使用pd-1軸結(jié)合拮抗劑和vegf拮抗劑治療癌癥的方法
【專利摘要】本發(fā)明描述了包含PD-1軸結(jié)合拮抗劑、化療和任選的VEGF拮抗劑的聯(lián)合治療及其使用方法，包括治療期望增強(qiáng)的免疫原性的狀況(諸如提高腫瘤免疫原性以治療癌癥)的方法。
【專利說明】使用PD-1軸結(jié)合拮抗劑和VEGF拮抗劑治療癌癥的方法
[0001] 對相關(guān)申請的交叉引用
[0002] 本申請要求2012年5月31日提交的美國臨時(shí)申請?zhí)?1/653, 861的權(quán)益，通過提 及將其完整收入本文。
[0003] 序列表
[0004] 本申請含有序列表，已經(jīng)以ASCII格式經(jīng)EFS-Web提交且通過述及完整收入本文。 2013年5月28日創(chuàng)建的所述ASCII拷貝命名為P4926RlW0.txt，并且大小為14, 285個(gè)字 節(jié)。
[0005] 發(fā)明背景
[0006] 對T細(xì)胞提供兩種截然不同的信號是一種關(guān)于抗原呈遞細(xì)胞（APC)對靜息T 淋巴細(xì)胞的淋巴細(xì)胞活化的廣泛公認(rèn)的模型。Lafferty等，Aust. J. Exp. Biol. Med. ScL 53:27-42(1975)。此模型進(jìn)一步提供了自身與非自身的辨別和免疫耐受性。Bretscher 等，Science 169:1042-1049(1970) ;Bretscher，P.A·，P.N.A.S. USA 96:185-190(1999); Jenkins等，J.Exp.Med 165:302-319(1987)。在主要組織相容性復(fù)合體（MHC)的背景 中呈遞的外來抗原肽的識別后，第一信號，或抗原特異性信號經(jīng)由T細(xì)胞受體（TCR)轉(zhuǎn) 導(dǎo)。第二或共刺激信號通過抗原呈遞細(xì)胞（APC)上表達(dá)的共刺激分子投遞至T細(xì)胞，并 且誘導(dǎo)T細(xì)胞以促進(jìn)克隆擴(kuò)充，細(xì)胞因子分泌和效應(yīng)器功能。Lenschow等，Ann. Rev. Immunol. 14:233(1996)。在缺乏共刺激的情況中，T細(xì)胞能對抗原刺激變得不應(yīng)，不發(fā)起有 效的免疫應(yīng)答，并且進(jìn)一步可以導(dǎo)致對外來抗原的耐受性或耗竭。
[0007] 在兩信號模型中，T細(xì)胞接受正和負(fù)第二共刺激信號兩者。此類正和負(fù)信號的調(diào)節(jié) 對于在維持免疫耐受性和防止自身免疫的同時(shí)使宿主的保護(hù)性免疫應(yīng)答最大化是至關(guān)重 要的。負(fù)第二信號對于誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受性似乎是必需的，而正信號促進(jìn)T細(xì)胞活化。雖然 簡單的兩信號模型仍然為未免疫淋巴細(xì)胞提供有效解釋，但是宿主的免疫應(yīng)答是一個(gè)動(dòng)態(tài) 過程，并且也可以對抗原暴露的T細(xì)胞提供共刺激信號。共刺激的機(jī)制是治療學(xué)方面感興 趣的，因?yàn)橐呀?jīng)顯示了共刺激信號的操作提供增強(qiáng)或終止基于細(xì)胞的免疫應(yīng)答的手段。最 近，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了 T細(xì)胞功能障礙或無反應(yīng)性與抑制性受體（編程性死亡1多肽（PD-I))的 誘導(dǎo)且持續(xù)的表達(dá)并行發(fā)生。因此，PD-I和經(jīng)由與ro-i的相互作用發(fā)信號的其它分子，諸 如編程性死亡配體l(ro-Li)和編程性死亡配體2(ro-L2)的治療性靶向是強(qiáng)烈感興趣的領(lǐng) 域。
[0008] PD-Ll在許多癌癥中過表達(dá)，并且經(jīng)常與不良預(yù)后關(guān)聯(lián)（Okazaki T等，1]^61·]!· Immun. 2007, 19 (7): 813 !Thompson RH 等，Cancer Res 2006, 66 (7): 3381)。令人感興趣地， 與正常組織中的T淋巴細(xì)胞和外周血T淋巴細(xì)胞形成對比，大多數(shù)腫瘤浸潤性T淋巴細(xì)胞 主要表達(dá)ro-ι，這指示腫瘤反應(yīng)性τ細(xì)胞上ro-i的上調(diào)可以促成受損的抗腫瘤免疫應(yīng)答 (Blood 2009114(8) :1537)。這可以是由于利用由與ro-l表達(dá)T細(xì)胞相互作用的ro-Ll 表達(dá)腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的ro-Ll信號傳導(dǎo)以導(dǎo)致T細(xì)胞活化的減弱及逃避免疫監(jiān)視（Sharpe 等，Nat Rev 2002) (Keir ME 等，2008Annu. Rev. Immunol. 26:677)。因此，對 PD-L1/PD-1 相 互作用的抑制可以增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷。
[0009] 已經(jīng)提出經(jīng)由其直接配體（例如ro-Li，ro-L2)抑制ro-i軸信號傳導(dǎo)為增強(qiáng)τ細(xì) 胞免疫以治療癌癥（例如腫瘤免疫）的手段。此外，已經(jīng)通過抑制H)-L1與結(jié)合配偶B7-1 的結(jié)合觀察到對T細(xì)胞免疫的類似增強(qiáng)。最佳的治療性處理可組合ro-i受體/配體相互 作用的阻斷與其它抗癌劑。仍然需要用于治療各種癌癥，穩(wěn)定化各種癌癥，預(yù)防各種癌癥， 和/或延遲各種癌癥形成的此類最佳療法。
[0010] 在此通過提及將本文中公開的所有參考文獻(xiàn)，出版物，和專利申請完整收錄。
[0011] 發(fā)明概述
[0012] 本發(fā)明描述了聯(lián)合治療，其在有或無 VEGF拮抗劑的情況下包含奧沙利鉬、亞葉酸 和5-FU及ro-i軸結(jié)合拮抗劑。
[0013] 本文中提供了在個(gè)體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展的方法，其包括對所述個(gè)體施用 有效量的ro-ι軸結(jié)合拮抗劑及奧沙利鉬、亞葉酸和5-FU。在一些方面，所述方法進(jìn)一步包 括施用VEGF拮抗劑。
[0014] 癌癥可以是黑素瘤、結(jié)腸直腸癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺 癌、血液學(xué)惡性（malignancy)或腎細(xì)胞癌。癌癥可以為早期階段或晚期階段。在一些實(shí)施 方案中，治療的受試者是人。
[0015] 在一些實(shí)施方案中，治療導(dǎo)致停止治療后個(gè)體中持續(xù)的應(yīng)答。在一些實(shí)施方案中， 治療在受試者中產(chǎn)生完全應(yīng)答，部分應(yīng)答，或穩(wěn)定疾病。
