雙重靶向治療癌癥的葉酸-阿霉素免疫制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，特別涉及一種藥物組合物及其應(yīng)用、制備方法。本發(fā)明提供的藥物組合物可通過(guò)免疫治療和主動(dòng)靶向藥物治療的雙重作用協(xié)同治療腫瘤（癌癥），且療效顯著。如式I所示的阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物，由阿霉素和牛血清白蛋白偶聯(lián)制得。。
【專利說(shuō)明】雙重靶向治療癌癥的葉酸-阿霉素免疫制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，特別涉及一種藥物組合物及其應(yīng)用、制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]癌癥,亦稱惡性腫瘤(Malignant neoplasm),為由控制細(xì)胞生長(zhǎng)增殖機(jī)制失常而引起的疾病。癌細(xì)胞除了生長(zhǎng)失控外，還會(huì)局部侵入周遭正常組織甚至經(jīng)由體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到身體其他部分，可破壞組織、器官的結(jié)構(gòu)和功能，引起壞死出血合并感染，患者最終由于器官功能衰竭而死亡。常見(jiàn)的癌癥有血癌(白血病)、骨癌、淋巴癌(包括淋巴細(xì)胞瘤)、腸癌、肝癌、胃癌、盆腔癌(包括子宮癌、宮頸癌)、肺癌(包括縱隔癌)、腦癌、神經(jīng)癌、乳腺癌、食道癌、腎癌等。近三十年來(lái)，世界癌癥發(fā)病率以年均3-5%的速度遞增，癌癥已成為人類第一位死因。如何有效預(yù)防和治療癌癥一直是醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)領(lǐng)域。
[0003]目前治療癌癥的方法,除手術(shù)治療外，主要包括化學(xué)治療、免疫治療、放射治療、自然療法等。其中，化學(xué)治療存在毒副作用嚴(yán)重，降低機(jī)體正常功能，治療不徹底等問(wèn)題，為了改善化學(xué)治療存在的問(wèn)題，在細(xì)胞水平和分子水平上利用配體-受體、抗原-抗體的特異性作用發(fā)展起來(lái)的主動(dòng)靶向給藥成為研究熱點(diǎn)。尤其是目前大量研究的葉酸修飾藥物，抗癌藥物經(jīng)葉酸修飾后形成葉酸-藥物，可針對(duì)在子宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、肺癌和鼻咽癌等各類腫瘤細(xì)胞表面過(guò)度表達(dá)的葉酸受體產(chǎn)生特異性作用，葉酸-藥物與癌細(xì)胞表面的葉酸受體結(jié)合后，經(jīng)內(nèi)吞途徑進(jìn)入癌細(xì)胞并形成內(nèi)涵體，葉酸-藥物可利用內(nèi)涵體偏酸性特點(diǎn)，在癌細(xì)胞的胞漿內(nèi)解體，釋放藥物發(fā)揮作用，從而起到主動(dòng)靶向治療的作用。這類藥物可通過(guò)分子靶向作用實(shí)現(xiàn)對(duì)癌細(xì)胞的主動(dòng)靶向給藥，對(duì)癌細(xì)胞具有高度選擇性，靶向定位精確，可有效、低毒治療癌癥。另外由于葉酸體積小，無(wú)免疫原性，廉價(jià)易得，性質(zhì)穩(wěn)定，易于修飾和產(chǎn)業(yè)化，因此，葉酸修飾藥物在治療癌癥方面具有顯著的優(yōu)勢(shì)。然而，葉酸修飾藥物不可避免地、或多或少地會(huì)進(jìn)一步加深患癌機(jī)體已經(jīng)異常的免疫功能的紊亂程度，故葉酸修飾藥物無(wú)法從根本上改善整個(gè)癌癥機(jī)體的免疫狀況。
[0004]免疫系統(tǒng)具有生理防御、自身穩(wěn)定、免疫監(jiān)視等功能。免疫監(jiān)視正常時(shí)，機(jī)體受異體蛋白大分子、病原體、自身變異細(xì)胞和癌細(xì)胞等抗原的刺激，會(huì)產(chǎn)生抗體(antibody,內(nèi)源性蛋白質(zhì))，并形成抗原-抗體復(fù)合物將抗原標(biāo)記，進(jìn)而啟動(dòng)免疫系統(tǒng)后續(xù)功能，通過(guò)吞噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、補(bǔ)體等將抗原殺滅和清除。當(dāng)免疫監(jiān)視異常時(shí)，受抗原刺激的機(jī)體因原有保護(hù)機(jī)制受阻，免疫系統(tǒng)喪失免疫識(shí)別能力，不能及時(shí)識(shí)別癌細(xì)胞，難以啟動(dòng)將其殺死并清除的功能，往往導(dǎo)致癌癥發(fā)生。故如何誘導(dǎo)機(jī)體恢復(fù)對(duì)癌細(xì)胞的識(shí)別，并產(chǎn)生抗體進(jìn)而啟動(dòng)免疫防御功能將其消除，成為解決問(wèn)題的核心?；诖嗽?，近年來(lái)出現(xiàn)了一種新興的、
