1所述的一種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法，其特征在于，步驟S3和S6中所述洗脫速度為1.8~2.4 m3/h。
4.如權(quán)利要求1所述的一種從新鮮茶葉中提取單體EGCG的方法，其特征在于，步驟Sll中所述磁鐵的磁力為10000~15000高斯。
【文檔編號】C07D311/62GK103819444SQ201410067471
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年2月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月26日
【發(fā)明者】顧峰 申請人:成都華高生物制品有限公司