[0016] 在一些實(shí)施方案中，PD-I軸結(jié)合拮抗劑是ro-i結(jié)合拮抗劑，PD-Ll結(jié)合拮抗劑或 PD-L2結(jié)合拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，PD-I結(jié)合拮抗劑抑制ro-i與ro-Ll的結(jié)合和/或 ro-i與ro-L2的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，PD-I結(jié)合拮抗劑是抗體（例如本文中描述的抗 體MDX-1106, CT-Oll和Merck 3745)，其抗原結(jié)合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。在 一些實(shí)施方案中，PD-LI結(jié)合拮抗劑抑制ro-Ll與ro-i的結(jié)合和/或ro-Ll與B7-1的結(jié) 合。在一些實(shí)施方案中，PD-Ll結(jié)合拮抗劑是抗體（例如本文中描述的抗體YW243. 55. S70 和MDX-1105)，其抗原結(jié)合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。在一些實(shí)施方案中，PD-L2 結(jié)合拮抗劑抑制ro-L2與ro-i的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，PD-L2結(jié)合拮抗劑是抗體，其 抗原結(jié)合片段，免疫粘附素（例外本文所述AMP-224)，融合蛋白，或寡肽。
[0017] 在一些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑是抗體，例如單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中， 抗VEGF抗體與由雜交瘤ATCC HB 10709生成的單克隆抗VEGF抗體A4. 6.1結(jié)合相同表 位?？筕EGF抗體可以是人源化抗體或人抗體。在一些實(shí)施方案中，抗VEGF抗體是貝伐單 抗（bevacizumab)。在一些實(shí)施方案中，抗VEGF抗體具有包含下述氨基酸序列的重鏈可變 區(qū)：
[0018] EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT NYGMNWVRQA PGKGLEIVVGff
[0019] INTYTGEPTY AADFKRRFTF SLDTSKSTAY LQMNSLRAED TAVYYCAKYP
[0020] HYYGSSHWYF DVffGQGTLVT VSS(SEQ ID NO ：22)
[0021] 和包含下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)：
[0022] DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCSASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKVLIYF
[0023] TSSLHSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSTVPffTFGQ
[0024] GTKVEIKR(SEQ ID NO :23)。
[0025] 在另一個(gè)方面，提供了在有或無 VEGF拮抗劑的情況下包含Η)-1軸結(jié)合拮抗劑、奧 沙利鉬、亞葉酸和5-FU的試劑盒，其用于在個(gè)體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展或者在具有癌 癥的個(gè)體中增強(qiáng)免疫功能。試劑盒可以包含ro-ι軸結(jié)合拮抗劑和包裝插頁，該包裝插頁包 含關(guān)于在有或無 VEGF拮抗劑的情況下與奧沙利鉬、亞葉酸和5-FU組合使用ro-Ι軸結(jié)合拮 抗劑在個(gè)體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展或在具有癌癥的個(gè)體中增強(qiáng)免疫功能的用法說明 書。試劑盒可以包含VEGF拮抗劑和包裝插頁，該包裝插頁包含關(guān)于與ro-i軸結(jié)合拮抗劑及 奧沙利鉬、亞葉酸和5-FU組合使用VEGF拮抗劑在個(gè)體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展或在具 有癌癥的個(gè)體中增強(qiáng)免疫功能的用法說明書。試劑盒可以包含ro-Ι軸結(jié)合拮抗劑和VEGF 拮抗劑，及包裝插頁，該包裝插頁包含關(guān)于使用ro-Ι軸結(jié)合拮抗劑和VEGF拮抗劑在個(gè)體中 治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展或在具有癌癥的個(gè)體中增強(qiáng)免疫功能的用法說明書。
[0026] 附圖簡述
[0027] 圖1是描繪在抗ro-Ll抗體和FOLFOX共處理的情況中腫瘤體積變化的圖。數(shù)據(jù) 表明與僅抗ro-Ll抗體或FOLFOX處理相比顯著的腫瘤生長降低和持續(xù)的抗腫瘤效果。
[0028] 圖2是顯示圖1所示處理組的體重變化的圖。
[0029] 圖3是描繪在抗H)-L1抗體與FOLFOX組合的情況中與抗H)-L1抗體與FOLFOX和 抗VEGF抗體組合相比腫瘤體積變化的圖。數(shù)據(jù)表明與抗H)-L1抗體與FOLFOX組合處理相 比額外施用抗VEGF抗體顯著降低腫瘤生長且導(dǎo)致持久的抗腫瘤效應(yīng)。
[0030] 圖4是顯示圖3所示處理組的體重變化的圖。
[0031] 發(fā)明詳述
[0032] L通用技術(shù)
[0033] 本文中描述或提及的技術(shù)和規(guī)程是本領(lǐng)域技術(shù)人員一般充分了解且通常采用的， 其使用常規(guī)方法，諸如例如廣泛利用的方法進(jìn)行，該方法記載于Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual 3d edition(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. ；Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel 等編，（2003));叢刊 Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.) :PCR 2:A Practical Approach(M. J. MacPherson, B. D. Hames and G. R. Taylor 編(1995)), Harlow 和 Lane 編(1988)Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture(R. I. Freshney 編（1987)) ;01igonucleotide Synthesis(M.J. Gait 編，1984) ;Methods in Molecular Biology, Humana Press ；Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis 編，1998)Academic Press ;Animal Cell Culture(R. I. Freshney)編，1987); Introduction to Cell and Tissue Culture(J. P. Mather 和 P. E. Roberts, 1998)Plenum Press ；Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths,和 D. G. Newell , 1993-8)J. Wiley and Sons !Handbook of Experimental Immunology(D. M. Weir 和 C. C. Blackwell 編）；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J. M. Miller 和 M.P. Calos 編，1987) ;PCR:The Polymerase Chain Reaction, (Mullis 等編，1994) ;Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan 等編，1991) ;Short Protocols in Molecular Biology (Wiley和 Sons, 1999) ;Immunobiology(C. A. Janeway和 P. Travers,1997) ；Antibodies(P. Finch,1997) ；Antibodies: A Practical Approach (D. Catty.