具有顯著療效的癌癥治療模式-免疫治療。但此療法不具備化學(xué)治療直接殺死癌細(xì)胞的
優(yōu)勢(shì)，發(fā)揮療效的周期較長(zhǎng)。
[0005]鑒于主動(dòng)靶向化學(xué)藥物治療和免疫治療在癌癥治療中各有所長(zhǎng)，又都存在一定的不足，因此，提供一種療效顯著，既能夠直接殺死癌細(xì)胞，又能恢復(fù)機(jī)體免疫功能的癌癥治療藥物及其制備方法，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]有鑒于此，本發(fā)明提供了一種藥物組合物及其應(yīng)用、制備方法。該藥物組合物可通過(guò)免疫治療和主動(dòng)祀向藥物治療的雙重作用協(xié)同治療腫瘤(癌癥)，且療效顯著。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:
[0008]本發(fā)明提供了一種如式I所示的阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物，由阿霉素和牛血清白蛋白偶聯(lián)制得；阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物作為一種藥物組合物的一部分，為治療癌癥而應(yīng)用于刺激癌癥機(jī)體產(chǎn)生抗體。
[0009]本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，癌癥為血癌、骨癌、淋巴癌、腸癌、肝癌、胃癌、盆腔癌、肺癌、腦癌、神經(jīng)癌、宮頸癌、乳腺癌、食道癌或腎癌。
[0010]本發(fā)明提供的一種藥物組合物，包括本發(fā)明提供的如式I所示的ADM-BSA和如式II所示的FA-ADM ；
[0011]阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物的制備方法為:取阿霉素(ADM)和牛血清白蛋白(BSA)，用戊二醛偶聯(lián)法，在二甲基甲酰胺(DMF)中反應(yīng)，即得；
[0012]由于小分子-異體蛋 白偶聯(lián)物可作為抗原(亦稱免疫原)刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗小分子抗體，但要求小分子半抗原與異體蛋白，采取適當(dāng)方式制成將小分子抗原決定族暴露在異體蛋白大分子表面的抗原。ADM為半抗原，經(jīng)BSA修飾得到抗原ADM-BSA。經(jīng)BSA修飾后的ADM應(yīng)不受BSA的空間位阻干擾，為獲得抗ADM的特異性多克隆抗體奠定了基礎(chǔ)。
[0013]本發(fā)明提供的藥物組合物治療癌癥的作用機(jī)理為:先將本發(fā)明提供的ADM-BSA注射入癌癥機(jī)體中，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗ADM多克隆抗體；然后將本發(fā)明提供的FA-ADM注射入癌癥機(jī)體中，利用配體和受體的作用，F(xiàn)A-ADM與癌細(xì)胞表面過(guò)度表達(dá)的葉酸受體(FR)結(jié)合；同時(shí)，利用抗原-抗體作用，F(xiàn)A-ADM可發(fā)揮連接橋作用，與抗ADM多克隆抗體作用，形成葉酸受體-FA-ADM-抗ADM抗體復(fù)合物(簡(jiǎn)稱:FA—FA-ADM—抗體復(fù)合物，或:抗體復(fù)合物)。該抗體復(fù)合物可恢復(fù)機(jī)體的免疫識(shí)別功能，從而啟動(dòng)機(jī)體免疫保護(hù)系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞及補(bǔ)體等，將癌細(xì)胞殺滅和清除，發(fā)揮靶向免疫治療作用；此外，部分沒(méi)有與抗體結(jié)合的FA-ADM，可與癌細(xì)胞表面的FR作用，通過(guò)內(nèi)吞途徑進(jìn)入癌細(xì)胞并形成內(nèi)涵體，F(xiàn)A-ADM可利用內(nèi)涵體偏酸性特點(diǎn)，在癌細(xì)胞的胞漿內(nèi)解體，釋放ADM發(fā)揮治療作用。
[0014]在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物在255nm和485nm位置有紫外吸收的特征峰。BSA的紫外特征峰在280nm左右處，ADM在233nm、253nm、290nm、485nm處有不同吸收強(qiáng)度的吸收峰，而合成的ADM-BSA在485nm左右出現(xiàn)了 ADM的特征峰，并且在255nm左右出現(xiàn)一個(gè)峰肩，是ADM的吸收峰BSA吸收峰加和的結(jié)果，表明ADM與BSA交聯(lián)成功，制得了 ADM-BSA。