編，IRL Press, 1988-1989) ;Monoclonal Antibodies:A Practical Approach(P. Shepherd 和 C.Dean 編，Oxford University Press, 2000) ;Using Antibodies:A Laboratory Manual(E. Harlow和D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)； The Antibodies(M. Zanetti 和 J. D. Capra 編,Harwood Academic Publishers, 1995)； ]k. Cancer !Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita 等編，J. B. Lippincott Company, 1993) 〇
[0034] II.定義
[0035] 術(shù)語"PD-1軸結(jié)合拮抗劑"是一種抑制ro-i軸結(jié)合配偶與一種或多種其結(jié)合配偶 的相互作用，使得消除源自ro-ι信號傳導(dǎo)軸上的信號傳導(dǎo)的τ細(xì)胞功能障礙（結(jié)果是恢復(fù) 或增強(qiáng)T細(xì)胞功能）的分子。如本文中使用的，PD-I軸結(jié)合拮抗劑包括ro-i結(jié)合拮抗劑、 PD-Ll結(jié)合拮抗劑和ro-L2結(jié)合拮抗劑。
[0036] 術(shù)語"PD-1結(jié)合拮抗劑"是一種降低、阻斷、抑制、消除或干擾源自ro-i與一種或 多種其結(jié)合配偶，諸如ro-Ll，PD-L2的相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子。在一些實(shí)施方案中， ro-i結(jié)合拮抗劑是一種抑制ro-i與其結(jié)合配偶結(jié)合的分子。在一個(gè)具體的方面，ro-i結(jié) 合拮抗劑抑制ro-i與ro-Li和/或ro-L2的結(jié)合。例如，PD-I結(jié)合拮抗劑包括降低、阻斷、 抑制、消除或干擾源自ro-i與ro-Li和/或ro-L2相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗ro-i抗體、其 抗原結(jié)合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽和其它分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，ro-i結(jié)合拮 抗劑降低負(fù)共刺激信號，從而使功能障礙τ細(xì)胞不太為非功能障礙的，所述負(fù)共刺激信號 經(jīng)由ro-i由或經(jīng)由τ淋巴細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白質(zhì)介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)介導(dǎo)。在一些實(shí) 施方案中，ro-i結(jié)合拮抗劑是抗ro-i抗體。在一個(gè)具體的方面，ro-i結(jié)合拮抗劑是本文 中描述的MDX-1106。在另一個(gè)具體的方面，PD-I結(jié)合拮抗劑是本文中描述的Merck 3745。 在另一個(gè)具體的方面，PD-I結(jié)合拮抗劑是本文中描述的CT-Ol 1。
[0037] 術(shù)語"PD-L1結(jié)合拮抗劑"是一種降低、阻斷、抑制、消除或干擾源自PD-Ll與一種 或多種其結(jié)合配偶，諸如ro-1，B7-1的相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子。在一些實(shí)施方案中， PD-Ll結(jié)合拮抗劑是抑制H)-L1與其結(jié)合配偶結(jié)合的分子。在一個(gè)具體的方面，PD-Ll結(jié)合 拮抗劑抑制ro-Li與ro-i和/或B7-1的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，PD-Ll結(jié)合拮抗劑包 括降低、阻斷、抑制、消除或干擾源自PD-Ll與一種或多種其結(jié)合配偶，諸如ro-l，B7-l的相 互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗ro-Li抗體，其抗原結(jié)合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它 分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，PD-Ll結(jié)合拮抗劑降低負(fù)共刺激信號，從而使功能障礙T細(xì)胞不 太為非功能障礙的，所述負(fù)共刺激信號經(jīng)由ro-Li由或經(jīng)由τ淋巴細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞表面 蛋白質(zhì)介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)介導(dǎo)。在一些實(shí)施方案中，PD-LI結(jié)合拮抗劑是抗ro-Li抗體。在 一個(gè)具體的方面，抗ro-Ll抗體是本文中描述的YW243. 55. S70。在另一個(gè)具體的方面，抗 PD-Ll抗體是本文中描述的MDX-1105。
[0038] 術(shù)語"PD-L2結(jié)合拮抗劑"是一種降低、阻斷、抑制、消除或干擾源自PD-L2與一種 或多種其結(jié)合配偶，諸如Η)-1的相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子。在一些實(shí)施方案中，PD-L2結(jié) 合拮抗劑是抑制H)-L2與其結(jié)合配偶結(jié)合的分子。在一個(gè)具體的方面，PD-L2結(jié)合拮抗劑 抑制ro-L2與ro-i的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，PD-L2拮抗劑包括降低、阻斷、抑制、消除 或干擾源自PD-L2與一種或多種其結(jié)合配偶，諸如ro-i的相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗ro-L2 抗體，其抗原結(jié)合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，PD-L2 結(jié)合拮抗劑降低負(fù)共刺激信號，從而使功能障礙T細(xì)胞不太為非功能障礙的，所述負(fù)共刺 激信號經(jīng)由ro-L2由或經(jīng)由T淋巴細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白質(zhì)介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)介導(dǎo)。在 一些實(shí)施方案中，PD-L2結(jié)合拮抗劑是ro-L2免疫粘附素。在一個(gè)具體的方面，PD-L2免疫 粘附素是本文中描述的AMP-224。
[0039] "VEGF拮抗劑"指能夠中和、阻斷、抑制、消除、降低或干擾VEGF活性（包括其與一 種或多種VEGF受體的結(jié)合）的分子。VEGF拮抗劑包括抗VEGF抗體及其抗原結(jié)合片段、特 異性結(jié)合VEGF由此使其隔絕與一種或多種受體結(jié)合的受體分子及衍生物、抗VEGF受體抗 體和VEGF受體拮抗劑諸如VEGFR酪氨酸激酶的小分子抑制劑。
[0040] 術(shù)語"VEGF"或"VEGF-A"用于指165個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子及相 關(guān)的121個(gè)、145個(gè)、189個(gè)和206個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，如例如Leung et al. Science, 246:1306 (1989);及 Houck et al. Mol. Endocrin. ,5:1806 (1991)所述，及其 天然存在的等位基因形式和加工形式。VEGF-A是包括VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、 VEGF-F和PlGF在內(nèi)的基因家族的一部分。VEGF-A主要結(jié)合兩種高親和力受體酪氨酸激 酶，即VEGFR-I(Flt-I)和VEGFR-2(Flk-l/KDR)，后者是VEGF-A血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂信 號的主要遞質(zhì)。另外，神經(jīng)氈蛋白-1已經(jīng)被鑒定為肝素結(jié)合VEGF-A同種型（isoform)的 受體，而且可在血管發(fā)育中發(fā)揮作用。術(shù)語"VEGF"或"VEGF-A"還指來自非人物種諸如小 鼠、大鼠或靈長類動(dòng)物的VEGF。有時(shí)，來自特定物種的VEGF表示如下，hVEGF表示人VEGF， mVEGF表示鼠 VEGF。術(shù)語"VEGF"還用于指包含165個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的 氨基酸第8-109位或第1-109位的截短形式多肽。本申請中可能通過例如"VEGF (8-109) "、 "VEGF(1-109) "或"VEGF165"來鑒別任何此類形式VEGF。"截短的"天然VEGF的氨基酸位置 如天然VEGF序列中所示編號。例如，截短的天然VEGF中的第17位氨基酸（甲硫氨酸）也 是天然VEGF中的第17位（甲硫氨酸）。截短的天然VEGF具有與天然VEGF相當(dāng)?shù)膶DR 和Flt-I受體的結(jié)合親和力。
[0041] "抗VEGF抗體"指以足夠親和力和特異性結(jié)合VEGF的抗體。所選擇的抗體通 常會(huì)具有對VEGF的結(jié)合親和力，例如，該抗體可以以介于IOOnM-IpM之間的K d值結(jié)合 hVEGF。抗體親和力可通過例如基于表面等離振子共振的測定法（諸如PCT申請公開文本 No. W02005/012359中所記載的BIAcore測定法）；酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA);和競爭測 定法（例如RIA)來測定。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗VEGF抗體可用作治療劑，用于靶 向和干擾其中涉及VEGF活性的疾病或疾患。還有，可對該抗體進(jìn)行其它生物學(xué)活性測定 法，例如為了評估其作為治療劑的效力所進(jìn)行的生物學(xué)活性測定法。此類測定法是本領(lǐng)域 已知的，而且取決于抗體的靶抗原和預(yù)定用途。例子包括HUVEC抑制測定法；腫瘤細(xì)胞生長 抑制測定法（如例如WO 89/06692中所記載的）；抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性（ADCC)和補(bǔ) 體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（CDC)測定法（美國專利5, 500, 362);及激動(dòng)活性或造血測定法（參見 WO 95/27062)?？筕EGF抗體通常不會(huì)結(jié)合其它VEGF同系物，諸如VEGF-B或VEGF-C，也不 會(huì)結(jié)合其它生長因子，諸如P1GF、PDGF或bFGF。
[0042] "嵌合VEGF受體蛋白"指具有衍生自至少兩種不同蛋白質(zhì)（其中至少一種是VEGF 受體蛋白）的氨基酸序列的VEGF受體分子。在某些實(shí)施方案中，嵌合VEGF受體蛋白能夠 結(jié)合VEGF并抑制VEGF的生物學(xué)活性。
[0043] "抗血管發(fā)生劑"或"血管發(fā)生抑制劑"指或直接或間接抑制血管發(fā)生 (angiogenesis)、血管生成（vasculogenesis)、或不想要的血管通透性的小分子量物 質(zhì)、多核苷酸、多肽、分離的蛋白質(zhì)、重組蛋白、抗體、或其偶聯(lián)物或融合蛋白。應(yīng)當(dāng)理 解，抗血管發(fā)生劑包括那些結(jié)合并阻斷血管發(fā)生因子或其受體的血管發(fā)生活性的藥 齊[J。例如，抗血管發(fā)生劑是上文定義的血管發(fā)生劑的抗體或其它拮抗劑，例如VEGF-A 的抗體、VEGF-A受體（例如KDR受體或Flt-I受體）的抗體、抗TOGFR抑制劑諸如 Gleevec?(Imatinib Mesylate)。抗血管發(fā)生劑還包括天然血管發(fā)生抑制劑，例如血管他 ?。╝ngiostatin)、內(nèi)皮他?。╡ndostatin)等。參見例如 Klagsbrun and D'Amore, Annu. Rev.Physiol.53:217-39 (1991) ；Streit and Detmar1Oncogene 22:3172-3179(2003) (例如列舉惡性黑素瘤中抗血管發(fā)生療法的表3) ;Ferrara&Alitalo, Nature Medicine5:1359-1364 (1999) Jonini 等，Oncogene 22:6549-6556 (2003)(例如列舉已知 抗血管發(fā)生因子的表2) ;Sato, Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206(2003)(例如列舉臨床試驗(yàn) 中所使用的抗血管發(fā)生劑的表1)。
[0044] 術(shù)語"功能障礙"在免疫功能障礙的背景中指對抗原性刺激的響應(yīng)性降低的免疫 狀態(tài)。該術(shù)語包括可以發(fā)生抗原識別，但是隨后的免疫應(yīng)答對于控制感染或腫瘤生長無效 的耗竭和/或無反應(yīng)性兩者的共同要素。
[0045] "增強(qiáng)T細(xì)胞功能"意指誘導(dǎo)，引起或刺激T細(xì)胞具有持續(xù)或放大的生物學(xué)功能，或 者恢復(fù)或再活化耗竭的或無活性的T細(xì)胞。增強(qiáng)T細(xì)胞功能的例子包括：相對于干預(yù)前的 此類水平，升高的來自CD8+T細(xì)胞的γ -干擾素分泌，升高的增殖，升高的抗原響應(yīng)性（例如 病毒或病原體清除）。在一個(gè)實(shí)施方案中，增強(qiáng)的水平是至少50 %，或者60 %，70 %，80 %， 90 %，100 %，120 %，150 %，200 %。測量此增強(qiáng)的方式是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。