[0015]在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，葉酸-阿霉素偶聯(lián)物的制備方法為:葉酸經(jīng)N, N’ - 二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS)的活化作用，得到葉酸物，葉酸物與阿霉素偶聯(lián)，即得。
[0016]本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法，包括如下步驟:
[0017]將阿霉素和牛血清白蛋白，用戊二醛法偶聯(lián)，在二甲基甲酰胺(DMF)中反應(yīng)得到阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物；
[0018]葉酸經(jīng)DCC和NHS的活化作用，得到葉酸活化物，葉酸活化物與阿霉素偶聯(lián)，得到葉酸-阿霉素偶聯(lián)物；
[0019]藥物組合物包括阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物和葉酸-阿霉素偶聯(lián)物。
[0020]本發(fā)明提供了一種如式I所示的阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物，由阿霉素和牛血
清白蛋白偶聯(lián)制得；
[0021]
【權(quán)利要求】
1.如式I所示的阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物，其特征在于，由阿霉素和牛血清白蛋白偶聯(lián)制得；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物在255nm和485nm波長(zhǎng)有紫外吸收特征峰。
3.如權(quán)利要求1或2所述的阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物的制備方法為:阿霉素、牛血清白蛋白用戊二醛法，在二甲基甲酰胺中反應(yīng)得到的偶聯(lián)物。
4.如權(quán)利要求1或2所述的阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物是一種藥物組合物之一，為治療癌癥而應(yīng)用于刺激癌癥機(jī)體產(chǎn)生抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述,其特征在于，所述癌癥為血癌、骨癌、淋巴癌、腸癌、肝癌、胃癌、盆腔癌、肺癌、腦癌、神經(jīng)癌、宮頸癌、乳腺癌、食道癌或腎癌。
6.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括如式II所示的葉酸-阿霉素偶聯(lián)物和如權(quán)利要求1所述的阿霉素-牛血清白蛋白偶聯(lián)物；
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，所述葉酸-阿霉素偶聯(lián)物是在癌癥機(jī)體產(chǎn)生抗阿霉素抗體后應(yīng)用，通過(guò)在癌細(xì)胞表面產(chǎn)生“葉酸受體一葉酸-阿霉素一葉酸抗體”復(fù)合物，啟動(dòng)免疫系統(tǒng)發(fā)揮抗癌作用。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述葉酸-阿霉素偶聯(lián)物，其制備方法為:葉酸經(jīng)DCC和NHS的活化作用，得到葉酸活化物，所述葉酸活化物與阿霉素偶聯(lián)，即得。
9.如權(quán)利要求6所述葉酸-阿霉素偶聯(lián)物作為藥物組合之一，在機(jī)體產(chǎn)生抗阿霉素抗體后應(yīng)用，可發(fā)揮主動(dòng)靶向作用治療癌癥。
【文檔編號(hào)】C07K14/765GK103864921SQ201410019998
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年1月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月16日
【發(fā)明者】楊紅, 吳秀鳳, 鄧安平, 龔珠萍, 梅麗蕓, 黃晨蓉, 明志君, 劉揚(yáng) 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)