[0046] "T細(xì)胞功能障礙性病癥"是以降低的對抗原性刺激的響應(yīng)性為特征的T細(xì)胞病癥 或狀況。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，T細(xì)胞功能障礙性病癥是明確與經(jīng)由ro-i的不適當(dāng)升 高的信號傳導(dǎo)有關(guān)的病癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，T細(xì)胞功能障礙性病癥是如下的病癥，其 中T細(xì)胞是無反應(yīng)性的或者具有降低的分泌細(xì)胞因子，增殖，或者執(zhí)行細(xì)胞裂解活性的能 力。在一個(gè)具體的方面，降低的響應(yīng)性導(dǎo)致對表達(dá)免疫原的病原體或腫瘤的無效控制。以T 細(xì)胞功能障礙為特征的T細(xì)胞功能障礙性病癥的例子包括未分辨的急性感染，慢性感染和 腫瘤免疫。
[0047] "腫瘤免疫"指腫瘤逃避免疫識別和清除的過程。如此，作為治療概念，腫瘤免疫在 此類逃避減弱時(shí)得到"治療"，并且腫瘤被免疫系統(tǒng)識別并攻擊。腫瘤識別的例子包括腫瘤 結(jié)合，腫瘤收縮和腫瘤清除。
[0048] "免疫原性"指特定物質(zhì)引發(fā)免疫應(yīng)答的能力。腫瘤是免疫原性的，并且增強(qiáng)腫瘤 免疫原性有助于通過免疫應(yīng)答清除腫瘤細(xì)胞。增強(qiáng)腫瘤免疫原性的例子包括在有或無 VEGF 拮抗劑的情況下用抗PDL抗體、奧沙利鉬、亞葉酸和5-FU處理。
[0049] "持續(xù)應(yīng)答"指在停止處理后對降低腫瘤生長的持續(xù)影響。例如，與施用階段開始 時(shí)的大小相比，腫瘤大小可以保持為相同或更小。在一些實(shí)施方案中，持續(xù)應(yīng)答具有與處理 持續(xù)時(shí)間至少相同的持續(xù)時(shí)間，處理持續(xù)時(shí)間的至少1. 5倍，2. 0倍，2. 5倍，或3. 0倍長度。
[0050] 術(shù)語"抗體"包括單克隆抗體（包括具有免疫球蛋白Fc區(qū)的全長抗體），具有多表 位特異性的抗體組合物，多特異性抗體（例如雙特異性抗體），雙抗體，和單鏈分子，及抗體 片段（例如Fab，F(xiàn)(ab'） 2，和Fv)。術(shù)語"免疫球蛋白"（Ig)在本文中與"抗體"可互換使 用。
[0051] 基本的4鏈抗體單元是由兩條相同的輕鏈（L)和兩條相同的重鏈（H)構(gòu)成的異四 聚體糖蛋白。IgM抗體由5個(gè)基本的異四聚體單元及稱作J鏈的另外多肽組成，而且包含10 個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，而IgA抗體包含與J鏈組合的2-5個(gè)能聚合而形成多價(jià)裝配物的基本4鏈 單元。在IgG的情況中，4鏈單元通常是約150, 000道爾頓。每條輕鏈通過一個(gè)共價(jià)二硫鍵 與重鏈相連，而兩條重鏈通過一個(gè)或多個(gè)二硫鍵彼此相連，二硫鍵的數(shù)目取決于重鏈的同 種型。每條重鏈和輕鏈還具有間隔規(guī)律的鏈內(nèi)二硫橋。每條重鏈在N-末端具有一個(gè)可變域 (V h)，接著是三個(gè)（對于α和Y鏈）或四個(gè)（對于μ和ε同種型）恒定域（Ch)。每條輕 鏈在N-末端具有一個(gè)可變域（V 1),接著是其另一端的一個(gè)恒定域（C1)。Vlj與Vh排列在一 起，而Q與重鏈第一恒定域（C hI)排列在一起。認(rèn)為特定的氨基酸殘基在輕鏈和重鏈可變域 之間形成界面。一個(gè)Vh和一個(gè)'一起配對而形成一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。關(guān)于不同類別抗體 的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，參見例如Basic and Clinical Immunology,第 8 版，Daniel Ρ. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw(編），Appleton&Lange, Norwalk, CT, 1994，第 71 頁和第 6章。根據(jù)其恒定域氨基酸序列，來自任何脊椎動(dòng)物物種的L鏈可歸入兩種截然不同類型 中的一種，稱作卡帕（κ)和拉姆達(dá)（λ)。根據(jù)其重鏈恒定域（C 0)氨基酸序列，免疫球蛋白 可歸入不同的類別或同種型。有五類免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分別具有稱作 α、δ、ε、γ和μ的重鏈。根據(jù)Ch序列和功能的較小差異，Y和α類可進(jìn)一步分為亞 類，例如人類表達(dá)下列亞類：IgGl、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2。
[0052] 抗體的"可變區(qū)"或"可變域"指抗體重鏈或輕鏈的氨基末端結(jié)構(gòu)域。重鏈可變域 和輕鏈可變域分別可以稱為"VH"和"VL"。這些結(jié)構(gòu)域一般是抗體的最易變部分（相對于 同一類的其它抗體而言）且包含抗原結(jié)合位點(diǎn)。
[0053] 術(shù)語"可變的"指可變域中的某些區(qū)段在抗體間序列差異廣泛的實(shí)情。V結(jié)構(gòu)域介 導(dǎo)抗原結(jié)合且限定特定抗體對其特定抗原的特異性。然而，變異性并非均勻分布于可變域 的整個(gè)跨度。而是，它集中于輕鏈和重鏈可變域二者中稱作高變區(qū)（HVR)的三個(gè)區(qū)段?？勺?域中更加高度保守的部分稱作框架區(qū)（FR)。天然重鏈和輕鏈的可變域各自包含四個(gè)FR區(qū)， 它們大多采取β_折疊片構(gòu)象，通過形成環(huán)狀連接且在有些情況中形成β_折疊片結(jié)構(gòu)一 部分的三個(gè)HVR連接。每條鏈中的HVR通過FR區(qū)非常接近的保持在一起，并與另一條鏈的 HVR -起促成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成（參見Kabat等，Sequences of Immunological Interest,第 5 版，National Institute of Health，Bethesda, MD. (1991))。恒定域不直 接參與抗體與抗原的結(jié)合，但展現(xiàn)出多種效應(yīng)器功能，諸如抗體在抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞 毒性中的參與。
[0054] 術(shù)語"單克隆抗體"在用于本文時(shí)指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即構(gòu) 成群體的各個(gè)抗體相同，除了可能以極小量存在的可能的天然存在突變和/或翻譯后修 飾（例如異構(gòu)化、酰胺化）外。單克隆抗體是高度特異性的，針對單一抗原性位點(diǎn)。與典 型的包含針對不同決定簇（表位）的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，每種單克隆抗體 針對抗原上的單一決定簇。在它們的特異性以外，單克隆抗體的優(yōu)勢在于它們是由雜交瘤 培養(yǎng)物合成的，未受到其它免疫球蛋白的污染。修飾語"單克隆"指示抗體從基本上同質(zhì) 的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如，有待依照本 發(fā)明使用的單克隆抗體可通過多種技術(shù)來生成，包括例如雜交瘤法（例如Kohler and M ilstein. ,Nature, 256:495-97(1975) ;Hongo 等，Hybridoma，14(3) :253-260 (1995) ,Harlo w 等，Antibodies:A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988) ；HammerIing 等,in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, Ν· Y.，1981))、重組 DNA 法（參見例如美國專利 No. 4, 816, 567)、 噬菌體展不技術(shù)（參見例如 Clackson 等，Nature 352:624-628 (1991) ;Marks 等，J. Mol.Biol. 222:58 卜 597 (1992) ;Sidhu 等，J.Mol.Biol. 338 (2) :299-310 (2004); Lee 等，J. Mol. Biol. 340 (5) :1073-1093 (2004) ;Fellouse，Proc. Nat. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472(2004) ;Lee 等，J.Immunol. Methods 284 (1-2):119-132(2004))、 及用于在具有部分或整個(gè)人免疫球蛋白基因座或編碼人免疫球蛋白序列的基因的動(dòng)物中 生成人或人樣抗體的技術(shù)（參見例如WO 1998/24893 ;W0 1996/34096 ;W0 1996/33735; WO 1991/10741 ;Jakobovits 等，Proc.Natl.Acad. Sci. USA 90:2551(1993) ;Jakobovits 等，Nature 362:255-258 (1993) ;Bruggemann 等，Year in Immunol. 7:33 (1993); 美國專利 No. 5, 545, 807 ;5, 545, 806 ;5, 569, 825 ;5, 625, 126 ;5, 633, 425; 5,661，016 ;Marks 等，Bio/Technology 10:779-783(1992) ;Lonberg 等，Nature 368:856-859(1994) ;Morrison, Nature 368:812-813(1994) ;Fishwild 等，Nature Biotechnol.14:845-851(1996) ；Neuberger, Nature Biotechnol. 14:826(1996) ；Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Tmmunol · 13:65-93(1995))〇
[0055] 術(shù)語"裸抗體（裸露的抗體）"指未綴合細(xì)胞毒性模塊或放射性標(biāo)記物的抗體。
[0056] 術(shù)語"全長抗體"、"完整抗體"和"全抗體"可互換使用，指基本上完整形式的抗體， 與抗體片段不同。具體而言，完整抗體包括那些具有重鏈和輕鏈（包括Fc區(qū)）的。恒定域 可以是天然序列恒定域（例如人天然序列恒定域）或其氨基酸序列變體。在有些情況中， 完整抗體可具有一項(xiàng)或多項(xiàng)效應(yīng)器功能。
[0057] "抗體片段"包含完整抗體的一部分，優(yōu)選完整抗體的抗原結(jié)合和/或可變區(qū)。 抗體片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab'）2和Fv片段；雙抗體；線性抗體（參見美國專利 5,641,870,實(shí)施例 2 ;Zapata 等，Protein Eng. 8 (10) :1057-1062 (1995));單鏈抗體分子； 及由抗體片段形成的多特異性抗體。用木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片 段，稱作"Fab"片段，和一個(gè)殘余"Fc"片段，其名稱反映了它易于結(jié)晶的能力。Fab片段由 完整L鏈及H鏈可變區(qū)域（V h)和重鏈第一恒定域（ChI)組成。每個(gè)Fab片段對于抗原結(jié)合 是單價(jià)的，即它具有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。胃蛋白酶處理抗體產(chǎn)生一個(gè)較大F(ab'） 2片段，它 大體相當(dāng)于兩個(gè)通過二硫鍵相連的Fab片段，具有不同抗原結(jié)合活性且仍能夠交聯(lián)抗原。 Fab'片段因在ChI結(jié)構(gòu)域的羧基末端增加了少數(shù)殘基而與Fab片段有所不同，包括來自抗 體鉸鏈區(qū)的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸。Fab'-SH是本文中對其中恒定域半胱氨酸殘基攜帶游離 硫醇基的Fab'的稱謂。F(ab'） 2抗體片段最初是作為成對Fab'片段生成的，在Fab'片段 之間具有鉸鏈半胱氨酸。還知道抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)。
[0058] Fc片段包含通過二硫鍵保持在一起的兩條H鏈的羧基末端部分。抗體的效應(yīng)器功 能由Fc區(qū)中的序列來決定，該區(qū)域也受到在某些類型的細(xì)胞上找到的Fc受體（FcR)識別。
[0059] "Fv"是包含完整抗原識別和結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。此片段由緊密、非共價(jià)結(jié) 合的一個(gè)重鏈可變區(qū)和一個(gè)輕鏈可變區(qū)的二聚體組成。從這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域的折疊中生發(fā)出六 個(gè)高變環(huán)（重鏈和輕鏈各3個(gè)環(huán)），貢獻(xiàn)出抗原結(jié)合的氨基酸殘基并賦予抗體以抗原結(jié)合特 異性。然而，即使是單個(gè)可變域（或只包含對抗原特異的三個(gè)HVR的半個(gè)Fv)也具有識別 和結(jié)合抗原的能力，盡管親和力低于完整結(jié)合位點(diǎn)。
[0060] "單鏈Fv"，也縮寫成"sFv"或"scFv"，是包含連接成一條多肽鏈的Vh和\抗體結(jié) 構(gòu)域的抗體片段。優(yōu)選的是，sFv多肽在V h與'結(jié)構(gòu)域之間進(jìn)一步包含多肽接頭，其使得 sFv能夠形成結(jié)合抗原的期望結(jié)構(gòu)。關(guān)于sFv的綜述參見Pluckthun,于《The Pharmacology of Monoclonal Antibodies》，第 113 卷，Rosenburg 和 Moore 編，Springer-Verlag, New York，第 269-315 頁，1994。
[0061] 本發(fā)明抗體的"功能性片段"包含完整抗體的一部分，一般包括完整抗體的抗原結(jié) 合或可變區(qū)或抗體的保留或具有改良FcR結(jié)合能力的Fc區(qū)?？贵w片段的例子包括線性抗 體、單鏈抗體分子和自抗體片段形成的多特異性抗體。
[0062] 術(shù)語"雙抗體"指通過在Vh和'結(jié)構(gòu)域之間使用短接頭（約5-10個(gè)殘基）構(gòu) 建sFv片段（見上一段）而制備的小型抗體片段，由于接頭短，使得V結(jié)構(gòu)域?qū)嵭墟滈g而 非鏈內(nèi)配對，由此導(dǎo)致二價(jià)片段，即具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段。雙特異性雙抗體是兩 個(gè)"交叉" sFv片段的異二聚體，其中兩種抗體的Vh和 '結(jié)構(gòu)域存在于不同多肽鏈上。雙 抗體更詳細(xì)的描述于例如 EP404, 097 ;W0 93/11161 ;Hollinger 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448(1993)。
[0063] 單克隆抗體在本文中明確包括"嵌合"抗體（免疫球蛋白），其中重鏈和/或輕鏈的 一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而 鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或 同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性（美國專利No. 4, 816, 567 ; Morrison 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984))。本文中感興趣的嵌合抗 體包括"靈長類化"抗體，其中抗體的抗原結(jié)合區(qū)衍生自通過用例如感興趣抗原免疫短尾猴 (macaque monkey)而生成的抗體。如本文中所使用的，"人源化抗體"是"嵌合抗體"的一 個(gè)子集。
[0064] 非人（例如鼠）抗體的"人源化"形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的 序列的嵌合抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，人源化抗體指人免疫球蛋白（受體抗體）中的HVR 殘基（下文限定）用具有期望特異性、親和力和/或能力的非人物種（供體抗體）（諸如小 鼠、大鼠、家兔或非人靈長類動(dòng)物）的HVR殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免 疫球蛋白的框架（"FR"）殘基用相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗 體中或在供體抗體中沒有找到的殘基。進(jìn)行這些修飾可以是為了進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能， 諸如結(jié)合親和力。一般而言，人源化抗體將包含至少一個(gè)、通常兩個(gè)基本上整個(gè)如下的可 變域，其中所有或基本上所有高變環(huán)對應(yīng)于非人免疫球蛋白序列的高變環(huán)，且所有或基本 上所有FR區(qū)是人免疫球蛋白序列的FR區(qū)，盡管FR區(qū)可包含一處或多處改進(jìn)抗體性能（諸 如結(jié)合親和力、異構(gòu)化、免疫原性等）的個(gè)別FR殘基替代。FR中這些氨基酸替代的數(shù)目， H鏈中通常不超過6處，L鏈中通常不超過3處。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫 球蛋白恒定區(qū)（Fe),通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見例如Jones等，Nature 321:522-525(1986) ;Riechmann 等，Nature 332:323-329(1988);及 Presta，Curr. 0ρ·Struct. Biol. 2:593-596(1992)。還可參見例如 Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy,Asthma&Immunol. 1:105-115 (1998) ；Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038(1995) ;Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994);及美國專利 No. 6, 982, 321 和 7, 087, 409。
[0065] "人抗體"指擁有與由人生成的抗體的氨基酸序列對應(yīng)的氨基酸序列和/或使用 本文所公開的用于生成人抗體的任何技術(shù)生成的抗體。人抗體的這種定義明確排除包含 非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。人抗體可使用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)來生成，包括噬 菌體展不文庫（Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227:381 (1991) ;Marks 等，J. Mol. Biol. 222:581 (1991))。還可用于制備人單克隆抗體的是以下文獻(xiàn)中記載的方法：Cole 等,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77(1985) ；Boerner 等，J. Immunol. 147 (I) :86-95 (1991)。還可參見 van Dijk and van de Winkel，Cur;r.Opin· Pharmacol.，5:368-74(2001)?？赏ㄟ^給已經(jīng)修飾以應(yīng)答抗原性刺激而生成人抗體但其內(nèi) 源基因座已經(jīng)失去能力的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物例如經(jīng)過免疫的異種小鼠（xenomice)施用抗原來制 備人抗體（參見例如美國專利No. 6, 075, 181和6, 150, 584,關(guān)于XEN0M0USE?技術(shù)）。還可 參見例如 Li 等，Proc. Natl. Ascad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)，關(guān)于經(jīng)人 B-細(xì)胞雜交 瘤技術(shù)生成的人抗體。
[0066] 術(shù)語"高變區(qū)"、"HVR"或"HV"在用于本文時(shí)指抗體可變域中序列上高度可變和/ 或形成結(jié)構(gòu)上定義的環(huán)的區(qū)域。通常，抗體包含六個(gè)HVR :三個(gè)在VH中（H1、H2、H3)，三個(gè)在 VL中（LI、L2、L3)。在天然抗體中，H3和L3展示這六個(gè)HVR的最大多樣性，而且認(rèn)為特別是 H3在賦予抗體以精密特異性中發(fā)揮獨(dú)特作用。參見例如Xu等，Immunity 13:37-45(2000); Johnson and Wu,于:Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo 編,Human Press, Totowa，NJ, 2003)。事實(shí)上，僅由重鏈組成的天然存在胳馬它（camelid)抗體在缺乏輕 鏈時(shí)是有功能的且穩(wěn)定的。參見例如Hamers-Casterman等，Nature363:446_448 (1993); Sheriff 等，Nature Struct.Biol.3:733-736 (1996)。
[0067] 本文中使用且涵蓋許多HVR的敘述。Kabat互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R)是以序 列變異性為基礎(chǔ)的，而且是最常用的（Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。Chothia 改為指結(jié)構(gòu)環(huán)的位置（Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。AbM HVR 代表 Kabat HVR 與 Chothia 結(jié)構(gòu)環(huán)之間的折衷，而且 得到Oxford Molecular的AbM抗體建模軟件的使用。"接觸"HVR是以對可獲得的復(fù)合物 晶體結(jié)構(gòu)的分析為基礎(chǔ)的。下文記錄了這些HVR中每一個(gè)的殘基。
[0068]
【權(quán)利要求】
1. 一種在個(gè)體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展的方法，其包括對所述個(gè)體施用有效量的 ro-i軸結(jié)合拮抗劑、奧沙利鉬、亞葉酸和5-FU。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述ro-i軸結(jié)合拮抗劑選自下組：ro-i結(jié)合拮抗劑、PD-L1 結(jié)合拮抗劑和ro-L2結(jié)合拮抗劑。
3. 權(quán)利要求2的方法，其中所述ro-i軸結(jié)合拮抗劑是ro-i結(jié)合拮抗劑。
4. 權(quán)利要求3的方法，其中所述ro-i結(jié)合拮抗劑抑制ro-i與其配體結(jié)合配偶的結(jié)合。
5. 權(quán)利要求4的方法，其中所述ro-i結(jié)合拮抗劑抑制ro-i與PD-L1的結(jié)合。
6. 權(quán)利要求4的方法，其中所述ro-i結(jié)合拮抗劑抑制ro-i與ro-L2的結(jié)合。
7. 權(quán)利要求4的方法，其中所述ro-i結(jié)合拮抗劑抑制ro-i與ro-Li和ro-L2兩者的 結(jié)合。
8. 權(quán)利要求4的方法，其中所述ro-i結(jié)合拮抗劑是抗體。
9. 權(quán)利要求8的方法，其中所述ro-l結(jié)合拮抗劑是MDX-1106。
10. 權(quán)利要求8的方法，其中所述ro-i結(jié)合拮抗劑是Merck 3745。 η.權(quán)利要求8的方法，其中所述ro-i結(jié)合拮抗劑是cT-oii。
12. 權(quán)利要求2的方法，其中所述ro-i軸結(jié)合拮抗劑是ro-Li結(jié)合拮抗劑。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中所述PD-L1結(jié)合拮抗劑抑制PD-L1與ro-l的結(jié)合。
14. 權(quán)利要求12的方法，其中所述PD-L1結(jié)合拮抗劑抑制PD-L1與B7-1的結(jié)合。
15. 權(quán)利要求12的方法，其中所述ro-Ll結(jié)合拮抗劑抑制ro-Ll與ro-i和B7-1兩者 的結(jié)合。
16. 權(quán)利要求12的方法，其中所述ro-Ll結(jié)合拮抗劑是抗ro-Ll抗體。
17. 權(quán)利要求16的方法，其中所述抗ro-Ll抗體是單克隆抗體。
18. 權(quán)利要求16的方法，其中所述抗ro-Ll抗體是選自下組的抗體片段：Fab， Fab' -SH，F(xiàn)v，scFv，和（Fab，）2 片段。
19. 權(quán)利要求16的方法，其中所述抗H)-L1抗體是人源化抗體。
20. 權(quán)利要求16的方法，其中所述抗H)-L1抗體是人抗體。
21. 權(quán)利要求16的方法，其中所述ro-Ll結(jié)合拮抗劑選自下組：YW243. 55. S70和 MDX-1105。
22. 權(quán)利要求21的方法，其中所述H)-L1結(jié)合拮抗劑是YW243. 55. S70。
23. 權(quán)利要求21的方法，其中所述PD-L1結(jié)合拮抗劑是MDX-1105。
24. 權(quán)利要求2的方法，其中所述ro-i軸結(jié)合拮抗劑是TO-L2結(jié)合拮抗劑。
25. 權(quán)利要求24的方法，其中所述TO-L2結(jié)合拮抗劑是抗體。
26. 權(quán)利要求24的方法，其中所述TO-L2結(jié)合拮抗劑是免疫粘附素。
27. 權(quán)利要求24的方法，其中所述TO-L2結(jié)合拮抗劑是AMP-224。
28. 權(quán)利要求1的方法，其中該方法進(jìn)一步包括施用VEGF拮抗劑。
29. 權(quán)利要求28的方法，其中所述VEGF拮抗劑是抗VEGF抗體。
30. 權(quán)利要求29的方法，其中所述抗VEGF抗體與由雜交瘤ATCC HB 10709生成的單克 隆抗VEGF抗體A4. 6. 1結(jié)合相同表位。
31. 權(quán)利要求29的方法，其中所述抗VEGF抗體是人源化抗體。
32. 權(quán)利要求29的方法，其中所述抗VEGF抗體是貝伐單抗（bevacizumab)。
33. 權(quán)利要求29的方法，其中所述抗VEGF抗體具有包含下述氨基酸序列的重鏈可變 區(qū)： EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT NYGMNWVRQA PGKGLEWVGW INTYTGEPTY AADFKRRFTF SLDTSKSTAY LQMNSLRAED TAVYYCAKYP HYYGSSHWYF DVWGQGTLVT VSS(SEQ ID NO ：22) 和包含下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)： DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCSASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKVLIYF TSSLHSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSTVPWTFGQ GTKVEIKR(SEQ ID N0:23)。
34. 權(quán)利要求1-33中任一項(xiàng)的方法，其中所述治療導(dǎo)致所述個(gè)體中所述治療停止后持 久的響應(yīng)。
35. 權(quán)利要求1-33中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者具有結(jié)直腸癌。
36. -種試劑盒，其包含ro-i軸結(jié)合拮抗劑和包裝插頁，該包裝插頁包含關(guān)于與奧沙 利鉬、亞葉酸和5-fu組合使用所述ro-i軸結(jié)合拮抗劑以在個(gè)體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn) 展的用法說明書。
37. -種試劑盒，其包含Η)-1軸結(jié)合拮抗齊[J、奧沙利鉬、亞葉酸和5-FU及包裝插頁，該 包裝插頁包含關(guān)于使用所述ro-i軸結(jié)合拮抗劑和所述奧沙利鉬、亞葉酸和5-FU以在個(gè)體 中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展的用法說明書。
38. 權(quán)利要求36或37的試劑盒，其中所述Η)-1軸結(jié)合拮抗劑是抗H)-L1抗體。
39. 權(quán)利要求36或37的試劑盒，其中所述ro-i軸結(jié)合拮抗劑是抗ro-i抗體。
40. 權(quán)利要求36或37的試劑盒，其中所述Η)-1軸結(jié)合拮抗劑是TO-L2免疫粘附素。
【文檔編號】C07K16/22GK104271601SQ201380023297
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2013年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月31日
【發(fā)明者】H·梅克爾, B·歐文 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司